含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物、制备方法及应用与流程

1.本发明涉及生物领域，具体涉及了一种含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物、制备方法及应用。


背景技术：

2.皮肤作为人体最大的器官，是抵御热量流失、脱水、机械创伤和微生物入侵的主要屏障。皮肤从外及里的结构依次为表皮层、真皮层、皮下脂肪层。表皮层是皮肤最外层，薄如一张纸，由大量角质形成细胞及干细胞、黑色素细胞、免疫细胞(langerhans细胞、t细胞)组成，支配神经和吞噬外来的异物，不断进行自我更新。真皮层是由结缔组织组成，富含胶原纤维、蛋白纤维以及成纤维细胞，起支撑皮肤结构的作用，促进伤口修复。皮下层富含脂肪细胞及血管。健康的皮肤有光泽、弹性良好，形成稳定的内环境。当皮肤受到外界刺激如电离辐射、紫外线、烧伤等，皮肤屏障遭到破坏导致皮肤问题。紫外线照射导致皮肤形态学和外观上都发生改变。外观上主要表现为晒伤(sunburn)，皮肤出现红斑、充血水肿甚至破溃等急性炎症反应，形态学上表现为表皮增厚，大量炎性细胞浸润及脓肿形成，胶原蛋白合成减少。引起光老化现象，表现为皮革外观，弹性减低，晒斑形成。
3.目前市面上舒缓修复类化妆品主要有两种，一种是以天然植物油和中草药为活性物质修复肌肤，一种是以生物相容性原料作为活性物质修复肌肤。天然植物油和中草药的成分物质复杂，甚至会存在一些致敏成分，存在一定的安全隐患。生物活性物质的代表为透明质酸和胶原蛋白。但通过添加透明质酸和胶原蛋白起效的产品，如中国发明专利cn107714631a公开的胶原蛋白肽面膜液，由于皮肤的屏障功能(蛋白分子量较大)，因此吸收不好，存在有效利用率低的问题。此外，目前使用的胶原蛋白大多来自动物提取，不仅存在一定的病毒隐患，而且其亲水性和生物相容性也不好。因而不能有效针对皮肤受损早期的炎症因子及后续的免疫反应进行及时修复。


技术实现要素：

4.为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供了含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物、制备方法及应用。
5.本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：
6.第一方面，含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物，其包括如下重量份数的组分：5～20g/100g重组人纤连蛋白、0.3～1.0g/100g透明质酸混合物、0.8～1.2g/100g燕麦葡聚糖、0.8～1.2g/100g芦荟提取液、0.3～0.8g/100g紫松果菊提取物、0.8～1.2g/100g金钗石斛茎提取物和0.3～0.8g/100g舒敏佳，余量为水；其中，所述重组人纤连蛋白氨基酸序列如seq id no.1所示。
7.在本发明中，进一步地，所述组合物还包括以下重量份的组分：0.01～0.02g/100g金属离子螯合剂、5～10g/100g多元醇、2～3g/100g蛋白稳定剂和0.03～0.05g/100g增稠剂。
8.第二方面，一种含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物的制备方法，其包括以下步骤：
9.步骤1，将透明质酸混合物及水混合后，加热到一定温度，混合均匀后，得到混合物1；
10.步骤2，将重组人纤连蛋白及水混合后，低速搅拌混合均匀得到混合物2；
11.步骤3，将紫松果菊提取物、金钗石斛茎提取物、舒敏佳及水加热后，搅拌均匀得到混合物3；
12.步骤4，将燕麦葡聚糖、芦荟提取液及水混合后，加入到一定温度，混合均匀后，得到混合物4；
13.步骤5，先将混合物1和3进行第一次均质混合处理；然后再逐步加入混合物4进行第二次均质混合处理；最后再加入混合物2进行第三次均质混合处理，获得具有修复功效的组合物。
14.第三方面，一种上述第一方面或第二方面含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物的应用。
15.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
16.本发明含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物，以特定的生物活性蛋白重组人纤连蛋白为基础，添加透明质酸混合物、舒敏佳、芦荟提取物、燕麦葡聚糖等物质，达到修复、补水、抗炎、抗敏的作用。通过重组人纤连蛋白功能域加强透明质酸、燕麦葡聚糖、芦荟提取液等有效组分的作用，通过各种原料的相互配合使用，起到多重协同作用，能够迅速补充水分，抗炎、清除自由基，达到损伤后修复的作用。
17.该修复功效组合物的优势在于重组人纤连蛋白分子量较小，可以很快被皮肤吸收，活化和促进细胞运动，能够先活化皮肤表层细胞，促进细胞贴壁伸展增殖，恢复受损细胞和衰老细胞形态结构，增强细胞代谢水平，促进细胞生长，强化角质层，提升肌肤锁水能力，提高角质层抵抗外界刺激能力。
18.本发明特定的重组人纤连蛋白的活性功能域不仅强化了透明质酸结合域的作用，让分子大小不同的透明质酸均能作用在皮肤上，增加了皮肤对水分的吸收和锁定，呈现出更好的保湿效果。还可以加强燕麦葡聚糖和芦荟提取液的功效，迅速起到抗炎、修复和补水的作用。紫松果菊提取物，除本身抗氧化剂，抗炎剂，保湿剂的功效外，还能有效抑制透明质酸酶，延长透明质酸作用。
19.本发明使用了植物提取物等活性物质，且在生产方案采用多次均质混合的方式，因此所制得的组合物温和、安全，亲肤性良好；且不需要进行过滤处理，生产工艺简单适合推广应用。
附图说明
20.图1为本发明的重组人纤连蛋白结构示意图；图2为本发明的重组人纤连蛋白结构图；图3为本发明实施例1的重组人纤连蛋白（rhfn）的促细胞贴附作用；图4为对紫外线照射损伤小鼠背部皮肤皱纹评分情况；图5为经过紫外线辐照后小鼠皮肤含水量情况。
[0021][0022][0023]
具体实施方式
[0024]
如背景技术描述的，现有技术中通过添加透明质酸和胶原蛋白起效的产品，由于皮肤的屏障功能(蛋白分子量较大)，因此吸收不好，存在有效利用率低的问题。此外，目前使用的胶原蛋白大多来自动物提取，不仅存在一定的病毒隐患，而且其亲水性和生物相容性也不好。因而不能有效针对皮肤受损早期的炎症因子及后续的免疫反应进行及时修复。
[0025]
为了解决上述技术问题，本发明提出了含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物、制备方法及应用。
[0026]
含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物，其包括如下重量份数的组分：5～20g/100g重组人纤连蛋白、0.3～1.0g/100g透明质酸混合物、0.8～1.2g/100g燕麦葡聚糖、0.8～1.2g/100g芦荟提取液、0.3～0.8g/100g紫松果菊提取物、0.8～1.2g/100g金钗石斛茎提取物和0.3～0.8g/100g舒敏佳，余量为水；其中，所述重组人纤连蛋白氨基酸序列如seq id no.1所示。
[0027]
纤连蛋白(fibronectin，英文缩写为fn)最初是morrison于1948年发现的。由于其遇冷会沉淀的特性，最初被称为冷不溶球蛋白(cold insoluble globulin)。纤连蛋白广泛存在于血液、体液及各种组织中，在人体共有20余种，纤连蛋白是细胞外基质中普遍存在的重要成分。主要生物学功能是细胞活动过程中的调节因子，维持和指导组织结构和细胞外基质组成的重要支架蛋白。本发明中将人血浆纤连蛋白(plasma fibronectin，pfn)功能结构域进行重组和改造，获得具有特殊功能的重组人纤连蛋白(rhfn)。在本发明中，重组人纤连蛋白作为主要活性成分，具有活化细胞，增强细胞活性并依靠功能结构域与小分子量透明质酸结合，加快透明质酸作用，促进表皮细胞的增殖和分化、清除氧自由基。rhfn也能跟大分子透明质酸结合，形成保护膜功能，为损伤肌肤形成保护。
[0028]
重组人纤连蛋白(rhfn)，其氨基酸序列如seq id no.1所示，
[0029]
seq id no.1：
[0030]
mpgcydngkhyqinqqwertylgnalvctcyggsrgfnceskpeaeetcfdkytgntyrvgdtyerpkdsmiwdctcigagrgrisctianrcheggqsykigdtwrrphetggymlecvclgngkgewtckpiaekcfdhaagtsyvvgetwekpyqgwmmvdctclgegsgritctsrnrcndqdtrtsyrigdtwskkdnrgnllqcictgngrgewkcerhggsghcvtdsgvvysvgmqwlktqgnkqmlctclgngvscqetavtqtyggnsngepcvlpftyngrtfyscttegrqdghlwcsttsnyeqdqkysfctdhtvlvqtrggnsngalchfpflynnhnytdctsegrrdnmkwcgttqnydadqkfgfcpmaaheeicttnegvmyrigdqwdkqhdmghmmrctcvgngrgewtciaysqlrdqcivdditynvndtfhkrheeghmlnctcfgqgrgrwkcdpvdqcqdsetgtfyqigdswekyvhgvryqcycygrgigewhcqplggstdlsfvditdssiglrwtplnsstiigyritvvaagegipifedfvdssvgyytvtglepgidydisvitlinggesapttltqqtavppptdlrftnigpdtmrvtwapppsidltnflvryspvkneedvaelsispsdnavvltnllpgteyvvsvssvyeqhestplrgrqktgldsptgidfsditansftvhwiapratitgyrirhhpehfsgrpredrvphsrnsitltnltpgteyvvsivalngreesplligqqstvsdvprdlevvaatptslliswdapavtvryyritygetggnspvqeftvpgskstatisglkpgvdytitvyavtgrgdspasskpisinyrteidkpsqmqvtdvqd
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[0031]
结构图如图1、2所示，是在天然人血浆纤连蛋白基础上进行的重组和修饰，修饰后蛋白分子量约为117.7kd，较天然fn分子量大大降低(220kd)，有利于皮肤吸收和生物活性发挥；分子量过大，透皮吸收效果不好，过小，功能结构域不能包含在内，部分特定生物学活性不能充分体现。本发明重组人纤连蛋白具有以下结构功能域：
[0032]
ha-binding region：肝素和纤维蛋白结合域，可以和透明质酸混合物结合，增强透明质酸的吸收和构建保护膜，具有锁水、保湿功能；
[0033]
collagen-binding domain：ⅰ型胶原蛋白和ⅱ型胶原蛋白的结合位点，对伤口愈合的疗效可观；在细胞粘附中起核心作用，稳固基底层和角质层；
[0034]
edb+phsrn+rgd+eda：识别细胞整合素位点，进而促细胞粘附增殖活性；调节细胞生长，调节皮肤免疫功能。
[0035]
透明质酸混合物，由大分子透明质酸和小分子透明质酸以重量比3～5:5～7混合而成。固定比例的透明质酸混合物可以兼具防护、预防和修复的功能。大分子透明质酸(分子量1800kda)，由双糖单位(葡萄醛酸-n-乙硫氨基葡糖)组成的直链高分子多醣，是一种组织中自然存在的物质。在人类皮肤的真皮层中扮演了基质的重要角色，具有保护和防护的功能。无论是组织结构上整体的保养或是细胞之间的运送都具有很重要的功能。低分子透明质酸(分子量400-1000kda)是人体内一种固有的成份，是一种葡聚糖醛酸，能促进表皮细胞的增殖和分化、清除氧自由基，可预防和修复皮肤损伤。在本发明中，透明质酸混合物可以通过rhfn的部分功能域(rgd、vpp等)加强与细胞间的连接和作用，增强透明质酸的功能。
[0036]
燕麦葡聚糖，是存在于燕麦胚乳和糊粉层细胞壁的一种非淀粉多糖。燕麦葡聚糖拥有优异的抗衰老功效，能够抚平细小皱纹，提高皮肤弹性，改善皮肤纹理度；具有独特的直链分子结构，赋予了良好的透皮吸收性能；促进成纤维细胞合成胶原蛋白，促进伤口愈合，修复受损肌肤。
[0037]
芦荟提取液，内含蒽醌衍生物、芦荟大黄、皂甙、氨基酸和多糖。芦荟提取液促进纤维聚合蛋白降成nmf，从而增加天然保湿因子，即时增加水含量，通过轻微成膜作用减少经皮水分流失。同时，含生物酶，通过与皮肤缓慢水解，起到消炎杀菌作用，并在氨基酸作用下，与角质层中胶原作用，愈合伤口。
[0038]
紫松果菊提取物(echinacea purpurea extract)，紫松果菊是菊目，菊科的植物，主要作用是抗氧化剂，抗炎剂，保湿剂的功效。对透明质酸酶有一定的抑制作用，能够增强透明质酸的作用。因此，能够有效的抗衰老，除去皮肤上面的皱纹，还能够有效的美白抗氧化。
[0039]
金钗石斛茎提取物(dendrobium nobile lindl)，具有很强的抗氧化能力，对羟基自由基的清除能力最强,同时也有较强抑制dna损伤的作用，且明显强于vc。
[0040]
舒敏佳，它以膜荚黄芪为主，能够提高机体适应能力，结合中医“君臣佐使”配方原则科学配伍防风、天麻、金盏花等中医药植物，修护损伤肌肤。
[0041]
所述组合物还包括以下重量份的组分：0.01～0.02g/100g金属离子螯合剂、5～10g/100g多元醇、2～5g/100g蛋白稳定剂和0.03～0.1g/100g增稠剂。
[0042]
其中，所述金属离子螯合剂选自edta-2na、edta和edta-4na的至少一种。所述多元醇包括丙二醇、eg-1聚甘油、丁二醇、己二醇、戊二醇中的一种或多种。所述蛋白稳定剂选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、精氨酸和海藻糖的至少一种。所述增稠剂包括羧甲基纤维素、羟乙基纤维素和甲基纤维素中的一种或多种。
[0043]
通过以上技术方案，本发明含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物，以特定的生物活性蛋白重组人纤连蛋白为基础，添加透明质酸混合物、舒敏佳、芦荟提取物、燕麦葡聚糖等物质，达到修复、补水、抗炎、抗敏的作用。通过重组人纤连蛋白功能域加强透明质酸、燕麦葡聚糖、芦荟提取液等有效组分的作用，通过各种原料的相互配合使用，起到多重协同作用，能够迅速补充水分，抗炎、清除自由基，达到损伤后修复的作用。
[0044]
一种上述含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物的制备方法，其包括以下步骤：
[0045]
步骤1，将透明质酸混合物及水混合后，加热到一定温度，如50℃以下，混合均匀后，得到混合物1；
[0046]
步骤2，将重组人纤连蛋白及水混合后，低速搅拌混合均匀得到混合物2；
[0047]
步骤3，将紫松果菊提取物、金钗石斛茎提取物、舒敏佳及水加热后，搅拌均匀得到混合物3；
[0048]
步骤4，将燕麦葡聚糖、芦荟提取液及水混合后，加入到一定温度，如50℃以下，混合均匀后，得到混合物4；
[0049]
步骤5，先将混合物1和混合物3进行第一次均质混合处理；然后再逐步加入混合物4进行第二次均质混合处理；最后再加入混合物2进行第三次均质混合处理，获得具有修复功效的组合物。
[0050]
本发明原先是在设定的ph条件下直接均质混合，发现有的组分加热溶解的效果要好，蛋白类加热以后活性就下降了。而且，直接混合非常容易产生泡沫，蛋白质搅拌就会形成大量泡沫；甚至，经过多步混合和均质，rhfn的活性会下降10～20％。为此，通过以上技术方案，本发明仅是混合物1和混合物4设定在50度以下进行，避免温度过高会使活性物质rhfn失活，还会出现部分蛋白质变性，出现絮状物。而且本发明在各种不同温度下将各种原料分别有序加入搅拌混合均匀，然后分步进行均质混合，使得各种原料能够充分混匀、反应，且能够保持生物活性，从而制备出细腻均匀的组合物，其温和、安全以及亲肤性良好。且不需要进行过滤处理，生产工艺简单适合推广应用。
[0051]
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
[0052]
本发明将通过以下实施例作进一步说明。本发明用到的重组人纤连蛋白为自制品；其他原料均为《已使用化妆品原料目录》产品，且均为市售产品；使用的水为药用注射用水。
[0053]
实施例1主要活性成分重组人纤连蛋白的促细胞贴附作用测试
[0054]
将培养瓶生长至80％的hela细胞用胰酶消化，离心洗涤三次后，用dmem(gibco)培养基吹打，重悬分散，调整细胞数至106/ml左右，加入6孔培养板进行培养。细胞分组情况如下：空白对照组(rhfn 0μg/ml)、低浓度组(rhfn 20μg/ml)、高浓度组(rhfn 50μg/m l)。按
不同分组分别加入dmem和含不同浓度的dmem，培养8h和24h后分别观察细胞贴壁和增殖情况。
[0055]
结果如图3所示，空白对照组未加入rhfn在8h时仅有少量细胞贴壁，未见增殖伸展细胞。而加入rhfn的培养组8h时已经大量细胞贴壁，并且部分细胞已经出现增殖情况。高浓度组贴壁细胞数量稍多，细胞增殖情况更明显。24h后观察，空白对照组仅部分细胞贴壁伸展，且细胞形态不规则。而rhfn组细胞增殖明显，细胞形态呈典型的菱形，且贴壁较牢固。rhfn高低剂量组并无明显区别，表明20μg/ml的rhfn即可产生良好的促细胞贴壁和增殖作用。
[0056]
以上实验结果说明，本发明中的rhfn具有良好的促进细胞贴壁和增殖的作用，能够促进细胞生长和新陈代谢，利于皮肤代谢和修复。
[0057]
实施例2
[0058]
含有重组人纤连蛋白的具有修复功效组合物包括以下原料：丙二醇、金属离子螯合剂、透明质酸混合物、蛋白稳定剂(磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、精氨酸和海藻糖)、保湿剂(丁二醇、聚甘油等)、舒敏佳、燕麦葡聚糖、芦荟提取物、金钗石斛茎提取物、紫松果菊提取物等。各种原料的用量具体见下表1。
[0059]
上述含有重组人纤连蛋白的具有修复功效组合物的制备方法，其包括以下步骤：
[0060]
步骤1，将丙二醇、金属离子螯合剂、透明质酸混合物及去离子水混合后，加热到50℃，50r/min搅拌均匀，得到混合物1；
[0061]
步骤2，将磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、精氨酸和海藻糖及去离子水混合后作为蛋白稳定剂，加入重组纤连蛋白，低速(10r/min)搅拌混合均匀得到混合物2；
[0062]
步骤3，将丁二醇和聚甘油作为基质加入舒敏佳、金钗石斛茎提取物、紫松果菊提取物及去离子水加热后，50r/min搅拌均匀得到混合物3；
[0063]
步骤4，将己二醇、燕麦葡聚糖、芦荟提取物及去离子水混合后，加入到50℃，50r/min混合均匀后，得到混合物4；
[0064]
步骤5，先将混合物1和混合物3进行第一次均质混合，均质处理的转数为3000rpm，5min。然后再将混合物4逐步加入进行第二次均质混合，均质转数5000rpm，5min。最后一步将混合物2加入上述均质混合物中进行第三次均质混合，均质转数为1000rpm，5min。出料，得到具有修复功效的混合物。
[0065]
表1具有修复功效的混合物各原料用量表，重量计(g)
[0066]
[0067][0068]
实施例3
[0069]
一种具有修复功能的组合物，与实施例2不同之处在于活性成分重组人纤连蛋白和透明质酸的混合物的使用量不同，即rhfn的使用量为10g，透明质酸混合物的使用量为0.3g，具体见表1。
[0070]
实施例4
[0071]
一种具有修复功能的组合物，与实施例2不同之处在于活性成分重组人纤连蛋白和透明质酸的混合物的使用量不同，即rhfn的使用量为15g，透明质酸混合物的使用量为0.5g，其他成分具体见表1。
[0072]
实施例5
[0073]
一种具有修复功能的组合物，与实施例2不同之处在于活性成分重组人纤连蛋白和透明质酸的混合物的使用量不同，即rhfn的使用量为20g，透明质酸混合物的使用量为0.5g，其他成分具体见表1。
[0074]
对比例1
[0075]
该对比例1与实施例2不同之处在于：不含有rhfn，仅含有透明质酸的混合物0.5g，其他成分与实施例2相同。
[0076]
对比例2
[0077]
该对比例2与实施例2不同之处在于：组合物制备方法不同。对比例2的制备方法包括如下步骤：将各个原料进行混合搅拌，然后调节ph至7.0，直接均质混合后，出料。
[0078]
试验对紫外线照射损伤小鼠皮肤的修复实验
[0079]
30
±
2g km小鼠(广东省医学实验动物中心)，小鼠适应2天，按体重随机分组：
①
正常组、
②
模型组(模型组只进行紫外线照射，不给予贴膜治疗)、
③
实施例2组、
④
实施例3组、
⑤
实施例4组、
⑥
实施例5组、
⑦
对比例1、
⑧
对比例2。以上各组均制成对应的敷料贴膜。
[0080]
辐照前24h，对所有小鼠进行背部皮肤脱毛处理，先用宠物剃毛器剃去小鼠背部较长毛发，然后均匀涂抹脱毛膏去除余下细短毛发，使其形成约4cm
×
3cm大小裸露区域。除正常组外，其余各组置于紫外光治疗仪下25cm处，紫外线照射强度为0.35mw/cm2，模拟日光进行2次/日照射，每次时间为30分钟。实验周期为14天，总辐射量为12.6j/cm2；照射期间停止
给食给水，照射后0.5h恢复。从实验第4天起，
③
～
⑧
组贴敷对应的修复膜布，贴敷时间为15min。7天、14天，利用宏观等级评分方法对小鼠背部皮肤皱纹情况进行评分，见下表2。
[0081]
表2小鼠背部皮肤皱纹评分表
[0082]
级别评分标准0正常皮肤细腻纹理1皮肤出现细磨痕2出现少量浅皱纹3出现较多浅皱纹4皮肤粗糙，有深皱纹产生5有较多粗糙皱纹产生6皱纹粗糙，出现皮肤局部损伤
[0083]
评分后的小鼠，用化妆棉蘸取纯水清洗小鼠背部裸露皮肤后腹腔注射剂量为80mg/kg的1％戊巴比妥钠，麻醉处死，分离背部中央皮肤，剪去皮下组织和粘连脂肪后使用4℃预冷pbs浸泡去除血液，滤纸吸干表面液体，于当日干燥法测定皮肤含水量。先用电子天平称取部分干燥前的背部皮肤质量，标号并记录，于60℃烘箱中烘干处理，相同方法再称取干燥后的背部皮肤质量，计算皮肤含水百分比。
[0084]
皮肤含水量(％)＝(干燥前质量-干燥后质量)/干燥前质量
×
100
[0085]
采用spss21.0和graphpad prism software 8.1统计分析软件处理。
[0086]
结果：最后一天时的背部裸露皮肤外观，正常组小鼠背部皮肤纹理细腻，光滑饱满；模型组小鼠随着累积辐照时长的增加，皮肤皱纹得分不断递增，说明其皱纹逐渐由少变多，由浅入深，个别小鼠最后伴有局部损伤出现；与模型组、对比例1和对比例2相比，四组实施例组小鼠皮肤外观均有不同程度的改善，其皮肤仅少量皱纹，表皮基本无增厚，未见明显色素，外观较为接近正常组，评分结果见附图4。
[0087]
皮肤暴露于紫外线会对皮肤屏障功能产生影响，真皮深层的水分通过表皮蒸发散失，从而造成皮肤含水量下降。各组小鼠皮肤含水量如图5所示，与正常组比较，模型组小鼠皮肤含水量极显著降低，说明经过紫外线辐照后，小鼠皮肤角质层屏障功能受到严重破坏，导致背部皮肤水分大量散失；与模型组、对比例1和对比例2比较，实施例组小鼠皮肤含水量显著升高(p《0.05)，表明含有重组人纤连蛋白的修复贴膜能够有效抑制紫外线辐照过程中小鼠背部皮肤的水分散失，对小鼠皮肤屏障具有保护作用实施例4组小鼠皮肤含水量极显著增高，表明高含量的重组人纤连蛋白对皮肤的保湿补水效果更佳。
[0088]
以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制，但凡采用等同替换或等效变换的形式所获得的技术方案，均应落在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物，其特征在于，其包括如下重量份数的组分：5～20g/100g重组人纤连蛋白、0.3～1.0g/100g透明质酸混合物、0.8～1.2g/100g燕麦葡聚糖、0.8～1.2g/100g芦荟提取液、0.3～0.8g/100g紫松果菊提取物、0.8～1.2g/100g金钗石斛茎提取物和0.3～0.8g/100g舒敏佳，余量为水；其中，所述重组人纤连蛋白氨基酸序列如seq id no.1所示。2.根据权利要求1所述的含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物，其特征在于，所述重组人纤连蛋白的分子量为117.7kd。3.根据权利要求1所述的含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物，其特征在于，所述透明质酸混合物由大分子透明质酸和小分子透明质酸以重量比3～5:5～7混合而成。4.根据权利要求3所述的含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物，其特征在于，所述大分子透明质酸是由双糖单位(葡萄醛酸-n-乙硫氨基葡糖)组成的直链高分子多醣，分子量为1800kda。5.根据权利要求3所述的含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物，其特征在于，所述小分子透明质酸是葡聚糖醛酸，分子量为400～1000kda。6.根据权利要求1所述的含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物，其特征在于，所述组合物还包括以下重量份的组分：0.01～0.02g/100g金属离子螯合剂、5～10g/100g多元醇、2～3g/100g蛋白稳定剂和0.03～0.05g/100g增稠剂。7.一种如权利要求1所述的含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤1，将透明质酸混合物及水混合后，加热到一定温度，混合均匀后，得到混合物1；步骤2，将重组人纤连蛋白及水混合后，低速搅拌混合均匀得到混合物2；步骤3，将紫松果菊提取物、金钗石斛茎提取物、舒敏佳及水加热后，搅拌均匀得到混合物3；步骤4，将燕麦葡聚糖、芦荟提取液及水混合后，加入到一定温度，混合均匀后，得到混合物4；步骤5，先将混合物1和混合物3进行第一次均质混合处理；然后再逐步加入混合物4进行第二次均质混合处理；最后再加入混合物2进行第三次均质混合处理，获得具有修复功效的组合物。8.根据权利要求7所述的含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物的制备方法，其特征在于，所述一定温度为50℃以下。9.根据权利要求7所述的含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物的制备方法，其特征在于，所述第一次、第二次均质混合处理的均质转数为2000～3000rpm；所述第三次的均质混合处理的均质转数为1000～1500rpm。10.一种含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物的应用，其特征在于，所述组合物为如权利要求1-6任一所述的含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物或由如权利要求7-9任一所述制备方法制得的组合物。

技术总结
本发明公开了含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物、制备方法及应用。组合物包括如下重量份数的组分：5～20g/100g重组人纤连蛋白、0.3～1.0g/100g透明质酸混合物、0.8～1.2g/100g燕麦葡聚糖、0.8～1.2g/100g芦荟提取液、0.3～0.8g/100g紫松果菊提取物、0.8～1.2g/100g金钗石斛茎提取物和0.3～0.8g/100g舒敏佳，余量为水；其中，所述重组人纤连蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明含重组人纤连蛋白具有修复功效组合物，以特定的生物活性蛋白重组人纤连蛋白为基础，通过重组人纤连蛋白功能域加强透明质酸、燕麦葡聚糖、芦荟提取液等有效组分的作用，通过各种原料的相互配合使用，起到多重协同作用，能够迅速补充水分，抗炎、清除自由基，达到损伤后修复的作用。达到损伤后修复的作用。


技术研发人员：王琦 常鲜耀 王璐
受保护的技术使用者：珠海盈盛联科生物科技有限公司
技术研发日：2023.02.27
技术公布日：2023/8/5