血浆外泌体来源的长链非编码RNALINC00467在急性髓系白血病中的应用方法

血浆外泌体来源的长链非编码rna linc00467在急性髓系白血病中的应用方法
技术领域
1.本发明涉及生物医药技术领域，具体为一种血浆外泌体来源的长链非编码rna linc00467在急性髓系白血病早期诊断和化疗疗效监测中的应用。


背景技术：

2.急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,aml)是起源于造血干、祖细胞的髓系造血系统恶性肿瘤，是成人中最常见的急性白血病类型，其临床和分子生物学特征具有高度异质性。急性髓系白血病以骨髓与外周血中原始和幼稚髓系细胞异常增生为主要特征，临床表现为贫血、出血、感染、脏器浸润等，多数病例病情急重，预后凶险，且患者治疗后仍出现复发、难治。因此，及时对急性髓系白血病进行早期诊断，探究与其疗效监测或预后评估相关的分子特征，完善该疾病风险评估体系，进而制定个体化治疗方案，对于减少患者缓解后复发率，改善患者预后具有重大意义。
3.外泌体(exosome)是由细胞分泌释放到细胞外的一种脂质双层囊泡，直径约为40-100nm，其中携带大量生物活性物质，包括蛋白质、脂质、核酸等。外泌体在血液、唾液、尿液等多种体液中均有存在，可携带生物活性物质在细胞和组织之间穿梭，从而参与细胞间的通讯，并且外泌体具有在体液中稳定存在的特性，其双层膜结构可以保护携带的分子免受体液循环中酶的降解。研究发现，黑色素瘤患者血浆外泌体中表达上调的肿瘤相关标志物cav1可帮助疾病诊断；多发性骨髓瘤患者血清外泌体中lncrna prins可作为疾病诊断标志物；膀胱癌患者血清外泌体lncrna pcat-1,ubc和snhg16可作为膀胱癌预后判断的指标。因此，外泌体可作为一种理想的液体活检分析材料，帮助肿瘤的早期诊断及预后判断等。目前，大部分急性髓系白血病的研究集中在骨髓细胞，需要进行骨髓穿刺，这无疑增加了患者的痛苦，因此，为了让急性髓系白血病患者在治疗过程中最大获益，利用循环外泌体，进一步探寻相对无创的诊断及预后评估指标，可以有效减少患者的痛苦和不便。
4.在外泌体的运载成分中，长链非编码rna(long non-coding rna,lncrna)受到广泛关注。研究表明，多种肿瘤细胞中存在差异表达的lncrna，在肿瘤的发生发展中发挥着重要作用，并且肿瘤细胞中的lncrna可以包裹到外泌体中，由细胞释放进血液循环，这使得外泌体lncrna成为一种理想的、无创的肿瘤诊断及预后标志物。然而，外泌体lncrna对于急性髓系白血病诊断分层和风险评估的作用目前还有待研究。


技术实现要素：

5.1.针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种血浆外泌体来源的长链非编码rna linc00467的应用方法，尤其是一种能够用于制备急性髓系白血病早期诊断或者化疗疗效监测制剂的应用方法，所述长链非编码rna linc00467的核苷酸序列表为seq id no.1。
6.2.为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种实验性验证血浆外泌体来源的
长链非编码rna linc00467在制备急性髓系白血病诊断及化疗疗效监测制剂方面的应用，其特征在于，包括以下步骤：
7.(1)提取并鉴定血浆外泌体：首先，收集急性髓系白血病患者及健康人外周血，离心、过滤处理获得无细胞成分的血浆；然后，利用外泌体提取试剂盒(exorneasy midi kit)提取血浆外泌体；最后，利用透射电子显微镜(transmission electron microscopy,tem)观察外泌体形态、纳米颗粒追踪分析技术(nanoparticle tracking analysis,nta)测定外泌体粒径、蛋白质印迹法(western blot analysis)检测外泌体表面标志蛋白表达。
8.(2)检测急性髓系白血病血浆外泌体长链非编码rna linc00467表达并分析其临床意义：首先，利用exorneasy midi kit提取急性髓系白血病患者和健康对照的血浆外泌体总rna；其次，利用实时荧光定量pcr(quantitative real time pcr，qrt-pcr)检测外泌体linc00467的表达水平；然后，收集急性髓系白血病患者年龄、性别、fab分型、白细胞数(wbc)等临床信息，统计学分析外泌体linc00467水平与患者临床特征的相关性；最后，收集急性髓系白血病患者化疗后达不同疗效的血浆样本，提取并检测其外泌体linc00467的表达水平，探讨其疗效评估作用。
9.(3)分析血浆外泌体长链非编码rna linc00467对急性髓系白血病的诊断价值：利用graphpad prism(version 7.00)软件绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,roc)曲线，分析血浆外泌体linc00467对急性髓系白血病的诊断价值。
10.(4)探讨血浆外泌体来源的长链非编码rna linc00467的稳定性：首先，提取急性髓系白血病患者血浆外泌体，获得外泌体悬液；然后，对外泌体悬液进行室温孵育、反复冻融以及rnase a处理；最后，qrt-pcr检测处理后外泌体中linc00467表达水平。
11.3.与现有技术相比，本发明具有如下优点：
12.(1)本发明首次通过实验证明急性髓系白血病患者血浆中可检测到外泌体来源的长链非编码rna linc00467，并且其表达水平明显低于健康人，具有诊断急性髓系白血病的潜能。
13.(2)本发明首次通过实验证明化疗后达完全缓解的急性髓系白血病患者血浆外泌体中长链非编码rna linc00467表达水平较初诊时明显上调，提示血浆外泌体linc00467可以成为急性髓系白血病疗效监测的新型非侵入性生物标志物。
附图说明
14.图1a显示为血浆外泌体电镜图。
15.图1b显示为血浆外泌体粒径图。
16.图1c显示为免疫印迹法检测外泌体标志蛋白cd63和alix的表达。
17.图2a显示为实时荧光定量pcr分析血浆外泌体来源的lncrna linc00467在急性髓系白血病与健康人中的表达差异。
18.图2b显示为血浆外泌体来源的lncrna linc00467在不同急性髓系白血病fab分型中的表达差异。
19.图2c显示为血浆外泌体来源的lncrna linc00467在急性髓系白血病患者初诊时样本与治疗后疗效评估为未缓解/部分缓解时样本中的表达差异。
20.图2d显示为血浆外泌体来源的lncrna linc00467在急性髓系白血病患者初诊时
样本与治疗后疗效评估为完全缓解时样本中的表达差异。
21.图3显示为roc分析血浆外泌体来源的lncrna linc00467对急性髓系白血病早期诊断的灵敏性和特异性。
22.图4a显示为室温孵育0、12、24、48h对外泌体lncrna linc00467水平的影响。
23.图4b显示为反复冻融0、4、6次对外泌体lncrna linc00467水平的影响。
24.图4c显示为rnase a酶处理对外泌体lncrna linc00467水平的影响。
具体实施方式
25.下面结合具体的实施例，进一步阐述本发明。应理解，本发明的实施例仅用于解释本发明，并不意味着限制本发明的保护范围。
26.下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
27.实施例1血浆外泌体的提取和鉴定
28.1.1实验方法
29.1.1.1白血病细胞的培养
30.nb4细胞购买自美国典型培养物保藏中心(american type culture collection，atcc)，并使用含10％南美胎牛血清、1％青霉素-链霉素溶液(100u/ml)的rpmi-1640培养液于37℃、5％co2的培养箱中培养。平均1天传代，以保持细胞对数生长。
31.1.1.2血浆样本的收集
32.选取因急性髓系白血病入院的病人及健康人群，分别抽取静脉血5ml置于抗凝采血管(含edta)中，4℃下2,000g离心10min，吸取血浆至无酶离心管中，4℃下10,000g离心30min，尽可能去除血细胞成分，用0.22μm过滤器过滤血浆以去除细胞碎片和大直径的细胞外囊泡，-80℃冰箱保存以备后续使用。
33.1.1.3血浆外泌体提取
34.将保存于-80℃的血浆样本取出，室温下完全溶解后使用外泌体提取试剂盒(exorneasy midi kit)提取血浆外泌体：首先，向血浆样本中加入等量buffer xbp，充分混匀后将混合液加入到exoeasy亲和性膜离心柱(exoeasy spin column)中，3,000g离心1min并去除废液；随后，加入3.5ml buffer xwp，3,000g离心5min；然后，将离心柱更换到新的collection tube中，向膜中央加入400μl elution buffer(xe)并在室温下静置5min；最后，500g离心5min得到外泌体悬液，用于后续实验或置于-80℃保存。
35.1.4血浆外泌体的鉴定
36.1.1.4.1透射电子显微镜观察外泌体形态：首先，将碳膜铜网正面向上放置于电镜用纸上，使用移液枪吸取适当外泌体悬液，滴加至碳膜铜网上，室温干燥10min；然后，用滤纸拭去铜网边缘残余液体，滴加2％磷钨酸溶液，室温负染10min。最后，将铜网置于透射电子显微镜下观察外泌体形态并拍摄照片。
37.1.1.4.2纳米颗粒追踪分析技术测定外泌体粒径：首先，用去离子水冲洗zetaview pmx 110仪器检测池，并用无菌pbs冲洗检测池以排除气泡；然后，使用pbs将外泌体悬液按照1:10000比例稀释，充分混匀后吸取适量稀释后悬液注入到检测池中；最后，应用相应的软件zetaview 8.02.28获得测量参数并进行数据处理。
38.1.1.4.3蛋白质印迹法检测外泌体表面标志蛋白：
39.(1)血浆外泌体蛋白提取：从-80℃冰箱中取出外泌体标本，室温下溶解后加入适量含蛋白酶抑制剂的蛋白裂解液ripa，冰上裂解30min，每5min涡旋震荡一次，充分裂解后，4℃，12,000g离心30min，吸取上清为外泌体总蛋白至新的ep管中，bca法检测蛋白浓度，剩余蛋白样品加入5
×
loading buffer，煮沸变性后-80℃保存，同时用相同的方法提取nb4细胞的蛋白作为对照。
40.(2)sds-page凝胶电泳：首先，配制12％分离胶并缓慢匀速加入电泳槽内，在凝胶表层缓慢注入适量无水乙醇，室温静置30min；然后，弃去无水乙醇，在分离胶上层缓慢注入5％浓缩胶，插上齿梳后室温静置30min；随后，拔出齿梳，加入1
×
sds电泳缓冲液，向加样孔中加入变性蛋白样品，同时在样本两侧加入蛋白marker作为分子量参照；最后，按照两步法电泳分离蛋白：第一步，电压80v，电流150ma，30min；第二步，电压120v，电流200ma，60～90min。12％分离胶与5％浓缩胶的配方见表1-1。表1-1 12％分离胶与5％浓缩胶配制试剂12％分离胶(ml)5％浓缩胶(ml)30％丙烯酰胺6.0000.830ddh2o4.9003.4001.5m tris-hcl(ph＝8.8)3.800-1.5m tris-hcl(ph＝6.8)-0.63010％sds0.1500.05010％ap0.1500.050temed0.0060.005
41.(3)湿转法转膜：电泳结束后，首先根据待测蛋白分子量大小，切取适当凝胶并剪裁与之相匹配的pvdf膜，将pvdf膜置于甲醇中浸泡活化15s，随后用蒸馏水洗涤2min并浸泡在预冷的湿转缓冲液中。最后，由正极向负极方向依次安放海绵、滤纸、pvdf膜和凝胶，以210ma的恒流电泳转膜，转膜时间根据目的蛋白分子量大小决定。
42.(4)封闭：转膜结束后，将pvdf膜浸泡在5％的蛋白封闭液中，室温下封闭2h。
43.(5)抗体孵育：首先，用tbst洗去pvdf膜上残留的封闭液，将膜置于蜡板上，取适量预先稀释好的一抗工作液均匀覆盖于膜上，4℃孵育过夜；然后，回收一抗工作液，将pvdf膜放入tbst中洗涤3次，每次10min；最后，加入预先用5％脱脂牛奶配置的二抗工作液于pvdf膜上，室温孵育1h，tbst洗涤3次，每次10min。
44.(6)显色及成像：将pvdf膜置于化学发光板上，取适量预先配置的化学发光试剂均匀覆盖于pvdf膜上，置于成像系统中避光成像。
45.1.2实验结果
46.首先，利用试剂盒提取患者及健康对照血浆外泌体，并对该方法提取的外泌体进行生物学特征鉴定。如图1a所示，透射电子显微镜观察到双层膜结构囊泡，符合外泌体形态特征；如图1b所示，利用纳米颗粒追踪分析技术发现外泌体粒径主要分布在60-100nm左右，符合外泌体粒径分布特点；如图1c所示，蛋白质印迹法在外泌体组分中可检测到外泌体标志蛋白cd63和alix的表达，而在白血病细胞nb4组分中仅检出阴性对照calnexin。以上结果表明，我们成功地从急性髓系白血病患者和健康人血浆样本中提取外泌体，为后续实验打
下坚实基础。
47.实施例2急性髓系白血病患者血浆外泌体lncrna linc00467的表达及临床意义
48.2.1实验方法
49.2.1.1外泌体总rna提取
50.使用上述exorneasy midi kit提取血浆外泌体中总rna：首先，向exoeasy spin column或外泌体悬液中加入700μl qiazol试剂以裂解外泌体，室温静置5min；加入90μl三氯甲烷，室温静置2min并使用涡旋振荡器充分混匀15s，4℃下12,000g离心15min；然后，吸取取上清液至无酶ep管中，加入两倍体积无水乙醇，混匀后加入到rneasy minelute spin column，8,000g离心15s；弃废液，加入700μl buffer rwt，8,000g离心15s；弃废液，加入500μl buffer rpe，8,000g离心15s；弃废液，加入500μl buffer rpe，8,000g离心2min；最后，将spin column移入新的collection tube，全速开盖离心5min弃去残余液体；再将spin column移入新的无酶ep管中，向膜中央加入14μl rnase-free water，室温静置1min，全速离心1min得到外泌体总rna，-80℃保存或进行下一步实验。
51.2.1.2逆转录：配置逆转录体系如下(20μl体系)：试剂用量5
×
primescript rt master mix4μltotal rna1μgrnase free ddh2oup to 20μl反应条件：37℃
×
15min，85℃
×
5s，4℃冷却，cdna于-40℃保存。
52.2.1.3 qrt-pcr：配置qrt-pcr反应体系如下(10μl体系)：试剂用量tb green premix ex taq ii5.0μlforward primer(10μm)0.4μlreverse primer(10μm)0.4μlrnase-free h2o3.2μlcdna1.0μl反应条件：95℃预变性30s，循环1次；95℃变性5s，58℃退火30s，72℃充分延伸20s，循环49次。溶解曲线：65℃～95℃，每上升0.5℃采集1次荧光。以gapdh为内参，采用2
–
δct
计算进行相对定量。各目的基因的引物由上海生工有限公司合成，序列见表2-1。表2-1 qrt-pcr的引物序列基因序列(5
’‑3’
)linc00467f:5'-cagcaccgatcccgacatag-3' r:5'-ctggcttcctgaagacgatga-3'gapdhf:5'-gaagggctcatgaccacagt-3' r:5'-ggatgcagggatgatgttct-3'
53.2.1.4统计分析
54.采用2-δct
计算方法得出linc00467的相对表达量，采用mann-whitney u检验分析
linc00467在组间的表达差异。收集急性髓系白血病患者年龄、性别、fab分型、白细胞数(wbc)、血红蛋白含量(hb)等信息，采用卡方检验和fisher确切概率法分析外泌体linc00467水平与急性髓系白血病患者临床资料的关系。所有数据来自3次独立的实验，定量资料以均数
±
标准差(x
±
sd)表示。采用graphpad prism(version 7.00)或spss(version 25.00)软件进行统计处理。两样本均数比较采用非配对学生t检验。检验水准为α＝0.05，p《0.05表示差异有统计学意义。
55.2.2实验结果
56.2.2.1急性髓系白血病患者血浆外泌体中linc00467表达水平
57.为了探讨急性髓系白血病患者血浆外泌体中lncrna linc00467的表达情况，我们以65例初诊急性髓系白血病患者和20例健康人的血浆样本作为实验对象，采用qrt-pcr检测血浆外泌体linc00467的表达水平。结果如图2a所示，与健康对照相比，急性髓系白血病患者血浆外泌体linc00467显著下调(p＝0.0021)。
58.2.2.2血浆外泌体linc00467表达水平与急性髓系白血病患者临床特征的相关性
59.为进一步探讨外泌体linc00467与急性髓系白血病患者临床特征的关系，我们收集了患者性别、年龄、fab分型、白细胞数(wbc)等临床信息，并采用卡方检验和fisher确切概率法分析外泌体linc00467水平与患者临床特征的相关性。如图2b所示，m2、m4和m5亚型中，外泌体linc00467水平均低于健康对照。如表2-2所示，血浆外泌体linc00467表达水平与急性髓系白血病患者年龄和白细胞数显著相关(p＝0.0206，p＝0.0152)。表2-2外泌体linc00467水平与急性髓系白血病患者临床特征的相关性
60.2.2.3血浆外泌体linc00467对急性髓系白血病的疗效评估作用
61.外泌体lncrna对疾病治疗效果的评估作用是判断其临床价值的重要条件。因此，我们收集了6例化疗后未缓解(non-remission,nr)或者部分缓解(partial remission,pr)的急性髓系白血病患者血浆样本，以及12例化疗后达完全缓解(complete remission,cr)的急性髓系白血病患者血浆样本，qrt-pcr检测外泌体linc00467在患者化疗前后的表达水平。结果如图2c-d所示，化疗后达完全缓解的患者血浆外泌体linc00467水平较初诊时明显上调(p＝0.0161)，但在未缓解或部分缓解时表达水平无明显差异(p》0.05)。
62.实施例3血浆外泌体lncrna linc00467对急性髓系白血病的诊断价值
63.3.1实验方法
64.3.1.1统计分析
65.利用graphpadprism(version7.00)软件绘制受试者工作特征(roc)曲线，并分析外泌体lncrna linc00467的曲线下面积(auc)、灵敏性和特异性。根据roc曲线确定血浆外泌体lncrna的最佳cut-off值。
66.3.2实验结果
67.为了探讨外泌体linc00467在急性髓系白血病中的诊断价值，通过绘制roc曲线确定其曲线下面积，并分析其诊断灵敏性及特异性。如图3所示，linc00467对诊断急性髓系白血病具有较高的auc值(0.7246)，对诊断急性髓系白血病的最佳cut-off值为0.0104(灵敏性，100.0％；特异性，50.8％)。综上所述，血浆外泌体linc00467对急性髓系白血病具有较
好的诊断价值。
68.实施例4血浆外泌体lncrna linc00467的稳定性
69.4.1实验方法
70.4.1.1室温孵育对外泌体linc00467水平的影响
71.首先，分离急性髓系白血病患者血浆外泌体，制备外泌体悬液；然后，将外泌体悬液均分成4份，分别于室温环境下放置0、12、24、48h；最后，提取外泌体rna，qrt-pcr检测各组外泌体linc00467水平。
72.4.1.2反复冻融对外泌体linc00467水平的影响
73.首先，分离急性髓系白血病患者血浆外泌体，制备外泌体悬液；然后，将外泌体悬液均分成3份，分别在-80℃冰箱反复冻融0、4、6次；最后，提取外泌体rna，qrt-pcr检测各组外泌体linc00467水平。
74.4.1.3处理对外泌体linc00467水平的影响
75.首先，分离急性髓系白血病患者血浆外泌体，制备外泌体悬液；然后，将外泌体悬液均分成2份，一份加入rnasea(终浓度为2μg/ml)设为实验组，一份不加rnasea设为对照组，37℃孵育20min；最后，提取外泌体rna，qrt-pcr检测各组外泌体linc00467水平。
76.4.2实验结果
77.为了评估linc00467在血浆外泌体中的稳定性，我们采用了三种方式处理血浆外泌体。首先，将外泌体悬液分别在室温孵育0、12、24、48h后qrt-pcr检测linc00467表达水平，结果如图4a所示，室温孵育后linc00467表达水平没有显著变化；然后，在-80℃冰箱反复冻融外泌体悬液，qrt-pcr检测linc00467表达水平，如图4b所示，linc00467表达水平无显著变化；此外，用rnasea处理外泌体悬液后qrt-pcr检测linc00467水平，如图4c所示，rnasea处理并未显著降低外泌体linc00467水平。以上结果提示，长时间室温放置、反复冻融和rnasea处理并未影响血浆外泌体linc00467的表达水平，血浆外泌体linc00467具有良好的稳定性。

技术特征：
1.一种血浆外泌体来源的长链非编码rna linc00467的应用方法，其特征在于，所述的血浆外泌体来源的长链非编码rna linc00467用于急性髓系白血病患者的早期诊断或疗效监测，该长链非编码rna linc00467的核苷酸序列见seq id no.1。2.根据权利要求1所述的血浆外泌体来源的长链非编码rna linc00467用于急性髓系白血病诊断和疗效监测的应用方法，其特征在于，其具体方法如下：(1)临床获取急性髓系白血病患者血浆样本并提取外泌体；(2)提取外泌体中总rna；(3)实时荧光定量pcr方法检测外泌体中linc00467的含量。3.根据权利要求2所述的血浆外泌体来源的长链非编码rna linc00467用于急性髓系白血病诊断和疗效监测的应用方法，其特征在于，所述步骤(1)中血浆外泌体，具体提取方法如下：(1)收集受试者5ml空腹静脉血，4℃下2,000g离心10min；吸取血浆至无酶离心管中，4℃下10,000g离心30min，尽可能去除血细胞成分；用0.22μm过滤器过滤血浆以去除细胞碎片和大直径的细胞外囊泡；(2)使用外泌体提取试剂盒(exorneasy midi kit)提取血浆外泌体：首先，向处理后的血浆样本中加入等量buffer xbp，充分混匀后将混合液加入到exoeasy spin column中，3,000g离心1min并去除废液；随后，加入3.5ml buffer xwp，3,000g离心5min；然后，将spin column更换到新的collection tube中，向膜中央加入400μl elutionbuffer(xe)并在室温下静置5min；最后，500g离心5min得到外泌体悬液。4.根据权利要求2所述的血浆外泌体来源的长链非编码rna linc00467用于急性髓系白血病诊断和疗效监测的应用方法，其特征在于，所述步骤(2)中提取外泌体内总rna，具体提取方法如下：使用exorneasy midi kit提取血浆外泌体中总rna：首先，向exoeasy spin column或外泌体悬液中加入700μl qiazol试剂以裂解外泌体，室温静置5min；加入90μl三氯甲烷，室温静置2min并使用涡旋振荡器充分混匀15s，4℃下12,000g离心15min；然后，吸取上清液至无酶ep管中，加入两倍体积无水乙醇，混匀后加入到rneasy minelute spin column，8,000g离心15s；弃废液，加入700μl buffer rwt，8,000g离心15s；弃废液，加入500μl buffer rpe，8,000g离心15s；弃废液，加入500μl buffer rpe，8,000g离心2min；最后，将spin column移入新的collection tube，全速开盖离心5min弃去残余液体；再将spin column移入新的无酶ep管中，向膜中央加入14μl rnase-free water，室温静置1min，全速离心1min得到外泌体总rna。5.根据权利要求2所述的血浆外泌体来源的长链非编码rna linc00467用于急性髓系白血病诊断和疗效监测的应用方法，其特征在于，所述步骤(3)中检测外泌体linc00467的含量，具体操作方法如下：(1)rna逆转录配置逆转录体系如下(20μl体系)：试剂用量5
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primescript rt master mix4μltotal rna1μg
rnase free ddh2oup to 20μl反应条件：37℃
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15min，85℃
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5s，4℃冷却，cdna于-40℃保存。(2)qrt-pcr配置qrt-pcr反应体系如下(10μl体系)：试剂用量tb green premix ex taq ii5.0μlforward primer(10μm)0.4μlreverse primer(10μm)0.4μlrnase-free h2o3.2μlcdna1.0μl反应条件：95℃预变性30s，循环1次；95℃变性5s，58℃退火30s，72℃充分延伸20s，循环49次。溶解曲线：65℃～95℃，每上升0.5℃采集1次荧光。以gapdh为内参，采用2
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δct
计算进行相对定量。各目的基因的引物由上海生工有限公司合成，序列见表1-1。表1-1 qrt-pcr的引物序列基因序列(5
’‑3’
)linc00467f:5'-cagcaccgatcccgacatag-3'r:5'-ctggcttcctgaagacgatga-3'gapdhf:5'-gaagggctcatgaccacagt-3'r:5'-ggatgcagggatgatgttct-3'

技术总结
本发明公开了一种血浆外泌体来源的长链非编码RNA(longnon-codingRNA，lncRNA)LINC00467的应用方法，即血浆外泌体来源的lncRNALINC00467在急性髓系白血病患者早期诊断以及化疗疗效监测的应用。通过研究证实，在急性髓系白血病患者血浆中分离外泌体后提取总RNA，逆转录并进行实时荧光定量PCR分析发现，与健康对照相比，急性髓系白血病患者血浆外泌体中LINC00467表达水平明显下调；并且当患者化疗达完全缓解后，血浆外泌体中LINC00467表达水平较化疗前明显上调。因此，血浆外泌体lncRNA LINC00467可成为急性髓系白血病早期诊断及化疗疗效监测的新型非侵入性生物标志物。生物标志物。生物标志物。


技术研发人员：张伶 林灿 肖巧玲 任俊 彭美茜 敬一佩 陶永红 黄军鹏 杨静 孙明会
受保护的技术使用者：重庆医科大学国际体外诊断研究院
技术研发日：2022.12.15
技术公布日：2023/7/31