mir-1909-3P在制备治疗逆转胃癌细胞的放疗抵抗性药物中的应用

mir-1909-3p在制备治疗逆转胃癌细胞的放疗抵抗性药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及mir-1909-3p在制备治疗逆转胃癌细胞的放疗抵抗性药物中的应用。


背景技术：

2.胃癌（gc）是最具侵袭性的恶性肿瘤之一，是全球第五大最普遍的癌症类型，也是世界上第三大最常见的癌症相关死亡原因。手术、化疗、放疗以及这些方法的组合可用于治疗胃癌；尽管诊断和全身治疗取得了进展，但诊断为胃癌，特别是转移性胃癌的患者的预后仍然较差。放疗诱导多种dna损伤，是胃癌常用的治疗手段之一。然而肿瘤组织对辐射的抵抗力也可能导致治疗效果受到限制。
3.据报道，microrna可以在多种癌症中发挥其功能性作用，例如，异常表达的mir-217增强了急性髓性白血病和宫颈癌的化疗敏感性。mir-372-3p通过调控自噬相关因子影响肺腺癌细胞的放疗敏感性，然而，异常表达的microrna是否参与逆转胃癌的放疗抵抗性尚不清楚。


技术实现要素：

4.本发明的目的是为了解决现有技术中异常表达的microrna是否参与逆转胃癌的放疗抵抗性尚不清楚的技术问题。
5.为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：一种用于影响放疗抵抗胃癌细胞增值细胞的microrna，所述microrna的核苷酸序列如序列表中seq id no：1所述。
6.本申请还提供了mir-1909-3p在制备治疗逆转胃癌细胞的放疗抵抗性药物中的应用。
7.优选的，所述mir-1909-3p的序列如如序列表中seq id no：1所述。
8.优选的，所述mir-1909-3p通过影响放疗抵抗胃癌细胞的增值水平，以此来逆转胃癌细胞的放疗抵抗性。
9.与现有技术相比，本申请通过提供一种mir-1909-3p，其通过影响放疗抵抗胃癌细胞的增值水平，从而逆转胃癌细胞的放疗抵抗性，依次来减轻肿瘤组织对于辐射的抵抗力，进一步的，在进行治疗过程中，可以减少患者使用放疗的照射剂量，减少了患者因放疗而造成的其他影响。
附图说明
10.图1为本发明一实施方式中mkn-45与mkn-45r放疗抵抗性对比图；图2为本发明一实施方式中mir-1909-3p在细胞水平中的验证实验对比图；图3为本发明一实施方式中mir-1909-3p在动物水平中的验证实验对比图。
具体实施方式
11.以下结合具体实施例，对本发明作进一步地详细说明。
12.本申请提供了一种用于影响放疗抵抗胃癌细胞增值细胞的microrna，所述microrna的核苷酸序列如序列表中seq id no：1所述。
13.本申请还提供了mir-1909-3p在制备治疗逆转胃癌细胞的放疗抵抗性药物中的应用，所述mir-1909-3p的序列如如序列表中seq id no：1所述。
14.所述mir-1909-3p通过影响放疗抵抗胃癌细胞的增值水平，以此来逆转胃癌细胞的放疗抵抗性。
15.以下结合具体实施例对本申请进行阐述：实施例1：构建放疗抵抗细胞株并验证胃癌细胞的放疗抵抗性具体的，在一实施方式中，本申请的放疗抵抗细胞株使用胃癌细胞mkn-45，构建方法如下：使用人胃癌细胞系mkn-45细胞在添加10%胎牛血清的rpmi-1640培养基中，在37℃，5% co2的湿化气氛中培养。将mkn-45细胞隔日照射一次、每次照射4gy，共照射60gy后，建立了耐ir细胞系（mkn-45r）。
16.所述胃癌细胞的放疗抵抗性的验证方法如下：使用集落形成实验对mkn-45r细胞系（和mkn-45细胞系）进行了放疗敏感性验证，以每孔1000个细胞的浓度接种在6孔板中。
17.24小时后，用0、2、4、6、8gy不同剂量照射细胞。
18.培养14天后，菌落在聚乙二醇中固定，用结晶紫染色，计数至少含有50个细胞的菌落数。计算每个孔板的菌落存活率，实验重复三次。使用graphpad prism 8软件绘制成图。
19.结果如图1所示，可以看出mkn-45r细胞株相比于其亲本细胞株表现出更高的增殖能力。这说明mkn-45r细胞的放疗抗性显著高于亲本株。
20.实施例2：验证细胞水平具体的，在一实施方式中，将mkn-45r细胞分为2组，包括对照组及agomir-1909-3p处理组，将2组同时进行不同剂量（0gy、2gy、4gy、6gy、8gy）放疗后培养2周，观察细胞菌落形成数量。实验结果如图2所示，相较于对照组，使用agomir-1909-3p处理后显著抑制了放疗抵抗胃癌细胞的增殖水平。
21.对照组：即正常mkn-45r细胞agomir-1909-3p处理组：将mkn-45r细胞种植于6孔板中。12h后将100μl agomir/lipfectamin复合物加到含有细胞和培养基的孔中，来回轻柔摇晃培养板，在37℃，5% co2的湿化气氛中培养6h后，除去复合物，更换培养基。继续培养48h后进行后续实验。
22.实施例3：动物实验具体的，在一实施方式中，先构建了小鼠皮下瘤模型。
23.使用6周龄雌性balb/c裸鼠随机分为4组：对照组，放疗组（间隔1天照射一次，剂量率为2gy，共12gy）、agomir-1909-3p处理组、agomir-1909-3p处理联合放疗组（放疗组及agomir-1909-3p处理组共同进行处理）；mkn-45r细胞或经agomir-1909-3p处理的mkn-45r细胞经胰蛋白酶处理后冷pbs洗涤3次，最终浓度为2
×
106/ml。将100μl的细胞悬液注射到小鼠右背侧。
24.一旦肿瘤体积达到200mm3，就开始放射干预治疗。
25.第21天处死裸鼠，取皮下瘤观察生长情况。实验结果如图3所示，可以发现agomir-1909-3p处理后的mkn-45r细胞注射形成的皮下瘤经放射处理后肿瘤大小显著小于对照组及单纯放疗组。
26.本申请中提供了一种microrna，即mir-1909-3p，其通过影响放疗抵抗胃癌细胞的增值水平，从而逆转胃癌细胞的放疗抵抗性，依此来减轻肿瘤组织对于辐射的抵抗力，进一步的，在进行治疗过程中，可以减少患者使用放疗的照射剂量，减少了患者因放疗而造成的其他影响。


技术特征：
1.一种用于影响放疗抵抗胃癌细胞增值细胞的microrna，其特征在于：所述microrna的核苷酸序列如序列表中seq id no：1所述。2.mir-1909-3p在制备治疗逆转胃癌细胞的放疗抵抗性药物中的应用。3.根据权利要求2所述的mir-1909-3p在制备治疗逆转胃癌细胞的放疗抵抗性药物中的应用，其特征在于：所述mir-1909-3p的序列如如序列表中seq id no：1所述。4.根据权利要求2所述的mir-1909-3p在制备治疗逆转胃癌细胞的放疗抵抗性药物中的应用，其特征在于：所述mir-1909-3p通过影响放疗抵抗胃癌细胞的增值水平，以此来逆转胃癌细胞的放疗抵抗性。

技术总结
本发明提供mir-1909-3P在制备治疗逆转胃癌细胞的放疗抵抗性药物中的应用，涉及生物医学技术领域，本申请通过提供一种mir-1909-3P，其通过影响放疗抵抗胃癌细胞的增值水平，从而逆转胃癌细胞的放疗抵抗性，依次来减轻肿瘤组织对于辐射的抵抗力，进一步的，在进行治疗过程中，可以减少患者使用放疗的照射剂量，减少了患者因放疗而造成的其他影响。了患者因放疗而造成的其他影响。了患者因放疗而造成的其他影响。


技术研发人员：薛万江 李明 陈俊杰 胡懿淋 易剑锋
受保护的技术使用者：南通大学附属医院
技术研发日：2023.08.28
技术公布日：2023/10/20