一种重组人胸腺素β4促进细胞迁移的生物学活性测定方法与流程

一种重组人胸腺素
β
4促进细胞迁移的生物学活性测定方法
技术领域
1.本发明涉及一种测定胸腺素β4细胞迁移活性的方法，本技术还涉及一种判断测定的胸腺素β4细胞迁移活性是否准确的方法。


背景技术：

2.1981年，low和goldstein从胸腺提取物中首次分离并表征了胸腺素β4(tβ4)，天然人胸腺素β4是一种含有43个氨基酸的小分子蛋白，是一种天然存在的肌动蛋白螯合抗炎因子，可修复和再生受损组织的蛋白质，通过减少细胞死亡、增加干细胞迁移和减少瘢痕形成而发挥作用。tβ4是在真核细胞中表达的一种多功能肽，在细胞迁移、血管生成、细胞凋亡和炎症中发挥作用。tβ4通过与单体肌动蛋白(又称球状肌动蛋白globular actin，g-actin)结合影响细胞迁移。tβ4以1:1的方式与g-actin结合，阻碍g-actin通过盐键聚集成纤维状肌动蛋白(fibros actin，f-actin)，维持细胞内actin聚合与解聚的动态平衡以促进细胞迁移。
3.在前期的研究中，申请人利用基因工程技术表达了含有44个氨基酸的重组人胸腺素β4(recombinant human tβ4，rhtβ4)。具体来说，与天然胸腺素β4相比，将天然胸腺素β4的n末端乙酰化去除，n末端添加一个gly或ala。而现有技术中测定rhtβ4生物学活性的方法，存在着以下不足之处：(1)细胞迁移指数值偏小，仅能将药品的迁移指数标准设定为≥1.3；(2)方法受操作误差影响较大，重复性和稳定性有待进一步提高。
4.因此，为了解决上述问题，也为了探索更适用于rhtβ4的生物学活性测定方法，并提高药品的迁移指数标准，需要提供一种新的适用于rhtβ4的生物学活性测定方法。


技术实现要素：

5.本技术的发明人经过大量的研究，出乎意料的发现了特别适用于测定rhtβ4的生物学活性的方法。具体来说，本技术的发明人通过实验找到了rhtβ4的生物学活性测定方法中能够显著影响细胞迁移指数的主要因素。进一步的，通过实验探索到了最适合rhtβ4的生物学活性测定方法，并将迁移指数标准由≥1.3提升至了≥1.8，显著的提高了rhtβ4的生物学活性测定方法的灵敏度，能够更准确的区分和鉴定rhtβ4的生物学活性。因此，本技术的方法在rhtβ4的筛选与医疗应用中具有较大的应用前景。
6.因此，在第一方面，本技术提供了一种测定胸腺素β4细胞迁移活性的方法，所述方法包括：
7.(1)将细胞饥饿培养3天22h至4天2h；
8.(2)将胸腺素β4与所述细胞的一部分接触，做为实验组；所述细胞的另一部分不与胸腺素β4接触，做为对照组；
9.(3)调整所述细胞密度，进行细胞迁移，然后计算所述细胞的迁移指数；其中，细胞迁移指数的计算方法为：实验组迁移细胞数除以对照组迁移细胞数。
10.在第二方面，本技术提供了一种判断测定的胸腺素β4细胞迁移活性是否准确的方
法，所述方法在权利要求的步骤(1)至(3)之后还包括：
11.(4)当步骤(3)测定的迁移指数≥1.8时，判断获得的胸腺素β4细胞迁移活性为准确的活性；反之则重新测定胸腺素β4的细胞迁移活性。
12.在某些实施方案中，在步骤(1)中，所述细胞为脐静脉血管内皮细胞；例如，ecv304细胞。
13.在某些实施方案中，在步骤(1)中，培养脐静脉血管内皮细胞至第四代细胞，通过不含胎牛血清的dmem培养基对所述第四代细胞饥饿培养3天至4天5h。
14.在某些实施方案中，饥饿培养3天22h至4天或4天至4天2h。
15.在某些实施方案中，在步骤(2)中，将胸腺素β4与所述细胞接触并孵育。
16.在某些实施方案中，在步骤(2)中，在步骤(1)的产物中加入rhtβ4溶液，并孵育12-36h(例如，12-24h，24-36h)。
17.在某些实施方案中，所述rhtβ4溶液的浓度为500-5000ng/ml，例如，500ng/ml，1000ng/ml，2000ng/ml，3000ng/ml，4000ng/ml，5000ng/ml。
18.在某些实施方案中，在步骤(3)中，调整细胞密度至5
×
104cells/ml-30
×
104cells/ml。
19.在某些实施方案中，调整细胞密度至5-10
×
104cells/ml，10-15
×
104cells/ml，15-20
×
104cells/ml，20-25
×
104cells/ml，25-30
×
104cells/ml。
20.在某些实施方案中，在步骤(3)中，使细胞迁移4-6h，例如，4h-5h，5h-6h。
21.在某些实施方案中，所述方法包括：
22.(1)将细胞饥饿培养3天22h至4天2h；
23.(2)将胸腺素β4与所述细胞的一部分接触，做为实验组；所述细胞的另一部分不与胸腺素β4接触，做为对照组；
24.(3)调整所述细胞密度至5
×
104cells/ml-30
×
104cells/ml，进行细胞迁移4-6h，然后通过统计迁移细胞个数，计算所述细胞的迁移指数；
25.其中，细胞迁移指数的计算方法为：实验组迁移细胞数除以对照组迁移细胞数。
26.在某些实施方案中，所述方法包括：
27.(1)培养脐静脉血管内皮细胞至第四代细胞，通过不含胎牛血清的dmem培养基对所述第四代细胞饥饿培养3天22h至4天2h；
28.(2)在步骤(1)的一部分产物中加入rhtβ4溶液，并孵育12-36h(例如，12-24h，24-36h)，做为实验组；步骤(1)的另一部分产物不与rhtβ4溶液接触，做为对照组；
29.(3)调整所述细胞密度至5
×
104cells/ml-30
×
104cells/ml，进行细胞迁移4-6h，然后计算所述细胞的迁移指数；其中，细胞迁移指数的计算方法为：实验组迁移细胞数除以对照组迁移细胞数。
30.在某些实施方案中，所述步骤(1)通过如下的步骤(a)至(c)实现：
31.(a)使用含10％胎牛血清和1％青链霉素的dmem完全培养基培养ecv304细胞至第4代细胞；
32.(b)将步骤(a)的细胞悬液接种于细胞培养板中，并于二氧化碳培养箱中培养；
33.(c)将步骤(b)的细胞放入不含胎牛血清的dmem基础培养基进行饥饿培养3～4天5h。
34.在某些实施方案中，所述步骤(3)通过如下的步骤(a)至(d)实现：
35.(a)用0.25％胰蛋白酶溶液消化步骤(2)的产物，加入0.1％fbs/dmem测定培养基以终止消化，然后调整细胞悬液的密度至5
×
104cells/ml-30
×
104cells/ml；
36.(b)在迁移板的中加入600μl的10％ fbs/dmem测定培养基，然后加入200μl的步骤(a)的细胞悬液，在二氧化碳培养箱中培养4～6h；
37.(c)加入95％甲醇/5％pbs固定液固定细胞5min，去除未迁移的细胞，静置晾干，用结晶紫染色液染色10min，用纯化水从侧面冲洗脱色，静置晾干；
38.(d)在光学显微镜下连续选取迁移槽外膜5个视野进行拍照，进行迁移细胞计数统计，计算实验组的细胞迁移指数。
39.在某些实施方案中，所述胸腺素β4是人胸腺素β4。
40.在某些实施方案中，所述人胸腺素β4是天然的人胸腺素β4，重组的人胸腺素β4或经改造的人胸腺素β4。
41.在某些实施方案中，所述胸腺素β4具有如seq id no:1-3任一项所示的序列。
42.术语定义
43.在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的病毒学、生物化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。
44.当本文使用术语“例如”、“如”、“诸如”、“包括”、“包含”或其变体时，这些术语将不被认为是限制性术语，而将被解释为表示“但不限于”或“不限于”。
45.如本文中所使用的，术语“细胞迁移指数(cell migration index，cmi)是一种描述细胞迁移能力的指数。通常，这种指数通过观察和测量细胞在给定时间内移动的距离和路径来计算。测定细胞迁移指数的方法可以有多种，例如，通过微观成像技术来测量。在本文中，细胞迁移指数越高，代表细胞迁移能力越强。在测定tβ4的细胞迁移活性的方法中，细胞迁移指数的提升，有助于更准确的测定tβ4的细胞迁移活性。
46.如本文中所使用的，术语“胸腺素β4”的英文为thymosinβ4，tβ4，其是1966年从小牛胸腺中提取处的促淋巴细胞生成因子，是在人体内广泛存在的一种肽类物质。可方便地从各种公共数据库(例如，genbank数据库)获得胸腺素β4(例如人胸腺素β4)的氨基酸序列。
47.如本文中所使用的，术语“天然的人胸腺素β4”是指天然存在的、具有生物学活性的人胸腺素β4。
48.如本文中所使用的，术语“经改造的人胸腺素β4”是指在天然的人胸腺素β4的基础上，产生或人工引入突变或变异(包括但不限于，置换，缺失和/或添加)，而不影响人胸腺素β4的生物学活性。在本技术中，天然的人胸腺素β4的示例性氨基酸序列提供于seq id no:2中。因此，在某些实施方案中，经改造的人胸腺素β4包含在seq id no:2中天然产生或人工引入突变或变异(包括但不限于，置换，缺失和/或添加)，而不影响人胸腺素β4的生物学活性的多肽。
49.发明的有益效果
50.本技术的发明人经过大量的研究，出乎意料的发现了特别适用于测定rhtβ4的生物学活性的方法。具体来说，本技术的发明人通过实验找到了rhtβ4的生物学活性测定方法
中能够显著影响细胞迁移指数的主要因素，进一步的，通过优化该因素下的具体条件，探索到了最适合rhtβ4的生物学活性测定方法。
51.所述方法具有下述优势：(1)将迁移指数标准由≥1.3提升至了≥1.8，显著的提高了本技术方法的准确性；(2)将相对标准偏差控制在5％以内，显著提高了本技术方法的重复性和稳定性。
52.综上，本技术的方法在rhtβ4的筛选与医疗应用中具有较大的应用前景。
53.下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的范围的限定。根据优选实施方案的下列详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得显然。
附图说明
54.图1显示了优化前的迁移结果。
55.图2显示了正交实验1～3组(饥饿3天)的迁移结果。
56.图3显示了正交实验4～6组(饥饿3天17h)的迁移结果。
57.图4显示了正交实验7～9组(饥饿4天)的迁移结果。
58.图5显示了正交实验条件验证的迁移结果。
59.序列信息
60.本技术涉及的序列的描述提供于下表中。
61.表1：序列信息
62.具体实施方式
63.现参照下列意在举例说明本发明(而非限定本发明)的实施例来描述本发明。
64.除非特别指明，本发明中所使用的分子生物学实验方法和免疫检测法，基本上参照j.sambrook等人，分子克隆：实验室手册，第2版，冷泉港实验室出版社，1989，以及f.m.ausubel等人，精编分子生物学实验指南，第3版，john wiley&sons,inc.，1995中所述的方法进行；限制性内切酶的使用依照产品制造商推荐的条件。本领域技术人员知晓，实施例以举例方式描述本发明，且不意欲限制本发明所要求保护的范围。
65.下述实施例所使用的脐静脉血管内皮细胞ecv304和供试品获自北京诺思兰德生物技术股份有限公司，使用的rhtβ4具体如表1中的seq id no:1所示。dmem培养基购自hyclone公司。胎牛血清购自杭州四季青工程材料有限公司。
66.实施例1.设计正交实验
67.现有技术中，rhtβ4的生物学活性测定方法是先对细胞饥饿培养，再将rhtβ4与细胞孵育，最后测定细胞迁移指数。本技术的发明人从中挑选了细胞饥饿时长、迁移细胞铺孔密度、迁移时间等多个因素，并采用正交实验以找出最大影响因素和因素的最佳水平。
68.具体的实验设计的因素与水平如表1所示。按3因素3水平，采用l9(34)实验设计进行实验。
69.表1正交实验因素水平表
[0070][0071]
根据计算结果，采用极差分析法，k值为因素的同一水平之和，k值为k值的平均值，r＝kmax-kmin。对比r值可找出最大影响因素，对比k(k)值可选出因素最佳水平。
[0072]
正交实验条件验证
[0073]
重复最优实验条件实验3次，对实验条件进行验证，且三次迁移指数的相对标准偏差rsd小于30％。
[0074]
实施例2.细胞饥饿时长的探索
[0075]
本实施例对细胞饥饿时长进行初步探索。现有技术中通常将细胞饥饿培养数小时(例如，过夜培养)，然后进行迁移实验。实验结果证实，细胞饥饿培养2天或以内，实验组和对照组的细胞迁移数量差异不够显著(图1)。
[0076]
进一步的，按照实施例1记载的实验方案进行正交实验，以探索最佳的细胞饥饿时长，结果具体如下：
[0077]
(1)饥饿3天时的迁移实验结果
[0078]
当ecv304细胞饥饿3天时，对照组和实验组迁移细胞数量随着迁移细胞铺孔密度的增加和迁移时间的延长而增加，但对照组和实验组迁移细胞数量无明显差异(图2)。
[0079]
(2)饥饿3天17h时的迁移实验结果
[0080]
当细胞饥饿3天17h时，对照组和实验组细胞数量随着细胞铺孔密度的提高而增加，对照组和实验组无明显差异(图3)。
[0081]
(3)饥饿4天时的迁移实验结果
[0082]
当细胞饥饿4天时，对照组和实验组细胞数量随着细胞铺孔密度的提高而增加，且对照组和实验组有明显差异(图4)。
[0083]
实施例3.细胞饥饿时长的进一步探索
[0084]
以正交实验优化获得最优方案为基础，进一步对比考察细胞饥饿时长(包括有3天22h、4天、4天2h、4天10hr和5天)对细胞迁移结果的影响。实验结果显示，细胞饥饿3天22h、4天和4天2h时实验组迁移指数分别为2.05、2.13、2.11，各实验组迁移指数无明显差异；而细胞饥饿4天10hr和5天时，实验组与对照组基本无细胞迁移。
[0085]
实施例4.最佳实验条件的探索
[0086]
按照实施例1记载的实验方案，本实施例共进行9组正交实验，实验结果如表2所示。
[0087]
表2正交实验结果分析
[0088][0089][0090]
实验结果：
[0091]
对正交实验9组实验的细胞迁移指数进行统计分析(表2)，结果出乎意料的显示，在测试的3个因素中，细胞饥饿时长对于细胞迁移指数的影响尤为显著，而另外两个因素则对细胞迁移指数的影响较小。
[0092]
具体实验结果显示，
①
细胞饥饿时长、迁移细胞铺孔密度、迁移时间3个因素的r值分别为3.12、0.41和0.35，表明这些因素中的影响主次为细胞饥饿时长＞迁移细胞铺孔密度＞迁移时间，其中饥饿时长对迁移结果影响最显著，当饥饿时长较短(3天和3天17h)时，细胞受损程度较轻，实验组细胞迁移功能恢复不明显，迁移指数小于2；
②
最佳迁移条件是饥饿4天、迁移细胞铺孔密度15
×
104cells/ml、迁移时间6h。
[0093]
实施例5.优化后方法的稳定性验证
[0094]
采用实施例4的最优方法，3次批内验证实验结果显示(图5)，实验组迁移细胞数量明显多于对照组，对实验组的迁移指数进行统计，结果见表3，3次验证实验的迁移指数均大于2，并且相对标准偏差rsd为3.2％，小于5％，符合标准。
[0095]
表3验证结果迁移指数统计
[0096][0097]
采用实施例4的最优方法，分别在不同天数对同一批样品进行批间测定，以及不同人员对进行测定，并进行原液和成品测定，其结果相对标准偏差均在5％以内(表4)，证明优化后的测活方法其优异的重复性和稳定性。
[0098]
表4重复性和稳定性结果
[0099]
[0100][0101]
综上，通过研究，本技术获得了重复性和稳定性更好的rhtβ4生物学活性测定方法，可将细胞迁移指数标准提高到≥1.8。
[0102]
实施例6.迁移指数对rhtβ4活性检测的准确性的影响
[0103]
综合上述实施例，本技术优化后的方法具体如下：
[0104]
细胞饥饿培养
[0105]
采用ecv304细胞进行实验，饥饿培养包括以下步骤：
[0106]
(1)使用dmem完全培养基(含10％胎牛血清和1％青链霉素)培养ecv304细胞，使用第4代细胞，将细胞密度调整为10
×
104cells/ml。
[0107]
(2)将细胞悬液接种于6孔细胞培养板中，于37℃、潮湿、5％co2二氧化碳培养箱中培养24h。
[0108]
(3)将dmem完全培养基替换为不含胎牛血清的dmem基础培养基进行饥饿培养3天22h至4天2h。
[0109]
rhtβ4孵育
[0110]
在饥饿培养的最后1天，加入终浓度为1000ng/ml的rhtβ4溶液，继续培养24h。
[0111]
细胞迁移
[0112]
采用transwell迁移板(美国costar公司)进行细胞迁移实验，包括以下步骤：
[0113]
(1)用0.25％胰蛋白酶溶液消化细胞，加入0.1％ fbs/dmem测定培养基终止消化并制备细胞悬液，调整细胞密度至10
×
104cells/ml-20
×
104cells/ml(15
×
104cells/ml)。
[0114]
(2)在transwell迁移板的下槽孔中加入600μl的10％ fbs/dmem测定培养基，在迁移槽中加入200μl的细胞悬液，每个样做3个复孔，于37℃、潮湿、5％ co2二氧化碳培养箱中培养4-6h。
[0115]
(3)吸掉迁移槽内的培养液，加入95％甲醇/5％pbs固定液固定细胞5min，用棉签擦去膜内未迁移的细胞，静置晾干，用结晶紫染色液染色10min，用纯化水从侧面冲洗脱色，静置晾干。
[0116]
(4)在光学显微镜下连续选取迁移槽外膜5个视野进行拍照，用ipwin软件进行迁移细胞计数统计，取其平均值为该孔的计数结果。
[0117]
(5)计算实验组的细胞迁移指数，计算公式为：细胞迁移指数＝实验组迁移细胞数/对照组迁移细胞数。其中，对照组细胞与实验组细胞进行同样的上述步骤，唯一不同之处在于，对照组细胞不进行rhtβ4孵育。结果判定：细胞迁移指数≥1.8，判定为合格；反之，不合格。
[0118]
进一步的，按照优化后的方法，分别对表1中的胸腺素β4seq id no:1，seq id no:
2和seq id no:3序列进行了细胞迁移活性检测，结果见表5。
[0119]
表5细胞迁移活性检测结果
[0120][0121]
通过上述优化后方法，获得了细胞迁移指数为2左右的ecv304细胞迁移方法，而改进前的常规的细胞迁移指数为1.32左右。改进前的实验组细胞迁移数量与对照组相比差异较小，所以活性较为接近的胸腺素β4seq id no:1、胸腺素β4seq id no:2与胸腺素β4seq id no:3的活性较难进行区分；而当改进后，细胞迁移指数为2时，实验组细胞迁移数量与对照组相比差异显著，能够明显的看出不同的胸腺素β4之间的活性差异。并且，多次检测结果之间的相对标准偏差较小，证明通过本技术优化后方法测定获得的实验结果更稳定、准确。
[0122]
因此，本技术的方法特别适用于区分活性较为接近的rhtβ4，有利于rhtβ4的前期筛选与生产。
[0123]
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，但本领域技术人员将理解：根据已经公布的所有教导，可以对细节进行各种修改和变动，并且这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部分为由所附权利要求及其任何等同物给出。

技术特征：
1.一种测定胸腺素β4细胞迁移活性的方法，所述方法包括：(1)将细胞饥饿培养3天22h至4天2h；(2)将胸腺素β4与所述细胞的一部分接触，做为实验组；所述细胞的另一部分不与胸腺素β4接触，做为对照组；(3)调整所述细胞密度，进行细胞迁移，然后计算所述细胞的迁移指数；其中，细胞迁移指数的计算方法为：实验组迁移细胞数除以对照组迁移细胞数。2.一种判断测定的胸腺素β4细胞迁移活性是否准确的方法，所述方法在权利要求的步骤(1)至(3)之后还包括：(4)当步骤(3)测定的迁移指数≥1.8时，判断获得的胸腺素β4细胞迁移活性为准确的活性；反之则重新测定胸腺素β4的细胞迁移活性。3.权利要求1或2所述的方法，其中，在步骤(1)中，所述细胞为脐静脉血管内皮细胞；例如，ecv304细胞；优选地，在步骤(1)中，培养脐静脉血管内皮细胞至第四代细胞，通过不含胎牛血清的dmem培养基对所述第四代细胞饥饿培养3天至4天5h；优选地，饥饿培养3天22h至4天或4天至4天2h。4.权利要求1-3任一项所述的方法，其中，在步骤(2)中，将胸腺素β4与所述细胞接触并孵育；优选地，在步骤(2)中，在步骤(1)的产物中加入rhtβ4溶液，并孵育12-36h(例如，12-24h，24-36h)；优选地，所述rhtβ4溶液的浓度为500-5000ng/ml，例如，500ng/ml，1000ng/ml，2000ng/ml，3000ng/ml，4000ng/ml，5000ng/ml。5.权利要求1-4任一项所述的方法，其中，在步骤(3)中，调整细胞密度至5
×
104cells/ml-30
×
104cells/ml；优选地，调整细胞密度至5-10
×
104cells/ml，10-15
×
104cells/ml，15-20
×
104cells/ml，20-25
×
104cells/ml，25-30
×
104cells/ml；优选地，在步骤(3)中，使细胞迁移4-6h，例如，4h-5h，5h-6h。6.权利要求1-5任一项所述的方法，其中，所述方法包括：(1)将细胞饥饿培养3天22h至4天2h；(2)将胸腺素β4与所述细胞的一部分接触，做为实验组；所述细胞的另一部分不与胸腺素β4接触，做为对照组；(3)调整所述细胞密度至5
×
104cells/ml-30
×
104cells/ml，进行细胞迁移4～6h，然后通过统计迁移细胞个数，计算所述细胞的迁移指数；其中，细胞迁移指数的计算方法为：实验组迁移细胞数除以对照组迁移细胞数。7.权利要求1-6任一项所述的方法，其中，所述方法包括：(1)培养脐静脉血管内皮细胞至第四代细胞，通过不含胎牛血清的dmem培养基对所述第四代细胞饥饿培养3天22h至4天2h；(2)在步骤(1)的一部分产物中加入rhtβ4溶液，并孵育12-36h(例如，12-24h，24-36h)，做为实验组；步骤(1)的另一部分产物不与rhtβ4溶液接触，做为对照组；(3)调整所述细胞密度至5
×
104cells/ml-30
×
104cells/ml，进行细胞迁移4～6h，然后
计算所述细胞的迁移指数；其中，细胞迁移指数的计算方法为：实验组迁移细胞数除以对照组迁移细胞数。8.权利要求1-7任一项所述的方法，其中，所述步骤(1)通过如下的步骤(a)至(c)实现：(a)使用含10％胎牛血清和1％青链霉素的dmem完全培养基培养ecv304细胞至第4代细胞；(b)将步骤(a)的细胞悬液接种于细胞培养板中，并于二氧化碳培养箱中培养；(c)将步骤(b)的细胞放入不含胎牛血清的dmem基础培养基进行饥饿培养3～4天5h。9.权利要求1-8任一项所述的方法，其中，所述步骤(3)通过如下的步骤(a)至(d)实现：(a)用0.25％胰蛋白酶溶液消化步骤(2)的产物，加入0.1％fbs/dmem测定培养基以终止消化，然后调整细胞悬液的密度至5
×
104cells/ml-30
×
104cells/ml；(b)在迁移板的中加入600μl的10％fbs/dmem测定培养基，然后加入200μl的步骤(a)的细胞悬液，在二氧化碳培养箱中培养4-6h；(c)加入95％甲醇/5％pbs固定液固定细胞5min，去除未迁移的细胞，静置晾干，用结晶紫染色液染色10min，用纯化水从侧面冲洗脱色，静置晾干；(d)在光学显微镜下连续选取迁移槽外膜5个视野进行拍照，进行迁移细胞计数统计，计算实验组的细胞迁移指数。10.权利要求1-9任一项的药物组合物，其中，所述胸腺素β4是人胸腺素β4；优选地，所述人胸腺素β4是天然的人胸腺素β4，重组的人胸腺素β4或经改造的人胸腺素β4；优选地，所述胸腺素β4具有如seq id no:1-3任一项所示的序列。

技术总结
本发明涉及一种测定胸腺素β4细胞迁移活性的方法，本申请还涉及一种判断测定的胸腺素β4细胞迁移活性是否准确的方法。综上，本申请的方法在rhTβ4的筛选与医疗应用中具有较大的应用前景。的应用前景。


技术研发人员：梁明征 赵楠 马杉姗 汤晓闯 韩成权 马素永 聂李亚 许松山
受保护的技术使用者：北京诺思兰德生物技术股份有限公司
技术研发日：2023.08.30
技术公布日：2023/10/20