基于带有酪氨酸的HER2亲和体的肿瘤靶向诊治方法与流程

基于带有酪氨酸的her2亲和体的肿瘤靶向诊治方法
1.本技术要求享有2022年01月25日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202210089894.0，发明名称为“带有酪氨酸的her2亲和体的肿瘤靶向诊治方法”的在先申请的优先权权益。所述在先申请的全文通过引用的方式结合于本技术中。
技术领域
2.本发明涉及生物医药领域，具体而言，本发明涉及一种带有酪氨酸的her2亲和体的肿瘤靶向诊治方法。


背景技术：

3.癌症是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类。目前治疗癌症的方法有外科手术、放射治疗、化学药物治疗、免疫疗法、靶向治疗、内分泌治疗等。靶向治疗具有毒副作用小的优势，目前已经成为癌症治疗的主流手段，癌症靶点的选择是靶向治疗成功的关键。
4.近年来，人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2，her2)已经成为最重要的癌症治疗靶点。它也被称为受体酪氨酸蛋白激酶erbb-2，属于表皮因子受体家族成员之一，其致癌机制包括抑制肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤细胞增殖、增加肿瘤细胞的侵袭力、促进肿瘤血管新生和淋巴管新生等，在卵巢癌、乳腺癌、胃癌和膀胱癌中常出现高表达。例如，her2在正常的卵巢上皮中几乎不表达，但在上皮性卵巢癌中表达率高达60％。上皮性卵巢癌约95％属于浆液性卵巢癌和粘液性卵巢癌，5％属于子宫内膜样和透明细胞癌。由于多项研究证实her2阳性表达与患者的预后呈显著相关，能够准确有效的获得her2阳性表达的信息将有助于卵巢癌的精准诊断和靶向治疗。为此临床上常采用活检联合免疫组织化学方法进行her2分析和病人分选，但是这种分析方法具有创伤性、偏差和误差等局限，需要改进。制备放射性探针进行癌组织her2活体探测可以解决这一问题，探针材料可以选用不同大小的生物分子，配套适当半衰期的发射γ射线的同位素进行显像。也可以配套发射α、β射线的同位素进行治疗。
5.研究认为，亲和体(affibody)是制备her2探针的理想分子，它的相对分子量约为6.5kda，由58个氨基酸组成，不含二硫键桥，具有较高的稳定性。由于其体积小、高亲和力、能够快速的从血液和非靶向组织清除，从而减少病人检查的等待时间。另外体积小也便于进入癌症组织，提高癌症治疗效果。放射性核素与亲和体相连，利用亲和体与肿瘤表面相关蛋白特异结合，实现受体特异的癌症诊断与治疗。
131
i释放的β射线最大有效射程2.2mm，可不必内化到肿瘤细胞内，在胞外结合区即能起到治疗效果，而且半衰期较长，为8天，在靶细胞滞留时间较长，有利于发挥治疗作用。
131
i还释放γ射线，可用于显像。以往的研究难以在亲和体上直接标记碘，只能通过连接分子间接标记碘，不但产率低，成本高，而且难以定点标记和成药。


技术实现要素：

6.为克服现有技术中所存在的上述缺陷，本发明提供了一种直接标记有放射性核素的亲和体，通过放射性核素与亲和体相连，利用亲和体与肿瘤表面相关蛋白特异结合，实现受体特异的癌症诊断与治疗。本发明的方法产率高，成本低，定点标记专一性强。
7.本发明提供一种亲和体，所述亲和体的氨基端带有酪氨酸。
8.在一些实施方案中，通过基因工程方法在亲和体的氨基端融合表达酪氨酸。
9.在一些实施方案中，所述亲和体与肿瘤细胞表面相关蛋白特异结合；
10.优选地，所述肿瘤细胞表面相关蛋白包括her2、pd-l1、vegfr、egfr、muc1中的一种或多种，优选为her2。
11.在一些实施方案中，所述亲和体为her2亲和体。
12.在一些实施方案中，所述亲和体的氨基端和酪氨酸的羧基端之间包括hehehe序列。
13.在一些实施方案中，所述亲和体的羧基端包括gggc序列。
14.在一些实施方案中，所述亲和体的核苷酸序列选自seq id no.1、seq idno.3。
15.在一些实施方案中，所述亲和体的蛋白质序列选自seq id no.2、seq idno.4。
16.其中，her2亲合体羧基端设计gggc序列便于同位素标记，氨基端设计hehehe序列便于亲和柱纯化。
17.本发明还提供一种诊疗核素标记物，所述诊疗核素标记物为放射性核素标记的上述亲和体。
18.在一些实施方案中，放射性核素选自碘、氚、碳、磷、硫，
19.优选为氚、碳14、磷32、硫35、碘131、碘124、碘125，
20.更优选为碘131。
21.在一些实施方案中，所述诊疗核素标记物为放射性核素标记的her2亲和体。
22.在一些实施方案中，所述her2亲和体中的放射性核素为碘、氚、碳、磷、硫；
23.在一些实施方案中，所述her2亲和体中的放射性核素为氚、碳14、磷32、硫35、碘131、碘124、碘125；
24.在一些实施方案中，所述her2亲和体中的放射性核素为碘131。
25.本发明还提供上述亲和体在制备诊疗核素标记物中的应用。
26.本发明还提供上述诊疗核素标记物在制备肿瘤pet显像和/或spect显像的试剂中的应用。
27.在一些实施方案中，所述肿瘤包括卵巢癌、乳腺癌、胃癌和膀胱癌中的一种或多种。
28.本发明还提供上述诊疗核素标记物在制备肿瘤核素治疗的产品中的应用。
29.在一些实施方案中，所述产品包括试剂盒、药物。
30.在一些实施方案中，所述肿瘤包括卵巢癌、乳腺癌、胃癌和膀胱癌中的一种或多种。
31.本发明还提供上述诊疗核素标记物的制备方法，包括以下步骤：
32.采用放射性核素试剂标记上述亲和体。
33.在一些实施方案中，所述制备方法，包括以下步骤：
34.1)将亲和体的氨基端结合上酪氨酸；
35.2)采用放射性核素标记试剂标记步骤1)中的亲和体。
36.在一些实施方案中，放射性核素试剂选自氯胺-t或iodogen。
37.在一些实施方案中，标记方法选自氯胺-t法或iodogen法。
38.其中，氯胺-t是水溶性的，在水溶液中生成hclo，将放射性
131
i-氧化为放射性的
131
i2，放射性的
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i2进而和化合物的苯环发生亲电取代反应，制得碘标记化合物。iodogen标记化合物的原理和氯胺-t一致，但iodogen不溶于水，标记化合物时可以减少与水溶性有机分子的接触从而减少其氧化损伤，所以氧化条件较为温和。
39.有益效果
40.带有酪氨酸的亲和体更容易被碘标记成功。这是由于酪氨酸由于分子内部有被羟基活化了的苯环，碘的亲电取代反应很容易在羟基的邻位发生。
41.本发明通过放射性核素与带有酪氨酸的亲和体直接相连，利用亲和体与肿瘤表面相关蛋白特异结合，实现受体特异的癌症诊断与治疗。解决了目前只能通过连接分子间接标记碘，产率低，成本高，而且难以定点标记和成药的问题。
附图说明
42.图1：y(he)3z
her2 g3c基因ncoi/ecori双酶切鉴定(1.质粒酶切；2.sm0331(thermo fisher scientific)marker，10000、8000、6000、5000、4000、3500、3000、2500、2000、1500、1200、1000、900、800、600、500、400、300、200、100bp共20条带)。
43.图2：y(he)3z
her2 g3c基因测序图(箭头分别指示起始和终止密码)。
44.图3:1.亲和纯化5mm咪唑洗涤；2.亲和纯化30mm咪唑洗脱；3、4.离子交换0.2m nacl洗脱；5、6.离子交换0.5m nacl洗脱；7.低分子量标准20.1、14.4、7.8、5.4、3.3kd。
45.图4:
131
i-her2亲和体的标记率(a)和纯化产物的放射性化学纯度鉴定(b)。
46.图5:
131
i-her2亲和体的稳定性测定。
47.图6:
131
i-her2亲和体的亲和力测定。
48.图7:
131
i-her2亲和体对卵巢癌模型的靶向性能测定(1.尾静脉注射药物后3h；2.尾静脉注射药物20h；3.尾静脉注射药物后44h；4.尾静脉注射药物68h.圆圈勾画部分为异种移植肿瘤)。
49.图8:
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i-her2亲和体对乳腺癌模型的靶向性能测定(1.尾静脉注射药物后3h；2.尾静脉注射药物44h；.圆圈勾画部分为异种移植肿瘤)。
50.图9:卵巢癌模型
131
i-her2亲和体生物分布测定。
51.图10:带酪氨酸、不带半胱氨酸her2亲和体基因表达质粒的pcr鉴定(1.dl2000plus marker,2000、1500、1000、750、500、250、100bp；2-6：细菌克隆)。
52.图11：y(he)3z
her2
基因测序图(箭头分别指示起始和终止密码)。
53.图12：y(he)3z
her2
的表达和纯化(1：诱导前；2：诱导后；3：培养基；4：菌体；5：超声后沉淀；6：上柱前；7：上柱后；8：marker；9：60mm咪唑；10：45mm；11：5mm咪唑；12：5mm咪唑；13：10mm咪唑；14：15mm咪唑；15：30mm咪唑；16：45mm咪唑；17：60mm咪唑；18：120mm咪唑；19：marker)。
具体实施方式
54.下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。
55.除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
56.为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更详细的描述。但是，应当理解，本发明可以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式或实施例。相反地，提供这些实施方式或实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
57.下文中，仅仅是为说明，只在实施例中描述了其中一少部分，然而不应将其理解为对本发明的限制。除非特殊说明，否则本发明中所使用的试剂都是市售可购买的。
58.实施例1.带酪氨酸、半胱氨酸her2亲和体的基因合成、原核表达载体构建、大肠杆菌重组表达
59.通过多重pcr合成her2亲和体基因，序列seq id no.1如下：ccatggcgtaccacgaacacgaacacgaagcggaaaacaaattcaacaaagaaatgcgcaacgcgtactgggaaattgccctgctgccgaacctgaccaaccaacagaaacgcgccttcatccgctccctgtacgacgacccatcccaatctgcaaacctgctggcggaagcgaagaaactgaacgatgcacagggtggtggttgctaaccgaattc。5’端为ncoi酶切位点，3’端为ecori酶切位点，将该基因和pet26b(+)质粒用ncoi、ecori双酶切，并将her2亲和体基因插入pet26b(+)质粒，转化感受态dh5α大肠杆菌，铺于卡那霉素抗性lb琼脂平板上，培养过夜获得多个克隆。挑取克隆进行pcr鉴定，阳性克隆提取质粒进行ncoi、ecori双酶切鉴定，确定插入基因片段长度约为200bp，和目的基因预期长度217bp一致(图1)。
60.克隆基因长度正确的质粒转化感受态bl21(de3)大肠杆菌，铺于卡那霉素抗性lb琼脂平板上，培养过夜获得多个克隆。挑取克隆进行培养和iptg诱导表达，诱导前后的细菌经过sds-page电泳进行鉴定。对出现7kd左右蛋白质表达的克隆进行测序，测序结果显示基因序列正确(图2)。
61.测序正确的克隆表达的蛋白质氨基酸序列seq id no.2如下：mayheheheaenkfnkemrnayweiallpnltnqqkrafirslyddpsqsa nllaeakklndaqgggc。
62.实施例2.带酪氨酸、半胱氨酸her2亲和体的制备及纯化
63.按照1:100比例将实施例1中的工程菌株接种到1l体积的lb-kana培养基中，37℃，250rpm过夜诱导。12000rpm离心10min。去上清，将沉淀用40ml buffer a(50mm tris-hcl,200mm nacl,ph 8.0)重悬。超声破碎菌体，离心，取上清，0.22μm滤膜过滤后上ni-nta树脂。2倍柱床体积buffer a平衡。上样，10倍体积buffer b(50mm tris-hcl buffer,1m nacl，5mm咪唑，ph 8.0)洗涤。10倍体积buffer c(50mm tris-hcl buffer,1m nacl，30mm咪唑，ph8.0)洗脱。收集洗脱液，透析置换为buffer d(20mm tris-hcl，ph 7.4)，上2倍柱床体积平衡的q-sepharose ff层析柱，用10倍buffer e(20mm tris-hcl，0.2m nacl，ph 7.4洗脱，收集洗脱液。再用10倍buffer f(20mm tris-hcl，0.5m nacl，ph 7.4洗脱，收集洗脱液。sds-page分析显示目的蛋白经过亲和柱纯化和离子交换纯化后得到单一成分(图3，3-4道)。
64.实施例3.
131
i-her2亲和体制备(带酪氨酸、半胱氨酸)
65.1.iodogen法
66.精密称取1.0mg iodogen溶于1ml二氯甲烷，取出20μl iodogen溶液于1.5ml ep管中，氩气吹干形成iodogen膜，管中充入氩气保护，放入零下20℃保存，可用约3个月。在上述管中依次加入20μl 0.25m pbs、20μl 1mg/ml实施例2中的带酪氨酸、半胱氨酸的her2亲和体、约150μci na
131
i，混匀。室温反应5min，立刻加入300μl 0.25m pbs终止反应静置5min。采用放射itlc法测标记率。固定相：itlc-sg，流动相：正丁醇/乙酸/水＝4/1/5(v/v)。测得标记率为89.60％(图4)。采用nap-5柱进行纯化。用pbs进行洗脱。测得
131
i-her2亲和体的放射性化学纯度为96.09％。实验同时
131
i标记带半胱氨酸、不带酪氨酸的her2亲和体，标记率只有3.05％，采用nap-5柱进行纯化。用pbs进行洗脱。测得
131
i-her2亲和体的放射性化学纯度为92.24％(表1)。表明基因工程融合酪氨酸可以提高标记率。
67.表1.
131
i标记y(he)3z
her2 g3c和(he)3z
her2 g3c的标记率、放射性化学纯度比较
[0068][0069]
2.氯胺t法
[0070]
依次在1.5ml的ep管中加入20μl her2亲和体、5μl 0.5m pbs、100μci na 131
i、氯胺t 5μl，室温静置10min，2.5ul na2s2o3终止反应，静置约5min。采用itlc法测标记率。固定相：itlc-sg，流动相：正丁醇/乙酸/水＝4/1/5(v/v)。测得标记率为60.00％。采用nap-5柱进行纯化。用pbs进行洗脱。
[0071]
测得放射性化学纯度为90.06％。将标记好的
131
i-her2亲和体分别加入到生理盐水和血清中，分别在0、15、30、60、120、240、480分钟测其标记率。结果显示
131
i-her2亲和体稳定性大于6h(图5)。
[0072]
实施例4.
131
i-her2亲和体亲和力测定(带酪氨酸、半胱氨酸)
[0073]
接种skov-3细胞，待skov-3细胞长至对数期，采用胰酶进行消化，配成细胞悬液，按照1
×
105个/ml接种24孔板，每孔1ml。放入37℃、5％ co2培养箱中培养24h进行亲和力测定。倒掉培养基，换入新的培养基，实验组每孔加入梯度稀释的
131
i-her2亲和体药物100μl，终浓度分别为2100、525、262.5、131.25、65.63、32.82、16.41、8.21、4.1、2.05(nm)，每个浓度三个平行孔。阻断组先加入100倍浓度的非标记亲和体，然后再加入标记亲和体药物，每个浓度2个平行孔。4℃放置1h后，倒掉培养基。用冰冷的pbs洗涤6遍，加入1ml 0.4m naoh裂解细胞。裂解液转入玻璃管中，采用井型γ计数仪测量细胞结合的放射性，用非阻断组减去阻断组结合的放射性计数得到特异性结合的放射性计数。按照y＝b
max
×
x/(kd+x)公式(x：放射性配体的浓度，y：特异性结合的放射性计数，b
max
：最大结合的放射性计数，kd：平衡解离常数)通过graphpad prism 5软件测定kd值。kd值指获得半数最大结合平衡时的放射性配体浓度。
[0074]
结果测得kd值为25.67
±
6.19nm(图6)。由此可见，
131
i-her2亲和体(带酪氨酸、半胱氨酸的)亲和力高，适合于her2阳性肿瘤的检出和治疗。
[0075]
实施例5.卵巢癌模型
131
i-her2亲和体显像(带酪氨酸、半胱氨酸)
[0076]
培养人卵巢癌(skov-3)细胞长至对数期。胰酶消化细胞，离心，用pbs重悬，加入等
量体积的matrigel，混匀。按1
×
107/只(200μl)匀速注射到裸鼠右腋下。待肿瘤长至0.5-1cm时用于肿瘤显像(约1月)。尾静脉注射200μl约50μci的
131
i-her2亲和体药物。分别在3h、20h、44h、68h后平面显像。
[0077]
结果如图7所示，在注射3h即可显像，在注射44h后显像非常清晰。由此可见，本技术的亲和体定位快速、专一、准确。本技术的亲和体可以将治疗性核素如
131
i靶向运载到her2阳性病灶组织如卵巢癌，实施定点辐射和杀灭。
[0078]
实施例6.乳腺癌模型
131
i-her2亲和体显像(带酪氨酸、半胱氨酸)
[0079]
培养人乳腺癌(mda-mb-361)细胞长至对数期。胰酶消化细胞，离心，用pbs重悬，加入等量体积的matrigel，混匀。按1
×
107/只(200μl)匀速注射到裸鼠右腋下。待肿瘤长至0.5-1cm时用于肿瘤显像(约2月)。尾静脉注射200μl约50μci的
131
i-her2亲和体药物。分别在3h、20h后做平面显像。
[0080]
结果如图8所示，在注射3h即可显像，在注射44h后显像非常清晰。由此可见，本技术的亲和体定位快速、专一、准确。本技术的亲和体可以将治疗性核素如
131
i靶向运载到her2阳性病灶组织如乳腺癌，实施定点辐射和杀灭。
[0081]
实施例7.
131
i-her2亲和体生物分布测定(带酪氨酸、半胱氨酸)
[0082]
尾静脉注射200μl约50μci的
131
i-her2亲和体药物140h后取处死模型小鼠，取血液、心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、肿瘤、骨、甲状腺、卵巢、十二指肠、肌肉、大脑和胃，分别用吸水纸吸去脏器表面血污后称重。放入试管底部，测其放射性。
[0083]
结果如图9所示，肿瘤组织的摄取最高，其次是肾脏和肝脏，甲状腺的摄取明显低于肿瘤组织(图9)。由此可见，本发明的亲和体能够利用亲和体中的her2与肿瘤表面相关蛋白特异结合，实现受体特异的癌症诊断与治疗，非癌症组织受到的影响小于癌组织。
[0084]
实施例8.带酪氨酸、不带半胱氨酸her2亲和体的基因合成、原核表达载体构建、大肠杆菌重组表达
[0085]
通过定点突变，以带酪氨酸、半胱氨酸her2亲和体基因为模板，去除半胱氨酸编码基因，得到带酪氨酸、不带半胱氨酸her2亲和体基因，序列seq idno.3如下：ccatggcgtaccacgaacacgaacacgaag cggaaaacaaattcaacaaagaaatgcgcaacgcgtactgggaaattgccctgctgccgaacctgaccaaccaacagaaacgcgccttcatccgctccctgtacgacgacccatcccaatctgcaaacctgctggcggaagcgaagaaactgaacgatgcacagtaaccgaattc。和pet-26b(+)空载质粒酶切片段、80ng iher2tm片段、4μl 5xce ii buffer、2μl exnase ii、加ddh2o到20ul，37℃孵育30min连接，4℃保存。转化至trans-t1中。方法如下：20ul连接产物加入100μl trans-t1感受态中，冰上放置30min，42℃水浴1min(立马捞起)，放置冰上2min，于超净工作台内加入1ml lb至上述离心管中，37℃250rpm培养40min左右，3000rpm室温离心3min，于超净工作台留100μl左右上清悬起细菌，涂于lb-kana琼脂板上，37℃培养箱中培养过夜，随机挑取5个克隆于1ml培养基中摇至4h后做菌检，结果显示所有克隆均出现约250bp的条带(图10)。将菌检鉴定正确的克隆测序，结果见图11。
[0086]
测序正确的克隆表达的蛋白质氨基酸序列seq id no.4如下：mayheheheaenkfnkemrnayweiallpnltnqqkrafirslyddpsqsa nllaeakklndaq。
[0087]
将测序正确的表达质粒转化至bl21(de3)中，第二天获得抗生素抗性克隆。挑单克隆做菌检，菌检条带正确的保菌诱导蛋白。
[0088]
实施例9.带酪氨酸、不带半胱氨酸her2亲和体的制备及纯化
[0089]
按照1:100比例将工程菌株接种到1l体积的lb-kana培养基中，37℃，250rpm过夜诱导。12000rpm离心10min。去上清，将沉淀用40ml buffer a(50mm tris-hcl,200mm nacl,ph 8.0)重悬。超声破碎菌体，离心，取上清，0.22μm滤膜过滤后上ni-nta树脂。2倍柱床体积buffer a平衡。上样，10倍体积buffer b(50mm tris-hcl buffer,1m nacl，5mm咪唑，ph 8.0)洗涤。再用10倍体积buffer c1(50mm tris-hcl buffer,1m nacl，15、30、45mm咪唑，ph 8.0)洗脱。再用10倍体积buffer c2(50mm tris-hcl buffer,0.2m nacl，60mm咪唑，ph 8.0)洗脱收集洗脱液。透析置换为buffer d(20mm tris-hcl，ph 7.4)，上2倍柱床体积平衡的q-sepharose ff层析柱，用10倍buffer e(20mm tris-hcl，0.2m nacl，ph 7.4洗脱，收集洗脱液。再用10倍buffer f(20mm tris-hcl，0.5m nacl，ph 7.4洗脱，收集洗脱液。
[0090]
sds-page分析显示45mm咪唑和60mm咪唑洗脱蛋白质纯度较高，特别是45mm咪唑洗脱蛋白质浓度最高，在30-60mm咪唑范围内都可以洗脱出纯度和浓度都较高的蛋白质(图12)。
[0091]
实施例10.
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i-her2亲和体治疗卵巢癌的效果研究(带酪氨酸、不带半胱氨酸)
[0092]
培养人卵巢癌(skov-3)细胞长至对数期。胰酶消化细胞，离心，用pbs重悬，按1
×
107/只(200μl)匀速注射到裸鼠右腋下，共30只。待肿瘤长至0.5-1cm时用于肿瘤治疗。将小鼠随机分为pbs对照组、her2亲和体对照组、
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i-her2亲和体实验组。分别腹腔注射pbs、her2亲和体和100μci的
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i-her2亲和体。每周测定肿瘤体积2次，间隔2周注射第二针。第一针注射后25天实验结束。分析各组间肿瘤体积的统计学差异。结果显示和pbs对照组、her2亲和体对照组相比，
131
i-her2亲和体实验组的小鼠肿瘤体积明显缩小，具有显著意义(表2)。计算各组移植瘤抑制率和肿瘤抑制率。公式如下：[肿瘤抑制率＝(对照组平均瘤重－实验组平均瘤重)/对照组平均瘤重
×
100％]。[肿瘤治愈率＝(未长肿瘤小鼠个数/小鼠总只数)
×
100％]，见表3。
[0093]
表2.
131
i-her2亲和体治疗中skov-3卵巢癌体积变化(mm3)
[0094][0095][0096]
*：p《0.05
[0097]
表3.小鼠肿瘤瘤重(g)及肿瘤抑制率(％)和肿瘤治愈率
[0098][0099]
从表2和表3中可以看出，
131
i-her2亲和体相对于her2亲和体，可以显著消除肿瘤。注射第一针
131
i-her2亲和体后的21、25天，肿瘤显著缩小。分别从705
±
222mm3缩小到465
±
153mm3；从846
±
268mm3缩小到491
±
168mm3，p值均小于0.05，存在显著差异。相比之下，注射第一针her2亲和体后的21、25天，和pbs相比肿瘤变化不明显。分别从764
±
455mm3缩小到705
±
222mm3；从877
±
496mm3缩小到846
±
268mm3，p值均大于0.05，没有显著意义。提示
131
i-her2亲和体对卵巢癌具有很好的自导自爆效果。
[0100]
实验表明，在实施例1、实施例2的基础上，可以衍生出带酪氨酸、不带半胱氨酸只用于碘标记的癌症靶向诊治分子，该分子的制备方法、同位素标记方法和临床应用同样适用。
[0101]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

技术特征：
1.一种亲和体，所述亲和体的氨基端带有酪氨酸。2.根据权利要求1所述的亲和体，其特征在于，通过基因工程方法在亲和体的氨基端融合表达酪氨酸；和/或，所述亲和体与肿瘤细胞表面相关蛋白特异结合；优选地，所述肿瘤细胞表面相关蛋白包括her2、pd-l1、vegfr、egfr、muc1中的一种或多种，优选为her2。3.根据权利要求1或2所述的亲和体，其特征在于，所述亲和体为her2亲和体。4.根据权利要求1-3任一项所述的亲和体，其特征在于，所述亲和体的氨基端和酪氨酸的羧基端之间包括hehehe序列；和/或，所述亲和体的羧基端包括gggc序列。5.根据权利要求4所述的亲和体，其特征在于，所述亲和体的核苷酸序列选自seq id no.1、seq id no.3；和/或，所述亲和体的蛋白质序列选自seq id no.2、seq id no.4。6.一种诊疗核素标记物，所述诊疗核素标记物为放射性核素标记的权利要求1-5任一项所述的亲和体；优选地，放射性核素选自碘、氚、碳、磷、硫，优选为氚、碳14、磷32、硫35、碘131、碘124、碘125，更优选为碘131。7.权利要求1-5任一项所述的亲和体在制备诊疗核素标记物中的应用。8.权利要求6所述的诊疗核素标记物在制备肿瘤pet显像和/或spect显像的试剂中的应用；优选地，所述肿瘤包括卵巢癌、乳腺癌、胃癌和膀胱癌中的一种或多种。9.权利要求6所述的诊疗核素标记物在制备肿瘤核素治疗的产品中的应用；优选地，所述产品包括试剂盒、药物；优选地，所述肿瘤包括卵巢癌、乳腺癌、胃癌和膀胱癌中的一种或多种。10.权利要求6所述的诊疗核素标记物的制备方法，包括以下步骤：采用放射性核素试剂标记上述亲和体；优选地，放射性核素试剂选自氯胺-t或iodogen；优选地，标记方法选自氯胺-t法或iodogen法。

技术总结
本发明公开了一种直接标记有放射性核素的亲和体，通过放射性核素与带有酪氨酸的亲和体相连，利用亲和体与肿瘤表面相关蛋白特异结合，实现受体特异的癌症诊断与治疗。实现受体特异的癌症诊断与治疗。实现受体特异的癌症诊断与治疗。


技术研发人员：蔡炯
受保护的技术使用者：元本（珠海横琴）生物科技有限公司
技术研发日：2023.01.19
技术公布日：2023/8/1