包括聚丙烯容器和包装在其中的NGF水性制剂的药物包装的制作方法

包括聚丙烯容器和包装在其中的ngf水性制剂的药物包装
1.本发明涉及包括特定聚丙烯容器和包装在其中的ngf水性制剂的药物包装。
2.包装是制药行业的一个重要方面，其确保在运输、储存、销售和使用期间对药物进行保护和保持。
3.主包装最为重要，因为其与药物产品直接接触，因此其需要是惰性的，并且不会引起药物产品组成的任何变化。
4.主包装的类型取决于药物的剂型和化学组成。对于液体药物剂型，通常使用高品质的玻璃或塑料材料。玻璃是广泛使用的材料，因为其是化学惰性的并且允许非常容易地检查容器中的内容物。然而，玻璃易碎且昂贵。
5.至于塑料，其具有柔性、重量轻和成本有效的优点，但在一些情况下，由于一些药物可能与容器反应的事实而出现问题。
6.对于药物主包装，基于聚丙烯的材料已得到药典批准并被普遍使用。
7.神经生长因子(nerve growth factor，ngf)是在中枢和外周水平二者调节神经元的存活、发育和功能的复合蛋白。
8.ngf已被认为对于治疗外周和中枢神经系统二者的某些退行性疾病包括遗传性感觉和运动神经病、遗传性和偶发性系统退化、肌萎缩侧索硬化症、帕金森病和阿尔茨海默病是有效的。现今，ngf还发现了在角膜疾病例如神经营养性角膜炎的治疗中的特定治疗用途。目前用于治疗的ngf是从小鼠颌下腺中提取或通过重组技术制造的。
9.ngf在治疗中的用途具有一些问题，因为在制造、纯化或储存期间其生物活性(取决于其二级和三级结构)可能发生变化。ngf溶液可能经受蛋白质聚集，从而可能导致效价变化。
10.除了稳定性问题之外，与许多其他蛋白质一样，ngf非特异性地结合至表面和各种材料(包括玻璃和塑料)，在制造、储存或施用期间ngf可以与之接触。这种现象可能导致溶液中活性物质的浓度降低，并因此导致最终施用于患者的ngf量可变或不足。
11.ngf目前以冻干形式销售，以在使用时进行重构，或者作为需要在低温(通常-20℃)下储存的水性制剂销售，以使ngf水性制剂的降解和粘附最小化。此外，为了减轻ngf对主包装的粘附，目前销售的ngf玻璃小瓶的内接触表面覆盖有减少蛋白质吸附的涂层。
12.wo95/05845a1描述了ngf制剂并说明了该蛋白质缺乏稳定性和对各种表面的不期望粘附的缺点。为了减少或防止ngf粘附，该文献提出使用用于ngf水性制剂的稳定添加剂，例如表面活性剂如聚山梨醇酯，例如80，泊洛沙姆如f68，或蛋白质如白蛋白。实施例5和6描述了包装在聚丙烯滴头小瓶中的ngf水性制剂的稳定性研究。这些小瓶的聚丙烯是一般的未表征材料。
13.jp2012001588 a公开了用于包装固体制剂的具有优异的透明度、抗冲击性、可成型性和抗卷曲性的基于丙烯的片材。
14.wo2016153663a1描述了可喷洒的基于烯烃的热熔粘合剂。
15.鉴于以上，仍然需要保持ngf水性制剂在处理和储存期间的活性和效价，而不必借助于在溶液中联合使用添加剂、在整个制造和储存中采用低温以及用于主包装的复杂且昂
贵的容器。


技术实现要素：

16.申请人进行了旨在有效防止ngf从水性制剂粘附到储存其的容器的内接触表面或使其最小化的研究，并且出乎意料地发现以一定热特性和结晶度为特征的特定聚丙烯(pp)显示出显著低于硅化玻璃或其他聚丙烯的ngf粘附的ngf粘附。
17.通过使用这些特定pp，因此可以在不太苛刻的条件下甚至在室温下储存ngf水性制剂，从而有利地避免另外的对容器的涂覆处理和制剂中的稳定添加剂，同时保持ngf效价恒定。
18.因此，本发明的一个目的是药物包装，其包括作为主包装的塑料容器和包装在其中的ngf水性制剂，其中塑料容器具有外表面和与ngf水性制剂接触的内表面，其中至少所述内接触表面基本上由至少丙烯-乙烯共聚物制成，优选地所述内接触表面由高于80重量％的至少丙烯-乙烯共聚物制成，所述丙烯-乙烯共聚物的根据说明书中报道的方法通过dsc测量的熔融焓δhm小于95j/g且大于35j/g。
19.本发明的另一个目的是用于选择适用于制造本发明的药物包装的塑料容器的至少内接触表面的丙烯-乙烯共聚物的方法，所述方法包括：
[0020]-提供至少丙烯-乙烯共聚物样品
[0021]-根据说明书中报道的方法通过dsc测量丙烯-乙烯共聚物样品的熔融焓δhm，
[0022]-如果丙烯-乙烯共聚物的熔融焓δhm小于95j/g且大于35j/g，则将丙烯-乙烯共聚物选择为合适的。
[0023]
本发明的又一个目的是上述塑料容器用于包装ngf水性制剂的用途。
[0024]
定义
[0025]
术语“聚丙烯”意指丙烯的均聚物和共聚物二者。
[0026]
首字母缩写“pp”意指聚丙烯。
[0027]
术语“基于丙烯的材料”意指包含高于50％的丙烯mer％的材料。
[0028]
术语“丙烯-乙烯共聚物”意指其中丙烯单体是主要单体的丙烯与乙烯的共聚物。本文中的术语“丙烯-乙烯共聚物”还包括其中丙烯单体是主要单体并且存在另外的烯烃单体的丙烯。乙烯三元共聚物。
[0029]
术语“主要单体”意指以高于50％mol的量存在于聚合物中的单体。
[0030]
术语“mer”意指聚合物的重复单元部分。
[0031]
首字母缩写“ngf”意指神经生长因子。
[0032]
术语“基本上由
…
制成”意指关于组分的百分比按重量计高于80％。
[0033]
术语“液体药物剂型”意指其中药物产品被制造并可供使用的液体制剂，例如溶液、乳剂、混悬剂、洗剂等。
[0034]
术语“主包装”或“主容器”意指与液体药物剂型直接接触的包装。
[0035]
术语“单剂量包装”意指包含单个剂量的药物的包装。
[0036]
术语“多剂量包装”意指包含多于单个剂量的药物的包装。
[0037]
术语“接触表面”意指塑料容器的用于与ngf水性制剂接触的表面。
[0038]
除非另有说明，否则在本文中所有百分比均为重量百分比。
附图说明
[0039]-图1示出了制剂f1至f5在被测pp材料ppl至pp5上的接触角的条形图；
[0040]-图2示出了在rhngf从制剂f1吸附到pp2材料膜上的实验中在石英晶体微量天平上测量的电极的振荡频率与时间的图(δf-hz与时间-分钟，6个复制品)；
[0041]-图3和图4示出了从制剂f6吸附到pp3、pp4和pp5试样的表面上的ngf的光电子发射图；
[0042]-图5示出了制剂f7与对照制剂(ctrl)的吸光度(在280nm处)的条形图，制剂f7包装在双层硅化玻璃小瓶或pp3瓶中并储存在2℃至8℃、25℃和37℃的温度下；在1周、2周、1个月、2个月和3个月的时间点测量吸光度(3个月稳定性测试)。
[0043]-图6示出了制剂f7与对照制剂(ctrl)的色氨酸荧光(λ最大
‑×
107cps处的强度)的条形图，制剂f7包装在双层硅化玻璃小瓶或pp3瓶中并储存在2℃至8℃、25℃和37℃的温度下；在1周、2周、1个月、2个月和3个月的时间点测量荧光(3个月稳定性测试)。
[0044]
除非另有说明，否则所有百分比均以重量百分比表示。
具体实施方式
[0045]
本发明的一个目的是药物包装，其包括塑料容器和包装在其中的ngf水性制剂，其中塑料容器具有外表面和与ngf水性制剂接触的内表面，其中至少所述内接触表面基本上由至少丙烯-乙烯共聚物制成，优选地所述内接触表面由高于80重量％的至少丙烯-乙烯共聚物制成，所述丙烯-乙烯共聚物的根据说明书中报道的方法通过dsc测量的熔融焓δhm小于95j/g且大于35j/g。
[0046]
本发明的包装的塑料容器为适用于ngf水性制剂的主包装的塑料容器。
[0047]
本发明的包装的塑料容器可以为刚性或柔性容器。
[0048]
本发明的包装的容器可以为安瓿、小瓶、瓶、罐、包或袋。
[0049]
优选地，本发明的容器为瓶或小瓶。
[0050]
本发明的包装的塑料容器可以具有单层或多层结构，优选地具有单层结构。
[0051]
在单层结构的情况下，塑料容器基本上由如本文所限定的丙烯-乙烯共聚物制成，优选地其包含至少90％、更优选地至少95％、甚至更优选地至少99％的至少如本文所限定的丙烯-乙烯共聚物。
[0052]
在多层结构的情况下，至少接触表面层基本上由至少如本文所限定的丙烯-乙烯共聚物制成，优选地其包含至少90％、更优选地至少95％、甚至更优选地至少99％的至少如本文所限定的丙烯-乙烯共聚物。
[0053]
在一个实施方案中，整个容器基本上由至少如本文所限定的丙烯-乙烯共聚物制成，优选地其包含至少90％、更优选地至少95％、甚至更优选地至少99％的至少如本文所限定的丙烯-乙烯共聚物或其混合物。
[0054]
接触表面层或整个容器的至100％的补充可以由其他优选可混溶的热塑性聚合物例如乙烯-乙酸乙烯酯共聚物等表示。
[0055]
本发明的塑料容器的特征在于至少丙烯-乙烯共聚物形成至少接触表面层，所述丙烯-乙烯共聚物的根据说明书中报道的方法通过dsc测量的熔融焓δhm小于95j/g且大于35j/g。
[0056]
优选地，丙烯-乙烯共聚物的熔融焓δhm小于90j/g，更优选地小于80j/g。
[0057]
优选地，丙烯-乙烯共聚物的熔融焓δhm大于40j/g。
[0058]
优选地，丙烯-乙烯共聚物的熔融焓δhm为90j/g至35j/g，更优选为80j/g至40j/g。
[0059]
不适用于制造本发明的包装的容器的100％结晶丙烯均聚物的熔融焓δhm为约207j/g(thermal application note-polymer heats of fusion-roger l.blaine，ta inctruments，109 lukens drive，new castle de 19720，美国)。
[0060]
优选地，丙烯-乙烯共聚物的根据说明书中报道的dsc方法测量的熔融温度tm低于160℃，更优选地低于155℃。
[0061]
优选地，丙烯-乙烯共聚物的根据说明书中报道的dsc方法测量的熔融温度tm高于130℃，更优选地高于140℃。
[0062]
优选地，丙烯-乙烯共聚物的根据说明书中报道的dsc方法测量的熔融温度tm为160℃至130℃，更优选为155℃至140℃。
[0063]
优选地，丙烯-乙烯共聚物的根据iso 1133在230℃和2.16kg下测量的熔体流动指数小于10克/10分钟，更优选地小于9克/10分钟。
[0064]
优选地，丙烯-乙烯共聚物的根据iso 1133在230℃和2.16kg下测量的熔体流动指数为1克/10分钟至20克/10分钟。
[0065]
优选地，丙烯-乙烯共聚物为无规丙烯-乙烯共聚物。
[0066]
优选地，丙烯-乙烯共聚物为半结晶的。
[0067]
优选地，丙烯-乙烯共聚物中乙烯单体的含量小于40％，更优选地小于30％，并且为至少5％。
[0068]
在一个实施方案中，丙烯-乙烯共聚物为丙烯、乙烯和α-烯烃(优选丁烯)的三元共聚物。
[0069]
优选地，最终容器中与ngf水性制剂接触的丙烯-乙烯共聚物接触表面的特征在于在ngf孵育之前根据iso 4287(1997)测量的表面粗糙度sa低于25nm，更优选地低于20nm，甚至更优选地低于15nm。
[0070]
优选地，最终容器中与ngf水性制剂接触的丙烯-乙烯共聚物表面的的特征在于，当如本发明的实验部分中所描述的关于溶液f1测量时，接触角大于90
°
，优选地大于95
°
。
[0071]
优选地，丙烯-乙烯共聚物在至少药典中被批准。
[0072]
适用于制造本发明的包装的容器的丙烯-乙烯共聚物的实例为borealis的bormed
tm
系列的共聚物，特别是丙烯-乙烯共聚物bormed
tm rd808cf、bormed
tm sb815mo和bormed
tm sc876cf。
[0073]
本发明的塑料容器可以包含单一的丙烯-乙烯共聚物或者两种或更多种丙烯-乙烯共聚物的混合物。
[0074]
根据上述偏好，在丙烯-乙烯共聚物的混合物的情况下，它们可混溶以提供具有单一熔融峰和单一熔融焓δhm的单相均匀共混物。
[0075]
在本发明的塑料容器中，除了塑料聚合物之外，还可以存在少量本领域中常用的添加剂。
[0076]
根据容器，可以使用不同的已知制造技术，其中本发明的丙烯-乙烯共聚物是用于
容器的整个壁或至少用于接触表面层的材料。
[0077]
例如，如包装领域中所已知的，刚性的较厚的容器(例如瓶或小瓶)可以通过将所选的聚合物注射成型来制造，而柔性的薄容器(例如包和袋)可以通过将单层或多层膜适当切割和自密封来制造。
[0078]
有利地，本发明的药物包装提供了在更容易的储存条件下储存ngf水性制剂，同时使ngf在容器的接触表面上的粘附最小化并保持ngf效价。
[0079]
特别地，本发明的药物包装允许在高于4℃的温度下甚至在室温下保存ngf水性制剂，而无需使用制剂的例如防止ngf粘附或聚集的稳定添加剂。
[0080]
优选地，容器为小瓶或瓶，其至少在内接触表面处包含如前所限定的丙烯-乙烯共聚物，优选由其组成。
[0081]
本发明的药物包装包含ngf水性制剂，例如水溶液、乳剂、混悬剂、洗剂等，优选地ngf水溶液，更优选地用于眼科用途的ngf水溶液。
[0082]
ngf水性制剂以治疗有效量包含ngf。优选地，在水性制剂中，ngf以水性制剂的约0.0001％至约0.5％w/v，更优选地约0.001％至约0.1％w/v，最优选地约0.002％w/v的量存在。
[0083]
ngf水性制剂可以包含足量的生物学上可接受的盐以提供适当的流体张力并保持溶液中的ngf。
[0084]
优选地，ngf水性制剂包含足够的盐以根据治疗用途在生理学可接受的限度内与眼液、人血或脑脊髓液等渗。
[0085]
优选的盐为氯化钠(nacl)，但也可以使用其他生物学上可接受的盐，例如氯化钾(kcl)、氯化钙(cacl2)和氯化镁(mgcl2)及其混合物。
[0086]
ngf水性制剂还包含生物学上可接受的缓冲液，以在储存期间提供和保持适当的ph。
[0087]
ngf水性制剂经生物学上可接受的缓冲液缓冲至约6.8至约7.5的ph，更优选地缓冲至约7.2的ph。
[0088]
优选的缓冲液为磷酸盐缓冲液，但能够将ph保持在期望范围内的其他缓冲液，尤其是适于眼科用途的缓冲液也包括在内。缓冲液的优选量将根据所使用的缓冲液的类型及其缓冲能力而变化。
[0089]
ngf水性制剂可以任选地包含进一步减少或防止ngf吸附至各种表面的添加剂，优选表面活性剂例如聚山梨醇酯如tweeny 80、泊洛沙姆如pluronics f68、或蛋白质如血清白蛋白。
[0090]
在一个实施方案中，ngf水性制剂不包含任何减少吸附的添加剂，优选地不包含任何表面活性剂。
[0091]
ngf水性制剂中可以存在药物水性制剂中常用且技术专家已知的赋形剂，例如糖、糖醇、氨基酸、纤维素衍生物、聚乙二醇。
[0092]
ngf水性制剂以足以实现制剂组分的适当浓度的量包含水。
[0093]
在本文中ngf包括来自任何来源的任何形式的神经生长因子，只要其表现出生物活性并与ngf受体结合即可。
[0094]
ngf还包括保留ngf生物活性和受体结合的修饰形式的ngf，包括其中某些氨基酸
已被删除或替换同时保持足够的ngf生物活性和受体结合以提供治疗活性的融合蛋白、ngf片段和突变体。
[0095]
在一个实施方案中，ngf是鼠来源的。
[0096]
优选地，ngf为人ngf(hngf)，更优选地其为重组hngf(rhngf)。
[0097]
获得适用于本发明的水性制剂的rhngf的方法是本领域技术人员已知的，例如用于其制造的方法描述于wo9505845a1、wo0022119a1和wo2013092776a1中。
[0098]
本发明的水性制剂的ngf的纯度优选地高于70％，更优选地高于80％，甚至更优选地高于90％，并且最优选地高于95％。用于本发明的水性制剂的分离的ngf的纯度可以通过本领域技术人员已知的常规手段来确定。
[0099]
本发明的ngf水性制剂优选提前制备，然后包装并储存在本发明的容器中。
[0100]
然而，在一个实施方案中，ngf制剂以粉末形式例如以冻干形式包装在容器中，然后在用水性重构载体重构之后，作为ngf水性制剂储存直至施用于需要治疗的患者。
[0101]
在用ngf制剂常规填充之后，本发明的包装的容器需要封闭。
[0102]
用于在填充过程之后封闭药物容器的封闭物应当尽可能惰性。它们不应当引起内容物与外部环境之间的不期望的相互作用，并且应当提供完全密封。除了其保护功能之后，封闭物还必须允许容易且安全地施用药物。
[0103]
适用于本发明的容器的封闭物的实例为简单的弹性盖或者它们是更复杂的递送系统的一部分，例如nemera的系统或aptar的眼用挤压分配器(ophthalmic squeeze dispenser，osd)。
[0104]
有利地，如果提供足够的气体阻隔特性，则本发明的包装可以包含改性气氛，例如无氧气氛，目的是改善储存期间的稳定性。
[0105]
在这样的情况下，包装应当是气密的，可以包括如包装领域中已知的合适的气体阻隔材料。
[0106]
优选地，ngf水性制剂是用于眼科用途的ngf水溶液，呈通过经眼途径施用的滴眼剂的形式。
[0107]
除了ngf(优选rhngf)之外，特别优选的ngf水性制剂还包含海藻糖、甘露糖醇、甲基纤维素(methocel)、peg 6000、l-甲硫氨酸、磷酸盐缓冲液、水，并且具有约7.2的ph。
[0108]
本发明的药物包装可以为单剂量包装或多剂量包装。
[0109]
在一个实施方案中，本发明的药物包装为单剂量包装，即预装载的无菌塑料施加器，其包括如前所限定的容器和包装在其中的优选不包含稳定添加剂的ngf水溶液，用于单次施用。
[0110]
在一个实施方案中，本发明的药物包装为多剂量包装，其包含如前所限定的多剂量无菌容器和优选不包含稳定剂的ngf水溶液，用于多次施用，优选通过使用递送系统。
[0111]
ngf水性制剂可用于治疗患有响应于ngf治疗的病症的个体。
[0112]
通常，这样的制剂是无菌的，并且适用于经眼、静脉内、肌内、肠胃外或脑室内施用，优选适用于经眼施用。
[0113]
这样的治疗可以用于治疗角膜疾病例如神经营养性角膜炎，或者涉及神经元损伤或ngf响应性神经元变性的神经元功能障碍例如阿尔茨海默病。
[0114]
作为神经营养性角膜炎的治疗的ngf水性制剂通常通过经眼途径施用。
[0115]
根据具体最终用途，可以通过多种途径中的任一种施用作为痴呆的治疗的ngf水性制剂。
[0116]
为了克服穿过血脑屏障可能遇到的困难，可以通过直接脑室内注射或者经由浸渍有药物的植入物或泵将ngf施用到cns中。另一种施用途径是通过经由脑室内插管装置连续输注。
[0117]
有利地，塑料容器(即注射器、管、内室等)的至少在那些施用期间与ngf水性制剂接触的表面基本上由如前所限定的丙烯-乙烯共聚物制成。
[0118]
确切的施用剂量和方案将取决于许多因素，例如施用途径和接受治疗的个体的患病程度。
[0119]
本发明在以下实验部分中得到更好的说明。
[0120]
实验部分
[0121]
在本实验部分中，在定性方面和定量方面二者对蛋白质(rhngf)与塑料材料(聚丙烯pp)之间的相互作用进行了评估。
[0122]
使用不同的分析技术直接和间接地确定了rhngf在pp包装材料上的吸附。
[0123]
出乎意料地发现，pp材料的不同结晶度导致不同水平的ngf吸附，并且测试的分析技术提供了一致且稳健的相关结果。
[0124]
在这些测试中，使用了表1中列出的已批准用于制造药物主容器的药用级pp材料：
[0125]
表1：pp
[0126]
[0127][0128]
注射成型测试表明，pp材料均易于机械加工，并且在可成形性和力学方面满足挤出和成型过程所需的规格。
[0129]
对于每种材料，用于进行测试的试样通过注射成型制造。试样为15cm长、2cm宽、1cm高的锭剂。
[0130]
实施例1
[0131]
通过差示扫描量热(dsc)分析测量pp的熔融焓(δhm)和熔融温度(tm)
[0132]
为了评估不同pp的热特性，使用dsc ta 2010仪器通过双次热扫描操作(第一次以20℃/分钟的速度从0℃加热至200℃，中间以20℃/分钟的速度从200℃冷却至0℃，以及第二次以20℃/分钟的速度从0℃加热至200℃)进行差示扫描量热分析。对于每种材料测试两个试样。
[0133]
dsc分析的平均结果报告于下表2中：
[0134]
表2：pp的热特性
[0135][0136]
相关的熔融焓δhm(j/g)和熔融温度(tm峰值℃)是在第二次加热时测量的那些。
[0137]
由于塑料材料的结晶度与各自的熔融焓δhm(j/g)成正比，因此被测pp可以按结晶度如下所示排序(从左到右，从最大结晶到最小结晶)：
[0138]
pp2＞pp5＞pp1＞pp3＞pp4
[0139]
实施例2
[0140]
接触角的测量
[0141]
该测试使用了五种rhngf水基制剂(f1至f5)。f1至f5的制剂示于下表3中：
[0142]
表3：制剂
[0153]
根据接触角的值，被测pp材料按以下润湿性顺序表征(从左到右，从最润湿到最不润湿)：
[0154]
pp2＞pp5＞pp1＞pp4＞pp3
[0155]
平均接触角(作为制剂f1至f5和试样材料的函数)的趋势报告在图1中。
[0156]
参照表4和图1，观察到一些pp材料的行为相似。特别地，pp3和pp4是具有最低润湿性(最高接触角)的材料，尤其是在制剂f1(缓冲液制剂中的rhngf，ph 7.2-由于不含表面活性剂和其他添加剂而最具辨别力的制剂)的情况下。根据dsc分析，pp3和pp4是具有最低结晶度(即最低δhm，参见表2)的材料。
[0157]
另一方面，材料pp5和pp2与前者相比具有更高润湿性(即更具亲水性的表面)和更高结晶度。
[0158]
总之，该测试表明，一方面，pp的结晶度与δhm之间存在相关性，另一方面，其润湿性与接触角之间存在相关性。越大的接触角表明塑料表面的润湿性越低，这继而预示着越少的ngf吸附，如通过以下吸附测试所确定的。
[0159]
实施例3
[0160]
rhngf在pp样品上的吸附的测量
[0161]
该测试所采用的技术使用石英晶体微量天平(qcm)，并提供rhngf在材料上的吸附程度的直接和定量分析。
[0162]
首先将待测pp塑料材料(pp1至pp5)在150℃的温度下搅拌1小时溶解在萘烷(2％w/v)中，然后通过静电纺丝作为薄膜沉积在石英晶体电极上(以3500rpm旋涂)。将用于使溶解的聚合物转移至旋涂机的设备在120℃至150℃下预热。pp膜的厚度报告在下表5中：
[0163]
表5：pp膜的厚度
[0164]
样品厚度(nm)pp1163
±
8pp2400
±
21pp3280
±
15pp4200
±
12pp5400
±
20
[0165]
在蛋白质吸附实验之前，将经涂覆的电极在pbs中孵育过夜。将如制剂f1至f5制备的以下制剂f6用于孵育：
[0166]
表6：rhngf制剂
[0167][0168]
使用高精度多通道蠕动泵将制剂以50微升/秒的流量泵送通过内径为0.75mm的聚四氟乙烯管并施加到经涂覆的电极上。
[0169]
向电极的两侧施加电压差δv，电极开始以一定频率振动。
[0170]
随着沉积在电极上的rhngf膜增加，电极的振荡频率降低，约60分钟之后达到吸附平台，如图2中与pp2材料相关的图所示。
[0171]
下表7和表8示出了在约60分钟之后rhngf达到吸附平台之后以质量(ng/cm2)测量的在用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤电极之前和之后rhngf的吸附。
[0172]
表7用pbs洗涤之前吸附的rhngf
[0173]
pp样品
△
f(hz)质量(ng/cm2)pp1-28.5
±
1.0503.7
±
17.7pp2-38.9
±
0.7687.9
±
17.2pp3-30.9
±
0.9546.1
±
16.0pp4-29.0
±
1.2529.6
±
20.9pp5-121.9
±
2.52158.2
±
43.7
[0174]
将电极用pbs洗涤以验证rhngf在不同pp表面上吸附的稳定性。
[0175]
表8用pbs洗涤之后吸附的rhngf
[0176]
pp样品
△
f(hz)质量(ng/cm2)pp1-24.3
±
0.7430.9
±
13.1pp2-38.5
±
1.3627.1
±
23.1pp3-30.9
±
0.7546.6
±
12.1pp4-29.0
±
0.5514.94
±
9.4pp5-120.7
±
2.32136.2
±
41.3
[0177]
从以上分析观察到，与具有较低结晶度的最具疏水性的pp材料(pp3、pp4和pp1)相比，最具结晶性和亲水性的pp材料(pp5和pp2)表面上吸附的rhngf的质量更高。
[0178]
后洗涤结果表明，吸附的rhngf在塑料表面上非常稳定，并且在所有表面上，洗涤之后解吸的rhngf的百分比都相当低。
[0179]
总之，吸附测试的结果与接触角和结晶度数据良好相关，表明ngf在较低结晶度较高疏水性的材料上的吸附较低。
[0180]
实施例4
[0181]
通过原子力显微术(afm)测量表面粗糙度
[0182]
原子力显微术是允许通过称为“悬臂”的小杠杆的偏转来测量表面上存在的最小力并以1nm至10nm的分辨率提供同一表面的三维视图的技术。
[0183]
afm检测器测量悬臂的偏转并将其转换为电信号。该信号的强度与悬臂的位移成正比。
[0184]
第1部分
[0185]
将一滴包含蛋白质(rhngf)的制剂f6沉积到pp1至pp5的锭剂试样的表面上(每个pp一个试样)，并在4℃下孵育1周。
[0186]
在孵育之后，将试样冲洗并在容纳有200ml milli-q水的第一烧杯中浸渍5分钟，然后转移到同样容纳有200ml milli-q水的第二烧杯中另外浸渍5分钟。然后将表面在微弱的氮气流下脱水。该程序对于除去未被吸附而是存在于截留在pp表面上的溶液中的ngf以及对样品进行干燥之后将引起伪影的盐是必需的。
[0187]
在与rhngf制剂孵育之前和之后根据iso 4287(1997)测量表面粗糙度。通过使用
以动态模式工作的原子力显微镜(bruker)获取表面扫描图像来分析样品。使用弹性常数为40n/m且共振频率为300khz的tespa杠杆(bruker，美国)。尖端的曲率半径为约10nm。
[0188]
获取从50μm到2μm的不同比例下的图像。
[0189]
以sa(限定区域(a)内纵坐标值的绝对值的算术平均值)表示的结果示于下表9中：
[0190]
表9通过afm的粗糙度
[0191][0192]
sa是ra(直线的算术平均高度)到表面的延伸。其以绝对值表示表面的每个点的高度与算术平均值之差。
[0193]
从表9的sa值观察到材料中的仅两者(pp5和pp2)在与ngf孵育之后粗糙度显著增加(参见δsa-ngf孵育1周前后之差)。
[0194]
这些粗糙度数据与表7和表8的通过石英晶体微量天平测量的吸附数据以及表4的接触角良好相关，其中pp2和pp5是最具亲水性的材料，具有最粗糙的表面并引起最高的ngf吸附。
[0195]
其他材料pp1、pp3和pp4似乎对ngf的吸附较差，并且无法看出孵育之后表面粗糙度的增加。实际上，pp3材料在与ngf孵育之后甚至似乎降低了其表面粗糙度。
[0196]
第2部分
[0197]
在实验的第二部分，舍弃了不太感兴趣的亲水性材料(pp5和pp2)，仅重新检查了最有前景的疏水性材料(pp3、pp1和pp4)。
[0198]
还对样品制备方法进行了改变。这一次将rhngf制剂f6孵育48小时而不是1周。粗糙度数据示于下表10中：
[0199]
表10通过afm的粗糙度
[0200][0201]
数据证实，在最有前景的疏水性低结晶性pp1、pp3和pp4聚丙烯中，pp3和pp4在与ngf孵育之后显示出恒定或者甚至更低的粗糙度。
[0202]
实施例5
[0203]
通过x射线光电子能谱(xps)测量pp样品表面上的氮
[0204]
x射线光电子能谱是用于探测材料表面的能谱技术。其允许评估构成材料表面的化学元素，有时允许确定其键合状态。
[0205]
被单色x射线束击中的材料发射的电子以与键合能成正比的动能排出，指示化学元素。
[0206]
在这种情况下，分析了先前在接触角、afm和qcm方面研究的最佳疏水性材料pp3和pp4，将其与在ngf吸附方面最差的材料pp5进行比较。
[0207]
第1部分
[0208]
将一滴(约45微升)制剂f6沉积在pp材料的表面上并静置5秒，然后将表面用水洗涤，在氮气流下干燥并如下所述进行分析。
[0209]
所有xps能谱均在surface science instruments s-probe能谱仪上测量。该仪器具有单色a1 ka x射线和低能电子流枪，以用于非导电样品的电荷中和。将样品安装到双面胶带上并作为绝缘体运行。用于这些采集的x射线分析区域的直径为约800μm。能谱采集期间分析室中的压力小于5
×
10-9
托。将通能设定为150ev。出射角为0
°
(0
°
出射角＝100a采样深度)。
[0210]
图3和图4中的图显示出光电子发射，并且特别地，它们突出了氮发射峰，表明表面上存在rhngf。
[0211]
应注意，对于具有低结晶度的更具疏水性的塑料材料(pp3、pp4，图3a和图3b)，氮原子的发射峰与图4a的与具有高结晶度的更具亲水性的材料(pp5)相关的峰(强度2个任意单位)相比具有显著更低的强度(强度0.4个任意单位至0.5个任意单位)。
[0212]
这些结果表明样品pp3和pp4的ngf沉积较低，与以上报告的其他先前技术的结果非常良好地相关。
[0213]
第2部分
[0214]
希望通过将ngf孵育更长时间段(24小时)并通过评估与氮峰相关的电子发射强度来突出pp5材料的高吸附特性。
[0215]
如从图4中的图可以看出，rhngf在24小时时间段内持续吸附在塑料表面上，从而提供了发射强度为约4个任意单位的峰(图4b)，其是在孵育5秒之后测量的初始2个任意单位(图4a)的两倍高。
[0216]
在该第一实验阶段结束时，得出结论：
[0217]
1)较高结晶度的聚丙烯例如丙烯均聚物(pp2和pp5)与ngf表面吸附增加有关。
[0218]
2)较低结晶度的聚丙烯例如丙烯-乙烯共聚物pp1、pp3和pp4导致ngf的表面吸附较低。
[0219]
3)吸附相当稳定且不可逆：一旦ngf吸附至塑料表面，就非常难以发生解吸。
[0220]
以上测试中收集的主要结果的汇总报告于下表11中：
[0221]
表11：汇总表
[0222][0223]
要点：
§
在第二次加热时通过dsc测量，*ngf孵育1周前后之差，+++rhngf-pp最小相互作用，
‑‑‑
rhngf-pp最大相互作用。
[0224]
从表11中报告的数据得出结论，最适合用于生产ngf水溶液用容器的pp材料为pp1、pp3和pp4，即特征在于以下特性(根据先前描述的方法测量的特性)中的一者或更多者的材料：
[0225]-δhm小于95j/g，优选地小于90j/g，更优选地小于80j/g，并且δhm大于35j/g，优选地大于40j/g，
[0226]-f1制剂的水接触角大于90
°
(
±
2)，优选地大于95
°
(
±
2)，
[0227]-ngf孵育之前的δafm粗糙度sa(nm)低于10nm，优选地低于5nm，
[0228]-氮的光电子发射强度为0.2个任意单位至0.5个任意单位，优选为0.2个任意单位至0.4个任意单位。
[0229]
实施例6
[0230]
rhngf从包装在pp瓶与硅化玻璃小瓶中的水性制剂中的吸附的测量(3个月稳定性研究)
[0231]
对包装在双层硅化玻璃小瓶2r(2ml，用弹性盖封闭，由soffieria bertolini spa制造)(v)中或包装在pp瓶(10ml，用由nemera制造的系统封闭)(b)中的rhngf制剂f7进行了3个月比较稳定性测试。
[0232]
如制剂f1至f5制备的制剂f7的组成报告于下表12中：
[0233]
表12：f7制剂
[0234][0235]
pp瓶(b)由pp3制成，pp3是根据先前的测试最好的pp之一。
[0236]
在该稳定性测试中，将容纳有制剂f7的封闭玻璃小瓶(v)和pp瓶(b)保存在2℃至8℃、25℃或37℃的温度下，并在1周(1w)、2周(2w)之后、1个月(1m)、2个月(2m)和3个月(3m)
的时间点分析相对于对照制剂(ctrl)(即f7制剂但新鲜制备且立即分析)的ngf吸附。
[0237]
在每个时间点，针对一些或所有温度分析至少两个小瓶和两个瓶的ngf含量。手动按压pp瓶并收集液滴用于分析。在测量之前使制剂样品在室温下平衡至少30分钟。
[0238]
在fluoromax分光荧光计(fluoromax-4)(自发荧光发射)上通过分光荧光分析测量溶液中的ngf含量。
[0239]
为了确定不同ngf样品中的蛋白质浓度，通过uv-vis吸光度和固有荧光发射测量制备校准曲线。将rhngf在包含磷酸盐缓冲液(50mm)、甲硫氨酸0.020mg/ml、nacl 100mm、水q.s.的ph 6.2的溶液中以5μg/ml至40μg/ml的浓度范围稀释；对于每个浓度，进行三次稀释。
[0240]
样品(制剂f7与ctrl)的通过光谱分析评估的ngf含量示于图5中，以及通过荧光光谱分析评估的ngf含量示于图6中。
[0241]
针对光散射(ls)背景校正了280nm处的uv-vis吸光度值。
[0242]
具有相同水印的条表示同一时间点的复制品。
[0243]
从这些数据观察到：
[0244]-对于仅包含磷酸盐缓冲液而不包含防止吸附的表面活性剂的制剂f7，明显的是ngf在硅化玻璃容器中比在塑料容器中吸附更多。这种差异从色氨酸的自发荧光发射图中特别明显：对于f7，硅化玻璃容器中的吸附与ctrl相比最初非常快，然后在接下来3个月期间稳定(图6)；
[0245]-对于硅化玻璃容器和pp容器二者，ngf含量在所有稳定性条件下都在三个月时间段内恒定。色氨酸的自发荧光和吸光度测量结果二者均表明在测试期间溶液中的ngf效价未下降，即ngf在测试条件下是稳定的；特别地，通过分析色氨酸的荧光发射波长，即使在ngf吸附最多的容器(v，双层硅化玻璃小瓶)中以及在最具辨别力的制剂(不含表面活性剂的制剂f7)的情况下，也未注意到ngf的任何未折叠或错误折叠的过程，这表明蛋白质的生物活性得以保留。
[0246]
总之，以上报告的分析能够根据蛋白质吸附来区分pp材料。出乎意料地，用以上技术表明，在其表面吸附较少蛋白质的pp塑料材料为疏水性材料，其与聚乙烯的共聚程度低，并且结晶度低。塑料材料选项pp3在固液界面处吸附的蛋白质少于硅化玻璃。

技术特征：
1.一种药物包装，包括作为主包装的塑料容器和包装在所述塑料容器中的ngf水性制剂，其中所述塑料容器具有外表面和与所述ngf水性制剂接触的内表面，其中至少所述内接触表面由高于80重量％的至少丙烯-乙烯共聚物制成，所述丙烯-乙烯共聚物的根据说明书中记载的方法通过dsc测量的熔融焓δhm小于95j/g且大于35j/g。2.根据权利要求1所述的包装，其中所述丙烯-乙烯共聚物的根据说明书中记载的方法通过dsc测量的熔融焓δhm小于90j/g，优选地小于80j/g。3.根据权利要求2所述的包装，其中所述丙烯-乙烯共聚物的根据说明书中记载的方法通过dsc测量的熔融焓δhm大于40j/g。4.根据前述权利要求中任一项所述的包装，其中所述丙烯-乙烯共聚物的根据说明书中记载的dsc方法测量的熔融温度tm低于160℃，优选地低于155℃。5.根据权利要求4所述的包装，其中所述丙烯-乙烯共聚物的根据说明书中记载的dsc方法测量的熔融温度tm高于130℃，更优选地高于140℃。6.根据前述权利要求中任一项所述的包装，其中所述丙烯-乙烯共聚物为无规丙烯-乙烯共聚物。7.根据前述权利要求中任一项所述的包装，其中所述丙烯-乙烯共聚物中乙烯单体的含量小于40％，优选地小于30％，并且为至少5％。8.根据前述权利要求中任一项所述的包装，其中所述容器由根据前述权利要求中任一项所限定的丙烯-乙烯共聚物组成。9.根据前述权利要求中任一项所述的包装，其中所述容器为安瓿、小瓶、瓶、罐、包或袋，优选为小瓶或瓶。10.根据前述权利要求中任一项所述的包装，其中所述ngf水性制剂为ngf水溶液、乳剂、混悬剂或洗剂，优选为ngf水溶液，更优选为用于眼科用途的ngf水溶液。11.根据前述权利要求中任一项所述的包装，其中在所述ngf水性制剂中，ngf以所述水性制剂的约0.0001％至约0.5％w/v，优选地约0.001％至约0.10％w/v，最优选地约0.002％w/v的量存在。12.根据前述权利要求中任一项所述的包装，其中在所述ngf水性制剂中，ngf为重组人ngf(rhngf)。13.根据前述权利要求中任一项所述的包装，其中所述ngf水性制剂经生物学上可接受的缓冲液缓冲至6.8至7.5的ph，优选缓冲至约7.2的ph。14.根据前述权利要求中任一项所述的包装，其中除了rhngf之外，所述ngf水性制剂还包含海藻糖、甘露糖醇、甲基纤维素、peg 6000、l-甲硫氨酸、磷酸盐缓冲液、水，并且具有约7.2的ph。15.根据前述权利要求中任一项所述的包装，所述包装为单剂量包装或多剂量包装。16.一种用于选择适用于制造根据前述权利要求中任一项所述的包装的塑料容器的至少内接触表面的丙烯-乙烯共聚物的方法，所述方法包括：-提供至少丙烯-乙烯共聚物样品-根据说明书中记载的方法通过dsc测量所述丙烯-乙烯共聚物样品的熔融焓δhm，-如果所述丙烯-乙烯共聚物的熔融焓δhm小于95j/g且大于35j/g，则将所述丙烯-乙烯共聚物选择为合适的。
17.塑料容器用于包装ngf水性制剂的用途，其中所述塑料容器具有内表面和外表面，其中至少所述内表面由高于80重量％的至少丙烯-乙烯共聚物制成，所述丙烯-乙烯共聚物的根据说明书中记载的方法通过dsc测量的熔融焓δhm小于95j/g且大于35j/g。

技术总结
本发明涉及药物包装，其包括塑料容器和神经生长因子(NGF)水性制剂，其中容器的至少与NGF水性制剂接触的表面由以一定热特性和结晶度为特征的特定聚丙烯(PP)制成。有利地，所述容器显示出显著低于硅化玻璃或其他聚丙烯的NGF粘附的NGF粘附。因此可以在不太苛刻的条件下储存NGF水性制剂，从而避免另外的对容器的涂覆处理和添加剂，同时保持NGF效价恒定。同时保持NGF效价恒定。同时保持NGF效价恒定。


技术研发人员：马尔塞洛
受保护的技术使用者：导博药物公司
技术研发日：2021.10.27
技术公布日：2023/10/15