一种十五味赛尔斗丸中诃子的鉴别方法与流程

1.本发明具体涉及一种十五味赛尔斗丸中诃子的鉴别方法。


背景技术：

2.十五味赛尔斗丸是藏医用于肝胆热症，胆囊炎，胆石症，胆总管结石的常用药，其处方药材包括印度獐牙菜、诃子、石榴子、小檗皮等十五味藏药组成，在目前对十五味赛尔斗丸的研究中，主要是对其进行临床研究，对其质量控制研究较少。十五味赛尔斗丸现行的质量标准为国家食品药品监督管理局国家药品标准，标准编号：ws-10738(zd-0738)-2002，对其中多味药材未进行检查，对很多有效成分的含量也未进行控制，总体说来，质量标准相对简单，无法很好的体现药物质量的均一性、稳定性及可控性，尚不符合现代药物质量的要求。
3.诃子为使君子科植物诃子terminalia chebula retz.或绒毛诃子terminalia chebula retz.var.tomentella kurt.的干燥成熟果实。其是十五味赛尔斗丸中重要药味成分之一，但目前还没有关于十五味赛尔斗丸中诃子的质量控制的研究报道。


技术实现要素：

4.为解决上述问题，本发明提供了一种十五味赛尔斗丸中诃子的鉴别方法，它是采用薄层色谱法鉴别，具体包括如下步骤：
5.a、对照溶液的制备：取没食子酸对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；取诃子对照药材，加乙醇溶液提取，过滤，滤液挥干，残渣加乙醇溶解，作为对照药材溶液；
6.b、供试品溶液的制备：取待测样品，加乙醇溶液提取，过滤，滤液挥干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液；
7.c、薄层层析测定：取对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液，分别点于同一硅胶g板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，干燥，喷三氯化铁乙醇溶液，检视。
8.进一步地，所述对照品溶液每1ml含没食子酸0.05～0.5mg，优选0.1mg。
9.进一步地，所述提取为超声提取，时间20～60min，优选30min。
10.进一步地，所述诃子对照药材与乙醇溶液的质量体积比为0.1～1g：30ml，优选0.5g：30ml；所述待测样品与乙醇溶液的质量体积比为0.1～1g：30ml，优选0.5g：30ml。
11.更进一步地，所述乙醇溶液为70％乙醇溶液。
12.12、进一步地，步骤a所述残渣加乙醇的量为对照药材的6倍v/v，ml/ml；步骤b所述残渣加乙醇的量为待测样品的6倍v/v，ml/ml；所述乙醇为95％乙醇。
13.进一步地，步骤c所述对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液吸取量各为2～8μl；优选5μl。
14.进一步地，步骤c所述甲苯-乙酸乙酯-甲酸的体积比为2～7：1～5：0.5～1.5，优选为5：3：1。
15.更进一步地，所述甲苯为水饱和的甲苯。
16.进一步地，步骤c所述三氯化铁乙醇溶液浓度为1％，w/v，g/ml。
17.进一步地，步骤c所述检视的待测样品显示为含诃子的十五味赛尔斗丸，其色谱图在与对照药材、对照品色谱图相应的位置上，显相同颜色的斑点。
18.本发明一种十五味赛尔斗丸中诃子的鉴别方法，通过在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，能快速、有效的鉴别出十五味赛尔斗丸中是否含有诃子，该方法操作简便、精密度和灵敏度高、稳定性好，且较现有技术能更准确控制十五味赛尔斗丸的质量，具有良好的应用前景。
19.显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
20.以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
21.图1诃子专属性试验tlc图
22.图2诃子系统耐用性试验tlc色谱图-青岛海洋化工有限公司薄层板(1.没食子酸对照品；2.诃子对照药材；3-13.批次一～批次十一)
23.图3诃子系统耐用性试验tlc色谱图-青岛海浪硅胶干燥剂有限公司薄层板(1.没食子酸对照品；2.诃子对照药材；3-13.批次一～批次十一)
24.图4诃子系统耐用性试验tlc色谱图-自制硅胶g-cmc.na薄层板薄层板(1.没食子酸对照品；2.诃子对照药材；3-13.批次一～批次十一)
具体实施方式
25.本发明具体实施方式中使用的样品、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
26.实施例1十五味赛尔斗丸中诃子的鉴别
27.a、对照溶液的制备：
28.1)对照药材溶液的制备：取诃子对照药材0.5g，加入70％乙醇溶液30ml，采用超声提取30min，所得溶液滤过，滤液挥干，残渣加入95％乙醇3ml使溶解，即为对照药材溶液；
29.2)对照品溶液的制备：取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即为对照品溶液；
30.b、供试品溶液的制备：取十五味赛尔斗丸供试品粉末0.5g，加入70％乙醇溶液30ml，采用超声提取30min，所得溶液滤过，滤液挥干，残渣加入95％乙醇3ml使溶解，即得供试品溶液。
31.c、薄层层析测定：吸取对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以水饱和的甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点清晰；
32.供试品显示为含诃子的十五味赛尔斗丸，其色谱图在与对照药材、对照品色谱图相应的位置上，显相同颜色的斑点。
33.实施例2十五味赛尔斗丸中诃子的鉴别
34.a、对照溶液的制备：
35.1)对照药材溶液的制备：取诃子对照药材1g，加入70％乙醇溶液30ml，采用超声提取30min，所得溶液滤过，滤液挥干，残渣加入95％乙醇3ml使溶解，即为对照药材溶液；
36.2)对照品溶液的制备：取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即为对照品溶液；
37.b、供试品溶液的制备：取十五味赛尔斗丸供试品粉末1g，加入70％乙醇溶液30ml，采用超声提取30min，所得溶液滤过，滤液挥干，残渣加入95％乙醇3ml使溶解，即得供试品溶液。
38.c、薄层层析测定：吸取对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以水饱和的甲苯-乙酸乙酯-甲酸(2：1：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点清晰；
39.供试品显示为含诃子的十五味赛尔斗丸，其色谱图在与对照药材、对照品色谱图相应的位置上，显相同颜色的斑点。
40.实施例3十五味赛尔斗丸中诃子的鉴别
41.a、对照溶液的制备：
42.1)对照药材溶液的制备：取诃子对照药材粉末0.1g，加入70％乙醇溶液30ml，采用超声提取30min，所得溶液滤过，滤液挥干，残渣加入95％乙醇3ml使溶解，即为对照药材溶液；
43.2)对照品溶液的制备：取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即为对照品溶液；
44.b、供试品溶液的制备：取十五味赛尔斗丸供试品粉末0.1g，加入70％乙醇溶液30ml，采用超声提取30min，所得溶液滤过，滤液挥干，残渣加入95％乙醇3ml使溶解，即得供试品溶液。
45.c、薄层层析测定：吸取对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以水饱和的甲苯-乙酸乙酯-甲酸(7:5:1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点清晰；
46.供试品显示为含诃子的十五味赛尔斗丸，其色谱图在与对照药材、对照品色谱图相应的位置上，显相同颜色的斑点。
47.以下通过试验例具体说明本发明的有益效果：
48.试验例1本发明薄层鉴别方法学考察
49.1实验材料
50.1.1仪器
51.表1仪器
[0052][0053][0054]
1.2十五味赛尔斗丸
[0055]
十五味赛尔斗丸，规格为0.5g/丸，由青海久美藏药药业有限公司提供，批号见下表。十五味赛尔斗丸的十五味药材也均由青海久美藏药药业有限公司提供。
[0056]
表2十一批十五味赛尔斗丸药品
[0057][0058][0059]
表3对照品与对照药材
[0060][0061]
1.4试剂
[0062]
实验所用水为超纯水。
[0063]
表4试剂
[0064][0065]
1.5材料
[0066]
实验所用材料主要包括玻璃点样毛细管、硅胶g薄层板以及微孔滤膜等。
[0067]
表5材料
[0068][0069]
2实验方法与结果
[0070]
2.1原料药材的检验
[0071]
为保证药材质量，对青海久美藏药药业有限公司提供的十五味原药材按照现行标准规定项目进行检验，结果见表6。
[0072]
表6药材检验结果
[0073][0074]
2.2十五味赛尔斗丸中诃子的tlc鉴别方法的建立
[0075]
2.2.1样品的制备
[0076]
供试品溶液的制备：取十五味赛尔斗丸供试品粉末0.5g，加入70％乙醇溶液30ml，采用超声提取30min，所得溶液滤过，滤液挥干，残渣加入95％乙醇3ml使溶解，即得供试品溶液。
[0077]
对照药材溶液的制备：取诃子对照药材0.5g，照供试品溶液的制备同法制成对照药材溶液。
[0078]
没食子酸对照品溶液的制备：取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即为对照品溶液。
[0079]
阴性对照溶液的制备：按处方配比，取除诃子外的其他药材，按上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
[0080]
2.2.2检测方法
[0081]
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版第四部通则0502)试验，吸取对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以水饱和的
甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点清晰。
[0082]
2.2.3专属性试验
[0083]
吸取上述对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，按照上述检测方法进行试验，结果见图1，从结果可以看出，各批次供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点分离度较好，rf值适中，阴性对照色谱中则不出现相应斑点，表明方中其他成分对诃子的鉴别无明显干扰，说明此薄层色谱条件对于检出十五味赛尔斗丸中的诃子专属性较好，可以采用。
[0084]
2.2.4耐用性试验
[0085]
取自制硅胶g-cmc.na薄层板与两个厂家的预制硅胶g薄层板，分别按上述方法进行试验，结果可见图2～3。从结果可见，本发明方法对自制硅胶g-cmc.na薄层板与两个厂家的预制硅胶g薄层板均适用。

技术特征：
1.一种十五味赛尔斗丸中诃子的鉴别方法，其特征在于：它是采用薄层色谱法鉴别，具体包括如下步骤：a、对照溶液的制备：取没食子酸对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；取诃子对照药材，加乙醇溶液提取，过滤，滤液挥干，残渣加乙醇溶解，作为对照药材溶液；b、供试品溶液的制备：取待测样品，加乙醇溶液提取，过滤，滤液挥干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液；c、薄层层析测定：取对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液，分别点于同一硅胶g板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，干燥，喷三氯化铁乙醇溶液，检视。2.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于：所述对照品溶液每1ml含没食子酸0.05～0.5mg，优选0.1mg。3.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于：所述提取为超声提取，时间20～60min，优选30min。4.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于：所述诃子对照药材与乙醇溶液的质量体积比为0.1～1g：30ml，优选0.5g：30ml；所述待测样品与乙醇溶液的质量体积比为0.1～1g：30ml，优选0.5g：30ml。5.根据权利要求1或4所述的鉴别方法，其特征在于：所述乙醇溶液为70％乙醇溶液。6.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于：步骤a所述残渣加乙醇的量为对照药材的6倍v/v，ml/ml；步骤b所述残渣加乙醇的量为待测样品的6倍v/v，ml/ml；所述乙醇为95％乙醇。7.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于：步骤c所述对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液吸取量各为2～8μl；优选5μl。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c所述甲苯-乙酸乙酯-甲酸的体积比为2～7：1～5：0.5～1.5，优选为5：3：1。9.根据权利要求1或8所述的鉴别方法，其特征在于：所述甲苯为水饱和的甲苯。10.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于：步骤c所述三氯化铁乙醇溶液浓度为1％，w/v，g/ml。11.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于：步骤c所述检视的待测样品显示为含诃子的十五味赛尔斗丸，其色谱图在与对照药材、对照品色谱图相应的位置上，显相同颜色的斑点。

技术总结
本发明提供了一种十五味赛尔斗丸中诃子的鉴别方法，它是采用薄层色谱法鉴别，具体包括如下步骤：a、对照溶液的制备；b、供试品溶液的制备；c、薄层层析测定：取对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液，分别点于同一硅胶G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，干燥，喷三氯化铁乙醇溶液，检视。本发明通过在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，能快速、有效的鉴别出十五味赛尔斗丸中是否含有诃子，该方法操作简便、精密度和灵敏度高、稳定性好，且较现有技术能更准确控制十五味赛尔斗丸的质量，具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。


技术研发人员：孟宪丽 赖先荣 久美彭措
受保护的技术使用者：青海久美藏药药业有限公司
技术研发日：2022.01.19
技术公布日：2023/8/1