一种环状RNAsus-circ-SLC23A2_0010的应用的制作方法

一种环状rna sus-circ-slc23a2_0010的应用
技术领域
1.本发明属于分子生物学结合畜禽生产技术领域，尤其涉及一种环状rna sus-circ-slc23a2_0010的应用。


背景技术：

2.目前，在畜禽生产过程中，脂肪适度沉积会改善肉产品的口感与风味。过度的脂肪沉积可能会导致胴体风味变差，储存时长变短等众多不利因素。在研究者的关注点中，脂肪组织是如何过度沉积，如何抑制脂肪组织的过渡沉积对于改善肉产品的品质有着至关重要的作用。排除品种环境等非人为因素，遗传育种研究者们更关注的是基因对某一特定性状的多效微调控或强力调控某性状。已有研究证明mi rna在组织生长发育过程中起着调控作用，但mirna在畜禽动物脂肪组织中的研究相对较少。而环状rna作为mi rna的上游靶基因，对于mi rna具有海绵吸附作用，因此当mi rna对宁乡猪脂肪组织进行调控的同时环状rna也会发挥其海绵吸附作用，进而会对脂肪的发育与沉积起着间接调控作用。由于猪的重要经济性状通常是数量性状，涉及到的生理生化过程相当复杂，即使同一个数量性状，尽管已揭示其1～2个受控基因，但仍有其它具有大效应的新基因有待发现。由于目前circ rna在医学领域特别是在癌症这个方面研究比较深入，而在畜禽动物中的研究大部分都只是停留在初级阶段。因此，亟需寻找一种新的影响猪脂肪沉积性能的基因。
3.通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：
4.(1)由于猪的重要经济性状通常是数量性状，涉及到的生理生化过程相当复杂，仍有其它具有大效应的新基因有待发现。
5.(2)由于目前circ rna在医学领域特别是在癌症这个方面研究比较深入，而在畜禽动物中的研究大部分都只是停留在初级阶段。


技术实现要素：

6.针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种环状rna sus-circ-slc23a2_0010的应用，旨在分析并验证环状rna sus-circ-slc23a2_0010为促进猪前脂肪细胞的成脂分化的主要物质，为猪遗传育种和肉质的改良的研究提供一个新的方向。
7.本发明是这样实现的，一种环状rna sus-circ-slc23a2_0010，所述环状rnasus-circ-slc23a2_0010的核苷酸序列为seq id no：1。
8.进一步，所述环状rna sus-circ-slc23a2_0010是在脂肪组织发育初期与末期表达量差异显著的基因，能够促进猪前脂肪细胞的分化。
9.本发明的另一目的在于提供一种实施所述的环状rna sus-circ-slc23a2_0010合成的circ-slc23a2_0010环化过表达载体。
10.进一步，所述circ-slc23a2_0010环化过表达载体用于过表达circ-slc23a2_0010基因。
11.本发明的另一目的在于提供一种实施所述的环状rna sus-circ-slc23a2_0010合
成的circ-slc23a2_0010的sirna干扰链。
12.进一步，所述circ-slc23a2_0010的sirna干扰链用于干扰circ-slc23a2_0010基因的表达。
13.本发明的另一目的在于提供一种所述的环状rna sus-circ-slc23a2_0010在制备猪脂肪沉积调控剂中的应用。
14.进一步，所述猪脂肪沉积通过检测板油率和/或内脂率和/或背膘厚定量。
15.本发明的另一目的在于提供一种所述的环状rna sus-circ-slc23a2_0010在作为潜在调控猪瘦肉率的靶点基因中的应用。
16.本发明的另一目的在于提供一种所述的环状rna sus-circ-slc23a2_0010在制备猪脂肪组织过渡沉积用抑制剂中的应用。
17.结合上述的技术方案和解决的技术问题，本发明所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：
18.第一，针对上述现有技术存在的技术问题以及解决该问题的难度，紧密结合本发明的所要保护的技术方案以及研发过程中结果和数据等，详细、深刻地分析本发明技术方案如何解决的技术问题，解决问题之后带来的一些具备创造性的技术效果。具体描述如下：
19.本发明具体涉及一种sus-slc23a2_0010的活体应用。本发明首次发现在猪初生1天以及出栏后皮下脂肪差异表达的环状rna sus-circ-slc23a2_0010。该circ-slc23a2_0010在出栏后的猪皮下脂肪中表达量显著升高。此外，本发明使用环状rna专用过表达载体以及sirna对其功能进行放大或干扰。在细胞实验中表明，本发明提供的circ-slc23a2_0010能够促进猪前脂肪细胞的分化，可以作为潜在调控猪瘦肉率的靶点基因。
20.本发明成功鉴定了猪的一个新circ-slc23a2_0010，circ-slc23a2_0010是一个在脂肪组织发育初期与末期表达量差异显著的基因，并且初步证明其可通过cerna机制调控成脂分化，对于改善猪过度脂肪沉积以及脂肪细胞过度分化具有深远的意义以及重要的推广前景。
21.第二，把技术方案看做一个整体或者从产品的角度，本发明所要保护的技术方案具备的技术效果和优点，具体描述如下：
22.本发明分析并验证环状rna sus-circ-slc23a2_0010为促进猪前脂肪细胞的成脂分化的主要物质，为猪遗传育种和肉质的改良的研究提供一个新的方向。
23.第三，本发明的技术方案转化后的预期收益和商业价值为：随着社会经济的发展，人们对生活水平也有了更高的要求，肉是日常生活中必不可少的产品，一些优质肉更是受到了人们的喜爱。肉中的脂肪含量是决定其外观、口感以及品质的重要因素，过高的脂肪含量会影响动物机体健康，造成糖尿病等一系列肥胖疾病，脂肪含量过低会降低肉的口感，通过circ-slc23a2_0010作用机机制调控脂肪细胞成脂分化，可培育出脂肪含量合适的优质畜禽动物，因此探究脂肪的发育机理对于肉质甚至是肥胖等疾病有重要意义，有着巨大的商业价值。
附图说明
24.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对本发明实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于
本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。
25.图1是本发明实施例提供的；circ-slc23a2_0010在脂肪细胞分化过程中表达量示意图；
26.图2是本发明实施例提供的脂肪细胞经circ-slc23a2_0010过表达处理后脂肪标志基因表达变化示意图；
27.图3是本发明实施例提供的。脂肪细胞经circ-slc23a2_0010过表达处理后油红o染色结果示意图。
具体实施方式
28.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
29.针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种环状rna sus-circ-slc23a2_0010的应用，下面结合附图对本发明作详细的描述。
30.一、解释说明实施例。为了使本领域技术人员充分了解本发明如何具体实现，该部分是对权利要求技术方案进行展开说明的解释说明实施例。
31.本发明实施例提供的环状rna sus-circ-slc23a2_0010的核苷酸序列为seq id no：1。
32.本发明实施例提供的环状rna的全长序列：pig sus-slc23a2_0010
33.cttagtaattcccaaaactccaatgttgggactggatgaagtagagccattcccagtaccaaatatgccatcgagaacacaggagagaccctccacgaaaatccccctgtttattgcatggatggggggcggtggggcacaggacagccttgcacaggcgtagtagtccccgatagactcgataatactggcaacaaccgcactgagcatgccgatgacaccagccgcagagacggtgggcagtccccactgaaatgggtatgggaccttaaaccacggggctaccagaagtaccccctgcctggcatcagttcgagcatagaagccatacttcgtgctgtcaggagggaagacatctgttactgtgaagatgaagcagagcagccaggacacgaggatggccaggatgatagggaacattttgaaaagctgtaacttgtatgcagtccatcctttcttagatttgtaaattgggagaggaaatttaacatttctggcatattgagaaaacagtaatactaggaaaattgtcagcatggcgatgccccagtgcttccctgctctctcccccgcagcctggaaaccagagaggccaatgagggccaccgtaggcgtgatggtcaggggtccgatgtatttcagcagagccccaggcaggcccaggaggccaatgactacttctatcagtgaagacatgatgatggctccctggatctcacgtatccggggataccagatgtgttccgtgtgtaacagctctgttgttccatttgcaaccgaaacatctgtggtgttacatttccatttatctaaagacaggatggctcgagcaggggccagaaatgcaaaagcactggcctgaaacaggggtaacctgcatccaaaagttgtctgcaacaaagttgtgattcccacacagaagaaaatggtcccaatgagctggctggtggcccactggtcgtaccccacacacatggcgtcggccagcagaaagggcaccgcgattgtgccgctgaagcaggtcaggtagtgctgcaaccctagaaatatgcacaggtaccagggaggaacatcttctatggtataaatcatgtccgatctctgggggtctaaactaccagtgctatccaaggtctcagcgagagagctcttttctgcaatgccattttctgtcgtgtatattgccatgagttcagtgtcttcattgtcctgttctccactggacgtggcacctccattgatcaccac
34.本发明实施例提供的环状rna sus-circ-slc23a2_0010是在脂肪组织发育初期与末期表达量差异显著的基因，能够促进猪前脂肪细胞的分化。
35.本发明实施例提供了一种实施环状rna sus-circ-slc23a2_0010合成的circ-slc23a2_0010环化过表达载体。
36.本发明实施例提供的circ-slc23a2_0010环化过表达载体用于过表达circ-slc23a2_0010基因。
37.本发明实施例提供了一种实施环状rna sus-circ-slc23a2_0010合成的circ-slc23a2_0010的sirna干扰链。
38.本发明实施例提供的circ-slc23a2_0010的sirna干扰链用于干扰circ-slc23a2_0010基因的表达。
39.本发明实施例提供了一种环状rna sus-circ-slc23a2_0010在制备猪脂肪沉积调控剂中的应用。
40.本发明实施例提供的猪脂肪沉积通过检测板油率和/或内脂率和/或背膘厚定量。
41.本发明实施例提供了一种环状rna sus-circ-slc23a2_0010在作为潜在调控猪瘦肉率的靶点基因中的应用。
42.本发明实施例提供了一种环状rna sus-circ-slc23a2_0010在制备猪脂肪组织过渡沉积用抑制剂中的应用。
43.二、应用实施例。为了证明本发明的技术方案的创造性和技术价值，该部分是对权利要求技术方案进行具体产品上或相关技术上的应用实施例。
44.筛选出可能在脂肪细胞中发挥潜在作用的rna sus-circ-slc23a2_0010，通过一系列技术手段发现发现，rna sus-circ-slc23a2_0010促进脂肪细胞分化。
45.三、实施例相关效果的证据。本发明实施例在研发或者使用过程中取得了一些积极效果，和现有技术相比的确具备很大的优势，下面内容结合试验过程的数据、图表等进行描述。
46.1.检测circ-slc23a2_0010的核苷酸序列，确认此基因是否在猪这种哺乳动物体内存在并且存在环化现象。
47.2.检测40头初生小猪(外种猪)的皮下脂肪以及40头商品猪(出栏)皮下脂肪组织中该基因的表达量是否存在差异。
48.3.如上述提及的基因干扰以及过表达细胞水平实验。分离初生0天外种猪的皮下脂肪的前脂肪细胞，进行细胞水平的功能验证实验。
49.4.合成circ-slc23a2_0010环化过表达载体，过表达circ-slc23a2_0010基因，并检测转染效率，结果显示显著促进猪前脂肪细胞的分化。
50.5.合成circ-slc23a2_0010的sirna干扰链，干扰circ-slc23a2_0010基因的表达，并检测转染效率，结果显示显著抑制猪前脂肪细胞的分化。
51.以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
52.53.54.55.
技术特征：
1.一种环状rna sus-circ-slc23a2_0010，其特征在于，所述环状rna sus-circ-slc23a2_0010的核苷酸序列为seq id no：1。2.如权利要求1所述的环状rna sus-circ-slc23a2_0010，其特征在于，所述环状rna sus-circ-slc23a2_0010是在脂肪组织发育初期与末期表达量差异显著的基因，能够促进猪前脂肪细胞的分化。3.一种实施如权利要求1～2任意一项所述的环状rna sus-circ-slc23a2_0010合成的circ-slc23a2_0010环化过表达载体。4.如权利要求3所述的circ-slc23a2_0010环化过表达载体，其特征在于，所述circ-slc23a2_0010环化过表达载体用于过表达circ-slc23a2_0010基因。5.一种实施如权利要求1～2任意一项所述的环状rna sus-circ-slc23a2_0010合成的circ-slc23a2_0010的sirna干扰链。6.如权利要求5所述的circ-slc23a2_0010的sirna干扰链，其特征在于，所述circ-slc23a2_0010的sirna干扰链用于干扰circ-slc23a2_0010基因的表达。7.一种如权利要求1～2任意一项所述的环状rna sus-circ-slc23a2_0010在制备猪脂肪沉积调控剂中的应用。8.如权利要求7所述的环状rna sus-circ-slc23a2_0010在制备猪脂肪沉积调控剂中的应用，其特征在于，所述猪脂肪沉积通过检测板油率和/或内脂率和/或背膘厚定量。9.一种如权利要求1～2任意一项所述的环状rna sus-circ-slc23a2_0010在作为潜在调控猪瘦肉率的靶点基因中的应用。10.一种如权利要求1～2任意一项所述的环状rna sus-circ-slc23a2_0010在制备猪脂肪组织过渡沉积用抑制剂中的应用。

技术总结
本发明属于分子生物学结合畜禽生产技术领域，公开了一种环状RNA sus-circ-SLC23A2_0010的应用，环状RNAsus-circ-SLC23A2_0010的核苷酸序列为SEQ ID NO：1。本发明首次发现在猪初生1天以及出栏后皮下脂肪差异表达的环状RNAsus-circ-SLC23A2_0010。该circ-SLC23A2_0010在出栏后的猪皮下脂肪中表达量显著升高。本发明使用环状RNA专用过表达载体以及siRNA对其功能进行放大或干扰。在细胞实验中表明，本发明提供的circ-SLC23A2_0010能够促进猪前脂肪细胞的分化，可以作为潜在调控猪瘦肉率的靶点基因。靶点基因。靶点基因。


技术研发人员：王梽名 王宇豪
受保护的技术使用者：王梽名
技术研发日：2022.10.20
技术公布日：2023/10/20