一种抗PCNA重组抗体的重/轻链可变区编码基因及其重组抗体和应用的制作方法

一种抗pcna重组抗体的重/轻链可变区编码基因及其重组抗体和应用
技术领域
1.本发明涉及基因工程技术领域，具体是涉及一种抗pcna重组抗体的重/轻链可变区编码基因以及重组抗体和应用。


背景技术：

2.增殖细胞核抗原(pcna)是真核细胞dna合成所必需的一种36kd的核蛋白，它在g1期pcna的表达逐渐增加，s期达最高峰，而g2/m期则减少。pcna的表达可能是dna多倍体形式表达的一个标记，也成为肿瘤细胞失调状态下的一个标记，检测pcna可以客观评价肿瘤细胞增殖状态。
3.pcna无种属及组织特异性，其小鼠单克降抗体可以适用于冷冻组织、石蜡切片及培养的细胞等多种材料以及elisa、western blot、免疫组织化学等多种实验技术，同时可以与大鼠、小鼠、猴、人、昆虫、猫、狗等多个种属发反应，在基础科研中应用非常广泛，也是日常病理诊断中检测肿瘤增殖状态的一个常用标记分子。有研究表明pcna能较好地反映细胞的增殖活性，也有研究显示pcna与某些肿瘤的预后及诊断有一定关系。在乳腺癌的预后研究中，ki67与pcna这类增殖标记与p53等一同被列为仅次于雌激素受体、组织学级别的乳腺癌第二类预后指标。此外，pcna在其他肿瘤如肺癌、胃癌等其他组织来源肿瘤的良恶性的区分、恶性程度的确定及评估预后等方面有较广泛的应用。
4.传统用于病理诊断的抗体，主要是利用传统的小鼠杂交瘤技术制备生产，生产方式为首先制备抗原免疫小鼠，然后获取小鼠的脾细胞并与特殊的骨髓瘤细胞融合，使其变成“永生化”的杂交瘤细胞，最后通过杂交瘤细胞的培养源源不断的产生抗体。其主要弊端在于制备周期较长、表位丢失严重、单克隆细胞株传代过程中的抗体染色体丢失、细胞复苏后污染等问题，因此并不能达到真正意义上的永生。此外由于制备过程依赖动物，不仅无法克服动物个体差异性带来的批间差，而且随着人类对动物保护的认识加强，对于动物的限制使用也将是大势所趋。而用于临床病理诊断的抗体要求抗体具有较高的稳定性和一致性，因此，必须寻找稳定性良好且不依赖动物的抗体制备技术，基因工程抗体技术即重组抗体技术的产生解决了以上难题。
5.新一代重组抗体技术与传统杂交瘤技术相比有着明显优势，一是可根本防止杂交瘤细胞在传代过程中抗体基因容易丢失以及细胞株容易污染的缺陷，而重组抗体技术可以对抗体基因进行解码，使得抗体基因可以像芯片一样永久保存；其二，重组抗体可以从根本上摆脱动物依赖性，从而防止了因动物批次差异导致的批间差异，保证了产品的“稳定性及一致性”，特别适用于大剂量单抗的工业化使用；第三，重组抗体的开发使得单克隆抗体不再局限于小鼠，由于某些物种暂时未能获得工业化的骨髓瘤细胞，使得该物种的单抗制备受限，而利用重组抗体的技术理论上可以获得任何物种的单克隆抗体，从而打破市场上小鼠单抗独占鳌头的局面；此外，由于重组抗体主要是利用哺乳动物细胞进行表达，而哺乳动物细胞可实现反应器的大规模培养，培养规模可高达5000l，产量可达10g/l，对于需求量比
较大的抗体(如ivd抗体以及抗体药物)，采用基因工程抗体大规模表达，它具有极大的成本效益，一次开发，终身受益。
6.目前临床病理诊断用的抗pcna小鼠单抗，主要采用的是传统杂交瘤技术制备方法获得，无法克服由于动物个体差异引入的批间差，且单批次产量小，且无法避免优质的单克隆株丢失的问题，使得在病理诊断的过程中出现一定的偏差和误诊。此外，与科研用抗体的研发有所不同的是，研制出适用于临床病理诊断用的pcna抗体需要考虑诸多因素，包括抗体的特异性、稳定性、产量、一致性、以及抗体功能实用性等因素。因此，开发稳定可靠的重组抗体是非常具有市场前景的和意义。


技术实现要素：

7.本发明针对现有技术的不足，提供一种抗pcna重组抗体的重/轻链可变区编码基因以及重组抗体和应用，该抗pcna重组抗体的重链可变区、轻链可变区序列来源于多次免疫及筛选得到的一株高特异性的抗pcna的单克隆株，特异性强，稳定性好，将该抗pcna重组抗体应用于检测试剂盒产品中，将各序列的优势通过抗体的优势来体现，更加适用于病理诊断。
8.为实现上述目的，本发明第一方面提供一种抗pcna重组抗体的重链可变区，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:1所示，序列如下：
9.evklqqsgpelvkpgasvkisckasgyafsrswmnwvkqrpgkglewigriypgdgdtnyngkfkgkatltadkssstaymqlssltsedsavyfcarlyyysgsygayfdywgqgttitvss。
10.本发明第二方面，提供一种由上述抗pcna重组抗体的重链可变区的编码基因，所述编码基因的核苷酸序列如seq id no:2所示。
11.本发明第三方面，提供一种用于扩增上述重链可变区的编码基因的引物，所述引物的上游引物mu-ecori/vh-f1(2nd)的核苷酸序列如seq id no:5所示，下游引物mu-nhei/vh-r1(2nd)的核苷酸序列如seq id no:6所示。核苷酸序列如下：
12.mu-ecori/vh-f1(2nd)上游引物(seq id no:5)：
[0013]5’‑
cggaattcg gaggtgaagctgcagcagtctggacct-3’；
[0014]
mu-nhei/vh-r1(2nd)下游引物(seq id no:6)：
[0015]5’‑
ctagctagc tgaggagactgtgatagtggtgccttg-3’。
[0016]
本发明第四方面，提供一种重链可变区表达载体，所述表达载体含有上述重链可变区的编码基因，能够表达抗pcna重组抗体的重链可变区蛋白。
[0017]
本发明第五方面，提供一种抗pcna重组抗体的轻链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:3所示，序列如下：
[0018]
diqltqspatlsvtpgdrvslscrasqsisdylhwyqqkshesprllikyasqsisgipsrfsgsgsgsdftlsinsvepedvgvyycqnghsfpltfgagtkleik。
[0019]
本发明第六方面，提供一种由上述抗pcna重组抗体的轻链可变区的编码基因，所述编码基因的核苷酸序列如seq id no:4所示。
[0020]
本发明第七方面，提供一种用于扩增上述轻链可变区的编码基因的引物，所述引物的上游引物mu-ecori/vl-f1(2nd)的核苷酸序列如seq id no:7所示，下游引物mu-xhol/vl-r1(2nd)的核苷酸序列如seq id no:8所示。核苷酸序列如下：
[0021]
mu-ecori/vl-f1(2nd)上游引物(seq id no:7)：
[0022]5’‑
cggaattca gacattcagctgacccagtctccagc-3’；
[0023]
mu-xhol/vl-r1(2nd)下游引物(seq id no:8)：
[0024]5’‑
ccgctcgag tttgatctccagcttggtccc-3’。
[0025]
本发明第八方面，提供一种轻链可变区表达载体，所述表达载体含有上述轻链可变区的编码基因，能够表达抗pcna重组抗体的轻链可变区蛋白。
[0026]
本发明第九方面，提供一种抗pcna重组抗体，包括重链恒定区、重链可变区、轻链恒定区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:1所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:3所示。
[0027]
本发明第十方面，提供一种抗pcna重组抗体检测试剂盒产品，所述试剂盒产品的原料包括本发明的抗pcna重组抗体。
[0028]
本发明的有益效果：
[0029]
本发明提供的抗pcna重组抗体的重链可变区、轻链可变区序列来源于多次免疫及筛选得到的一株高特异性的抗pcna的单克隆株，特异性强，稳定性好，采用上述重链可变区、轻链可变区序列制备成的抗pcna重组抗体，序列的优势可通过抗体的优势体现出来，将其应用于检测试剂盒产品中，可适用于病理诊断。
[0030]
本发明涉及的用于检测pcna的重组抗体具备高特异性、高产量、批次差异小、稳定性好等特性，其能适用于多种免疫学检测体系，可用于科研以及临床用的pcna检测试剂的核心抗体原料。
[0031]
相比于传统杂交瘤抗体基因在传代过程中易丢失的特性，本发明的抗pcna重组抗体制备技术的引入，使得抗体基因得以明确并可以永久保存，从而保证了抗体的特异性，可大批量生产，抗体批次差异小，稳定性和一致性高，满足工业化的使用需求。目前，市面上没有商业化抗pcna重组抗体应用于病理诊断，我们将抗pcna重组抗体制备成检测试剂盒产品，并对其适用性进行了多方面验证，该重组抗体具有较高的特异性和稳定性，制成的检测试剂盒产品可用于乳腺癌等肿瘤的病理诊断，具有重要的应用前景。
附图说明
[0032]
图1为本发明小鼠脾脏细胞和sp20融合的杂交瘤细胞总rna(a)和cdna内参扩增琼脂糖凝胶电泳(b)；
[0033]
图2为本发明抗pcna重组抗体轻链和重链扩增结果图；
[0034]
图3为本发明t克隆蓝白筛选照片，其中，a为轻链t克隆蓝白筛选，b为重链t克隆蓝白筛选；
[0035]
图4为本发明抗pcna重组抗体轻链可变区基因测序结果图；
[0036]
图5为本发明抗pcna重组抗体重链可变区基因测序结果图；
[0037]
图6为本发明真核表达并纯化的抗pcna重组抗体的sds-page检测结果图；
[0038]
图7为本发明抗pcna重组抗体wb验证图，其中，a为组织样本，b为细胞样本；
[0039]
图8为本发明抗pcna重组抗体ihc验证图；
[0040]
图9为本发明抗pcna重组抗体病理组织(犬乳腺癌组织)ihc验证图；
[0041]
图10为本发明抗pcna重组抗体(肝癌细胞系huh7)icc验证图；
[0042]
图11为本发明抗pcna重组抗体(宫颈癌细胞系hela)icc验证图。
[0043]
以下结合附图及实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
[0044]
为了更好地阐述本发明的技术方案，下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内文献或参考书籍所描述的技术或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器设备未注明生产商者，均为常规产品。
[0045]
本发明的上述各项技术特征和在下文(如实施案例)中具体描述的各项技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。
[0046]
实施例中，vh表示重链可变区，vl表示轻链可变区；载体pfusess-chig-mg2b购自美国invivogen公司；载体pfuse2ss-clig-mk购自美国invivogen公司。
[0047]
实施例1：anti-pcna单克隆抗体可变区基因钓取
[0048]
1、杂交瘤细胞rna提取及逆转录结果
[0049]
先通过pcna抗原免疫小鼠，获得小鼠脾脏细胞，小鼠脾脏细胞与sp20融合获得杂交瘤细胞，trizol法提取杂交瘤细胞rna，经琼脂糖凝胶电泳可见清晰的28s和18s条带，如图1，a所示，说明rna完整性较好。rna浓度和纯度测定结果为d(260nm)/d(280nm)＝1.85，可以满足本实验要求。以rna为模板反转录合成cdna，以cdna为模板，小鼠内参基因β-actin为引物进行pcr扩增，扩增出目的条带，如图1，b所示，说明逆转录cdna可用于后续实验。
[0050]
2、anti-pcna单克隆抗体可变区pcr扩增
[0051]
引物序列：通过多序列比对和简并引物设计算法，在抗pcna重组单克隆抗体前导肽和可变区的相对恒定区设计可扩增抗pcna重组单克隆抗体可变区基因的引物。其中，pcna重组单克隆抗体轻链可变区引物序列如下：
[0052]
上游通用引物：
[0053]
vk-mu-f1(seq id no:9):
[0054]5’‑
gacattcagctgacccagtctcca-3’；
[0055]
vk-mu-f2(seq id no:10):
[0056]5’‑
gggaattcgayattgtgmtracmcarkmtcaa-3’；
[0057]
vk-mu-f3(seq id no:11):
[0058]5’‑
atgaggrcccctgctcagwttyttggmwtctt-3’；
[0059]
vk-mu-f4(seq id no:12):
[0060]5’‑
aggagacagacacactcctgctat-3’；
[0061]
下游通用引物：
[0062]
vk-mu-r1(seq id no:13):
[0063]5’‑
gttagatctccagcttggtccc-3’；
[0064]
vk-mu-r2(seq id no:14):
[0065]5’‑
ggaagcttactggatggtgggaagatgga-3’；
[0066]
vk-mu-r3(seq id no:15):
[0067]5’‑
atgragwcacakwcycagtctt-3’；
[0068]
vk-mu-r4(seq id no:16):
[0069]5’‑
cccaagcttactggatggtgggaaatgga-3’。
[0070]
pcna重组单克隆抗体重链可变区引物序列如下：
[0071]
上游通用引物：
[0072]
vh-mu-f1(seq id no:17):
[0073]5’‑
aggtsmarctgcagsagtcwgg-3’；
[0074]
vh-mu-f2(seq id no:18):
[0075]5’‑
gggaattcsaggtsmarctgcagsagtct-3’；
[0076]
下游通用引物：
[0077]
vh-mu-r1(seq id no:19):
[0078]5’‑
tgaggagacggtgaccgtggtcccttggccccag-3’；
[0079]
vh-mu-r2(seq id no:20):
[0080]5’‑
ggaagcttayctccacacacaggrrccagtggatagac-3’。
[0081]
以cdna为模板，用taqdna酶扩增mcab v区(单克隆抗体可变区)基因。扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果如图2所示，结果显示：vh(重链可变区)基因片段长度约为350-400bp，vl(轻链可变区)基因片段长度约为350bp，与目的片段长度一致。
[0082]
3、纯化v区基因与t-载体连接
[0083]
用胶回收试剂盒纯化pcr产物，将vh基因和vl基因分别与pgem-t载体连接，转化大肠杆菌。经蓝白筛选，筛选照片如图3所示(黑白图中灰色为蓝色菌落)，挑选白色菌落pcr鉴定。每一连接物各挑取20个单克隆，采用通用引物进行菌落pcr，目的片段大小为500bp左右，将其中条带明亮的40个阳性克隆菌送基因测序公司测序。
[0084]
4、anti-pcna单克隆抗体的可变区序列测序结果
[0085]
从步骤3中40个阳性克隆的8条有效序列当中优选2条，一条轻链可变区，一条重链可变区，分别标记为mu-anti-hu-pcna-vl和mu-anti-hu-pcna-vh。
[0086]
4.1anti-pcna-vl测序结果
[0087]
利用imgt/quest在线分析软件，对轻链基因进行同源性比较，有效核苷酸序列(seq id no.4)如下：
[0088]
gacattcagctgacccagtctccagccaccctgtctgtgactccaggagatagagtctctctttcctgcagggccagccagagtattagcgactacttacactggtatcaacaaaaatcacatgagtctccaaggcttctcatcaaatatgcttcccaatccatctctgggatcccctccaggttcagtggcagtggatcagggtcagatttcactctcagtatcaacagtgtggaacctgaagatgttggagtgtattactgtcaaaatggtcacagctttcctctcacgttcggtgctgggaccaagctggagatcaaac。
[0089]
氨基酸序列(seq id no.3)如下：
[0090]
diqltqspatlsvtpgdrvslscrasqsisdylhwyqqkshesprllikyasqsisgipsrfsgsgsgsdftlsinsvepedvgvyycqnghsfpltfgagtkleik。
[0091]
软件分析结果如图4所示，功能性轻链可变区全长为322个碱基，结构域从第1位碱基开始，编码107个氨基酸，该有功能的轻链均属于musmus igkv5-39*01f家族，v区匹配率为98.57％，j区为94.44％。具体结构域划分如表1所示：
[0092]
表1轻链可变区结构域划分结果
[0093]
结构域fr1cdr1fr2cdr2fr3cdr3fr4碱基1..7879..9697..147148..156157..264265..291292..322
[0094]
抗pcna重组单克隆抗体，轻链可变区cdr1、cdr2、cdr3的编码基因的核苷酸序列依次如下所示：其中，cdr2序列过短，未在序列表中列出。
[0095]
cdr1：cagagtattagcgactac(seq id no:21)；
[0096]
cdr2：tatgcttcc；
[0097]
cdr3：caaaatggtcacagctttcctctcacg(seq id no:22)。
[0098]
抗pcna重组单克隆抗体，轻链可变区cdr1、cdr2、cdr3的编码基因翻译成氨基酸序列依次如下所示：其中，cdr2序列过短，未在序列表中列出。
[0099]
cdr1：qsisdy(seq id no:23)；
[0100]
cdr2：yas；
[0101]
cdr3：qnghsfplt(seq id no:24)。
[0102]
4.2anti-pcna-vh测序结果
[0103]
利用imgt/quest在线分析软件，对重链可变区基因进行同源性比较，有效核苷酸序列(seq id no.2)如下：
[0104]
gaggtgaagctgcagcagtctggacctgagctggtgaagcctggggcctcagtgaagatttcctgcaaggcttctggctacgcattcagtaggtcctggatgaactgggtgaagcagaggcctggaaagggtcttgagtggattggacggatttatcctggagatggagatactaactacaatgggaagttcaagggcaaggccacactgactgcagacaaatcctccagcacagcctacatgcaactcagcagcctgacatctgaggactctgcggtctacttctgtgcaagactttattactacagtggtagctacggggcctactttgactactggggccaaggcaccactatcacagtctcctcag。
[0105]
氨基酸序列(seq id no.1)如下：
[0106]
evklqqsgpelvkpgasvkisckasgyafsrswmnwvkqrpgkglewigriypgdgdtnyngkfkgkatltadkssstaymqlssltsedsavyfcarlyyysgsygayfdywgqgttitvss。
[0107]
软件分析结果如图5所示，功能性重链可变区全长为370个碱基，结构域从第1位碱基开始，编码123个氨基酸，mu-anti-hu-pcna单抗有功能的重链均属于musmus ighv1-82*01f家族，v区匹配率为98.61％，j区为95.83％。具体结构域划分如表2所示：
[0108]
表2重链可变区结构域划分结果
[0109]
结构域fr1cdr1fr2cdr2fr3cdr3fr4碱基1..7576..99100..150151..174175..288289..336337..370
[0110]
抗pcna重组单克隆抗体，重链可变区cdr1、cdr2、cdr3的编码基因依次如seq id no:25～27所示。
[0111]
cdr1：ggctacgcattcagtaggtcctgg(seq id no:25)；
[0112]
cdr2：atttatcctggagatggagatact(seq id no:26)；
[0113]
cdr3：gcaagactttattactacagtggtagctacggggcctactttgactac(seq id no:27)。
[0114]
抗pcna重组单克隆抗体，重链可变区cdr1、cdr2、cdr3的编码基因翻译成氨基酸序列依次如seq id no:28～30所示：
[0115]
cdr1：gyafsrsw(seq id no:28)；
[0116]
cdr2：iypgdgdt(seq id no:29)；
[0117]
cdr3：arlyyysgsygayfdy(seq id no:30)。
[0118]
实施例2：抗pcna重组单克隆抗体的构建
[0119]
根据上述经测序确认正确且有功能的重链和轻链可变区基因，结合表达载体的酶切位点以及读码框，设计抗体扩增的二次扩增引物，以相应的t克隆为模板进行二次pcr，pcr产物经限制性内切酶处理后分别连入到载体pfusess-chig-mg2b和pfuse2ss-clig-mk，完成质粒重组，重组后的质粒转入感受态细胞dh5α后，挑选阳性克隆送公司测序。
[0120]
小鼠抗体重链恒定区载体pfusess-chig-mg2b是一种表达小鼠igg2b重链恒定区域的克隆质粒，它包含重链恒定区上游的多克隆位点，以克隆重链可变区，然后酶切连入重链可变区完成重组，重组质粒的重链基因全长如seq idno:31所示，其中前60bp为信号肽编码序列，中间的369bp为重链可变区编码基因，之后的1020bp为重链恒定区编码基因，重链的氨基酸序列如seq id no:32所示。
[0121]
小鼠抗体轻链恒定区载体pfuse2ss-clig-mk是一种表达小鼠igg2b轻链恒定区域的克隆质粒，它包含轻链恒定区上游的多克隆位点，以克隆轻链可变区，然后酶切连入轻链可变区完成质粒重组，重组质粒的轻链基因全长如seq id no:33所示，其中前60bp为信号肽编码序列，中间的321bp为轻链可变区编码基因，之后的324bp为轻链恒定区编码基因，轻链的氨基酸序列如seq id no:34所示。
[0122]
实施例3：抗pcna重组单克隆抗体真核表达纯化
[0123]
将测序正确质粒对应的菌液扩大培养并提取质粒，将携带重链基因的质粒和携带轻链基因的质粒以一定比例共转染哺乳动物细胞293f细胞或者cho-s细胞，两种质粒在哺乳动物细胞中完成重链和轻链的表达以及聚合后，形成抗pcna重组抗体。5-10天后，收集培养细胞上清液进行protein a亲和层析纯化，纯化后的抗体sds-page电泳分析结果如图6所示，其中，还原性sds-page加入了还原剂，如dtt、2-巯基乙醇等。
[0124]
实施例4：anti-pcna重组单克隆抗体活性的检测及应用
[0125]
4.1western blot：抗pcna重组单克隆抗体可以很好地识别天然样本(各种组织与细胞样本)和重组蛋白，有比较广泛的物种反应性，如图7所示。
[0126]
4.2免疫组织化学(immunohistochemistry，ihc)：抗pcna重组单克隆抗体可以很好地应用于免疫组织化学检测，结果显示pcna定位于细胞核，且不同细胞着色不均一，表明不同细胞的增殖水平，如图8所示；犬乳腺癌pcna的表达明显高于正常犬乳腺组织pcna的表达，在不同分化程度和不同区域，pcna阳性细胞数量及分布呈异质性，其中以肿瘤实质区pcna表达最高，如图9所示。
[0127]
4.3细胞免疫荧光(mmunocytochemistry/immunofluorescence，icc)：抗pcna重组单克隆抗体与肝癌细胞系huh7和宫颈癌细胞系hela有很好的结合活性，可以很好地应用于免疫荧光检测，结果显示pcna可以很好的定位于细胞核，且肿瘤细胞系均有较强的着色，表明其增殖活跃，如图10、11所示，其中图10为肝癌细胞系huh7，图11为宫颈癌细胞系hela，anti-krt8(pab)为细胞骨架，dapi为染料。
[0128]
最后需要强调的是，以上所述仅为本发明的优选实施例，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种变化和更改，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种抗pcna重组抗体的重链可变区，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:1所示。2.如权利要求1所述的抗pcna重组抗体的重链可变区的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如seq id no:2所示。3.一种用于扩增权利要求2所述重链可变区的编码基因的引物，其特征在于，所述引物的上游引物mu-ecori/vh-f1(2nd)的核苷酸序列如seq id no:5所示，下游引物mu-nhei/vh-r1(2nd)的核苷酸序列如seq id no:6所示。4.一种重链可变区表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求2所述的编码基因，能够表达抗pcna重组抗体的重链可变区蛋白。5.一种抗pcna重组抗体的轻链可变区，其特征在于，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:3所示。6.如权利要求4所述的抗pcna重组抗体的轻链可变区的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如seq id no:4所示。7.一种用于扩增权利要求6所述轻链可变区的编码基因的引物，其特征在于，所述引物的上游引物mu-ecori/vl-f1(2nd)的核苷酸序列如seq id no:7所示，下游引物mu-xhol/vl-r1(2nd)的核苷酸序列如seq id no:8所示。8.一种轻链可变区表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求6所述的编码基因，能够表达抗pcna重组抗体的轻链可变区蛋白。9.一种抗pcna重组抗体，包括重链恒定区、重链可变区、轻链恒定区和轻链可变区，其特征在于：所述重链可变区的氨基酸序列如权利要求1所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如权利要求5所示。10.一种抗pcna重组抗体检测试剂盒产品，其特征在于，所述试剂盒产品的原料包括权利要求9所述的抗pcna重组抗体。

技术总结
本发明涉及基因工程技术领域，具体是涉及一种抗PCNA重组抗体的重/轻链可变区编码基因以及重组抗体和应用。本发明的抗PCNA重组抗体包括重链可变区的氨基酸序列SEQ ID NO:1和轻链可变区的氨基酸序列SEQ ID NO:3。本发明抗PCNA重组抗体的重链可变区、轻链可变区序列来源于多次免疫及筛选得到的一株高特异性的抗PCNA的单克隆株，特异性强，稳定性好，将该抗PCNA重组抗体应用于检测试剂盒产品中，将各序列的优势通过抗体的优势来体现，更加适用于病理诊断，具有重要的应用前景。具有重要的应用前景。具有重要的应用前景。


技术研发人员：杨娟 姚新欣
受保护的技术使用者：江西惠康基因科技有限公司
技术研发日：2022.08.17
技术公布日：2023/7/31