脂质体制备方法与流程

1.本发明涉及一种脂质体制备方法，具体涉及一种通过不同均质压力来改善粒径分布、提高脂质体质量的脂质体制备方法。


背景技术：

2.脂质体是由脂质双分子层所形成的一种超微球形载体制剂。当两性分 子如磷脂分散于水相时，分子的疏水尾部聚集在一起，亲水头部暴露在水 相，形成具有双分子层结构的封闭囊泡。在囊泡内水相和双分子膜内可以 包裹多种不同极性的药物。脂质体作为药物输送载体可以增加包封药物的 溶解度，提高药物的稳定性和治疗效果，减少用药量，提高药物输送的靶 向性，并且具有良好的生物相容性。因此，脂质体是目前纳米药物输送系 统中研究最广泛的纳米载体之一。
3.在制备脂质体时，最常用的方法是传统薄膜分散法，使用这种方法制 备脂质体不仅操作简单，程序也较少，因此备受人们欢迎。在薄膜分散法 中，将膜材溶于有机溶剂(可同时加入脂溶性药物)，然后在减压旋转下 除去溶剂，使脂质在器壁形成薄膜，再加入水性缓冲液(可含有水溶性药 物)，进行振摇，即可制备粗脂质体混悬液。该脂质体混悬液需要经过进 一步超声或均质等处理方式使脂质体粒径均匀。目前，如何提高粒径的均 匀性仍是一个技术难题。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种脂质体制备方法，用于提高脂质体的粒径均匀性，进而提高脂质体的质量。
5.为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：一种脂质体制备方法，包括以下步骤：（1）制备包含脂质的悬浮液；和（2）将包含脂质的悬浮液在依次提高的梯度压力下分别进行多次均质。
6.在一些实施方式中，均质过程中，当d90粒径变化小于15%，优选小于10%时，提高均质压力。
7.在一些实施方式中，步骤（1）包括：将所述悬浮液在第一压力下均质，然后在第二压力下均质，所述第二压力大于第一压力。
8.在一些实施方式中，所述第一压力的范围为40-80mpa，例如40-70 mpa、40-60 mpa、50-80mpa、60-80mpa或50-70mpa。
9.在一些实施方式中，所述第二压力的范围为110-160mpa，例如120-160mpa、130-160mpa、140-160mpa、110-150mpa、110-140mpa、110-130mpa或120-150mpa。
10.在一些实施方式中，所述悬浮液在第一压力下均质2-6次，例如3次、4次或5次。
11.在一些实施方式中，所述悬浮液在第二压力下均质4-15次，例如5次、6次、7次、8
次、9次、10次、11次、12次、13次或14次。
12.在一些实施方式中，步骤（1）包括：将所述悬浮液依次在第一压力、第二压力和第三压力下均质，所述第一压力、第二压力和第三压力依次提高。
13.在一些实施方式中，所述第一压力的范围为40-70mpa，例如50-70 mpa、60-70 mpa或50-60 mpa。
14.在一些实施方式中，所述第二压力的范围为60-90mpa，例如70-90 mpa、80-90 mpa或70-80 mpa。
15.在一些实施方式中，所述第三压力的范围为100-160mpa，例如120-160mpa、130-160mpa、140-160mpa、120-150mpa或120-140mpa。
16.在一些实施方式中，所述悬浮液在第一压力下均质3-10次，例如4次、5次、6次、7次、8次或9次。
17.在一些实施方式中，所述悬浮液在第二压力下均质5-15次，例如6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次或14次。
18.在一些实施方式中，所述悬浮液在第三压力下均质5-15次，例如6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次或14次。
19.在一些实施方式中，均质总次数为6-30次，优选为6-20次，优选为8-15次。
20.在一些实施方式中，均质方式选自狭缝式均质和微射流均质中的一种或两种，优选为微射流均质。
21.在一些实施方式中，均质温度不高于20℃。
22.在一些实施方式中，所述包含脂质的悬浮液通过以下步骤制备：制备脂质薄膜；和在所述脂质薄膜中加入水溶液，分散后得到悬浮液。
23.在一些实施方式中，制备脂质薄膜的步骤包括：将用于形成脂质薄膜的材料溶于有机溶剂，去除所述有机溶剂形成脂质薄膜。
24.在一些实施方式中，所述用于形成脂质薄膜的材料包含脂质和固醇。
25.在一些实施方式中，所述脂质选自磷脂、神经酰胺和鞘磷脂中的一种或多种。
26.在一些实施方式中，所述磷脂选自磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇和磷脂酰丝氨酸中的一种或多种。
27.在一些实施方式中，所述磷脂酰胆碱包括二月桂酰基磷脂酰胆碱(dlpc)、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(dmpc)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和二花生四烯酰基磷脂酰胆碱(dapc)、二棕榈油酰基磷脂酰胆碱和二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)中的一种或多种。
28.在一些实施方式中，所述固醇为胆固醇。
29.在一些实施方式中，固醇与脂质的质量比为1:(3-5)，优选为1:4。
30.在一些实施方式中，所述用于形成脂质薄膜的材料还包含免疫调节剂。
31.在一些实施方式中，所述免疫调节剂与脂质的质量比为1: (10-30)，例如1:15、1:20或1:25。
32.在一些实施方式中，所述免疫调节剂为单磷酰脂质a（mpl）。
33.在一些实施方式中，所述有机溶剂包括乙醇、异丙醇中的一种或两种。
34.在一些实施方式中，去除所述有机溶剂的方式为减压蒸发。
35.在一些实施方式中，所述悬浮液中进一步包含皂苷。
36.在一些实施方式中，所述皂苷选自qs-7、qs-17、qs-18、qs-21中的一种或多种，优选为qs-21。
37.在一些实施方式中，所述方法进一步包括在均质后进行过滤。
38.在一些实施方式中，过滤时所采用的过滤器的孔径为0.2-0.7μm。
39.在一些实施方式中，在进行均质前，不进行剪切处理。
40.相比现有技术，本发明具有如下有益效果：本发明的脂质体制备方法在逐渐提高的梯度压力下对包含脂质的悬浮液分别进行多次均质，可以显著提高粒径均一性和脂质体质量，同时还可以提高过滤载量，从而提高生产效率。
附图说明
41.以下附图仅旨在于对本发明做示意性说明和解释，并不限定本发明的范围。其中：图1为本发明实施例中单一均质压力下制备的脂质体的粒径；图2为本发明实施例中梯度均质压力下制备的脂质体的粒径；图3为本发明实施例中未经高速剪切制备的脂质体的电镜照片；图4为本发明实施例中经高速剪切制备的脂质体的电镜照片。
具体实施方式
42.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明作进一步的详细说明。
43.在本发明的说明书中，提及“一个实施例”时均意指在该实施例中描述的具体参数、步骤等至少包含在根据本发明的一个实施例中。因而，在本发明的说明书中，若采用了诸如“根据本发明的一个实施例”、“在一个实施例中”等用语并不用于特指在同一个实施例中，若采用了诸如“在另外的实施例中”、“根据本发明的不同实施例”、“根据本发明另外的实施例”等用语，也并不用于特指提及的特征只能包含在特定的不同的实施例中。本领域的技术人员应该理解，在本发明说明书的一个或者多个实施例中公开的各具体参数、步骤等可以以任何合适的方式组合。
44.本发明提供一种脂质体制备方法，包括以下步骤：（1）制备包含脂质的悬浮液；（2）将包含脂质的悬浮液在依次提高的梯度压力下分别进行多次均质。
45.本发明中的“脂质”是指脂肪酸或其衍生物等有机化合物，不溶于水但可溶于有机溶剂。
46.本发明中的“脂质体”是指由一种或多种脂质两亲性分子的双层构成的微囊泡，其可以包围一个或多个含水隔室。
47.在本发明的一些实施方式中，包含脂质的悬浮液通过以下步骤制备：制备脂质薄膜；
在所述脂质薄膜中加入水溶液，分散后得到悬浮液。
48.其中，制备脂质薄膜的步骤可以包括：将用于形成脂质薄膜的材料溶于有机溶剂，去除所述有机溶剂形成脂质薄膜。
49.在本发明的一些实施方式中，用于形成脂质薄膜的材料包含脂质。本发明的脂质可以包括磷脂、神经酰胺和鞘磷脂中的一种或多种。磷脂可以选自磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇和磷脂酰丝氨酸中的一种或多种。磷脂酰胆碱脂质可以包含饱和磷脂酰胆碱脂质和/或不饱和磷脂酰胆碱脂质，优选的饱和磷脂酰胆碱脂质可选自二月桂酰基磷脂酰胆碱(dlpc)、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(dmpc)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和二花生四烯酰基磷脂酰胆碱(dapc)；优选的不饱和磷脂酰胆碱脂质可包含二棕榈油酰基磷脂酰胆碱和二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)。
50.在本发明的一些实施方案中，用于形成脂质薄膜的材料进一步包含固醇，优选胆固醇。固醇与脂质的质量比为1:(3-5)，优选为1:4。
51.在本发明的一些实施方式中，用于形成脂质薄膜的材料进一步包含脂溶性免疫调节剂，例如tlr激动剂。在一些实施例中，tlr激动剂为tlr4激动剂，例如单磷酰脂质a（mpl）等。在一些实施例中，免疫调节剂与脂质的质量比为1: (10-30)，例如1:15、1:20或1:25等。
52.在本发明的一些实施方式中，用于溶解脂质的有机溶剂选自乙醇、异丙醇或其混合物。
53.在本发明的一些实施方式中，首先通过溶剂蒸发法制备脂质薄膜，然后通过薄膜分散法制备脂质体。具体步骤包括：（1）称量一定质量的脂质，胆固醇以及可选的单磷酰脂质a（mpl），加入一定体积的有机溶剂（例如乙醇、异丙醇或其混合物），在50～60℃水浴中溶解；然后在50～60℃水浴温度中通过梯度减压旋蒸1～4小时获得脂质薄膜。脂质与有机溶剂的质量体积比为4-400mg/ml，例如10-300mg/ml、20-200 mg/ml或50-100 mg/ml。
54.（2）在脂质薄膜中加入一定体积的水溶液，例如磷酸盐水溶液（50mm pb，包含100mm的nacl），以75rpm～120rpm，在20-30℃水浴中旋转水化得到悬浮液。悬浮液中脂质的浓度为1-200mg/ml，例如2-150 mg/ml、5-100 mg/ml或10-80 mg/ml。
55.（3）获得的悬浮液可通过均质降低粒径，获得脂质体。
56.在本发明的一些实施方案中，脂质体中可进一步包含皂苷。所述皂苷优选为皂树(quillaja saponaria)molina quil a的衍生物，合适地是quil a的免疫活性级分，诸如qs7、qs17、qs18或qs-21，尤其是qs-21。所述皂苷可溶解在制备悬浮液时的水溶液中。
57.为防止均质时产热而造成的脂质体质量下降，均质机的冷水循环温度一般不高于20℃。
58.在本发明的一些实施例中，为获得较好的粒径均匀性，减少均质次数，均质压力设为80mpa～160mpa，在单一均质压力或梯度压力下均质5-20次，均质后获得的脂质体进行减菌过滤，最终获得脂质体产品。
59.减菌过滤时应采用孔径0.45微米或0.22（或以下）微米的过滤器，以获得可接受的微生物污染水平。常用的过滤器为聚醚砜（pes）材质，其中的pes膜由聚醚砜超细纤维热熔连在一起制成，其物理、化学性能稳定，具有很好的相容性。
60.在一些实施例中，本发明的脂质体可用作疫苗佐剂。在用作疫苗佐剂时，各组分的
含量（目标浓度）为：dopc 1-5mg/ml、胆固醇 0.1-1mg/ml、mpl 0.05-0.5 mg/ml。在优选的实施例中，各组分的含量为：dopc 2 mg/ml、胆固醇 0.5mg/ml、mpl 0.1mg/ml。在本发明的一些实施例中，制备的是浓缩脂质体原液（clb），将其适当稀释即可用作疫苗佐剂。在一些实施例中，浓缩脂质体原液的浓度可以为目标浓度的1-30倍，例如2-25倍，优选为5-20倍。
61.由于脂质体颗粒的形状通常为非球形的，难以直接用直径表示其大小，因此在颗粒粒度测试领域，对非球形颗粒，通常以等效粒径（一般简称粒径）来表征颗粒的粒径。等效粒径是指当一个颗粒的物理特性或物理行为与某一直径的同质球体（或组合）最相近时，就把该球体的直径（或组合）作为被测颗粒的等效粒径（或粒度分布）。
62.本发明中的“平均粒径”是粒度分布曲线中累积分布为50%时的最大颗粒的等效直径。对于一个由大小和形状不相同的粒子组成的实际粒子群，与一个由均一的球形粒子组成的假想粒子群相比，如果两者的粒径全长相同，则称此球形粒子的直径为实际粒子群的平均粒径。
63.当用作疫苗佐剂时，脂质体的粒径优选在70-120nm范围内，优选为80-100nm，并且具有良好的粒径均匀度，例如多分散指数（pdi）优选小于0.25。
64.在本发明的一些实施方式中，在均质过程中，当d90粒径变化小于15%时（例如小于14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%或5%），优选小于10%时，提高均质压力。
65.本发明中的“d90粒径”是分布曲线中累积分布为90%时的最大颗粒的等效直径。
66.在本发明的一些实施方式中，提高均质压力的次数可以为一次、两次或更多次。
67.实施例1 单一均质压力下制备脂质体将40g dopc、10g胆固醇和2g mpl溶于200ml异丙醇，在50℃水浴中溶解；然后在50℃水浴温度中通过梯度减压旋蒸2小时获得脂质薄膜。
68.在脂质薄膜中加入500ml磷酸盐水溶液（50mm pb，包含100mm的nacl），以100rpm，在25℃水浴中旋转水化得到悬浮液。
69.获得的悬浮液稀释至特定浓度后在15℃，80 mpa～140mpa的单一均质压力下进行多次微射流均质，均质后获得的脂质体以0.65/0.2μm 聚醚砜膜（pes）过滤器过滤，最终获得浓缩脂质体原液（clb）。
70.在均质过程中，在每次均质后测定脂质体的平均粒径、pdi和d90，当平均粒径达到目标范围内且d90小于10nm时即停止均质。以10
×
clb浓度（dopc 20 mg/ml、胆固醇 5mg/ml、mpl 1mg/ml）和120mpa的数据为例，每次均质后的平均粒径、pdi和d90如表1和图1所示。可见，在单一均质压力下，随着均质次数的增加，平均粒径、pdi和d90开始下降较快，但超过一定次数后（图1中为6次，在不同浓度和压力，该次数会有所变化），二者变化幅度明显降低，并且，即使到了目标粒径下限，pdi仍维持在较高的水平（大于0.27），说明粒径均匀度较差。随着压力升高，产热增多，影响脂质体产品质量。
71.实施例1 单一均质压力下制备脂质体将40g dopc、10g胆固醇和2g mpl溶于200ml异丙醇，在50℃水浴中溶解；然后在50℃水浴温度中通过梯度减压旋蒸2小时获得脂质薄膜。
72.在脂质薄膜中加入500ml磷酸盐水溶液（50mm pb，包含100mm的nacl），以100rpm，在25℃水浴中旋转水化得到悬浮液。
73.获得的悬浮液稀释至特定浓度后在15℃，80 mpa～140mpa的单一均质压力下进行
多次微射流均质，均质后获得的脂质体以0.65/0.2μm 聚醚砜膜（pes）过滤器过滤，最终获得浓缩脂质体原液（clb）。
74.在均质过程中，在每次均质后测定脂质体的平均粒径、pdi和d90，当平均粒径达到目标范围内且d90变化小于10nm时即停止均质。以10
×
clb浓度（dopc 20 mg/ml、胆固醇 5mg/ml、mpl 1mg/ml）和120mpa的数据为例，每次均质后的平均粒径、pdi和d90如表1和图1所示。可见，在单一均质压力下，随着均质次数的增加，平均粒径、pdi和d90开始下降较快，但超过一定次数后（图1中为6次，在不同浓度和压力，该次数会有所变化），二者变化幅度明显降低，并且，即使到了目标粒径下限，pdi仍维持在较高的水平（大于0.27），说明粒径均匀度较差。随着压力升高，产热增多，影响脂质体产品质量。
75.表1 10
×
clb浓度和120mpa下多次均质后的粒径如表2所示，当压力提高到140mpa时，虽然粒径有所降低，但pdi没有改善，且均质超过8次以后，粒径和pdi反而开始增大，这可能是由于随着粒径的进一步降低，粒子的聚集性开始增大。
76.表2 10
×
clb浓度和140mpa下多次均质后的粒径表3是不同浓度和不同均质压力下制备的脂质体的粒径。总体来看，在所有不同的浓度和均质压力下，当脂质体到达目标粒径范围（大约80~110nm）时，样品的聚合物分散性指数（pdi）仍高于0.27。
77.例如，在均质压力小于100mpa时，粒径降低到110nm左右后，粒径变化幅度明显减小，但pdi仍处于较高的水平。当提高均质压力时，相同均质次数后平均粒径可降低至80-100nm，但即使进一步增加均质次数使平均粒径降低到目标粒径范围以下，pdi仍维持在较高的水平。这些结果表明，在单一均质压力下，无论如何改变脂质体浓度、均质次数和均质压力，制备的脂质体的粒径均匀度都不理想。
[0078] 表3 不同浓度和压力下多次均质后的粒径
实施例2 梯度均质压力下制备脂质体
将10gdopc、2.5g胆固醇和0.5gmpl溶于50ml异丙醇，在50℃水浴中溶解；然后在50℃水浴温度中通过梯度减压旋蒸2小时获得脂质薄膜。
[0079]
在脂质薄膜中加入250ml磷酸盐水溶液（50mmpb，包含100mm的nacl），以100rpm，在25℃水浴中旋转水化得到悬浮液。
[0080]
将悬浮液进一步稀释至特定浓度（dopc20mg/ml、胆固醇5mg/ml、mpl1mg/ml）后，在15℃下首先在40-70mpa的第一均质压力下进行微射流均质2-4次，然后在120-160mpa的第二均质压力下进行微射流均质4-11次，直到脂质体的粒径降至80-100nm范围内，且pdi降至0.25左右，均质后获得的脂质体以0.65/0.2μmpes过滤器过滤，最终获得10
×
浓缩脂质体原液（clb）。
[0081]
如表4和图2所示，以首先在50mpa下均质4次，然后在140mpa下均质6次的数据（组别7）为例，在50mpa下均质4次后，d90变化幅度降低（低于10%），但pdi仍较高，此时均质压力提高至140mpa，平均粒径和pdi均迅速降低，在平均粒径降至100nm以下时，pdi可降至0.24以下，即脂质体的粒径更均一，因此提高了脂质体的质量，满足疫苗佐剂的要求。另外，总的均质次数可降至8次左右，因此生产效率也明显提高。
[0082] 表4梯度均质压力下多次均质后的粒径
实施例3梯度均质压力下制备脂质体将0.4gdopc、0.1g胆固醇溶于10ml异丙醇，在50℃水浴中溶解；然后在50℃水浴温度中通过梯度减压旋蒸2小时获得脂质薄膜。
[0083]
在脂质薄膜中加入100ml磷酸盐水溶液（50mmpb，包含100mm的nacl），以100rpm，在25℃水浴中旋转水化得到悬浮液。
[0084]
将悬浮液在15℃下首先在50mpa的第一均质压力下进行微射流均质10次，在75mpa的第二均质压力下均质15次，然后在120mpa的第三均质压力下均质3次，均质后获得的脂质体以0.65/0.2μmpes滤器过滤，最终获得2
×
浓缩脂质体原液（clb）。不同梯度压力下多次均质后的粒径如表5所示。
[0085] 表5梯度均质压力下多次均质后的粒径
发明人发现，由于该实施例中浓缩脂质体原液的浓度较低，最高压力不宜过高，否则粒径会迅速降低，而pdi仍会维持在较高水平，因此该实施例中最高压力不超过120mpa。由于压力降低，所需的均质次数有所增加。
[0086] 实施例4 剪切对脂质体形貌的影响为了在高压均质步骤中以更少均质次数获得更低pdi的符合目标粒径范围（80~100nm左右）的脂质体，在均质工艺前，加入高速剪切（剪切速度6000rpm-12000rpm）工艺步骤预处理水化后的脂质体。在本实施例中采用剪切和不剪切两种工艺路线获得的浓缩脂质体原液（clb），将获得的clb进行透射电子显微镜观测，观测结果显示未经过高速剪切处理，直接高压均质获得的clb多成圆形或近圆形（如图3），符合疫苗佐剂的要求。而经过高速剪切处理后再进行高压均质获得的脂质体的形貌特征存在较多的不规则形状（如图4），对于疫苗佐剂是非理想的形貌。因此，在进行高压均质前，优选不进行高速剪切。
[0087]
以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种脂质体制备方法，包括以下步骤：（1）制备包含脂质的悬浮液；和（2）将包含脂质的悬浮液在依次提高的梯度压力下分别进行多次均质。2.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其中，均质过程中，当d90粒径变化小于15%，优选小于10%时，提高均质压力。3.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其中，步骤（1）包括：将所述悬浮液在第一压力下均质，然后在第二压力下均质，所述第二压力大于第一压力。4.根据权利要求3所述的脂质体制备方法，其中，所述第一压力的范围为40-80mpa，例如40-70 mpa、40-60 mpa、50-80mpa、60-80mpa或50-70mpa。5.根据权利要求3所述的脂质体制备方法，其中，所述第二压力的范围为110-160mpa，例如120-160mpa、130-160mpa、140-160mpa、110-150mpa、110-140mpa、110-130mpa或120-150mpa。6.根据权利要求3所述的脂质体制备方法，其中，所述悬浮液在第一压力下均质3-6次，例如4次或5次。7.根据权利要求3所述的脂质体制备方法，其中，所述悬浮液在第二压力下均质4-15次，例如5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次或14次。8.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其中，步骤（1）包括：将所述悬浮液依次在第一压力、第二压力和第三压力下均质，所述第一压力、第二压力和第三压力依次提高。9.根据权利要求8所述的脂质体制备方法，其中，所述第一压力的范围为40-70mpa，例如50-70 mpa、60-70 mpa或50-60 mpa。10.根据权利要求8所述的脂质体制备方法，其中，所述第二压力的范围为60-90mpa，例如70-90 mpa、80-90 mpa或70-80 mpa。11.根据权利要求8所述的脂质体制备方法，其中，所述第三压力的范围为110-160mpa，例如120-160mpa、130-160mpa、140-160mpa、120-150mpa或120-140mpa。12.根据权利要求8所述的脂质体制备方法，其中，所述悬浮液在第一压力下均质3-10次，例如4次、5次、6次、7次、8次或9次。13.根据权利要求8所述的脂质体制备方法，其中，所述悬浮液在第二压力下均质5-15次，例如6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次或14次。14.根据权利要求8所述的脂质体制备方法，其中，所述悬浮液在第三压力下均质5-15次，例如6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次或14次。15.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其中，均质总次数为6-30次，优选为6-20次，优选为8-15次。16.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其中，均质方式选自狭缝式均质和微射流均质中的一种或两种，优选为微射流均质。17.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其中，均质温度不高于20℃。18.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其中，所述包含脂质的悬浮液通过以下步骤制备：
制备脂质薄膜；和在所述脂质薄膜中加入水溶液，分散后得到悬浮液。19.根据权利要求18所述的脂质体制备方法，其中，制备脂质薄膜的步骤包括：将用于形成脂质薄膜的材料溶于有机溶剂，去除所述有机溶剂形成脂质薄膜。20.根据权利要求19所述的脂质体制备方法，其中，所述用于形成脂质薄膜的材料包含脂质和固醇。21.根据权利要求20所述的脂质体制备方法，其中，所述脂质选自磷脂、神经酰胺和鞘磷脂中的一种或多种。22.根据权利要求21所述的脂质体制备方法，其中，所述磷脂选自磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇和磷脂酰丝氨酸中的一种或多种。23.根据权利要求22所述的脂质体制备方法，其中，所述磷脂酰胆碱包括二月桂酰基磷脂酰胆碱(dlpc)、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(dmpc)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和二花生四烯酰基磷脂酰胆碱(dapc)、二棕榈油酰基磷脂酰胆碱和二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)中的一种或多种。24.根据权利要求20所述的脂质体制备方法，其中，所述固醇为胆固醇。25.根据权利要求20所述的脂质体制备方法，其中，固醇与脂质的质量比为1:(3-5)，优选为1:4。26.根据权利要求20所述的脂质体制备方法，其中，所述用于形成脂质薄膜的材料还包含免疫调节剂。27.根据权利要求26所述的脂质体制备方法，其中，所述免疫调节剂与脂质的质量比为1: (10-30)，例如1:15、1:20或1:25。28.根据权利要求26所述的脂质体制备方法，其中，所述免疫调节剂为单磷酰脂质a（mpl）。29.根据权利要求19所述的脂质体制备方法，其中，所述有机溶剂包括乙醇、异丙醇中的一种或两种。30.根据权利要求19所述的脂质体制备方法，其中，去除所述有机溶剂的方式为减压蒸发。31.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其中，所述悬浮液中进一步包含皂苷。32.根据权利要求31所述的脂质体制备方法，其中，所述皂苷选自qs-7、qs-17、qs-18、qs-21中的一种或多种，优选为qs-21。33.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其中，所述方法进一步包括在均质后进行过滤。34.根据权利要求33所述的脂质体制备方法，其中，过滤时所采用的过滤器的孔径为0.2-0.7μm。35.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其中，在进行均质前，不进行剪切处理。

技术总结
本发明涉及一种脂质体制备方法，包括以下步骤：（1）制备包含脂质的悬浮液；和（2）将包含脂质的悬浮液在依次提高的梯度压力下分别进行多次均质。本发明的脂质体制备方法可以显著提高粒径均一性和脂质体质量。提高粒径均一性和脂质体质量。提高粒径均一性和脂质体质量。


技术研发人员：郑文芝 袁楚晓 王维龙 姚文荣 洪坤学 陈健平 刘勇
受保护的技术使用者：北京安百胜生物科技有限公司
技术研发日：2022.01.29
技术公布日：2023/8/9