紫丁香中的一种三萜化合物及其制备方法与应用与流程

1.本发明属于医药技术领域，尤其涉及紫丁香中的一种三萜化合物及其制备方法与应用。


背景技术：

2.肝病是指肝脏发生结构或功能异常的疾病。常见的肝病包括肝炎、脂肪肝、肝硬化等，这些肝病可能是病毒感染、酒精滥用、肥胖、药物滥用、自身免疫等多种原因引起。由于各种生活习惯及生活环境的因素，肝脏疾病的发生率正在不断攀升，如何有效治疗及预防肝脏疾病已成为医药界面临的重大挑战之一。中药在保肝护肝方面有着广泛的应用。首先，中药可以通过调理肝脏的气血运行，促进肝脏的代谢功能，从而起到保护肝脏的作用。比如，黄芪、当归、枸杞等中药可以提高肝脏的免疫力，增强肝脏的抗氧化能力，减少肝脏损伤。其次，中药还可以通过清热解毒、消肿止痛等作用，改善肝脏炎症和肿胀情况。比如，柴胡、黄连等中药可以清热解毒，减轻肝炎症状，保护肝细胞。此外，中药还可以通过促进肝脏再生修复，加速肝细胞的恢复和新生。比如，丹参、山楂等中药可以促进肝脏血液循环，加速肝细胞的修复和再生。近年来中医药疗法在治疗肝脏疾病的临床应用和研究中取得了一定的进展，具有毒副作用小，无依赖性，患者依从性好，临床疗效显著的优势。
3.紫丁香syringaoblatalindl. 为木樨科丁香属落叶乔木。性温，味辛，归脾、胃、肺，具有抗菌消炎、抗病毒和保肝利胆作用。《新华本草纲要》和《长白山植物药志》分别记载其有主治“急性黄疸型肝炎”和“治腹泻、肝炎”的药理活性，因此从中药中发现和开发保肝药物已成当今药物研究的热点之一。


技术实现要素：

4.本发明的目的是对紫丁香茎的化学成分进行深入研究，提供紫丁香中的一种三萜化合物及其制备方法和应用，经研究发现本发明的三萜化合物具有显著的肝损伤保护作用。
5.本发明的技术方案如下：紫丁香中的一种三萜化合物，其结构式如式i所示，。
6.本发明还提供了式i所示化合物的制备方法，包括以下步骤：
（1）取紫丁香茎药材，加入乙醇溶液提取，提取液过滤，合并提取液，浓缩至无醇味，然后依次用二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，得二氯甲烷萃取部位以及乙酸乙酯萃取部位；（2）取步骤（1）得到的二氯甲烷萃取部位浸膏，用甲醇溶解，硅胶干法拌样，上样至硅胶柱中，进行柱层析分离，然后用体积比为100:0、100:1、50:1、25:1、10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，每个梯度洗脱5个体积，并用硅胶gf
254
薄层板检视，合并含近似斑点的馏分，得到12个馏分1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12 ；（3）取步骤（2）得到的馏分1用乙酸乙酯溶解，硅胶干法拌样，上样至硅胶柱中，进行柱层析分离，然后用体积比为100:1、50:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，并用硅胶gf
254
薄层板检视，合并含近似斑点的馏分，得到6个馏分a、b、c、d、e、f；（4）取步骤（3）得到的馏分b加乙酸乙酯溶解，再经制备硅胶gf
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薄层板分离，展开剂条件为：体积比为50:1的石油醚-乙酸乙酯，展开25min，得到目标化合物。
7.作为优选，步骤（1）所述的提取方法为冷浸法、渗漉法、微波提取法、超声提取法、回流提取法或连续回流提取法。更为优选的为回流提取两次，每次提取时间为2小时。
8.作为优选，步骤（1）所用的乙醇溶液为体积浓度为5%-95%的乙醇水溶液，更优选为70%乙醇水溶液。
9.作为优选，步骤（2）中，所述的二氯甲烷萃取部位与拌样所用硅胶的质量比为1:2。
10.作为优选，步骤（2）中，拌样所用硅胶为100～200目，所述硅胶柱中所用硅胶为100～200目。
11.作为优选，步骤（3）中，拌样所用硅胶为100～200目，所述硅胶柱中所用硅胶为200～300目。
12.作为优选，步骤（4）中，制备硅胶gf
254
薄层板的规格为20
×
20cm，厚度0.9-1.0mm。
13.本发明还提供了所述的紫丁香中的一种三萜化合物在制备保肝药物中的应用。
14.作为优选，所述模型为刀豆蛋白引起的小鼠急性肝损伤模型。
15.本发明还提供了一种药物制剂，包括治疗有效量的式i所示化合物及其药学上可接受的载体。
16.本领域技术人员可将所述式i所示化合物直接或间接加入制备不同剂型时所需的药学上可接受的各种常用辅料，如填充剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂等，以常规药物制剂方法，制成常用口服制剂或注射制剂。
17.优选的，所述口服制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、脂肪乳剂、微囊、滴丸。
18.优选的，所述注射制剂为注射液或粉针剂。
19.由上述技术方案可知，本发明提供了紫丁香中的一种三萜化合物及其制备方法与应用。本发明所述化合物的制备方法操作简单，可以分离获得纯的化合物。
20.实验表明，本发明所述化合物可显著降低刀豆蛋白诱导的小鼠急性肝损伤的alt，ast水平，降低小鼠肝组织匀浆中的mda含量，提高sod水平；具有显著的肝保护作用。本发明提供了所述化合物对肝损伤具有较好的保护作用，毒副作用小，可用于保肝类药物的制备。
附图说明
21.图1为本发明制备的三萜化合物的化学结构式；图2为本发明制备的三萜化合物的质谱图；
图3为本发明制备的三萜化合物的1h nmr谱图；图4为本发明制备的三萜化合物的
13
c nmr谱图；图5为本发明制备的三萜化合物的dept nmr谱图；图6为本发明制备的三萜化合物的hsqc谱图；图7为本发明制备的三萜化合物的hmbc谱图；图8为本发明制备的三萜化合物的1h-1
h cosy谱图；图9为本发明制备的三萜化合物的noesy 谱图；图10为本发明制备的三萜化合物的x-ray单晶衍射图；图11为本发明制备的三萜化合物对刀豆蛋白诱导icr小鼠肝组织病理学的影响情况。
具体实施方式
22.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
23.如无特殊说明，本发明实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。
24.实施例1化合物的制备本实施例提供了紫丁香中的一种三萜化合物的制备方法，步骤为：（1）取紫丁香茎药材80 kg，加入10倍量体积的70%乙醇水溶液，在95℃下回流提取2次，每次提取2h，提取后过滤，合并提取液，浓缩至无醇味，得提取物浓缩液；取提取浓缩液，先分别每次用浓缩液体积10倍量的二氯甲烷萃取3次后，再分别用浓缩液体积10倍量的乙酸乙酯萃取3次，分别合并二氯甲烷萃取液、乙酸乙酯萃取液，于40℃减压浓缩，60℃减压干燥，得二氯甲烷萃取部位以及乙酸乙酯萃取部位；（2）取步骤（1）得到的二氯甲烷萃取部位浸膏，用甲醇溶解，硅胶（100～200目，质量为二氯甲烷萃取部位的2倍）干法拌样，上样至硅胶（100～200目）柱中，进行柱层析分离，然后用体积比为100:0、100:1、50:1、25:1、10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，每个梯度洗脱5个体积，并用硅胶gf
254
薄层板检视，合并含近似斑点的馏分，得到12个馏分1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12 ；（3）取步骤（2）得到的馏分1用乙酸乙酯溶解，硅胶（100～200目）干法拌样，上样至硅胶（200～300目）柱中，进行柱层析分离，然后用体积比为100:1、50:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，并用硅胶gf
254
薄层板检视，合并含近似斑点的馏分，得到6个馏分a、b、c、d、e、f；（4）取步骤（3）得到的馏分b加乙酸乙酯溶解，再经制备硅胶gf
254
薄层板分离，展开剂条件为：体积比为50:1的石油醚-乙酸乙酯，展开25min，得到目标化合物200mg。制备硅胶gf
254
薄层板的规格为20
×
20cm，厚度0.9-1.0mm。
25.一、化合物的结构解析与鉴定化合物的结构解析：主要利用波谱学技术，包括质谱、核磁共振（1h-nmr、
13
c-nmr、2d-nmr）、x-单晶衍射鉴定其结构，具体谱图如图2～图10所示，其波谱数据及解析过程如
下：（1）白色无定形粉末，高分辨率质谱esi-tof-ms：453.3356[m+h]
+
。
[0026]
化合物分子式为c
30h44
o3，准确分子量为452.3290，不饱和度为9。
[0027]
综合分析1h nmr、
13
c nmr，可以得出该化合物结构中存在两个羰基碳[δc211.4,189.2]，有7个甲基 [δc：28.3，23.5，22.5，21.1，19.8，16.5，15.7]，4对不饱和双键碳[δc：156.6, 145.5，138.3，133.8，133.5，126.1，122.3，120.9]，三个烯氢质子信号[δh:6.34, s, 1h; δh:5.34, s, 2h;]。然后结合hmbc、dept和hsqc谱等二维核磁共振波谱数据，确定化合物的平面结构，结构式如附图1所示，通过x-ray单晶衍射确定其绝对构型。
[0028]
（2）该化合物的波谱数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δh6.32 (s, 1h, h-15), 5.35 (s,2h, h-10, h-21), 3.03 (m, 2h, h-4, h-17), 2.25(m,1h, h-6), 1.75~2.25 (m, 11h, h-8, h-3, h-22, h-19, h
a-18, h
a-11, h-23), 1.49~1.75 (m, 6h, h-7, h-12, h
b-18, h
b-11,), 2.10 (s, 3h, h-28), 1.84 (s, 3h, h-29), 1.55 (s, 3h, h-21), 1.41 (s, 3h, h-30),1.26 (s, 3h, h-27), 0.90 (s, 3h, h-25), 0.72 (s, 3h, h-24).
13
c nmr (150 mhz, cdcl3) δc211.4 (c-5), 189.2 (c-14), 156.6(c-16), 145.5 (c-1), 138.3 (c-20), 133.8 (c-2), 133.5 (c-9), 126.1 (c-10), 122.3 (c-15), 120.9 (c-21), 76.5 (c-13), 58.8 ( c-6), 53.1 (c-4), 40.7 (c-8), 34.3 (c-17), 30.5 (c-3), 30.5 (c-22), 29.8 (c-19),29.7 (c-18), 28.5 (c-11), 28.3 (c-29), 28.2 (c-23), 27.4 (c-7), 27.4 (c-12), 23.5 (c-26), 22.5 (c-25), 21.1 (c-28), 19.8 (c-27), 16.5 (c-24), 15.7 (c-30).二、药效实验研究（一）实验材料与仪器1、药物、试剂和动物实施例1制备的化合物（自提，纯度98%以上）；alt、ast检测试剂盒（南京建成生物科技有限公司），mda、sod检测试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司），刀豆蛋白a
ꢀⅳ
（广州云源生物科技有限公司），icr小鼠，清洁级，雌雄各半，体重20
±
2g (南京科瑞斯动物有限公司)。
[0029]
2.实验仪器液体真空浓缩煎药机（北京东华原医疗设备有限责任公司），biotek酶标仪（美国伯腾仪器有限公司），eyela n-1300旋转蒸发仪（东京理化器械株式会社），mco-20aci型co2恒温培养箱（美国thermo公司），bs125s型万分之一天平（瑞士梅特勒-托利多），hc-3018r高速冷冻离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）。
[0030]
（二）实验方法1、探究实施例1制得的化合物的保肝药效研究取icr小鼠40只，实验室适应性喂养7天后，随机分为4组：空白组，模型组刀豆蛋白 (35mg/kg)，阳性药水飞蓟宾组(100mg/kg)，给药组（实施例1化合物）60mg/kg，适应性喂养7天后，于第8天开始给药(注：第一次给药前禁食不禁水24h)，各组动物每日灌胃1次，连续灌胃一周，在末次给药2h后，除空白组外，每组小鼠尾静脉注射刀豆蛋白(35mg/kg)制备小鼠肝损伤模型，造模给药24h后，小鼠进行摘眼球取血，分离血清，进行血清生化指标的测定，
取血后处死小鼠，取小鼠肝组织，进行肝组织病理学检查和肝组织氧化应激指标的检测。
[0031]
2、血清生化指标的测定小鼠血液置于1.5ml ep管中静置30min，4℃，离心(3500r/min、10min)，分离血清，按照alt、ast检测试剂盒说明书测定血清中alt、ast水平。
[0032]
3、肝组织氧化应激指标的检测一部分小鼠肝组织置于冷生理盐水清洗后置于ep管，投入液氮冷冻后存于-80℃，测定时取出样品，于冰上操作剪碎肝组织，按重量体积比加以生理盐水制成10%的肝细胞匀浆，10000r/min，4℃低温离心10min，取上清液，按照sod、mda检测试剂盒说明书测定sod、mda的值。
[0033]
4、肝组织病理切片检查一部分小鼠肝组织置于4%多聚甲醛溶液中固定，经脱水，透明浸蜡，包埋，切片，摊片，苏木精和伊红染色后观察肝组织病理变化。
[0034]
5.统计学方法实验数据以表示，使用spss 19.0统计软件进行t检验比较，p《0.05为有统计学意义。
[0035]
（三）实验结果1、实施例1制得到的化合物对刀豆蛋白诱导icr小鼠血清中alt、ast影响，结果见表1。
[0036]
表1 化合物对刀豆蛋白诱导icr小鼠血清中alt、ast影响
[0037]
注：与空白对照组相比，
##
p《0.01；与模型组相比，。
[0038]
表1结果显示，与空白组相比，模型组alt、ast明显升高，差别有统计学意义(p《0.01)，说明刀豆蛋白诱导小鼠肝损伤模型造模成功。与模型组比较，实施例1制得的化合物给药组(60mg/kg)给药后可以降低肝损伤小鼠的alt、ast水平。结果表明实施例1制得到的化合物对刀豆蛋白诱导小鼠肝损伤有明显的保护作用。
[0039]
2、实施例1制得到的化合物对刀豆蛋白诱导icr小鼠肝匀浆中mda、sod水平的影响，结果见表2。
[0040]
表2化合物对刀豆蛋白诱导icr小鼠肝匀浆中mda、sod水平的影响
[0041]
注：与空白对照组相比，
##
p《0.01；与模型组相比，。
[0042]
表2结果显示，模型组与空白组比较，小鼠肝组织匀浆中sod活性显著降低，mda含量显著升高，提示模型成功。与模型组比较，实施例1制得的化合物给药组可以提高肝组织匀浆中抗氧酶sod活性，降低mda含量。结果表明实施例1制得到的化合物可以减轻刀豆蛋白诱导小鼠肝损伤引起的氧化应激反应。
[0043]
3、实施例1制得到的化合物对刀豆蛋白诱导icr小鼠肝组织病理学的影响，结果见附图11（a：空白组，b：模型组，c：阳性药组，d：给药组）。
[0044]
肝组织病理切片结果表明，空白组的肝小叶结构清晰，肝细胞排列整齐，无肿胀、萎缩等改变，亦未见有明显的变性、坏死及炎症等病理改变；模型组的肝细胞损伤明显，肝索排列紊乱，肝细胞变性坏死明显，提示造模成功；给药组肝细胞变性、坏死、炎症反应等病理改变有明显减轻，肝细胞排列规则。
[0045]
最后应说明的是，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.紫丁香中的一种三萜化合物，其特征在于：所述化合物的化学结构式如下：。2.根据权利要求1所述的紫丁香中的一种三萜化合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）取紫丁香茎药材，加入乙醇溶液提取，浓缩，然后依次用二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，得二氯甲烷萃取部位以及乙酸乙酯萃取部位；（2）取步骤（1）得到的二氯甲烷萃取部位，用甲醇溶解，硅胶干法拌样，上样至硅胶柱中进行柱层析分离，然后用体积比为100:0、100:1、50:1、25:1、10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，得到12个馏分1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12 ；（3）取步骤（2）得到的馏分1用乙酸乙酯溶解，硅胶干法拌样，上样至硅胶柱中进行柱层析分离，然后用体积比为100:1、50:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，得到6个馏分a、b、c、d、e、f；（4）取步骤（3）得到的馏分b加乙酸乙酯溶解，再经制备硅胶gf
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薄层板分离，展开剂为体积比为50:1的石油醚-乙酸乙酯，展开25min，得到目标化合物。3.根据权利要求2所述的紫丁香中的一种三萜化合物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，拌样所用硅胶为100～200目，所述硅胶柱中所用硅胶为100～200目。4.根据权利要求2所述的紫丁香中的一种三萜化合物的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，拌样所用硅胶为100～200目，所述硅胶柱中所用硅胶为200～300目。5.根据权利要求2所述的紫丁香中的一种三萜化合物的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，制备硅胶gf
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薄层板的规格为20
×
20cm，厚度0.9-1.0mm。6.一种如权利要求1所述的紫丁香中的一种三萜化合物在制备保肝药物中的应用。7.一种药物制剂，其特征在于：包括治疗有效量的权利要求1所述的紫丁香中的一种三萜化合物以及药学上可接受的载体或辅料。8.根据权利要求7所述的药物制剂，其特征在于：所述药物制剂为口服制剂或注射制剂。

技术总结
本申请属于医药技术领域，公开了紫丁香中的一种三萜化合物及其制备方法与应用，本发明所述化合物的制备方法操作简单，取紫丁香茎药材进行醇提，依次用二氯甲烷、乙酸乙酯萃取后，取二氯甲烷萃取部位依次经2次硅胶柱层析分离，薄层板分离，可以获得纯的化合物。实验表明，所述化合物可显著降低刀豆蛋白诱导的小鼠急性肝损伤的ALT，AST水平，降低小鼠肝组织匀浆中的MDA含量，提高SOD水平，具有显著的肝保护作用，毒副作用小，可用于保肝类药物的制备。可用于保肝类药物的制备。可用于保肝类药物的制备。


技术研发人员：冯育林 李志峰 李志强 何明珍 崔玉顺 李军茂 欧阳辉 姚闽 王依蕾 肖炜
受保护的技术使用者：江西本草天工科技有限责任公司
技术研发日：2023.09.13
技术公布日：2023/10/20