一种P2X3抑制剂化合物及其盐、多晶型和用途的制作方法

一种p2x3抑制剂化合物及其盐、多晶型和用途
1.本技术要求享有下述在先申请的优先权权益：2022年3月29日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202210326113.5，发明名称为“一种p2x3抑制剂化合物及其盐、多晶型和用途”的在先申请；以及2023年3月21日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202310281376.3，发明名称为“一种p2x3抑制剂化合物及其盐、多晶型和用途”的在先申请。所述在先申请的全文通过引用的方式结合于本技术中。
技术领域
2.本发明属于医药领域，涉及一种p2x3抑制剂化合物及其盐、多晶型，及它们的制备方法和应用。


背景技术：

3.p2x受体是一种非选择性的atp门控离子通道受体，即嘌呤能受体，可与胞外的atp结合，这些atp主要来源于受损或发炎的组织。该受体广泛表达在神经、免疫、心血管、骨骼、胃肠、呼吸、内分泌等系统，并参与心律和收缩力调节，血管张力的调节，伤害感受尤其是慢性疼痛的调节，射精时输精管收缩，排尿期间膀胱的收缩，血小板的聚集，巨噬细胞的激活，细胞凋亡以及神经元-神经胶质相互作用等多种生理过程。上述p2x受体包括七种同源性受体：p2x1、p2x2、p2x3、p2x4、p2x5、p2x6和p2x7，三种异源性受体：p2x2/3、p2x4/6、p2x1/5。
4.p2x3是p2x受体家族的一个亚型，选择性地表达在神经末梢的背根神经节、脊髓和脑神经元中，即中小直径的初级感觉神经元中。
5.大量研究表明，在初级感觉神经元中表达的p2x3和p2x2/3的激活对啮齿类动物的急性损伤、痛觉过敏和超敏反应起重要作用。许多研究表明，p2x3受体表达上调可导致痛觉过敏形成，参与疼痛的信号传递。p2x3基因敲除小鼠表现出疼痛反应减轻，在疼痛和炎性疼痛模型中，p2x3受体拮抗剂显示出减轻伤害感受的作用。
6.p2x3分布于气道周围的初级传入神经中，能够调节咳嗽。研究表明，气道受损或发炎的组织释放的atp作用于初级神经元的p2x3受体，触发去极化和动作电位，这些电位传递引起咳嗽冲动，引发咳嗽。p2x3受体在咳嗽反射超敏反应中起重要作用，通过拮抗与p2x3受体结合，可以抑制咳嗽反射的超敏反应，从而抑制慢性咳嗽患者的过度咳嗽。另外，有研究表明p2x3拮抗剂可以治疗慢性阻塞性肺病，肺纤维化，肺动脉高压或者是哮喘，因此p2x3拮抗剂也有望成为治疗上述疾病的新药物。
7.据报道，p2x3涉及控制膀胱容量反射的传入通路，p2x3基因敲除小鼠的排尿频率显著降低、膀胱容量显著增加。因此，抑制p2x3受体拮抗剂与p2x3受体结合具有治疗储尿和排尿障碍的病症，如膀胱过度活动症的作用。因此，p2x3拮抗剂可能是治疗膀胱过动症等相关疾病的潜在药物。
8.p2x3拮抗剂显示出巨大前景，目前临床常用的咳嗽药物加巴喷丁、吗啡和阿米替林或者是采用言语病理学进行治疗，这些疗法可以改善许多患者的咳嗽，但是却不适用于所有患者，而且加巴喷丁等中枢性药物可能会产生不良副作用，不适合长期用药，临床急需
要开发可长期用药的慢性难治性咳嗽药物给医生提供用药选择，因此开发p2x3拮抗剂对于临床具有重要意义。
9.中国专利申请cn202111165441.3公开了式i化合物的结构：
[0010][0011]
该式i化合物能够有效拮抗p2x3受体活性，在制备治疗与p2x3相关疾病的药物方面具有广阔的应用前景，因此，进一步研究式i化合物及其盐型、晶型对于开发有效的治疗药物具有重要意义。


技术实现要素：

[0012]
为解决现有技术中存在的问题，一方面，本发明提供一种式i化合物或其药学上可接受的盐的晶型，其中，式i化合物的结构如下所示：
[0013][0014]
在一些实施方案中，本发明提供所述式i化合物的游离碱晶型a，所述游离碱晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.44
°
、14.87
°
、15.77
°
、17.81
°
、18.61
°
处有衍射峰；进一步地，所述游离碱晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.44
°
、11.14
°
、11.36
°
、14.87
°
、15.77
°
、16.97
°
、17.81
°
、18.61
°
处有衍射峰；更进一步地，所述游离碱晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在3.75
°
、7.44
°
、11.14
°
、11.36
°
、11.98
°
、12.25
°
、14.87
°
、15.77
°
、16.97
°
、17.81
°
、18.61
°
、22.36
°
处有衍射峰；还进一步地，所述游离碱晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在3.75
°
、5.99
°
、7.44
°
、9.01
°
、9.93
°
、11.14
°
、11.36
°
、11.98
°
、12.25
°
、13.88
°
、14.20
°
、14.87
°
、15.77
°
、16.97
°
、17.81
°
、18.61
°
、22.36
°
、24.07
°
处有衍射峰；还更进一步地，所述游离碱晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在3.75
°
、5.99
°
、7.44
°
、9.01
°
、9.93
°
、11.14
°
、11.36
°
、11.98
°
、12.25
°
、13.88
°
、14.20
°
、14.87
°
、15.77
°
、16.97
°
、17.81
°
、18.61
°
、19.39
°
、20.26
°
、21.14
°
、22.36
°
、23.34
°
、24.07
°
、26.33
°
、26.78
°
、27.18
°
、28.17
°
、30.20
°
、33.88
°
、34.35
°
、37.23
°
、37.70
°
处有衍射峰；还更进一步地，所述游离碱晶型a具有基本如图1-1所示的xrpd谱图。
[0015]
在一些实施方案中，所述游离碱晶型a具有以下的一个、两个或三个特征：
[0016]
(1)游离碱晶型a的tga曲线在150.0
±
3℃处失重约1.28
±
1％；
[0017]
(2)游离碱晶型a的dsc曲线在175.6
±
3℃处有一个吸热峰的起始点；
[0018]
(3)游离碱晶型a的dsc曲线在176.4
±
3℃处有一个吸热峰。
[0019]
在一些实施方案中，所述游离碱晶型a的tga/dsc图如图1-2所示；所述游离碱晶型a的1h nmr图如图1-3所示。
[0020]
根据本发明的实施方案，所述游离碱晶型a为无水晶型。
[0021]
在一些实施方案中，所述游离碱晶型a呈团聚的针状晶体。
[0022]
在一些实施方案中，本发明提供所述式i化合物的游离碱晶型b，所述游离碱晶型b以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.21
°
、12.48
°
、13.17
°
、14.41
°
、19.09
°
、19.56
°
、22.09
°
、26.49
°
处有衍射峰；进一步地，所述游离碱晶型b以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.21
°
、12.48
°
、13.17
°
、14.41
°
、16.72
°
、19.09
°
、19.56
°
、20.90
°
、22.09
°
、26.49
°
处有衍射峰；进一步地，所述游离碱晶型b以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.21
°
、8.35
°
、12.48
°
、13.17
°
、14.41
°
、15.05
°
、16.72
°
、17.80
°
、18.39
°
、19.09
°
、19.56
°
、20.90
°
、21.67
°
、22.09
°
、22.97
°
、25.16
°
、26.49
°
、27.49
°
处有衍射峰；更进一步地，所述游离碱晶型b以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.21
°
、8.35
°
、12.48
°
、13.17
°
、14.41
°
、15.05
°
、16.72
°
、17.80
°
、18.39
°
、19.09
°
、19.56
°
、20.90
°
、21.67
°
、22.09
°
、22.97
°
、25.16
°
、25.45
°
、26.49
°
、27.49
°
、28.66
°
、29.10
°
、29.35
°
、31.71
°
、32.00
°
、32.85
°
、33.70
°
、34.23
°
、36.78
°
、38.26
°
、38.70
°
处有衍射峰；还更进一步地，所述游离碱晶型b具有基本如图2-1所示的xrpd谱图。
[0023]
在一些实施方案中，所述游离碱晶型b具有以下的一个、两个或三个特征：
[0024]
(1)游离碱晶型b的tga曲线在150.0
±
3℃处失重约2.36
±
1％；
[0025]
(2)游离碱晶型b的dsc曲线在177.0
±
3℃处有一个吸热峰的起始点；
[0026]
(3)游离碱晶型b的dsc曲线在179.4
±
3℃处有一个吸热峰。
[0027]
在一些实施方案中，所述游离碱晶型b的tga/dsc图如图2-2所示；所述游离碱晶型b的1h nmr图如图2-3所示。
[0028]
根据本发明的实施方案，所述游离碱晶型b为无水晶型。
[0029]
另一方面，本发明提供所述式i化合物的药学上可接受的盐，可以选自式i化合物与无机酸或有机酸形成的盐，例如所述无机酸包括：盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、氢溴酸；例如，所述有机酸包括：马来酸、l-天冬氨酸、富马酸、l-酒石酸、柠檬酸、d-葡萄糖醛酸、l-苹果酸、马尿酸、d-葡萄糖酸、dl-乳酸、琥珀酸、l-抗坏血酸、己二酸、乙酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、苯磺酸、草酸、2-羟基乙磺酸、丙二酸、龙胆酸、苯甲酸；
[0030]
根据本发明优选的实施方案，所述式i化合物的药学上可接受的盐为式i化合物的盐酸盐、马来酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐或丙二酸盐。
[0031]
根据本发明的实施方案，本领域技术人员可以理解，当所述式i化合物与酸形成盐时，所述式i化合物与酸的摩尔比可以为5:1～1:5，例如3:1、2:1、1:1、1:1.5、1:2、1:2.5、1:3。优选地，所述式i化合物与酸的摩尔比为1:1或2:1。
[0032]
另一方面，本发明提供所述式i化合物的药学上可接受的盐的晶型。
[0033]
在一些实施方案中，本发明提供所述式i化合物的盐酸盐晶型a，所述盐酸盐晶型a
以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.77
°
、9.01
°
、10.10
°
、15.54
°
、17.51
°
、19.24
°
、24.49
°
处有衍射峰；进一步地，所述盐酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.77
°
、9.01
°
、10.10
°
、15.54
°
、17.51
°
、18.01
°
、19.24
°
、20.05
°
、21.28
°
、23.38
°
、23.79
°
、24.49
°
、26.07
°
、28.33
°
处有衍射峰；进一步地，所述盐酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.77
°
、9.01
°
、10.10
°
、15.54
°
、17.51
°
、18.01
°
、19.24
°
、20.05
°
、21.28
°
、21.59
°
、22.67
°
、23.38
°
、23.79
°
、24.49
°
、26.07
°
、27.17
°
、28.33
°
处有衍射峰；更进一步地，所述盐酸盐晶型a具有基本如图3-1所示的xrpd谱图。
[0034]
在一些实施方案中，所述盐酸盐晶型a中式i化合物与盐酸的摩尔比为2:1。
[0035]
根据本发明的实施方案，所述盐酸盐晶型a具有基本如图9-4所示的vt-xrpd图谱。
[0036]
根据本发明的实施方案，所述盐酸盐晶型a为无水晶型。
[0037]
在一些实施方案中，所述盐酸盐晶型a具有以下的一个、两个、三个、四个、五个或六个特征：(1)盐酸盐晶型a的tga曲线在100.0
±
3℃处失重约2.19
±
1％；
[0038]
(2)盐酸盐晶型a的tga曲线在100.0
±
3℃至160.0
±
3℃温度区间内失重约3.90
±
1％；
[0039]
(3)盐酸盐晶型a的dsc曲线在143.6
±
3℃处有一个吸热峰的起始点；
[0040]
(4)盐酸盐晶型a的dsc曲线在157.4
±
3℃处有一个吸热峰；
[0041]
(5)盐酸盐晶型a的dsc曲线在176.0
±
3℃处有一个吸热峰；
[0042]
(6)盐酸盐晶型a的dsc曲线在179.0
±
3℃处有一个吸热峰。
[0043]
在一些实施方案中，所述盐酸盐晶型a的tga/dsc图如图9-2所示；所述盐酸盐晶型a的1h nmr图如图3-2所示。
[0044]
在一些实施方案中，所述盐酸盐晶型a中无溶剂残留。
[0045]
在一些实施方案中，所述盐酸盐晶型a呈无规则颗粒状。
[0046]
在一些实施方案中，本发明提供所述式i化合物的马来酸盐晶型a，所述马来酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在6.73
°
、10.84
°
、14.68
°
、16.26
°
、18.23
°
、18.44
°
处有衍射峰；进一步地，所述马来酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.43
°
、6.73
°
、10.84
°
、14.68
°
、16.26
°
、16.82
°
、18.23
°
、18.44
°
处有衍射峰；进一步地，所述马来酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.43
°
、6.73
°
、9.95
°
、10.84
°
、11.75
°
、13.50
°
、14.68
°
、16.26
°
、16.82
°
、18.23
°
、18.44
°
、20.17
°
、22.79
°
、23.22
°
、24.00
°
、26.07
°
、27.72
°
、28.86
°
处有衍射峰；更进一步地，所述马来酸盐晶型a具有基本如图4-1所示的xrpd谱图。
[0047]
在一些实施方案中，所述马来酸盐晶型a中式i化合物与马来酸的摩尔比为2:1。
[0048]
根据本发明的实施方案，所述马来酸盐晶型a具有基本如图10-4所示的vt-xrpd图谱。
[0049]
根据本发明的实施方案，所述马来酸盐晶型a为无水晶型。
[0050]
在一些实施方案中，所述马来酸盐晶型a具有以下的一个、两个、三个或更多个特征：
[0051]
(1)马来酸盐晶型a的tga曲线在110.0
±
3℃处失重约1.65
±
1％；
[0052]
(2)马来酸盐晶型a的tga曲线在在110.0
±
3℃至220.0
±
3℃温度区间内失重约11.88
±
1％；
[0053]
(3)马来酸盐晶型a的dsc曲线在107.8
±
3℃处有一个吸热峰；
[0054]
(4)马来酸盐晶型a的dsc曲线在143.4
±
3℃处有一个吸热峰的起始点；
[0055]
(5)马来酸盐晶型a的dsc曲线在144.1
±
3℃处有一个吸热峰；
[0056]
(6)马来酸盐晶型a的dsc曲线在160.2
±
3℃处有一个吸热峰。
[0057]
在一些实施方案中，所述马来酸盐晶型a的tga/dsc图如图10-2所示；所述马来酸盐晶型a的1h nmr图如图4-2所示。
[0058]
在一些实施方案中，本发明提供所述式i化合物的对甲苯磺酸盐晶型a，所述对甲苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在4.99
°
、7.26
°
、8.70
°
、8.87
°
、15.40
°
、17.73
°
、21.01
°
、24.13
°
处有衍射峰；进一步地，所述对甲苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在4.99
°
、7.26
°
、8.70
°
、8.87
°
、15.20
°
、15.40
°
、16.68
°
、17.73
°
、19.71
°
、21.01
°
、24.13
°
处有衍射峰；进一步地，所述对甲苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在4.99
°
、7.26
°
、8.70
°
、8.87
°
、14.45
°
、14.88
°
、15.20
°
、15.40
°
、16.41
°
、16.68
°
、17.45
°
、17.73
°
、19.16
°
、19.71
°
、20.66
°
、21.01
°
、21.76
°
、22.41
°
、24.13
°
、25.76
°
、26.18
°
、27.25
°
处有衍射峰；进一步地，所述对甲苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在4.99
°
、7.26
°
、8.70
°
、8.87
°
、14.45
°
、14.88
°
、15.20
°
、15.40
°
、16.41
°
、16.68
°
、17.45
°
、17.73
°
、19.16
°
、19.71
°
、20.66
°
、21.01
°
、21.76
°
、22.41
°
、24.13
°
、25.76
°
、26.18
°
、27.25
°
、27.95
°
、29.23
°
、30.69
°
、31.00
°
、31.78
°
、38.41
°
处有衍射峰；更进一步地，所述对甲苯磺酸盐晶型a具有基本如图5-1所示的xrpd谱图。
[0059]
在一些实施方案中，所述对甲苯磺酸盐晶型a中式i化合物与对甲苯磺酸的摩尔比为1:1。
[0060]
根据本发明的实施方案，所述对甲苯磺酸盐晶型a为无水晶型。
[0061]
在一些实施方案中，所述对甲苯磺酸盐晶型a具有以下的一个、两个或三个特征：
[0062]
(1)对甲苯磺酸盐晶型a的tga曲线在150.0
±
3℃处失重约0.73
±
1％；
[0063]
(2)对甲苯磺酸盐晶型a的dsc曲线在157.1
±
3℃处有一个吸热峰的起始点；
[0064]
(3)对甲苯磺酸盐晶型a的dsc曲线在159.2
±
3℃处有一个吸热峰。
[0065]
在一些实施方案中，所述对甲苯磺酸盐晶型a的tga/dsc图如图11-2所示；所述对甲苯磺酸盐晶型a的1h nmr图如图5-2所示。
[0066]
在一些实施方案中，本发明提供所述式i化合物的苯磺酸盐晶型a，所述苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.36
°
、7.28
°
、8.34
°
、9.64
°
、16.20
°
、18.55
°
、21.49
°
处有衍射峰；进一步地，所述苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.36
°
、7.28
°
、8.34
°
、9.64
°
、16.20
°
、18.55
°
、19.28
°
、21.49
°
、21.81
°
、23.21
°
、25.05
°
、25.74
°
处有衍射峰；进一步地，所述苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.36
°
、7.28
°
、8.34
°
、9.64
°
、10.66
°
、14.55
°
、15.00
°
、16.20
°
、16.93
°
、17.85
°
、18.55
°
、19.28
°
、19.74
°
、20.80
°
、21.49
°
、21.81
°
、23.21
°
、23.68
°
、23.98
°
、25.05
°
、25.74
°
、26.65
°
、27.82
°
处有衍射峰；更进一步地，所述苯磺酸盐晶型a具有基本如图6-1所示的xrpd谱图。
[0067]
在一些实施方案中，所述苯磺酸盐晶型a中式i化合物与苯磺酸的摩尔比为1:1。
[0068]
根据本发明的实施方案，所述苯磺酸盐晶型a为无水晶型。
[0069]
在一些实施方案中，所述苯磺酸盐晶型a具有以下的一个、两个或三个特征：
[0070]
(1)苯磺酸盐晶型a的tga曲线在120.0
±
3℃处失重约1.35
±
1％；
[0071]
(2)苯磺酸盐晶型a的dsc曲线在159.6
±
3℃处有一个吸热峰的起始点；
[0072]
(3)苯磺酸盐晶型a的dsc曲线在160.9
±
3℃处有一个吸热峰。
[0073]
在一些实施方案中，所述苯磺酸盐晶型a的tga/dsc图如图6-2所示；所述苯磺酸盐晶型a的1h nmr图如图6-3所示。
[0074]
在一些实施方案中，本发明提供所述式i化合物的丙二酸盐晶型a，所述丙二酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在6.75
°
、9.96
°
、10.67
°
、14.48
°
、16.04
°
、16.88
°
、18.04
°
、18.29
°
处有衍射峰；进一步地，所述丙二酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.34
°
、6.75
°
、9.96
°
、10.67
°
、11.83
°
、13.49
°
、14.48
°
、16.04
°
、16.88
°
、17.04
°
、18.04
°
、18.29
°
、27.38
°
处有衍射峰；进一步地，所述丙二酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.34
°
、6.75
°
、9.96
°
、10.67
°
、11.83
°
、13.49
°
、14.48
°
、16.04
°
、16.88
°
、17.04
°
、18.04
°
、18.29
°
、20.27
°
、22.57
°
、22.95
°
、27.38
°
、28.83
°
处有衍射峰；进一步地，所述丙二酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.34
°
、6.75
°
、9.96
°
、10.67
°
、11.83
°
、13.49
°
、14.48
°
、16.04
°
、16.88
°
、17.04
°
、18.04
°
、18.29
°
、18.63
°
、20.27
°
、21.57
°
、22.57
°
、22.95
°
、24.11
°
、24.83
°
、26.02
°
、27.38
°
、28.83
°
处有衍射峰；更进一步地，所述丙二酸盐晶型a具有基本如图7-1所示的xrpd谱图。
[0075]
在一些实施方案中，所述丙二酸盐晶型a中式i化合物与丙二酸的摩尔比为2:1。
[0076]
根据本发明的实施方案，所述丙二酸盐晶型a具有基本如图7-4所示的vt-xrpd图谱。
[0077]
根据本发明的实施方案，所述丙二酸盐晶型a为无水晶型。
[0078]
在一些实施方案中，所述丙二酸盐晶型a具有以下的一个、两个、三个、四个或五个特征：
[0079]
(1)丙二酸盐晶型a的tga曲线在120.0
±
3℃处失重约2.99
±
1％；
[0080]
(2)丙二酸盐晶型a的tga曲线在120.0
±
3℃至200.0
±
3℃温度区间内失重约11.02
±
1％；
[0081]
(3)丙二酸盐晶型a的dsc曲线在155.6
±
3℃处有一个吸热峰的起始点；
[0082]
(4)丙二酸盐晶型a的dsc曲线在156.4
±
3℃处有一个吸热峰；
[0083]
(5)丙二酸盐晶型a的dsc曲线在172.4
±
3℃处有一个吸热峰。
[0084]
在一些实施方案中，所述丙二酸盐晶型a的tga/dsc图如图7-2所示；所述丙二酸盐晶型a的1h nmr图如图7-3所示。
[0085]
另一方面，本发明提供所述式i化合物的游离碱晶型a的制备方法，其包括如下几种方法：
[0086]
方法一、将式i化合物加入有机溶剂i中，溶解后过滤，于室温下挥发：
[0087]
优选地，所述有机溶剂i选自丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、乙腈和乙酸乙酯中的一种或多种；
[0088]
方法二、将式i化合物在有机溶剂ii中完全溶解，搅拌条件下向澄清溶液中滴加反溶剂，至有固体析出；若无固体析出，则采用悬浮搅拌；若仍无固体析出，则降温悬浮搅拌后，澄清溶液在室温下挥发；
[0089]
所述有机溶剂ii可以选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、三氯甲烷、n,n-二甲基乙酰胺和n-甲基吡咯烷酮中的一种或多种；
[0090]
所述反溶剂可以选自水、间二甲苯、正己烷、异丙苯、甲苯、环己烷、正庚烷、正戊烷和对异丙基甲苯中的一种或多种，例如选自水、水和间二甲苯的混合物、水和正己烷的混合物、水和异丙苯的混合物、水和甲苯的混合物、环己烷和对异丙基甲苯的混合物。
[0091]
方法三、将盛有式i化合物的第一样品瓶敞口置于盛有溶剂的第二样品瓶中，密封第二样品瓶，室温静置；所述溶剂不没过第一样品瓶的瓶口；
[0092]
所述溶剂选自乙醇、二氯甲烷、乙腈、丙酮、甲苯、n,n-二甲基乙酰胺和正己烷中的一种或多种；
[0093]
优选地，静置时间为1～8天。
[0094]
方法四、将盛有式i化合物溶液的第一样品瓶敞口置于盛有反溶剂的第二样品瓶中，密封第二样品瓶，室温静置；所述反溶剂不没过第一样品瓶的瓶口；
[0095]
所述式i化合物溶液中的溶剂选自异丙醇、甲基异丁基酮、1,4-二氧六环和二甲基亚砜中的一种或多种，优选为二甲基亚砜；
[0096]
所述反溶剂选自正戊烷、甲基丁基醚、水和间二甲苯中的一种或多种，优选为正戊烷和甲基丁基醚的混合物、水和间二甲苯的混合物。
[0097]
方法五、向式i化合物溶液中加入聚合物，置于室温下挥发；
[0098]
所述式i化合物溶液中的溶剂选自甲醇、2-丁酮、乙酸甲酯、乙酸异丙酯、乙醇、二氯甲烷和2-甲基四氢呋喃中的一种或多种；
[0099]
所述聚合物选自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚氯乙烯、聚醋酸乙烯酯、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、聚己酸内酯、聚乙二醇、聚甲基丙烯酸甲酯、海藻酸钠和羟乙基纤维素中的一种或多种；
[0100]
优选地，所述聚合物选自混合聚合物a或混合聚合物b；所述混合聚合物a由聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚氯乙烯、聚醋酸乙烯酯、羟丙基甲基纤维素和甲基纤维素组成，所述述混合聚合物b由聚己酸内酯、聚乙二醇、聚甲基丙烯酸甲酯、海藻酸钠和羟乙基纤维素组成；
[0101]
优选地，所述聚合物与式i化合物的质量比为1:(5-20)。
[0102]
方法六：将盛有式i化合物的第一样品瓶敞口置于盛有饱和盐溶液或水的第二样品瓶中，密封第二样品瓶，室温静置；溶剂不没过第一样品瓶的瓶口；
[0103]
优选地，所述饱和盐溶液为无机盐饱和溶液，例如可以选自饱和乙酸钾溶液、饱和碳酸钾溶液、饱和溴化钠溶液或饱和溴化钾溶液；
[0104]
优选地，体系的湿度为15～100％ rh。
[0105]
方法七、式i化合物的悬浮液在温度循环下搅拌、离心，收集固体；
[0106]
所述悬浮液中的溶剂选自正庚烷、甲基丁基醚、苯甲醚、二环己胺、丙酮、乙醇、乙酸乙酯、甲基环己烷、三氯甲烷、2-丁酮、间二甲苯和水中的一种或多种，例如选自正庚烷、甲基丁基醚、苯甲醚、丁酮和水的混合物、乙醇和水的混合物、乙酸乙酯和甲基环己烷的混合物、三氯甲烷和正庚烷的混合物、或2-丁酮和间二甲苯的混合物；
[0107]
优选地，所述温度循环的条件包括：50℃～5℃,0.1～0.5℃/min，循环至少2次。
[0108]
方法八、将式i化合物在正溶剂中完全溶解，搅拌条件下向澄清溶液中滴加反溶
剂，至有固体析出；若无固体析出，则采用悬浮搅拌；若仍无固体析出，则降温悬浮搅拌后，澄清溶液在室温下挥发；
[0109]
所述正溶剂可以选自乙醇、乙酸乙酯、2-甲基四氢呋喃、2-丁酮、乙腈、二氯甲烷和1,4-二氧六环中的一种或多种；
[0110]
所述反溶剂选自正庚烷、四氢呋喃和水中的一种或多种。
[0111]
方法九、式i化合物的浑浊液置于室温磁力搅拌，离心，收集固体；
[0112]
所述浑浊液的溶剂选自异丁醇、甲基叔丁基醚、环己烷、甲苯、乙酸异丙酯、水、甲基环己烷、四氢呋喃、正戊烷、丙酮、异丙醇、环戊基甲醚、甲醇、对异丙基甲苯、二氯甲烷、正庚烷、乙腈、1,4-二氧六环和n-甲基吡咯烷酮中的一种或多种；例如，所述浑浊液的溶剂选自异丁醇、甲基叔丁基醚、环己烷、甲苯、乙酸异丙酯和甲苯的混合物、水、甲基环己烷、四氢呋喃和正戊烷的混合物、丙酮和异丙醇的混合物、异丙醇和环戊基甲醚的混合物、二氯甲烷和正庚烷的混合物、乙腈和水的混合物、1,4-二氧六环和水的混合物、或者n-甲基吡咯烷酮和水的混合物；
[0113]
优选地，所述磁力搅拌的转速为700-1200rpm。
[0114]
方法十、称取式i化合物于hplc瓶中，向hplc瓶中加入溶剂，加热搅拌平衡后过滤取上清液；将所述上清液放置在生物培养箱中，以0.05℃/分钟从50℃降温至5℃后并在5℃保持恒温，澄清溶液转移至-20℃下恒温，收集析出的固体，转移未析出固体的样品至室温下进行挥发；
[0115]
所述溶剂选自异丙醇、苯甲醚、乙酸异丙酯、四氢呋喃和水中的一种或多种；
[0116]
加热至的温度为45-55℃，优选为50℃。
[0117]
方法十一、将式i化合物的悬浮液搅拌，离心，收集固体；
[0118]
所述悬浮液中的溶剂选自正丁醇(n-buoh)、甲苯、二异丙基醚(isopropyl ether)、甲基环己烷、异丙苯、苯甲醚、水、石油醚、二环己胺、2-甲基四氢呋喃、正己烷、2-丁酮、乙酸异丙酯、三氯甲烷、间二甲苯、四氢呋喃、甲基异丁基酮、环戊基甲醚和苄醇中的一种或多种；例如为正丁醇和甲苯的混合物、二异丙基醚、甲基环己烷、异丙苯、苯甲醚、水、pet、二环己胺、2-丁酮和异丙苯的混合物、乙酸异丙酯和甲苯的混合物、三氯甲烷和间二甲苯的混合物、乙酸异丙酯和水的混合物、四氢呋喃和水的混合物、甲基异丁基酮和环戊基甲醚的混合物、或者苄醇和甲苯的混合物；
[0119]
所述悬浮液在45-55℃下搅拌，优选为50℃；
[0120]
优选地，所述搅拌为磁力搅拌，例如所述磁力搅拌的转速为700-1200rpm。
[0121]
另一方面，本发明提供所述式i化合物的游离碱晶型b的制备方法，其包括如下步骤：
[0122]
将式i化合物的游离酸晶型a溶解于1,4-二氧六环后在正己烷气氛中气液扩散获得所述式i化合物的游离碱晶型b。
[0123]
本发明还提供了所述式i化合物的药学上可接受的盐的制备方法，其包括如下步骤：将式i化合物或式i化合物的游离碱晶型a与成盐试剂(例如相应的酸)在合适的溶剂中混合得到混合液。
[0124]
在一些实施方案中，所述制备方法还包括步骤：将所述混合液进行搅拌或打浆，分离固体，真空干燥得到所述式i化合物的药学上可接受的盐；优选地，所述搅拌、打浆、真空
干燥在室温条件下进行。
[0125]
在一些实施方案中，所述制备方法还包括步骤：提高所述混合液的过饱和度(例如加入反溶剂)。
[0126]
在一些实施方案中，所述溶剂选自乙醇、庚烷、乙酸乙酯、mtbe、乙腈、水和丙酮中的一种或几种混合。
[0127]
又一方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含所述式i化合物游离碱晶型(例如游离碱晶型a、游离碱晶型b)、式i化合物药学上可接受的盐(包括其晶型形式)中的一种或多种。
[0128]
在一些实施方案中，所述药物组合物还包含药学上可以接受的赋形剂或载体。
[0129]
又一方面，本发明提供了所述式i化合物游离碱晶型(例如游离碱晶型a、游离碱晶型b)、式i化合物药学上可接受的盐(包括其晶型形式)或者所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗和/或预防p2x3相关疾病。
[0130]
根据本发明的实施方案，利用本发明所述式i化合物游离碱晶型(例如游离碱晶型a、游离碱晶型b)、式i化合物药学上可接受的盐(包括其晶型形式)或者所述的药物组合物，可以为有需要的患者提供更优、更有效的临床治疗药物或方案。
[0131]
本发明还提供治疗和/或预防与p2x3相关疾病的方法，该方法包括向患者施用治疗有效剂量的包含如上所述式i化合物的晶型、如上所述式i化合物药学上可接受的盐、如上所述盐的晶型、或者如上所述药物组合物；优选地，包括如上所述式i化合物游离碱晶型(例如游离碱晶型a、游离酸晶型b)、式i化合物药学上可接受的盐(包括其晶型形式)或者所述的药物组合物的药物制剂。
[0132]
在一些优选实施方案中，所述式i化合物药学上可接受的盐包括式i化合物与选自下列的酸形成的盐：盐酸、硫酸、马来酸、l-天冬氨酸、磷酸、富马酸、l-酒石酸、柠檬酸、d-葡萄糖醛酸、l-苹果酸、马尿酸、d-葡萄糖酸、dl-乳酸、琥珀酸、l-抗坏血酸、己二酸、乙酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、苯磺酸、草酸、2-羟基乙磺酸、丙二酸、龙胆酸、苯甲酸。
[0133]
优选地，所述式i化合物药学上可接受的盐包括所述的盐酸盐晶型a、马来酸盐晶型a、对甲苯磺酸盐晶型a、苯磺酸盐晶型a、丙二酸盐晶型a，或其任意多种盐的组合。
[0134]
根据本发明的实施方案，所述p2x3相关疾病包括：疼痛、生殖泌尿系统疾病或呼吸系统疾病。
[0135]
优选地，所述疼痛包括：炎性疼痛、手术疼痛、内脏疼痛、牙痛、经前期疼痛、中枢性疼痛、由灼伤所致疼痛、偏头痛或簇性头痛；优选地，所述的生殖泌尿系统疾病包括：尿失禁、膀胱过度活动症、排尿困难、膀胱炎、子宫内膜异位症、子宫内膜异位症相关疼痛；优选地，所述呼吸系统疾病包括：咳嗽、特发性肺纤维化(ipf)、慢性阻塞性肺疾病(copd)；优选地，所述咳嗽包括亚急性或慢性咳嗽、治疗抗性咳嗽、特发性慢性咳嗽、病毒感染后咳嗽、医源性咳嗽、与呼吸系统疾病(例如copd、哮喘和支气管痉挛)相关的咳嗽。
[0136]
根据本发明的实施方案，所述p2x3相关疾病包括选自下列疾病中的至少之一：慢性咳嗽，尤其是难治性慢性咳嗽(rcc)、不明原因慢性咳嗽(ucc)。
[0137]
本发明还提供一种式i化合物或其药学上可接受的盐的晶型的质量检测方法，包括如下步骤：使用高效液相色谱法检测所述晶型的含量；所述高效液相色谱法采用的流动相包括流动相a和流动相b；
[0138]
所述流动相a为甲酸(fa)和乙腈(acn)的水溶液；所述流动相b为乙腈。
[0139]
优选地，所述流动相a为0.05-0.15％甲酸和2-7％乙腈的水溶液，示例性为0.1％甲酸和5％乙腈的水溶液。
[0140]
优选地，所述质量检测方法包括：纯度检测方法、溶解度检测方法、稳定性检测方法。
[0141]
优选地，所述高效液相色谱法采用梯度洗脱。
[0142]
优选地，所述流动相的流速为1
±
0.2ml/min；所述梯度洗脱的时间为5-60min；更优选为10-30min。
[0143]
优选地，所述梯度洗脱中流动相a与流动相b的体积比＝1:9-9:1。
[0144]
术语定义和解释
[0145]
本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。
[0146]
除非另有说明，本说明书和权利要求书记载的数值范围相当于至少记载了其中每一个具体的整数数值。例如，两种以上代表2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多种。当某些数值范围被定义或理解为“数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点、该范围内的每一个整数以及该范围内的每一个小数。例如，“0～10的数”应当理解为不仅记载了0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的每一个整数，还至少记载了其中每一个整数分别与0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9的和。
[0147]
本说明书和权利要求书记载“约”某个数值时，包括了该数值本身，以及本领域可接受的该数值前后范围内的数值，例如该数值
±
15％范围内的数值，该数值
±
10％范围内的数值，该数值
±
5％范围内的数值等。例如，约10，代表了包括：10
±
1.5范围内、即8.5～11.5范围内的数值；10
±
1.0范围内、即9.0～11.0范围内的数值；以及10
±
0.5范围内、即9.5～10.5范围内的数值。
[0148]
本发明的式i化合物的盐、多晶型物可以与其它活性成分组合使用，只要它不产生其他不利作用，例如过敏反应。
[0149]
本发明所用的术语“组合物”意指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品。
[0150]
术语“患者”是指包括哺乳动物在内的任何动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿类动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物，最优选人。
[0151]
术语“治疗有效剂量”是指研究人员、兽医、医师或其他临床医师正在组织、系统、动物、个体或人中寻找的引起生物学或医学反应的活性化合物或药物的量，它包括以下一项或多项：(1)预防疾病：例如在易感染疾病、紊乱或病症但尚未经历或出现疾病病理或症状的个体中预防疾病、紊乱或病症；(2)抑制疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中抑制疾病、紊乱或病症(即阻止病理和/或症状的进一步发展)；(3)缓解疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中缓解疾病、紊乱或病症(即逆转病理和/或症状)。
[0152]
术语“药学上可接受的”是指处方组分或活性成分对一般治疗目标的健康没有过分的有害影响。
[0153]
术语“药学上可以接受的赋形剂或载体”意指一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能与本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药理上可以接受的赋形剂或载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等))、乳化剂、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。所述药物组合物可特别专门配制成以固体或液体形式供口服给药、供胃肠外注射或供直肠给药。所述的药物组合物可配制成多种剂型，便于给药，例如，口服制剂(如片剂、胶囊剂、溶液或混悬液)，可注射的制剂(如可注射的溶液或混悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入药物溶媒后可立即使用)。
[0154]
当用于上述治疗和/或预防用途时，本发明式i化合物的盐、多晶型物和药物组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。
[0155]
术语“api”指游离碱，亦即式i化合物。
[0156]
有益效果
[0157]
1)本发明提供了式i化合物的晶型，具有良好的药用性质。其中，游离碱晶型a，具有较低的引湿性、良好的溶解度和理化稳定性，所述游离碱晶型a在室温和50℃条件下为热力学稳定晶型，有利于药物的储存、质量稳定性以及进一步成药。
[0158]
2)本发明通过优化试验筛选得到了式i化合物的可药用盐，并进一步得到盐的晶型产品，例如盐酸盐晶型a、马来酸盐晶型a、对甲苯磺酸盐晶型a、苯磺酸盐晶型a、丙二酸盐晶型a，其中，对甲苯磺酸盐晶型a几乎无引湿性和良好的理化稳定性，在生物溶媒中溶解度更高，具有更好的成药价值。
附图说明
[0159]
图1-1为式i化合物游离碱晶型a的xrpd图谱；
[0160]
图1-2为式i化合物游离碱晶型a的tga/dsc图；
[0161]
图1-3为式i化合物游离碱晶型a的1h nmr图；
[0162]
图1-4为式i化合物游离碱晶型a的plm图；
[0163]
图2-1为式i化合物游离碱晶型b的xrpd图谱；
[0164]
图2-2为式i化合物游离碱晶型b的tga/dsc图；
[0165]
图2-3为式i化合物游离碱晶型b的1h nmr图；
[0166]
图2-4为游离碱晶型a/b混悬竞争试验样品的xrpd叠图；
[0167]
图3-1为式i化合物盐酸盐晶型a的xrpd图谱；
[0168]
图3-2为式i化合物盐酸盐晶型a的1h nmr图；
[0169]
图4-1为式i化合物马来酸盐晶型a的xrpd图谱；
[0170]
图4-2为式i化合物马来酸盐晶型a的1h nmr图；
[0171]
图5-1为式i化合物对甲苯磺酸盐晶型a的xrpd图谱；
[0172]
图5-2为式i化合物对甲苯磺酸盐晶型a的1h nmr图；
[0173]
图6-1为式i化合物苯磺酸盐晶型a的xrpd图谱；
[0174]
图6-2为式i化合物苯磺酸盐晶型a的tga/dsc图；
[0175]
图6-3为式i化合物苯磺酸盐晶型a的1h nmr图；
[0176]
图7-1为式i化合物丙二酸盐晶型a的xrpd图谱；
[0177]
图7-2为式i化合物丙二酸盐晶型a的tga/dsc图；
[0178]
图7-3为式i化合物丙二酸盐晶型a的1h nmr图；
[0179]
图7-4为式i化合物丙二酸盐晶型a的vt-xrpd图谱；
[0180]
图8-1为样品1和2的xrpd叠图；
[0181]
图8-2为样品3、4、5和6的xrpd叠图；
[0182]
图9-1为重复制备的式i化合物盐酸盐晶型a的xrpd图谱；
[0183]
图9-2为重复制备的式i化合物盐酸盐晶型a的tga/dsc图；
[0184]
图9-3为重复制备的式i化合物盐酸盐晶型a的1h nmr图；
[0185]
图9-4为重复制备的式i化合物盐酸盐晶型a的vt-xrpd图谱；
[0186]
图9-5为重复制备的式i化合物盐酸盐晶型a的plm图；
[0187]
图10-1为重复制备的式i化合物马来酸盐晶型a的xrpd图谱；
[0188]
图10-2为重复制备的式i化合物马来酸盐晶型a的tga/dsc图；
[0189]
图10-3为重复制备的式i化合物马来酸盐晶型a的1h nmr图；
[0190]
图10-4为重复制备的式i化合物马来酸盐晶型a的vt-xrpd图谱；
[0191]
图10-5为重复制备的式i化合物马来酸盐晶型a的plm图；
[0192]
图11-1为重复制备的式i化合物对甲苯磺酸盐晶型a的xrpd图谱；
[0193]
图11-2为重复制备的式i化合物对甲苯磺酸盐晶型a的tga/dsc图；
[0194]
图11-3为重复制备的式i化合物对甲苯磺酸盐晶型a的1h nmr图；
[0195]
图11-4为重复制备的式i化合物对甲苯磺酸盐晶型a的plm图；
[0196]
图12为37℃动态溶解度曲线图；
[0197]
图13为游离碱晶型a在h2o中溶解度样品的xrpd叠图；
[0198]
图14为游离碱晶型a在sgf中溶解度样品的xrpd叠图；
[0199]
图15为游离碱晶型a在fassif中溶解度样品的xrpd叠图；
[0200]
图16为游离碱晶型a在fessif中溶解度样品的xrpd叠图；
[0201]
图17为盐酸盐晶型a在h2o中溶解度样品的xrpd叠图；
[0202]
图18为盐酸盐晶型a在sgf中溶解度样品的xrpd叠图；
[0203]
图19为盐酸盐晶型a在fassif中溶解度样品的xrpd叠图；
[0204]
图20为盐酸盐晶型a在fessif中溶解度样品的xrpd叠图；
[0205]
图21为马来酸盐晶型a在h2o中溶解度样品的xrpd叠图；
[0206]
图22为马来酸盐晶型a在sgf中溶解度样品的xrpd叠图；
[0207]
图23为马来酸盐晶型a在fassif中溶解度样品的xrpd叠图；
[0208]
图24为马来酸盐晶型a在fessif中溶解度样品的xrpd叠图；
[0209]
图25为对甲苯磺酸盐晶型a在h2o中溶解度样品的xrpd叠图；
[0210]
图26为对甲苯磺酸盐晶型a在sgf中溶解度样品的xrpd叠图；
[0211]
图27为对甲苯磺酸盐晶型a在fassif中溶解度样品的xrpd叠图；
[0212]
图28为对甲苯磺酸盐晶型a在fessif中溶解度样品的xrpd叠图；
[0213]
图29为游离碱晶型a的dvs图；
[0214]
图30为游离碱晶型a的dvs测试前后的xrpd叠图；
[0215]
图31为盐酸盐晶型a的dvs图；
[0216]
图32为盐酸盐晶型a的dvs测试前后的xrpd叠图；
[0217]
图33为马来酸盐晶型a的dvs图；
[0218]
图34为马来酸盐晶型a的dvs测试前后的xrpd叠图；
[0219]
图35为对甲苯磺酸盐晶型a的dvs图；
[0220]
图36为对甲苯磺酸盐晶型a的dvs测试前后的xrpd叠图；
[0221]
图37为游离碱晶型a稳定性评估样品的xrpd叠图；
[0222]
图38为盐酸盐晶型a稳定性评估样品的xrpd叠图；
[0223]
图39为马来酸盐晶型a稳定性评估样品的xrpd叠图；
[0224]
图40为对甲苯磺酸盐晶型a稳定性评估样品的xrpd叠图；
[0225]
图41为对应化合物给药动物的水/水奎宁摄取倍数的试验结果；
[0226]
图42为豚鼠施予对应化合物后组胺/柠檬酸刺激的咳嗽次数的试验结果；
[0227]
图43为豚鼠施予对应化合物后atp/柠檬酸刺激的咳嗽次数的试验结果。
具体实施方式
[0228]
下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。
[0229]
除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
[0230]
本发明所采用的仪器和检测方法如下：
[0231]
一、x射线粉末衍射(xrpd)
[0232]
xrpd图在panalytacal生产的x射线粉末衍射分析仪上采集，扫描参数如下表a-1所示。
[0233]
表a-1xrpd测试参数
[0234][0235]
二、热重分析(tga)和差示扫描量热(dsc)
[0236]
tga和dsc图分别在ta 5500热重分析仪和ta 2500差示扫描量热仪上采集，下表a-2列出了测试参数。
[0237]
表a-2dsc和tga测试参数
[0238][0239]
三、动态水分吸附(dvs)
[0240]
动态水分吸附(dvs)曲线在sms(surface measurement systems)的dvs intrinsic上采集。在25℃时的相对湿度用licl，mg(no3)2和kcl的潮解点校正。dvs测试参数列于下表a-3。
[0241]
表a-3dvs测试参数
[0242][0243]
四、偏光显微镜(plm)
[0244]
偏光显微镜照片使用蔡司axio scope.a1显微镜在室温下拍摄。
[0245]
五、液态核磁(1h nmr)
[0246]
液态核磁谱图在bruker 400m核磁共振仪上采集，dmso-d6作为溶剂。
[0247]
六、高效液相色谱(hplc)
[0248]
试验中纯度测试、动态溶解度和稳定性测试是由安捷伦1260高效液相色谱仪测试，离子的成盐摩尔比测试是由离子色谱测试，分析条件如下表a-4和a-5。
[0249]
表a-4高效液相色谱测试条件
[0250][0251][0252]
表a-5离子色谱测试条件
[0253][0254]
本发明使用的试剂如下表a-6。
[0255]
表a-6试验中选用溶剂的中英文名称对照表
[0256][0257][0258]
实施例1中间体a-1的合成
[0259][0260]
第一步：3-溴-2-氟-5-碘苯甲酸的合成
[0261]
将3-溴-2-氟苯甲酸(10g,45.7mmol)溶于浓硫酸(40ml)中，0℃下分批加入nis(10.27g,45.7mmol)，室温下搅拌三小时。用冰水(200ml)淬灭，过滤，滤饼用水(200ml)洗涤五次后，真空干燥得到3-溴-2-氟-5-碘苯甲酸(10.9g，白色固体，产率69.2％)。
[0262]
第二步：3-溴-2-氟-5-羟基苯甲酸的合成
[0263]
在3-溴-2-氟-5-碘苯甲酸(10.9g,31.6mmol)，氢氧化钠(6.32g,158mmol)的水(100ml)溶液中加入氧化亚铜(0.656g,4.74mmol)，100℃下反应过夜。冷却至室温后过滤，滤液用2m盐酸溶液调节ph＝1,用乙酸乙酯(60ml
×
3)萃取，有机相浓缩干得到3-溴-2-氟-5-羟基苯甲酸，(7.2g,黄色固体，产率96.8％)。
[0264]
第三步：3-溴-2-氟-5-羟基苯甲酸甲酯的合成
[0265]
将3-溴-2-氟-5-羟基苯甲酸(7.2g，30.6mmol)的甲醇(120ml)溶液中加入二氯亚
砜(10.9g，91.8mmol)，55℃下搅拌16小时。随后减压下除去溶剂，浓缩得到固体化合物3-溴-2-氟-5-羟基苯甲酸甲酯(3.1g，收率40.8％)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。
[0266]
第四步：2-氟-5-羟基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酸甲酯的合成
[0267]
将3-溴-2-氟-5-羟基苯甲酸甲酯(3.1g,12.45mmol)、联硼酸频哪醇酯(3.48g,13.69mmol)和乙酸钾(3.67g,37.3mmol)溶解在1,4-二氧六环(50ml)中，并将溶液用氮气流脱气2分钟。加入pd(dppf)cl2(0.455g,0.622mmol))，并将所得溶液用氮气流脱气另外2分钟，然后将反应混合物在100℃下搅拌16小时。将反应混合物通过过滤并真空浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化得2-氟-5-羟基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酸甲酯(3.4g，白色固体，收率92％)。
[0268]
第五步：2-氟-5-羟基-3-(5-甲基噻唑-2-基)苯甲酸甲酯(中间体a-1)的合成
[0269]
室温下，在2-氟-5-羟基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酸甲酯(3.4g,11.48mmol)，2-溴-5-甲基噻唑(2.453g,13.78mmol)，碳酸钾(3.81g,27.6mmol)的thf(30ml)和水(10ml)的混合溶液中加入pd(dppf)cl2(1.260g,1.722mmol)，真空换氮气三次后90℃下反应16h。加入水(30ml)稀释,用乙酸乙酯(40ml
×
3)萃取,有机相浓缩干，残留物用硅胶柱分离纯化得到2-氟-5-羟基-3-(5-甲基噻唑-2-基)苯甲酸甲酯(中间体a-1，1.41g，黄色固体，产率45.9％)。
[0270]
lc-ms,m/z:268.2[m+h]
+
。
[0271]
实施例2式i化合物的制备
[0272][0273]
第一步：(4r,5r)-4,5-二甲基-1,3,2-二氧杂硫杂环戊烷-2-氧化物的合成
[0274]
将(2r,3r)-(-)-2,3-丁二醇(2g，22.19mmol)，吡啶(3.86g，48.8mmol)，溶于干燥的四氢呋喃(20ml)中，调节反应温度至0-5℃，缓慢加入二氯亚砜(2.9g，24.41mmol)，升至室温搅拌16h，加入水(30ml)淬灭反应，加入20ml乙酸乙酯，分液，有机相用饱和的氯化铵(20ml)及饱和氯化钠水溶液(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到(4r,5r)-4,5-二甲基-1,3,2-二氧杂硫杂环戊烷-2-氧化物(2.4g，无色液体，收率79％)。
[0275]1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ4.63(dq,j＝9.0,6.1hz,1h),4.07(dq,j＝9.0,6.1hz,1h),1.52(d,j＝6.2hz,3h),1.43(d,j＝6.1hz,3h).
[0276]
第二步：2-氟-5-(((2s,3r)-3-羟基丁-2-基)氧基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)苯甲酸甲酯的合成
[0277]
氮气保护下，向2-氟-5-羟基-3-(5-甲基噻唑-2-基)苯甲酸甲酯(中间体a-1，
500mg，1.871mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(5ml)溶液中，加入碳酸铯(1.22g，3.74mmol)，室温搅拌30min。加入(4r,5r)-4,5-二甲基-1,3,2-二氧杂硫杂环戊烷-2-氧化物(382mg，2.81mmol)，升温至80℃反应16h，冷却至室温。反应液减压浓缩干，加入氯仿(20ml)以及4m的硫酸溶液(20ml)，混合溶液在70℃下搅拌5h，分液，水相用碳酸氢钠调节ph至7-8，二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物用硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到2-氟-5-(((2s,3r)-3-羟基丁-2-基)氧基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)苯甲酸甲酯(380mg，白色固体，收率60％)。
[0278]
lc-ms,m/z:340.1[m+h]
+
。
[0279]
第三步：2-氟-5-(((2s,3r)-3-羟基丁-2-基)氧基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)苯甲酸的合成
[0280]
将2-氟-5-(((2s,3r)-3-羟基丁-2-基)氧基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)苯甲酸甲酯(200mg，0.589mmol)溶于甲醇(4ml)中，再加入一水合氢氧化锂(70.7mg，1.765mmol)和水(0.4ml)，室温继续搅拌反应16h。反应液直接浓缩干，加入水(5ml)，用1m的盐酸水溶液调节ph至2-3，水相用二氯甲烷萃取(5ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得到2-氟-5-(((2s,3r)-3-羟基丁-2-基)氧基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)苯甲酸(190mg，白色固体，收率99％)。
[0281]
lc-ms,m/z:326.1[m+h]
+
。
[0282]
第四步：2-氟-5-(((2s,3r)-3-羟基丁-2-基)氧基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)-n-((r)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)苯甲酰胺
[0283][0284]
氮气保护下，向反应瓶中依次加入2-氟-5-(((2s,3r)-3-羟基丁-2-基)氧基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)苯甲酸(190mg，0.584mmol)，(r)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙-1-胺盐酸盐(160mg，0.701mmol)，n,n-二异丙基乙胺(226mg，1.752mmol)和n,n-二甲基甲酰胺(5ml)，冷却至0℃左右，滴加1-丙基磷酸酐的n,n-二甲基甲酰胺溶液(50％，557mg，0.876mmol)，加完恢复至室温反应16h，加入饱和碳酸氢钠溶液(5ml)淬灭，乙酸乙酯萃取(10ml
×
3)，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤(30ml
×
2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物用硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得白色固体2-氟-5-(((2s,3r)-3-羟基丁-2-基)氧基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)-n-((r)-1-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)乙基)苯甲酰胺(式i化合物，110mg，收率37.8％)。
[0285]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.94(s,2h),7.86(dd,j＝5.9,3.3hz,1h),7.63
–
7.58(m,1h),7.50(dd,j＝5.8,3.4hz,1h),7.10(dd,j＝12.3,6.5hz,1h),5.38(ddd,j＝7.7,4.4,1.5hz,1h),4.40(qd,j＝6.3,3.3hz,1h),4.01(ddd,j＝6.5,4.8,3.3hz,1h),2.56(d,j＝1.2hz,3h),2.07(d,j＝4.9hz,1h),1.72(d,j＝7.1hz,3h),1.26(d,j＝6.3hz,3h),1.23(d,j＝6.5hz,3h).
[0286]
lc-ms,m/z:499.1[m+h]
+
。
[0287]
实施例3式i化合物游离碱晶型a的制备
[0288]
称取约20mg的式i化合物样品至hplc玻璃小瓶中，加入0.5ml甲苯，得到的悬浮液在室温下磁力搅拌(1000rpm)约4天后，离心(10000rpm,2min)收集固体并进行xrpd测试，如图1-1所示，根据测试结果将固体产物记为游离碱晶型a。tga/dsc结果(图1-2)显示样品加热至150℃时有1.28％的失重，在175.6℃(起始温度)有1个吸热峰。游离碱晶型a的1h nmr结果如图1-3所示。plm(图1-4)显示样品呈团聚的针状晶体。
[0289]
所获得的式i化合物的游离碱晶型a的xrpd解析数据如下表3-1所示：
[0290]
表3-1游离碱晶型a的xrpd衍射峰数据
[0291][0292][0293]
实施例4式i化合物游离酸晶型b的制备
[0294]
将式i化合物的游离碱晶型a溶清于1,4-dioxane后在n-hexane气氛中气液扩散，固体于室温下晾干后获得游离碱晶型b。
[0295]
游离碱晶型b的xrpd如图2-1所示。tga/dsc结果(图2-2)显示样品加热至150℃时有2.36％的失重，在177.0℃(起始温度)有1个吸热峰。游离碱晶型b的1h nmr结果如图2-3所示。
[0296]
所获得的式i化合物的游离碱晶型b的xrpd解析数据如下表4-1所示：
[0297]
表4-1游离碱晶型b的xrpd衍射峰数据
[0298][0299][0300]
为确认游离碱无水晶型a和b在不同温度条件下的热力学转化关系，设置了室温和50℃下n-heptane和toluene中的混悬竞争试验。具体步骤如下：1)首先配制起始样品游离碱晶型a在相应温度和溶剂下的饱和溶液；2)称取适量混晶样品加入到过滤后的饱和溶液中形成悬浊液；3)分别在对应温度条件下悬浮搅拌。结果汇总于表4-2，xrpd结果汇总于图2-4，结果表明，在n-heptane体系中50℃和toluene体系中室温/50℃条件下的混悬竞争后均转为游离碱晶型a，在n-heptane体系中室温条件混悬竞争42天后转为游离碱晶型a。实验表明，游离碱晶型a在室温和50℃条件下为热力学稳定晶型。
[0301]
表4-2混悬竞争试验总结表
[0302][0303]
实施例5式i化合物盐型的制备与筛选
[0304]
称取约20mg式i化合物和等摩尔量的不同成盐制剂(即与游离碱成盐的酸)至hplc小瓶中，加入0.5ml溶剂混合得到悬浊液，成盐制剂先用相应溶剂稀释后再与起始样品混合。室温悬浮搅拌约5天后，离心分离固体并在室温下真空干燥过夜。对于室温澄清体系，加入0.5～1.0ml反溶剂n-heptane提高溶液的过饱和度加速析晶。所得固体xrpd表征结果显示，在盐型筛选试验中共得到5种盐型(表5-1)。
[0305]
表5-1盐型筛选试验结果总结
[0306]
[0307][0308]
#
：酸/碱投料摩尔比为1:1。
[0309]
*：室温搅拌3小时后获得澄清溶液，加入0.5～1.0ml n-heptane后观察到有固体析出。
[0310]
实施例6式i化合物的盐酸盐晶型a的制备
[0311]
将式i化合物样品和等摩尔量的盐酸在mtbe中室温打浆5天后，离心分离固体在室温下真空干燥后，获得盐酸盐晶型a。
[0312]
盐酸盐晶型a样品的xrpd图如图3-1所示。1h nmr在dmso-d6中测得，结果如图3-2显示，在样品中未观察到mtbe溶剂残留。hplc/ic结果表明，盐酸与api(即游离碱)的摩尔比为0.5:1。
[0313]
所获得的式i化合物的盐酸盐晶型a的xrpd解析数据如下表6-1所示：
[0314]
表6-1盐酸盐晶型a的xrpd衍射峰数据
[0315][0316]
实施例7式i化合物的马来酸盐晶型a的制备
[0317]
将式i化合物样品和等摩尔量的马来酸在etoac中室温搅拌～3小时后，在所得澄清液中加入0.5ml n-heptane后于室温下搅拌5天后，离心分离固体在室温条件下真空干燥后获得式i化合物的马来酸盐晶型a。
[0318]
马来酸盐晶型a样品的xrpd图如图4-1所示。1h nmr在dmso-d6中测得，结果见图4-2。结果显示，马来酸与api(即游离碱)的摩尔比为0.5:1，未观察到etoac和n-heptane的溶剂残留。
[0319]
所获得的式i化合物的马来酸盐晶型a的xrpd解析数据如下表7-1所示：
[0320]
表7-1马来酸盐晶型a的xrpd衍射峰数据
[0321][0322]
实施例8式i化合物的对甲苯磺酸盐晶型a的制备
[0323]
将式i化合物样品和等摩尔量的对甲苯磺酸在etoac中室温搅拌搅拌5天后，离心分离固体在室温下真空干燥后获得式i化合物的对甲苯磺酸盐晶型a。
[0324]
对甲苯磺酸盐晶型a样品的xrpd图如图5-1所示。1h nmr在dmso-d6中测得，结果见
图5-2。结果显示，对甲苯磺酸与api(即游离碱)的摩尔比为1.0:1，未观察到etoac的溶剂残留。
[0325]
所获得的式i化合物的对甲苯磺酸盐晶型a的xrpd解析数据如下表8-1所示：
[0326]
表8-1对甲苯磺酸盐晶型a的xrpd衍射峰数据
[0327][0328]
实施例9式i化合物的苯磺酸盐晶型a的制备
[0329]
将式i化合物样品和等摩尔的苯磺酸在mtbe中室温搅拌搅拌5天后，离心分离固体在室温下真空干燥后获得式i化合物的苯磺酸盐晶型a。
[0330]
苯磺酸盐晶型a的xrpd图如图6-1所示。tga/dsc结果详见图6-2。tga结果显示样品加热至120℃时有1.35％的失重；dsc结果显示样品在有1个吸热峰，起始温度159.6℃，峰值温度160.9℃。1h nmr在dmso-d6中测得，结果见图6-3。结果显示，苯磺酸与api(即游离碱)的摩尔比为0.9:1，未观察到mtbe的溶剂残留。
[0331]
所获得的式i化合物的苯磺酸盐晶型a的xrpd解析数据如下表9-1所示：
[0332]
表9-1苯磺酸盐晶型a的xrpd衍射峰数据
[0333]
[0334][0335]
实施例10式i化合物的丙二酸盐晶型a的制备
[0336]
将式i化合物和等摩尔量的丙二酸在etoac中室温搅拌～3小时后，在所得澄清液中加入0.5ml n-heptane后于室温下搅拌5天后，离心分离固体在室温下真空干燥后获得式i化合物的丙二酸盐晶型a。
[0337]
丙二酸盐晶型a的xrpd图如图7-1所示。tga/dsc结果详见图7-2。tga结果显示样品加热至120℃时有2.99％的失重，从120℃加热至200℃时样品失重11.02％；dsc结果显示样品在156.4℃(峰值温度)有吸热峰。1h nmr在dmso-d6中测得，结果见图7-3。结果显示，丙二酸与api(即游离碱)的摩尔比为0.7:1，未观察到etoac的溶剂残留。
[0338]
通过vt-xrpd(图7-4)对丙二酸盐晶型a进行晶型鉴定，结果表明，将样品在n2下吹扫20min，加热至120℃并降至室温，未观察到晶型变化。
[0339]
所获得的式i化合物的丙二酸盐晶型a的xrpd解析数据如下表10-1所示：
[0340]
表10-1丙二酸盐晶型a的xrpd衍射峰数据
[0341]
[0342][0343]
实施例11式i化合物的多晶型的重复制备(一)游离碱晶型b的重复制备
[0344]
表11-1游离碱晶型b重复制备结果汇总
[0345][0346]
如表11-1所示，将游离碱晶型a在tfe中没有得到游离碱晶型b，仍然为游离碱晶型a(样品1和2的xrpd图谱如图8-1所示)；在1,4-二恶烷中得到了游离碱晶型a+b的混晶(样品3、4、5、6的xrpd图谱如图8-2所示)。
[0347]
(二)盐型的重复制备
[0348]
选择了盐酸盐晶型a、马来酸盐晶型a和对甲苯磺酸盐晶型a进行300mg重复制备。结果表明，三种盐型均重复制备成功，盐型样品的重复制备步骤汇总于表11-2。
[0349]
表11-2盐型重复制备步骤小结
[0350]
[0351][0352]
1.盐酸盐晶型a
[0353]
重复制备的盐酸盐晶型a样品的xrpd图如图9-1所示。tga/dsc结果见图9-2，tga结果显示样品加热至100℃时有2.2％的失重，从100℃加热至160℃，失重为3.9％；dsc结果显示样品在157.4℃和179.0℃(峰值温度)有吸热峰。1h nmr在dmso-d6中测得，结果如图9-3所示，未观察到mtbe溶剂残留。hplc/ic结果表明盐酸盐晶型a样品的摩尔比为0.5:1(盐酸:api)。plm(图9-5)显示盐酸盐晶型a呈无规则小颗粒。通过vt-xrpd(图9-4)对盐酸盐晶型a进行晶型鉴定，结果表明，将样品在n2下吹扫20min，加热至100℃并降至室温，未观察到晶型变化。
[0354]
2.马来酸盐晶型a
[0355]
重复制备的马来酸盐晶型a样品的xrpd图如图10-1所示。tga/dsc结果见图10-2。tga结果显示样品加热至110℃时有1.65％的失重，从110℃加热至220℃，失重为11.88％；dsc结果显示样品在144.1℃(峰值温度)有吸热峰。1h nmr在dmso-d6中测得，结果见图10-3。结果显示，该样品中马来酸与api的摩尔比为0.5:1，并观察到0.3wt％的etoac溶剂残留。plm(图10-5)显示马来酸盐晶型a为不规则颗粒部分呈团聚。通过vt-xrpd(图10-4)对马来酸盐晶型a进行晶型鉴定，结果表明，将样品在n2下吹扫20min，加热至120℃并降至室温，未观察到晶型变化。
[0356]
3.对甲苯磺酸盐晶型a
[0357]
重复制备的对甲苯磺酸盐晶型a样品的xrpd图如图11-1所示。tga/dsc结果见图11-2。tga结果显示样品加热至150℃时有0.73％的失重；dsc结果显示样品在有1个吸热峰，起始温度为157.1℃，峰值温度为159.2℃。1h nmr在dmso-d6中测得，结果见图11-3。结果显示，该样品中对甲苯磺酸与api的摩尔比为1.0:1，未观察到etoac溶剂残留。plm(图11-4)显示对甲苯磺酸盐晶型a呈不规则状颗粒。
[0358]
实施例12动态溶解度实验
[0359]
以10mg/ml(以游离碱计)的固体投料浓度在37℃下旋转混合，并在不同时间点(1、4和24小时)测定各样品在水、sgf、fassif和fessif1四种体系中的溶解度。每个时间点取样后经离心(10000rpm)过滤(0.45μm ptfe过滤头)，测定滤液的hplc浓度和ph值。溶解度试验结果总结于表12-1，溶解度曲线见图12，结果显示，马来酸盐晶型a在h2o中溶解度最高，对甲苯磺酸盐晶型a在h2o以外三种生物溶媒中的1小时的溶解度最高。图13-28分别为游离碱晶型a、盐酸盐晶型a、马来酸盐晶型a、对甲苯磺酸盐晶型a在h2o中、在sgf中、在fassif中、在fessif中溶解度样品的xrpd叠图，晶型变化如表12-1中所示，游离碱晶型a在动态溶解度测试中晶型未发生变化，表现出了很高的稳定性。
[0360]
表12-1 37℃动态溶解度测试结果总结
[0361][0362][0363]
s：溶解度(mg/ml)；a：转为游离碱晶型a；b：转为游离碱晶型b；
[0364]
a’：转为游离碱晶型a+额外衍射峰；
b’：转为游离碱晶型b+额外衍射峰；
[0365]
a+b’：转为游离碱晶型a+游离碱晶型b+额外衍射峰。
[0366]
生物溶媒的配制说明：
[0367]
模拟胃液的配制(sgf)：
[0368]
称取100.2mg nacl和50.3mg曲纳通x-100至50-ml容量瓶中，加入纯化水溶清。加入816μl1m盐酸，用1m的盐酸或1m的naoh溶液调节ph至1.8。加纯化水定容。
[0369]
模拟禁食状态肠液的配制(fassif)：
[0370]
称取170.5mg无水nah2po4,22.2mg naoh和310.9mg nacl至50-ml容量瓶中。加入纯化水溶清，用1m的盐酸或1m的naoh溶液调节ph至6.5。加纯化水定容。后称55.1mg sif粉末至25-ml容量瓶中，用上述溶液溶清并定容。
[0371]
模拟喂食状态肠液的配制(fessif)：
[0372]
取0.21ml冰醋酸，101.6mg naoh和295.4mg nacl至25-ml容量瓶中。加入约20ml纯化水溶清，用1m的盐酸或1m的naoh溶液调节ph至5.0。加纯化水定容，并称入280.8mg sif粉
末溶清。
[0373]
实施例13引湿性
[0374]
通过动态水分吸附仪(dvs)对实施例3制备的游离碱晶型a、以及实施例11重复制备的盐酸盐晶型a、马来酸盐晶型a和对甲苯磺酸盐晶型a进行引湿性评估。以0％rh为起始，测试收集了25℃恒温条件下，随湿度变化(0％rh-95％rh-0％rh)时，样品的质量变化百分比。dvs测试结果及dvs测试前后样品的xrpd结果如图29-36所示。结果显示游离碱晶型a在25℃/80％rh时的水分吸附为～0.91％，表明其略有引湿性；盐酸盐晶型a在25℃/80％rh时的水分吸附为～0.49％，表明其略有引湿性；马来酸盐晶型a在25℃/80％rh的水分吸附为～0.41％，表明其略有引湿性，当湿度》80％rh时，观察到马来酸盐晶型a快速吸湿；对甲苯磺酸盐晶型a样品在25℃/80％rh的水分吸附为～0.12％，表明其几乎无引湿性。游离碱晶型a、盐酸盐晶型a、马来酸盐晶型a和对甲苯磺酸盐晶型a样品在dvs测试后晶型均不变。
[0375]
实施例14固态稳定性
[0376]
将实施例3制备的游离碱晶型a、以及实施例11重复制备的盐酸盐晶型a、马来酸盐晶型a和对甲苯磺酸盐晶型a分别在60℃闭口放置1天、25℃/60％rh和40℃/75％rh条件下敞口放置1周和1月后(其中盐酸盐晶型a和马来酸盐晶型a仅放置1周)，通过xrpd和hplc检测样品的物理和化学稳定性。纯度数据列于表14-1，xrpd结果列于图37-图40。结果显示游离碱晶型a、盐酸盐晶型a、马来酸盐晶型a和对甲苯磺酸盐晶型a在对应条件下放置后的hplc纯度无明显变化。
[0377]
表14-1固态稳定性评估总结
[0378][0379][0380]
实施例15式i化合物的游离碱晶型的不同制备工艺
[0381]
根据实施例2的工艺方法制备得到式i化合物，并按照以下方法，可制备得到游离碱晶型a或游离碱晶型b(经xrpd鉴定)。
[0382]
方法一、缓慢挥发
[0383]
采用不同的溶剂体系共设置了6个缓慢挥发试验。分别称取约20mg每份的式i化合物样品至5ml小瓶中，分别加入0.4-0.6ml表15-1中的溶剂，溶解后过滤，用封口膜封住小瓶，并在上面扎2个针孔，放置在室温下缓慢挥发。收集所得固体并进行xrpd测试。试验结果如表15-1所示，得到游离碱晶型a/b。
[0384]
表15-1缓慢挥发试验小结
[0385][0386]
方法二、气固渗透
[0387]
采用不同的溶剂共设置了8个气固渗透试验。称取约20mg每份的式i化合物样品于3ml小瓶中，另在20ml小瓶中加入约3ml溶剂，将3ml小瓶敞口置于20ml小瓶中后，将20ml小瓶密封。室温下静置1～8天后收集固体并进行xrpd测试。试验结果如表15-2所示，得到游离碱晶型a和游离碱晶型a+b。
[0388]
表15-2气固扩散试验小结
[0389][0390][0391]
*：澄清后转室温挥发得到。
[0392]
方法三、气液渗透
[0393]
采用不同的溶剂共设置了8个气液渗透试验。称取约20mg每份的式i化合物样品至3ml小瓶中，加入0.4～2.2ml溶剂溶解(使用0.45μm的ptfe滤头过滤)，另取20ml的小瓶向其中加入约3ml的反溶剂，将装有清液的3ml小瓶敞口置于20ml小瓶后，密封20-ml的小瓶并于室温下静置。收集得到的固体并进行xrpd测试。试验结果如表15-3所示，得到游离碱晶型a/b和低结晶度。
[0394]
表15-3气液扩散试验小结
[0395][0396]
*：转室温挥发得到。
[0397]
方法四、高聚物诱导
[0398]
采用2种混合高聚物在不同溶剂共设置了8个高聚物诱导试验。称取约20mg每份的式i化合物样品于3ml小瓶中，加入0.4～1.0ml溶剂溶解，溶解后过滤，加入～2mg混合聚合物，用封口膜封住小瓶，并在上面扎2个小孔，放置在室温下缓慢挥发。试验结果如表15-4所示，得到游离碱晶型a和游离碱晶型a+b。
[0399]
表15-4高聚物诱导试验小结
[0400][0401]
混合高聚物a：聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，聚氯乙烯，聚醋酸乙烯酯，羟丙基甲基纤维素和甲基纤维素(等质量混合)
[0402]
混合高聚物b：聚己酸内酯，聚乙二醇，聚甲基丙烯酸甲酯，海藻酸钠和羟乙基纤维素(等质量混合)
[0403]
方法五、湿度诱导
[0404]
采用不同的溶剂共设置了5个湿度诱导试验。分别称取约20mg每份的式i化合物样品至3ml小瓶中，另在20ml小瓶中配置室温下的饱和盐溶液，将3ml小瓶敞口置于20ml小瓶中后，将20ml小瓶密封。室温下静置8天后收集固体并进行xrpd测试。试验结果如表15-5所示，得到游离碱晶型a。
[0405]
表15-5湿度诱导试验小结
[0406][0407]
方法六、循环升降温
[0408]
采用不同的溶剂共设置了9个循环升降温试验。称取约20mg每份的式i化合物样品至hplc玻璃小瓶中，分别加入0.5ml表15-6中所列的溶剂，得到的悬浮液在温度循环下(50℃～5℃,0.1℃/min,2个循环)磁力搅拌(1000rpm)，离心(10000rpm,2min)后收集固体并进行xrpd测试。试验结果见表15-6，得到游离碱晶型a。
[0409]
表15-6循环升降温试验小结
[0410][0411]
方法七、反溶剂添加
[0412]
采用不同的溶剂共设置了12个反溶剂添加试验。分别称取约20mg每份的式i化合物样品加至20ml的小瓶内，用0.4～0.6ml的溶剂(见表15-7)将固体完全溶解。向该澄清溶液中边搅拌(1000rpm)边滴加表15-7中的反溶剂，直至有固体析出，或当反溶剂总体积加至5ml后，无固体析出的样品在5℃下悬浮搅拌，若仍无固体析出，则在-20℃下悬浮搅拌，最后的澄清样品在室温下挥发。分离析出的固体并进行xrpd测试，结果如表15-7所示，反溶剂添加试验得到游离碱晶型a和澄清溶液。
[0413]
表15-7反溶剂添加试验小结
[0414][0415]
*：反溶剂添加后获得澄清液，后转至5℃下搅拌。
[0416]
方法八、反-反溶剂添加
[0417]
采用不同的溶剂共设置了8个反-反溶剂添加试验。分别称取约20mg每份的式i化合物样品加至20ml的小瓶内，用0.4～0.6ml的溶剂(见表15-8)将固体完全溶解。将该澄清溶液边搅拌(1000rpm)边滴加到表15-8中的5ml反溶剂中，无固体析出的样品在5℃下悬浮搅拌，若仍无固体析出，则在-20℃下悬浮搅拌，最后的澄清样品在室温下挥发。分离析出的固体并进行xrpd测试，结果如表15-8所示，反溶剂添加试验得到游离碱晶型a。
[0418]
表15-8反-反溶剂添加试验小结
[0419][0420]
*：样品由5℃下搅拌得到；
#
：样品由-20℃下搅拌得到。
[0421]
方法九、室温悬浮搅拌
[0422]
采用不同的溶剂共设置了15个室温悬浮搅拌试验。称量约20～40mg每份的式i化合物样品至hplc玻璃小瓶中，分别加入0.5ml表15-9中所列的溶剂，得到的浑浊液置于室温下磁力搅拌(1000rpm)约4天后，离心(10000rpm,2min)收集固体并进行xrpd测试。试验结果见表15-9，得到游离碱晶型a。
[0423]
表15-9室温悬浮搅拌试验小结
[0424]
[0425][0426]
方法十、缓慢降温
[0427]
采用不同的溶剂体系共设置了5个缓慢降温试验。称取约20mg每份的式i化合物样品于hplc小瓶中，加入1.0ml表15-10中的溶剂，在50℃下搅拌平衡约2小时后过滤(使用0.45μm的ptfe滤头过滤)取上清液。将所得上清液放置在生物培养箱中，以0.05℃/分钟从50℃降温至5℃后并在5℃保持恒温，澄清溶液转移至-20℃下恒温。收集析出的固体并进行xrpd测试，转移未析出固体的样品至室温下进行挥发。试验结果见表15-10，缓慢降温试验得到游离碱晶型a和游离碱晶型b+多峰。
[0428]
表15-10缓慢降温试验小结
[0429][0430]
*：样品由室温下挥发得到。
[0431]
方法十一、50℃悬浮搅拌
[0432]
采用不同的溶剂共设置了16个50℃悬浮搅拌试验。称取约20～40mg每份的式i化合物样品至hplc玻璃小瓶中，分别加入0.5ml表15-11中所列的溶剂，得到的悬浮液在50℃下磁力搅拌(1000rpm)约3天后，离心(10000rpm,2min)收集固体并进行xrpd测试。试验结果见表15-11，得到游离碱晶型a。
[0433]
表15-11 50℃悬浮搅拌试验小结
[0434][0435][0436]
*：样品在50℃下澄清，转室温下搅拌得到。
[0437]
实施例16
[0438]
对照化合物1和对照化合物2参考专利申请wo 2016/091776a1合成
[0439][0440]
一、flipr法测定hp2x3拮抗剂对hp2x3的拮抗活性
[0441]
人源p2x3受体(hp2x3)拮抗剂对hp2x3的拮抗活性的评价，是采用flipr calcium 4assay kit(molecular devices,r8141)和flipr tetra instrument(molecular devices,0296)，对钙流信号进行检测。在实验前24h，将稳定转染hp2x3受体的人源细胞以2
×
105cells/ml的密度铺于384孔板中，每孔50μl细胞悬液，于5％co2，37℃培养箱中培养16-24h。用dmso配制180倍所需浓度供试化合物(20-50mm dmso储备液)，每孔取500nl加到384孔板中，补充30μl flipr assay buffer(含1.26mm ca
2+
的1
×
hbss+2mm cacl
2 20mm hepes)，振摇20-40min以混匀。用flipr assay buffer配制3倍所需浓度激动剂(α,β-meatp)(所需终浓度400nm)，每孔加45μl激动剂到另一块384孔板中。取一日前所铺细胞培养板，吸弃细胞上清，每孔加入30μl dye(calcium 4assay kit，flipr buffer稀释)，孵育1h。向每孔细胞中加15μl化合物(flipr仪器加样)，15分钟后，每孔加22.5μl激动剂，检测荧光信号(激发光波长470nm-495nm，发射波长515nm-575nm)。取信号峰值和谷值的差值作为基础数据，以阳性药最高浓度数据作为100％抑制率，dmso数据作为0％抑制率，在软件graphpadprism6上拟合化合物的抑制效应曲线并计算ic
50
值。
[0442]
表16-1测试化合物对hp2x3的拮抗活性
[0443]
测试化合物hp2x3 ic
50
(nm)对照化合物1241式i化合物67
[0444]
二、小鼠药代动力学试验
[0445]
小鼠药代动力学试验，使用雄性icr小鼠，20-25g，禁食过夜。取3只小鼠，口服灌胃给药10mg/kg，在给药前和在给药后15、30分钟以及1、2、4、8、24小时采血。血液样品6800g，2-8℃离心6分钟，收集血浆，于-80℃保存。取各时间点血浆，加入3-5倍量含内标的乙腈溶液混合，涡旋混合1分钟，13000转/分钟4℃离心10分钟，取上清液加入3倍量水混合，取适量混合液进行lc-ms/ms分析。主要药代动力学参数用winnonlin 7.0软件非房室模型分析。
[0446]
试验结果表明，在小鼠模型中，与对照化合物1和2相比，本发明式i化合物的药代动力学性质表现出一定的改善。
[0447]
表16-2测试化合物的小鼠药代动力学
[0448][0449]
三、大鼠味觉试验
[0450]
sd大鼠经过3天的隔夜禁水训练后进行给药，在给药后半小时每只动物分别给予1瓶水和1瓶0.3mm奎宁水溶液，给水15min后撤离水瓶，分别测定大鼠对摄入水量和摄入0.3mm奎宁水量，根据摄入水量与摄入奎宁水量的差异(图41)评定化合物对sd大鼠的味觉影响。
[0451]
表16-3对应化合物给药动物的水/水奎宁摄取倍数
[0452]
化合物水/奎宁水溶媒34.7对照化合物1 30mg/kg i.p11.4式i化合物30mg/kg i.p29.4
[0453]
四、豚鼠组胺/柠檬酸咳嗽药效试验
[0454]
入组前，动物适应性饲养3-7天，体重达标(300-400g)后进行编号并随机分组。
[0455]
在咳嗽评估开始前0.25～24小时，通过滴鼻向豚鼠施用化合物或赋形剂。供试品施用剂量范围为0.17mg/kg-1.5mg/kg。咳嗽评估中，动物放入全身体积扫描箱适应后，进行组胺雾化，再给予柠檬酸雾化。从组胺雾化开始直到观察期结束，共记录22min内动物的咳嗽次数和咳嗽潜伏期。
[0456]
实验数据统计采用单因素方差分析方法(one-way anova)将各组数据进行分析比较。统计分析结果p《0.05认为有显著差异。两两比较采用t-test方法比较差异性。
[0457]
表16-4豚鼠施予对应化合物后组胺/柠檬酸刺激的咳嗽次数
[0458]
化合物15分钟内咳嗽次数均值咳嗽抑制率vs.溶媒(％)溶媒26.6
‑‑
对照化合物111.457.1式i化合物8.966.5
[0459]
数据显示，与对照化合物1相比，本发明化合物在柠檬酸/组胺刺激豚鼠咳嗽模型中显著减少了动物的咳嗽次数，延长了咳嗽潜伏期，具有良好的镇咳效果(图42)。
[0460]
五、豚鼠atp/柠檬酸咳嗽药效试验
[0461]
入组前，动物适应性饲养3-7天，体重达标(300-400g)后进行编号并随机分组。在咳嗽评估开始前0.25～24小时，通过滴鼻向豚鼠施用化合物或赋形剂。供试品施用剂量范围为0.17mg/kg-1.5mg/kg。咳嗽评估中，动物放入全身体积扫描箱适应后，进行atp雾化，间隔几分钟，再给予柠檬酸雾化。从柠檬酸雾化开始，记录15min内动物的咳嗽次数和咳嗽潜伏期。
[0462]
采用单因素方差分析方法(one-way anova)对各组数据进行分析比较。统计分析结果p《0.05认为有显著差异。两两比较采用t-test方法比较差异性。
[0463]
表16-5豚鼠施予对应化合物后atp/柠檬酸刺激的咳嗽次数
[0464]
化合物15分钟内咳嗽次数均值咳嗽抑制率vs.溶媒(％)溶媒19.8
‑‑
对照化合物18.159.1式i化合物6.368.2
[0465]
数据显示，与对照化合物1相比，本发明化合物在柠檬酸/atp刺激豚鼠咳嗽模型中显著减少了动物的咳嗽次数，延长了咳嗽潜伏期，具有良好的镇咳效果(图43)。
[0466]
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.式i化合物或其药学上可接受的盐的晶型，其中，所述式i化合物的结构如下所示：2.根据权利要求1所述的晶型，其中，所述晶型为式i化合物的游离碱晶型a，所述游离碱晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.44
°
、14.87
°
、15.77
°
、17.81
°
、18.61
°
处有衍射峰；优选地，所述游离碱晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.44
°
、11.14
°
、11.36
°
、14.87
°
、15.77
°
、16.97
°
、17.81
°
、18.61
°
处有衍射峰；优选地，所述游离碱晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在3.75
°
、7.44
°
、11.14
°
、11.36
°
、11.98
°
、12.25
°
、14.87
°
、15.77
°
、16.97
°
、17.81
°
、18.61
°
、22.36
°
处有衍射峰；优选地，所述游离碱晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在3.75
°
、5.99
°
、7.44
°
、9.01
°
、9.93
°
、11.14
°
、11.36
°
、11.98
°
、12.25
°
、13.88
°
、14.20
°
、14.87
°
、15.77
°
、16.97
°
、17.81
°
、18.61
°
、22.36
°
、24.07
°
处有衍射峰；优选地，所述游离碱晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在3.75
°
、5.99
°
、7.44
°
、9.01
°
、9.93
°
、11.14
°
、11.36
°
、11.98
°
、12.25
°
、13.88
°
、14.20
°
、14.87
°
、15.77
°
、16.97
°
、17.81
°
、18.61
°
、19.39
°
、20.26
°
、21.14
°
、22.36
°
、23.34
°
、24.07
°
、26.33
°
、26.78
°
、27.18
°
、28.17
°
、30.20
°
、33.88
°
、34.35
°
、37.23
°
、37.70
°
处有衍射峰；优选地，所述游离碱晶型a具有基本如图1-1所示的xrpd谱图；优选地，所述游离碱晶型a具有以下的一个、两个或三个特征：(1)游离碱晶型a的tga曲线在150.0
±
3℃处失重约1.28
±
1％；(2)游离碱晶型a的dsc曲线在175.6
±
3℃处有一个吸热峰的起始点；(3)游离碱晶型a的dsc曲线在176.4
±
3℃处有一个吸热峰。优选地，所述游离碱晶型a的tga/dsc图如图1-2所示；优选地，所述游离碱晶型a的1h nmr图如图1-3所示。3.根据权利要求1所述的晶型，其中，所述晶型为式i化合物的游离碱晶型b，其中，所述游离碱晶型b以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.21
°
、12.48
°
、13.17
°
、14.41
°
、19.09
°
、19.56
°
、22.09
°
、26.49
°
处有衍射峰；优选地，所述游离碱晶型b以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.21
°
、12.48
°
、13.17
°
、14.41
°
、16.72
°
、19.09
°
、19.56
°
、20.90
°
、22.09
°
、26.49
°
处有衍射峰；优选地，所述游离碱晶型b以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在7.21
°
、8.35
°
、12.48
°
、13.17
°
、14.41
°
、15.05
°
、16.72
°
、17.80
°
、18.39
°
、19.09
°
、19.56
°
、20.90
°
、21.67
°
、22.09
°
、22.97
°
、25.16
°
、26.49
°
、27.49
°
处有衍射峰；
射线粉末衍射谱图在6.73
°
、10.84
°
、14.68
°
、16.26
°
、18.23
°
、18.44
°
处有衍射峰；优选地，所述马来酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.43
°
、6.73
°
、10.84
°
、14.68
°
、16.26
°
、16.82
°
、18.23
°
、18.44
°
处有衍射峰；优选地，所述马来酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.43
°
、6.73
°
、9.95
°
、10.84
°
、11.75
°
、13.50
°
、14.68
°
、16.26
°
、16.82
°
、18.23
°
、18.44
°
、20.17
°
、22.79
°
、23.22
°
、24.00
°
、26.07
°
、27.72
°
、28.86
°
处有衍射峰；优选地，所述马来酸盐晶型a具有基本如图4-1所示的xrpd谱图；优选地，所述马来酸盐晶型a中式i化合物与马来酸的摩尔比为2:1；优选地，所述马来酸盐晶型a具有基本如图10-4所示的vt-xrpd图谱；优选地，所述马来酸盐晶型a具有以下的一个、两个、三个或更多个特征：(1)马来酸盐晶型a的tga曲线在110.0
±
3℃处失重约1.65
±
1％；(2)马来酸盐晶型a的tga曲线在110.0
±
3℃至220.0
±
3℃温度区间内失重约11.88
±
1％；(3)马来酸盐晶型a的dsc曲线在107.8
±
3℃处有一个吸热峰；(4)马来酸盐晶型a的dsc曲线在143.4
±
3℃处有一个吸热峰的起始点；(5)马来酸盐晶型a的dsc曲线在144.1
±
3℃处有一个吸热峰；(6)马来酸盐晶型a的dsc曲线在160.2
±
3℃处有一个吸热峰。8.根据权利要求5所述的晶型，其中，所述对甲苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在4.99
°
、7.26
°
、8.70
°
、8.87
°
、15.40
°
、17.73
°
、21.01
°
、24.13
°
处有衍射峰；优选地，所述对甲苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在4.99
°
、7.26
°
、8.70
°
、8.87
°
、15.20
°
、15.40
°
、16.68
°
、17.73
°
、19.71
°
、21.01
°
、24.13
°
处有衍射峰；优选地，所述对甲苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在4.99
°
、7.26
°
、8.70
°
、8.87
°
、14.45
°
、14.88
°
、15.20
°
、15.40
°
、16.41
°
、16.68
°
、17.45
°
、17.73
°
、19.16
°
、19.71
°
、20.66
°
、21.01
°
、21.76
°
、22.41
°
、24.13
°
、25.76
°
、26.18
°
、27.25
°
处有衍射峰；优选地，所述对甲苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在4.99
°
、7.26
°
、8.70
°
、8.87
°
、14.45
°
、14.88
°
、15.20
°
、15.40
°
、16.41
°
、16.68
°
、17.45
°
、17.73
°
、19.16
°
、19.71
°
、20.66
°
、21.01
°
、21.76
°
、22.41
°
、24.13
°
、25.76
°
、26.18
°
、27.25
°
、27.95
°
、29.23
°
、30.69
°
、31.00
°
、31.78
°
、38.41
°
处有衍射峰；优选地，所述对甲苯磺酸盐晶型a具有基本如图5-1所示的xrpd谱图；优选地，所述对甲苯磺酸盐晶型a中式i化合物与对苯磺酸的摩尔比为1:1；优选地，所述对甲苯磺酸盐晶型a具有以下的一个、两个或三个特征：(1)对甲苯磺酸盐晶型a的tga曲线在150.0
±
3℃处失重约0.73
±
1％；(2)对甲苯磺酸盐晶型a的dsc曲线在157.1
±
3℃处有一个吸热峰的起始点；(3)对甲苯磺酸盐晶型a的dsc曲线在159.2
±
3℃处有一个吸热峰。9.根据权利要求5所述的晶型，其中，所述苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.36
°
、7.28
°
、8.34
°
、9.64
°
、16.20
°
、18.55
°
、21.49
°
处有衍射峰；
优选地，所述苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.36
°
、7.28
°
、8.34
°
、9.64
°
、16.20
°
、18.55
°
、19.28
°
、21.49
°
、21.81
°
、23.21
°
、25.05
°
、25.74
°
处有衍射峰；优选地，所述苯磺酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.36
°
、7.28
°
、8.34
°
、9.64
°
、10.66
°
、14.55
°
、15.00
°
、16.20
°
、16.93
°
、17.85
°
、18.55
°
、19.28
°
、19.74
°
、20.80
°
、21.49
°
、21.81
°
、23.21
°
、23.68
°
、23.98
°
、25.05
°
、25.74
°
、26.65
°
、27.82
°
处有衍射峰；优选地，所述苯磺酸盐晶型a具有基本如图6-1所示的xrpd谱图；优选地，所述苯磺酸盐晶型a中式i化合物与苯磺酸的摩尔比为1:1；优选地，所述苯磺酸盐晶型a具有以下的一个、两个或三个特征：(1)苯磺酸盐晶型a的tga曲线在120.0
±
3℃处失重约1.35
±
1％；(2)苯磺酸盐晶型a的dsc曲线在159.6
±
3℃处有一个吸热峰的起始点；(3)苯磺酸盐晶型a的dsc曲线在160.9
±
3℃处有一个吸热峰。10.根据权利要求5所述的晶型，其中，所述丙二酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在6.75
°
、9.96
°
、10.67
°
、14.48
°
、16.04
°
、16.88
°
、18.04
°
、18.29
°
处有衍射峰；优选地，所述丙二酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.34
°
、6.75
°
、9.96
°
、10.67
°
、11.83
°
、13.49
°
、14.48
°
、16.04
°
、16.88
°
、17.04
°
、18.04
°
、18.29
°
、27.38
°
处有衍射峰；优选地，所述丙二酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.34
°
、6.75
°
、9.96
°
、10.67
°
、11.83
°
、13.49
°
、14.48
°
、16.04
°
、16.88
°
、17.04
°
、18.04
°
、18.29
°
、20.27
°
、22.57
°
、22.95
°
、27.38
°
、28.83
°
处有衍射峰；优选地，所述丙二酸盐晶型a以2θ
±
0.2
°
衍射角表示的x-射线粉末衍射谱图在5.34
°
、6.75
°
、9.96
°
、10.67
°
、11.83
°
、13.49
°
、14.48
°
、16.04
°
、16.88
°
、17.04
°
、18.04
°
、18.29
°
、18.63
°
、20.27
°
、21.57
°
、22.57
°
、22.95
°
、24.11
°
、24.83
°
、26.02
°
、27.38
°
、28.83
°
处有衍射峰；优选地，所述丙二酸盐晶型a具有基本如图7-1所示的xrpd谱图；优选地，所述丙二酸盐晶型a中式i化合物与丙二酸的摩尔比为2:1；优选地，所述丙二酸盐晶型a具有基本如图7-4所示的vt-xrpd图谱；优选地，所述丙二酸盐晶型a具有以下的一个、两个、三个或四个特征：(1)丙二酸盐晶型a的tga曲线在120.0
±
3℃处失重约2.99
±
1％；(2)丙二酸盐晶型a的tga曲线在120.0
±
3℃至200.0
±
3℃温度区间内失重约11.02
±
1％；(3)丙二酸盐晶型a的dsc曲线在155.6
±
3℃处有一个吸热峰的起始点；(4)丙二酸盐晶型a的dsc曲线在156.4
±
3℃处有一个吸热峰；(5)丙二酸盐晶型a的dsc曲线在172.4
±
3℃处有一个吸热峰。11.式i化合物的盐，其中，所述式i化合物的药学上可接受的盐包括式i化合物与无机酸或有机酸形成的盐；式i化合物的结构如下所示：
所述无机酸包括：盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、氢溴酸；所述有机酸包括：马来酸、l-天冬氨酸、富马酸、l-酒石酸、柠檬酸、d-葡萄糖醛酸、l-苹果酸、马尿酸、d-葡萄糖酸、dl-乳酸、琥珀酸、l-抗坏血酸、己二酸、乙酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、苯磺酸、草酸、2-羟基乙磺酸、丙二酸、龙胆酸、苯甲酸；优选地，所述式i化合物的药学上可接受的盐为式i化合物的盐酸盐、马来酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、丙二酸盐；优先地，所述式i化合物与酸的摩尔比为5:1～1:5，例如3:1、2:1、1:1、1:1.5、1:2、1:2.5、1:3。优选地，所述式i化合物与酸的摩尔比为1:1或2:1。12.权利要求2所述式i化合物的游离碱晶型a的制备方法，其中，选自下述方法中的任意一种：方法一、将式i化合物加入有机溶剂i中，溶解后过滤，于室温下挥发：优选地，所述有机溶剂i选自丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯中的一种或多种；方法二、将式i化合物在有机溶剂ii中完全溶解，搅拌条件下向澄清溶液中滴加反溶剂，至有固体析出；若无固体析出，则采用悬浮搅拌；若仍无固体析出，则降温悬浮搅拌后，澄清溶液在室温下挥发；所述有机溶剂ii选自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、三氯甲烷、n,n-二甲基乙酰胺、n-甲基吡咯烷酮中的一种或多种；所述反溶剂选自水、间二甲苯、正己烷、异丙苯、甲苯、环己烷、正庚烷、正戊烷、对异丙基甲苯中的一种或多种；方法三、将盛有式i化合物的第一样品瓶敞口置于盛有溶剂的第二样品瓶中，密封第二样品瓶，室温静置；所述溶剂不没过第一样品瓶的瓶口；所述溶剂选自乙醇、二氯甲烷、乙腈、丙酮、甲苯、n,n-二甲基乙酰胺、正己烷中的一种或多种；方法四、将盛有式i化合物溶液的第一样品瓶敞口置于盛有反溶剂的第二样品瓶中，密封第二样品瓶，室温静置；所述反溶剂不没过第一样品瓶的瓶口；所述式i化合物溶液中的溶剂选自异丙醇、甲基异丁基酮、1,4-二氧六环、二甲基亚砜中的一种或多种；所述反溶剂选自正戊烷、甲基丁基醚、水、间二甲苯中的一种或多种；方法五、向式i化合物溶液中加入聚合物，置于室温下挥发；所述式i化合物溶液中的溶剂选自甲醇、2-丁酮、乙酸甲酯、乙酸异丙酯、乙醇、二氯甲烷、2-甲基四氢呋喃中的一种或多种；
所述聚合物选自聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，聚氯乙烯，聚醋酸乙烯酯，羟丙基甲基纤维素，甲基纤维素，聚己酸内酯，聚乙二醇，聚甲基丙烯酸甲酯，海藻酸钠和羟乙基纤维素中的一种或多种；方法六：将盛有式i化合物的第一样品瓶敞口置于盛有饱和盐溶液或水的第二样品瓶中，密封第二样品瓶，室温静置；所述溶剂不没过第一样品瓶的瓶口；优选地，所述饱和盐溶液为无机盐饱和溶液；优选地，所述无机盐饱和溶液为饱和乙酸钾溶液、饱和碳酸钾溶液、饱和溴化钠溶液、饱和溴化钾溶液；优选地，体系的湿度为15～100％rh；方法七、式i化合物的悬浮液在温度循环下搅拌、离心，收集固体；所述悬浮液中的溶剂选自正庚烷、甲基丁基醚、苯甲醚、二环己胺、丙酮、乙醇、乙酸乙酯、甲基环己烷、三氯甲烷、2-丁酮、间二甲苯、水中的一种或多种；优选地，所述温度循环的条件包括：50℃～5℃,0.1～0.5℃/min，循环至少2次；方法八、将式i化合物在正溶剂中完全溶解，搅拌条件下向澄清溶液中滴加反溶剂，至有固体析出；若无固体析出，则采用悬浮搅拌；若仍无固体析出，则降温悬浮搅拌后，澄清溶液在室温下挥发；所述正溶剂选自乙醇、乙酸乙酯、2-甲基四氢呋喃、2-丁酮、乙腈、二氯甲烷、1,4-二氧六环中的一种或多种；所述反溶剂选自正庚烷、四氢呋喃和水中的一种或多种；方法九、式i化合物的浑浊液置于室温磁力搅拌，离心，收集固体；所述浑浊液的溶剂选自异丁醇、甲基叔丁基醚、环己烷、甲苯、乙酸异丙酯、水、甲基环己烷、四氢呋喃、正戊烷、丙酮、异丙醇、环戊基甲醚、甲醇、对异丙基甲苯、二氯甲烷、正庚烷、乙腈、1,4-二氧六环、n-甲基吡咯烷酮中的一种或多种；方法十、称取式i化合物于hplc瓶中，向hplc瓶中加入溶剂，加热搅拌平衡后过滤取上清液；将所述上清液放置在生物培养箱中，以0.05℃/分钟从50℃降温至5℃后并在5℃保持恒温，澄清溶液转移至-20℃下恒温，收集析出的固体，转移未析出固体的样品至室温下进行挥发；所述溶剂选自异丙醇、苯甲醚、乙酸异丙酯、四氢呋喃和水中的一种或多种；优选地，加热至的温度为45-55℃，优选为50℃；方法十一、将式i化合物的悬浮液搅拌，离心，收集固体；所述悬浮液中的溶剂选自正丁醇、甲苯、二异丙基醚、甲基环己烷、异丙苯、苯甲醚、水、石油醚、二环己胺、2-甲基四氢呋喃、正己烷、2-丁酮、乙酸异丙酯、三氯甲烷、间二甲苯、四氢呋喃、甲基异丁基酮、环戊基甲醚和苄醇中的一种或多种；优选地，所述悬浮液在45-55℃下搅拌。13.权利要求3所述式i化合物的游离碱晶型b的制备方法，其中，包括如下步骤：将式i化合物的游离酸晶型a溶解于1,4-二氧六环后在正己烷气氛中气液扩散，获得所述式i化合物的游离碱晶型b。14.权利要求11所述式i化合物的药学上可接受的盐的制备方法，其包括如下步骤：将式i化合物或式i化合物的游离碱晶型a与成盐试剂在合适的溶剂中混合得到混合液；
优选地，所述成盐试剂为权利要求4中的无机酸或有机酸；所述式i化合物的游离碱晶型a为权利要求2所述晶型中的游离碱晶型a。15.一种药物组合物，其中，药物组合物包含权利要求1-10任一项所述式i化合物或其药学上可接受的盐的晶型、权利要求11所述式i化合物药学上可接受的盐中的一种或多种；优选地，所述式i化合物药学上可接受的盐为式i化合物的盐酸盐、马来酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、丙二酸盐；优选地，所述盐的晶型为式i化合物的盐酸盐晶型a、马来酸盐晶型a、对甲苯磺酸盐晶型a、苯磺酸盐晶型a、丙二酸盐晶型a。16.权利要求1-10任一项所述式i化合物或其药学上可接受的盐的晶型、权利要求11所述式i化合物药学上可接受的盐、或者权利要求15所述药物组合物在制备治疗药物中的用途；优选地，所述用于治疗和/或预防p2x3相关疾病；优选地，所述p2x3相关疾病包括：疼痛、生殖泌尿系统疾病或呼吸系统疾病；优选地，所述疼痛包括：炎性疼痛、手术疼痛、内脏疼痛、牙痛、经前期疼痛、中枢性疼痛、由灼伤所致疼痛、偏头痛或簇性头痛；优选地，所述的生殖泌尿系统疾病包括：尿失禁、膀胱过度活动症、排尿困难、膀胱炎、子宫内膜异位症、子宫内膜异位症相关疼痛；优选地，所述呼吸系统疾病包括：咳嗽、特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺疾病；优选地，所述咳嗽包括亚急性或慢性咳嗽、治疗抗性咳嗽、特发性慢性咳嗽、病毒感染后咳嗽、医源性咳嗽、与呼吸系统疾病相关的咳嗽。17.一种治疗和/或预防与p2x3相关疾病的方法，该方法包括向患者施用治疗有效剂量的包含如权利要求1-10任一项所述式i化合物或其药学上可接受的盐的晶型、权利要求11所述式i化合物药学上可接受的盐、或者权利要求15所述药物组合物。18.一种权利要求1-10任一项所述晶型的质量检测方法，包括使用高效液相色谱法检测所述晶型的含量；所述高效液相色谱法采用的流动相包括流动相a和流动相b；所述流动相a为甲酸(fa)和乙腈(acn)的水溶液；所述流动相b为乙腈；优选地，所述流动相a为0.05-0.15％甲酸和2-7％乙腈的水溶液，示例性为0.1％甲酸和5％乙腈的水溶液；优选地，所述质量检测方法包括：纯度检测方法、溶解度检测方法、稳定性检测方法；优选地，所述高效液相色谱法采用梯度洗脱；优选地，所述流动相的流速为1
±
0.2ml/min；所述梯度洗脱的时间为5-60min；更优选为10-30min；优选地，所述梯度洗脱中流动相a：流动相b的体积比＝1:9-9:1。

技术总结
本发明涉及一种P2X3抑制剂化合物及其盐、多晶型和用途。本发明提供了式I化合物的晶型，具有良好的药用性质。还得到了式I化合物的可药用盐，并进一步得到盐的晶型产品，例如盐酸盐晶型A、马来酸盐晶型A、对甲苯磺酸盐晶型A、苯磺酸盐晶型A、丙二酸盐晶型A。对于开发有效的治疗药物具有重要意义。的治疗药物具有重要意义。的治疗药物具有重要意义。


技术研发人员：张学军 臧杨 李群 雷四军 刘礼飞 李园 夏庆丰 李莉娥 杨俊
受保护的技术使用者：武汉人福创新药物研发中心有限公司
技术研发日：2023.03.29
技术公布日：2023/10/19