氨基酸衍生物、药物组合物及其制备方法和应用与流程

氨基酸衍生物、药物组合物及其制备方法和应用
1.本发明要求享有于2022年4月6日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202210360017.2，名称为“氨基酸衍生物、药物组合物及其制备方法和应用”的在先申请的优先权。该在先申请的全文通过引用的方式结合于本技术中。
技术领域
2.本发明属于药物合成领域，具体涉及氨基酸衍生物、药物组合物及其制备方法和应用。


背景技术：

3.帕金森病(parkinson’s disease，pd)是仅次于阿尔茨海默症的第二大神经退行性疾病，其主要病理表现为黑质多巴胺能神经元变性缺失及路易小体(lewy body)形成。帕金森病临床表现为静止性震颤、运动迟缓、肌肉强直及姿势平衡障碍等运动症状，常伴随睡眠障碍，自主神经障碍、精神症状及认知功能损害等非运动症状。帕金森病发病机制尚未完全阐明，目前普遍认为是多种因素共同作用的结果，环境因素与遗传因素共同作用下最终导致帕金森病的发生。该疾病的复杂性和隐匿性，常导致临床上无法在疾病早期阶段做出明确诊断，而发展到终末期难以控制症状。帕金森病致病与遗传基因的作用逐渐受到人们的关注，随着基因测序的技术成熟，基因检测手段在帕金森病诊断领域也广泛被应用，至今已发现超过20种致病基因，其中包括富亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2，lrrk2)。lrrk2又称park8，位于染色体12q12，长约144kb，包含51个外显子，其编码2527个氨基酸，由lrr，ras蛋白复合体(roc)，ras蛋白复合体的c端区重复序列(cor)，激酶活性区域(mapkkk)，wd40等蛋白结构域组成。roc和cor具有蛋白激酶的作用，wd40是由每40个色氨酸和天冬氨酸组成的重复序列，该区域能够参与lrrk2与其他蛋白质的相互作用，同时也能够可逆性与蛋白质结合，参与其信号的传导和运输。lrrk2蛋白与gtp和蛋白激酶联合，可在各种组织中广泛表达，并参与黑质纹状体和尾状核等中枢神经系统功能。lrrk2基因突变是常染色体显性遗传帕金森病的常见原因，同时也与散发型帕金森病相关。目前已经鉴定出80几个错义突变，它们分布在整个lrrk2基因段上，并影响所有预测功能域。临床前研究发现lrrk2突变导致的帕金森病中均有黑质神经元的丢失，其他的病理表现还包括路易小体的形成，推测lrrk2蛋白可能同α-突触核蛋白在共同的途径导致帕金森病的发生。进一步的研究发现，lrrk2激酶活性异常增高会引起激酶活性升高3-4倍，导致多巴胺能神经元损伤，大大增加帕金森病的发病风险。临床研究也发现携带lrrk2变异基因的帕金森病患者在运动严重性方面可能更快发展。现今，科学家发现lrrk2激酶抑制剂可保护神经元免受lrrk2过度激活诱导的神经变性，阻断神经元中增加的α-突触核蛋白的聚集，抑制包涵体的形成，减缓疾病的进展。因此lrrk2被认为是一个新的非常有潜力的治疗帕金森病的靶点。针对lrrk2突变携带者的靶向lrrk2特异性治疗的临床试验已经开始，突显了该领域在过去十年中取得的快速进展。已开展的临床研究进展也已证明lrrk2抑制剂有望成为改善lrrk2-帕金森病的潜在疾病修饰疗法。lrrk2的激酶活性对于发病机制来说是重要的，并且lrrk2激
酶结构域可调节整体lrrk2功能。尽管lrrk2在中枢科研领域中取得进展，但仍需要适用于治疗各种神经退化性疾病(诸如帕金森氏病、阿尔茨海默症和肌肉萎缩性侧索硬化)的lrrk2受体的抑制剂。本发明提供了一种新型结构的氨基酸衍生物，并发现具有此类结构的化合物具有良好的活性。


技术实现要素：

4.为改善上述技术问题，本发明在第一方面提供了一种式i所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或其前药：
[0005][0006]
其中，r1选自无取代或任选被1个、2个或更多个r
11
取代的下列基团：nh2、c
6-20
芳基、5-20元杂芳基；每个r
11
相同或不同，彼此独立地选自c
1-40
烷基、卤代c
1-40
烷基、c
3-20
环烷基、二c
1-40
烷基-磷酰基-c
6-20
芳基；
[0007]
r2选自c
1-40
烷基、c
1-40
烷氧基、卤代c
1-40
烷基、卤素；
[0008]
r3选自h、c
1-40
烷基、c
1-40
烷氧基；
[0009]
或者，r1、r2与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
21
取代的下列基团：c
3-20
环烷基、3-20元杂环基、5-20元杂芳基；每个r
21
相同或不同，彼此独立地选自卤素、cn、氧代(＝o)、c
1-40
烷基、c
3-20
环烷基；
[0010]
或者，r2、r3与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
22
取代的下列基团：c
3-20
环烷基、3-20元杂环基、5-20元杂芳基；每个r
22
相同或不同，彼此独立地选自卤素、cn、氧代(＝o)、c
1-40
烷基、c
3-20
环烷基；
[0011]
x选自n或ch；
[0012]
r4选自h、卤素、cn、oh、无取代或任选被1个、2个或更多个r
41
取代的下列基团：c
1-40
烷基、c
2-40
烯基、c
2-40
炔基、c
3-20
环烷基、c
1-40
烷氧基、c
3-20
环烷基氧基；每个r
41
相同或不同，彼此独立地选自氘、卤素、c
1-40
烷基、卤代c
1-40
烷基、c
3-20
环烷基；
[0013]
和/或，x和其中一个r4与它们连接的环原子和亚氨基(nh)一起形成5-6元杂环基；
[0014]
m选自0-6的整数；例如1、2、3、4、5；
[0015]
环a选自c
6-20
芳基、5-20元杂芳基；
[0016]
e选自化学键或r
e1
选自c
1-40
烷基、c
1-40
烷氧基、卤代c
1-40
烷基、卤素；g选自化学键、c
6-20
芳基或5-20元杂芳基；n选自0、1、2、3或4；
[0017]
r5、r6、r7、r8相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-40
烷基、c
1-40
烷氧基、nh2、nh
2-c
1-40
烷
基或彼此连接成环，或与其中一个r4连接形成与环a稠合的c
3-20
环烷基、c
3-20
环烯基、c
3-20
环炔基、3-20元杂环基、5-20元杂芳基，或者r5、r6与其连接的原子形成c
3-20
环烷基、3-20元杂环基；且r5、r6、r7、r8中的至少一个为nh2或nh
2-c
1-40
烷基；
[0018]
y选自ora、n(rb)(rc)；ra选自h、c
1-40
烷基或rb、rc相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-40
烷基。
[0019]
根据本发明的实施方案，r1选自无取代或任选被1个、2个或更多个r
11
取代的下列基团：nh2、c
6-14
芳基；每个r
11
相同或不同，彼此独立地选自c
1-12
烷基、卤代c
1-12
烷基、c
3-12
环烷基、二c
1-12
烷基-磷酰基-c
6-14
芳基；
[0020]
r2可以选自c
1-12
烷基、c
1-12
烷氧基、卤代c
1-12
烷基、卤素；
[0021]
r3可以选自h、c
1-12
烷基、c
1-12
烷氧基；
[0022]
或者，r1、r2与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
21
取代的下列基团：c
3-12
环烷基、3-14元杂环基、5-14元杂芳基；每个r
21
相同或不同，彼此独立地选自卤素、cn、氧代(＝o)、c
1-12
烷基、c
3-12
环烷基；
[0023]
或者，r2、r3与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
22
取代的下列基团：c
3-12
环烷基、3-14元杂环基、5-14元杂芳基；每个r
22
相同或不同，彼此独立地选自卤素、cn、氧代(＝o)、c
1-12
烷基、c
3-12
环烷基。
[0024]
根据本发明的实施方案，r1选自无取代或任选被1个、2个或更多个r
11
取代的下列基团：nh2、苯基；每个r
11
相同或不同，彼此独立地选自c
1-6
烷基、卤代c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、二c
1-6
烷基-磷酰基-苯基；
[0025]
r2可以选自卤代c
1-6
烷基、卤素；
[0026]
r3可以为h；
[0027]
或者，r1、r2与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
21
取代的3-8元杂环基、5-8元杂芳基；每个r
21
相同或不同，彼此独立地选自卤素、氧代(＝o)、c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基；
[0028]
或者，r2、r3与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
22
取代的3-8元杂环基、5-8元杂芳基；每个r
22
相同或不同，彼此独立地选自卤素、cn、氧代(＝o)、c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基。
[0029]
根据本发明的实施方案，r1选自甲氨基、乙氨基、丙氨基、异丙基氨基、环丙基氨基、环丁基氨基、二氟乙氨基、三氟乙氨基、甲苯基、二甲基-磷酰基-苯氨基；
[0030]
r2可以选自三氟甲基、f、cl、br；
[0031]
或者，r1、r2与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
21
取代的四氢吡咯基；每个r
21
相同或不同，彼此独立地选自f、氧代(＝o)、环丙基；例如
[0032]
或者，r2、r3与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
22
取代的下列基团：
四氢吡咯基、1h-吡咯基；每个r
22
相同或不同，彼此独立地选自f、cn、氧代(＝o)、环丙基；例如
[0033]
根据本发明的实施方案，r4选自h、卤素、cn、无取代或任选被1个、2个或更多个r
41
取代的下列基团：c
1-12
烷基、c
2-12
炔基、c
3-12
环烷基、c
1-12
烷氧基、c
3-12
环烷基氧基；每个r
41
相同或不同，彼此独立地选自氘、卤素、c
1-12
烷基、卤代c
1-12
烷基、c
3-12
环烷基；
[0034]
和/或，x和其中一个r4与它们连接的环原子和亚氨基(nh)一起形成5-6元杂环基；
[0035]
和/或，r5和其中一个r4连接形成与环a稠合的c
3-12
环烷基、c
3-12
环烯基、3-12元杂环基或5-12元杂芳基。
[0036]
根据本发明的实施方案，r4选自h、卤素、cn、c
1-12
烷基、c
2-12
炔基、c
3-12
环烷基、c
1-12
烷氧基、c
3-12
环烷基氧基、卤代c
1-12
烷氧基、氘代c
1-12
烷氧基；
[0037]
和/或，x和其中一个r4与它们连接的环原子和亚氨基(nh)一起形成5-6元杂环基；
[0038]
和/或，r4和r5连接形成与环a稠合的5-6元杂环基。
[0039]
根据本发明的实施方案，r4选自h、f、cl、br、i、cn、c
1-6
烷基、c
2-6
炔基、c
3-6
环烷基、c
1-6
烷氧基、c
3-6
环烷基氧基、卤代c
1-6
烷氧基、氘代c
1-6
烷氧基；
[0040]
和/或，x和其中一个r4与它们连接的环原子和亚氨基(nh)一起形成6元杂环基；
[0041]
和/或，r5和其中一个r4连接形成与环a稠合的5元杂环基或5元杂芳基。
[0042]
根据本发明的实施方案，r4选自h、f、cl、cn、甲基、甲氧基、乙氧基、环丙基、环丙基氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、三氘代甲氧基、乙炔基；
[0043]
和/或，x和其中一个r4与它们连接的环原子和亚氨基(nh)一起形成吗啉基；
[0044]
和/或，r4和r5连接形成与环a稠合的
[0045]
根据本发明的实施方案，环a选自c
6-14
芳基、5-14元杂芳基；例如选自c
6-8
芳基、5-8元杂芳基；如选自苯基、吡啶基、噻吩基、吡唑基。
[0046]
根据本发明的实施方案，e选自化学键或r
e1
选自氟、氯、溴、碘；g选自化学键或c
6-14
芳基；n选自1或2；优选地，当n为1时，r
e1
为r构型；
[0047]
e例如选自化学键、优选地，选自
[0048]
根据本发明的实施方案，r5、r6、r7、r8相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-12
烷基、nh2或nh
2-c
1-12
烷基；且r5、r6、r7、r8中的至少一个为nh2或nh
2-c
1-12
烷基；
[0049]
或者，r5、r6与其连接的原子形成c
3-12
环烷基、3-12元杂环基。
[0050]
根据本发明的实施方案，r5、r6、r7、r8相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-6
烷基、nh2或nh
2-c
1-6
烷基，例如h、甲基、nh2、nh
2-甲基；且r5、r6、r7、r8中的至少一个为nh2或nh
2-甲基，例如当r5、r6、r7均为h时，r8为nh2；当r5、r7、r8均为h时，r6为nh2或nh
2-甲基；当r5、r6均为h时，r7为甲基，r8为nh2；当r5、r7均为h时，r6为甲基或乙基，r8为nh2；优选地，当r8为nh2时，为s构型；
[0051]
或者，r5、r6与其连接的原子形成c
3-6
环烷基，例如环丙基。
[0052]
根据本发明的实施方案，y选自ora、n(rb)(rc)；ra选自h、c
1-12
烷基或rb、rc相同或不同，彼此独立地选自c
1-12
烷基。
[0053]
根据本发明的实施方案，y选自ora、n(rb)(rc)；ra选自h、c
1-6
烷基或rb、rc相同或不同，彼此独立地选自c
1-6
烷基；y例如选自oh、甲氨基、二甲氨基、异丙基氧基、叔丁基氧基、庚基氧基或
[0054]
根据本发明的实施方案，式i所示化合物可以选自式ii或式iii所示的结构：
[0055][0056]
其中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、e、y和m独立地具有上文所述的定义。
[0057]
根据本发明的实施方案，式i所示化合物可以选自式i-1、i-2、i-3或i-4所示的结构：
[0058][0059]
其中，r1、r4、r5、r6、g和y独立地具有上文所述的定义。
[0060]
根据本发明的优选的实施方案，根据本发明的代表性式i的化合物具有选自如下所示的结构：
[0061]
[0062][0063][0064]
本发明还提供式i化合物的制备方法，至少包括以下方案一或方案二：
[0065]
方案一：化合物i-1脱保护，得到式i所示化合物；
[0066][0067]
方案二：化合物i-2脱保护，得到式i所示化合物；
[0068][0069]
其中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、m、a、e、x、y独立地具有上文所述的定义，pg选自氨基保护基，例如为叔丁氧羰基、苄氧基羰基；
[0070]
根据本发明的实施方案，方案一或方案二中的脱保护反应可以在酸存在下或催化剂存在下进行，所述酸优选选自hcl溶液、三氟乙酸；所述催化剂优选选自钯碳、二氧化钯。
[0071]
本发明还提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的式i所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或其前药中的至少一种。
[0072]
根据本发明的实施方案，所述药物组合物还包括一种或多种药学上可接受的辅料。
[0073]
根据本发明的实施方案，所述药物组合物还可以进一步含有一种或多种额外的治疗剂。
[0074]
在第三方面，本发明提供了式i的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或其前药在制备药物中的应用，例如在制备lrrk2抑制剂中的应用。
[0075]
根据本发明的实施方案，所述药物或药物组合物用于预防或治疗与lrrk2介导的疾病或症状。
[0076]
根据本发明的实施方案，所述与lrrk2介导相关的疾病或症状选自帕金森、麻风病、ibd、阿兹海默氏症、l-多巴诱发性运动障碍、痴呆症、肌肉萎缩性侧索硬化、肾癌、乳腺癌、前列腺癌、血癌、乳头状癌、肺癌、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、麻风病、克罗恩氏病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肌肉萎缩性侧索硬化、类风湿性关节炎或强直性脊椎炎。
[0077]
根据本发明，可将式i的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或其前药制成适合于通过任何适当途径给药的形式，通过常规方法使用一种或多种药学上可接受的载体来配制。因此，式i的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或其前药可以被配制成用于口服给药、注射(例如静脉内、肌肉内或皮下)给药、吸入或吹入给药的各种剂型；也可以配制成持续释放剂型，例如片剂、硬或软胶囊、水性或油性混悬液、乳剂、注射液、可分散性粉末或颗粒、栓剂、锭剂或糖浆。
[0078]
本发明还提供一种治疗或预防与lrrk2介导相关的疾病的方法，包括给予患者预
防或治疗有效量的式i所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或其前药化合物中的至少一种，或上述药物组合物。
[0079]
在一些实施方案中，所述患者哺乳动物，优选是人。
[0080]
本发明还提供式i所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或其前药化合物中的至少一种，或其药物组合物在治疗或预防与lrrk2介导相关的疾病中的应用。
[0081]
根据本发明的实施方案，所述与lrrk2介导相关的疾病或症状选自帕金森、麻风病、ibd、阿兹海默氏症、l-多巴诱发性运动障碍、痴呆症、肌肉萎缩性侧索硬化、肾癌、乳腺癌、前列腺癌、血癌、乳头状癌、肺癌、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、麻风病、克罗恩氏病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肌肉萎缩性侧索硬化、类风湿性关节炎或强直性脊椎炎。
[0082]
有益效果
[0083]
本发明提供的化合物具有良好的lrrk2抑制作用，可用于治疗或预防与lrrk2相关的病症和疾病，以及制备用于此类病症和疾病的药物。
[0084]
术语定义与说明
[0085]
除非另有说明，本技术说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当被理解为本技术说明书和/或权利要求书记载的范围内。
[0086]
除非另有说明，本说明书和权利要求书记载的数值范围相当于至少记载了其中每一个具体的整数数值。例如，数值范围“1-40”相当于记载了数值范围“1-10”中的每一个整数数值即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，以及数值范围“11-40”中的每一个整数数值即11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40。此外，当某些数值范围被定义为“数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点、该范围内的每一个整数以及该范围内的每一个小数。例如，“0～10的数”应当理解为不仅记载了0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的每一个整数，还至少记载了其中每一个整数分别与0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9的和。
[0087]
应当理解，本文在描述1、2个或更多个中，“更多个”应当是指大于2，例如大于等于3的整数，例如3、4、5、6、7、8、9或10。
[0088]
术语“卤素”表示氟、氯、溴和碘。
[0089]
术语“c
1-40
烷基”应理解为表示具有1～40个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。例如，“c
1-10
烷基”表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的直链和支链烷基，“c
1-8
烷基”表示具有1、2、3、4、5、6、7、或8个碳原子的直链和支链烷基，“c
1-6
烷基”表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链和支链烷基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。
[0090]
术语“c
2-40
烯基”应理解为表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并
且具有2～40个碳原子，优选“c
2-10
烯基”。“c
2-10
烯基”应理解为优选表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，更优选“c
2-8
烯基”。“c
2-10
烯基”应理解为优选表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5、6、7或8个碳原子，例如，具有2、3、4、5或6个碳原子(即，c
2-6
烯基)，具有2或3个碳原子(即，c
2-3
烯基)。应理解，在所述烯基包含多于一个双键的情况下，所述双键可相互分离或者共轭。所述烯基是例如乙烯基、烯丙基、(e)-2-甲基乙烯基、(z)-2-甲基乙烯基、(e)-丁-2-烯基、(z)-丁-2-烯基、(e)-丁-1-烯基、(z)-丁-1-烯基、戊-4-烯基、(e)-戊-3-烯基、(z)-戊-3-烯基、(e)-戊-2-烯基、(z)-戊-2-烯基、(e)-戊-1-烯基、(z)-戊-1-烯基、己-5-烯基、(e)-己-4-烯基、(z)-己-4-烯基、(e)-己-3-烯基、(z)-己-3-烯基、(e)-己-2-烯基、(z)-己-2-烯基、(e)-己-1-烯基、(z)-己-1-烯基、异丙烯基、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、(e)-1-甲基丙-1-烯基、(z)-1-甲基丙-1-烯基、3-甲基丁-3-烯基、2-甲基丁-3-烯基、1-甲基丁-3-烯基、3-甲基丁-2-烯基、(e)-2-甲基丁-2-烯基、(z)-2-甲基丁-2-烯基、(e)-1-甲基丁-2-烯基、(z)-1-甲基丁-2-烯基、(e)-3-甲基丁-1-烯基、(z)-3-甲基丁-1-烯基、(e)-2-甲基丁-1-烯基、(z)-2-甲基丁-1-烯基、(e)-1-甲基丁-1-烯基、(z)-1-甲基丁-1-烯基、1,1-二甲基丙-2-烯基、1-乙基丙-1-烯基、1-丙基乙烯基、1-异丙基乙烯基。
[0091]
术语“c
2-40
炔基”应理解为表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个三键并且具有2～40个碳原子，优选“c
2-10
炔基”。术语“c
2-10
炔基”应理解为优选表示直连或支链的一价烃基，其包含一个或多个三键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，例如，具有2、3、4、5、6、7或8个碳原子(即，“c
2-8
炔基”)，具有2、3、4、5或6个碳原子(即，“c
2-6
炔基”)，具有2或3个碳原子(“c
2-3
炔基”)。所述炔基是例如乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、戊-1-炔基、戊-2-炔基、戊-3-炔基、戊-4-炔基、己-1-炔基、己-2-炔基、己-3-炔基、己-4-炔基、己-5-炔基、1-甲基丙-2-炔基、2-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-2-炔基、3-甲基丁-1-炔基、1-乙基丙-2-炔基、3-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-4-炔基、1-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-3-炔基、1-甲基戊-3-炔基、4-甲基戊-2-炔基、1-甲基戊-2-炔基、4-甲基戊-1-炔基、3-甲基戊-1-炔基、2-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-2-炔基、1-丙基丙-2-炔基、1-异丙基丙-2-炔基、2,2-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-2-炔基或3,3-二甲基丁-1-炔基。特别地，所述炔基是乙炔基、丙-1-炔基或丙-2-炔基。
[0092]
术语“c
3-40
环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、二环(如稠环、桥环、螺环)烃环或三环烷烃，其具有3～40个碳原子，优选“c
3-10
环烷基”，更优选优选“c
3-8
环烷基”。术语“c
3-10
环烷基”应理解为表示饱和的一价单环、双环(如桥环、螺环)烃环或三环烷烃，其具有3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子。所述c
3-10
环烷基可以是单环烃基，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃基如龙脑基、吲哚基、六氢吲哚基、四氢萘基、十氢萘基、二环[2.1.1]己基、二环[2.2.1]庚基、二环[2.2.1]庚烯基、6,6-二甲基二环[3.1.1]庚基、2,6,6-三甲基二环[3.1.1]庚基、二环[2.2.2]辛基、2,7-二氮杂螺[3,5]壬烷基、2,6-二氮杂螺[3,4]辛烷基，或者是三环烃基如金刚烷基。
[0093]
术语“3-20元杂环基”是指饱和的或不饱和的非芳族的环或环系，例如，其是4-、5-、6-或7-元的单环、7-、8-、9-、10-、11-或12-元的二环(如稠环、桥环、螺环)或者10-、11-、
12-、13-、14-或15-元的三环环系，并且含有至少一个，例如1、2、3、4、5个或更多个选自o、s和n的杂原子，其中n和s还可以任选被氧化成各种氧化状态，以形成氮氧化物、-s(o)-或-s(o)
2-的状态。优选地，所述杂环基可以选自“3-10元杂环基”。术语“3-10元杂环基”意指饱和的或不饱和的非芳族的环或环系，并且含有至少一个选自o、s和n的杂原子。所述杂环基可以通过所述碳原子中的任一个或氮原子(如果存在的话)与分子的其余部分连接。所述杂环基可以包括稠合的或桥连的环以及螺环的环。特别地，所述杂环基可以包括但不限于：4元环，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基；5元环，如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6元环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基；或7元环，如二氮杂环庚烷基。任选地，所述杂环基可以是苯并稠合的。所述杂环基可以是双环的，例如但不限于5,5元环，如六氢环戊并[c]吡咯-2(1h)-基环，或者5,6元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1h)-基环。杂环基可以是部分不饱和的，即它可以包含一个或多个双键，例如但不限于二氢呋喃基、二氢吡喃基、2,5-二氢-1h-吡咯基、4h-[1,3,4]噻二嗪基、1,2,3,5-四氢噁唑基或4h-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基。所述3-20元杂环基与其它基团相连构成本发明的化合物时，可以为3-20元杂环基上的碳原子与其它基团相连，也可以为3-20元杂环基环上杂环原子与其它基团相连。例如当3-20元杂环基选自哌嗪基时，可以为哌嗪基上的氮原子与其它基团相连。或当3-20元杂环基选自哌啶基时，可以为哌啶基环上的氮原子和其对位上的碳原子与其它基团相连。
[0094]
术语“c
6-20
芳基”应理解为优选表示具有6～20个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、二环(如稠环、桥环、螺环)或三环烃环，其可以是单芳族环或稠合在一起的多芳族环，优选“c
6-14
芳基”。术语“c
6-14
芳基”应理解为优选表示具有6、7、8、9、10、11、12、13或14个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环(“c
6-14
芳基”)，特别是具有6个碳原子的环(“c6芳基”)，例如苯基；或联苯基，或者是具有9个碳原子的环(“c9芳基”)，例如茚满基或茚基，或者是具有10个碳原子的环(“c
10
芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基，或者是具有13个碳原子的环(“c
13
芳基”)，例如芴基，或者是具有14个碳原子的环(“c
14
芳基”)，例如蒽基。当所述c
6-20
芳基被取代时，其可以为单取代或者多取代。并且，对其取代位点没有限制，例如可以为邻位、对位或间位取代。
[0095]
术语“5-20元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、二环(如稠环、桥环、螺环)或三环芳族环系：其具有5～20个环原子且包含1-5个独立选自n、o和s的杂原子，例如“5-14元杂芳基”。术语“5-14元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个环原子，特别是5或6或9或10个碳原子，且其包含1-5个，优选1-3个独立选自n、o和s的杂原子并且，另外在每一种情况下可为苯并稠合的。单环“杂芳基”的实例包括例如吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻嗪基、噁嗪基、三嗪基、噻二嗪基或噁二嗪基等。“杂芳基”还指其中杂芳族环与一个或多个芳基、脂环族或杂环基环稠合的基团，其中所述连接的位点在杂芳族环上。非限制性实例包括1-、2-、3-、5-、6-、7-或8-吲嗪基、1-、3-、4-、5-、6-或7-异吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲唑基、2-、4-、5-、6-、7-或8-嘌呤基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-喹嗪基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基、1-、4-、5-、6-、7-或8-酞嗪基(phthalazinyl)、2-、3-、4-、5-或6-萘啶基、2-、3-、5-、6-、7-或8-喹唑啉基、3-、4-、5-、6-、
7-或8-噌啉基、2-、4-、6-或7-蝶啶基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-4ah咔唑基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-咔唑基咔唑基、1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-咔啉基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-菲啶基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-吖啶基、1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-啶基、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-或10-菲咯啉基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-吩嗪基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩噻嗪基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩嗪基、2-、3-、4-、5-、6-或1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-或10-苯并异喹啉基、2-、3-、4-或噻吩并[2,3-b]呋喃基、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-或11-7h-吡嗪并[2,3-c]咔唑基、2-、3-、5-、6-或7-2h-呋喃并[3,2-b]-吡喃基、2-、3-、4-、5-、7-或8-5h-吡啶并[2,3-d]-邻-嗪基、1-、3-或5-1h-吡唑并[4,3-d]-唑基、2-、4-或54h-咪唑并[4,5-d]噻唑基、3-、5-或8-吡嗪并[2,3-d]哒嗪基、2-、3-、5-或6-咪唑并[2,1-b]噻唑基、1-、3-、6-、7-、8-或9-呋喃并[3,4-c]噌啉基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-、10或11-4h-吡啶并[2,3-c]咔唑基、2-、3-、6-或7-咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪基、7-苯并[b]噻吩基、2-、4-、5-、6-或7-苯并唑基、2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基、2-、4-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基、1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-苯并氧杂基(benzoxapinyl)、2-、4-、5-、6-、7-或8-苯并嗪基、1-、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-或11-4h-吡咯并[1,2-b][2]苯并氮杂基(benzazapinyl)。典型的稠合杂芳基包括但不限于2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并[b]噻吩基、2-、4-、5-、6-或7-苯并唑基、2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基和2-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基。当所述5-20元杂芳基与其它基团相连构成本发明的化合物时，可以为5-20元杂芳基环上的碳原子与其它基团相连，也可以为5-20元杂芳基环上的杂原子与其它基团相连。当所述5-20元杂芳基被取代时，其可以为单取代或者多取代。并且，对其取代位点没有限制，例如可以为杂芳基环上与碳原子相连的氢被取代，或者杂芳基环上与杂原子相连的氢被取代。
[0096]
术语“螺环”是指两个环共用1个成环原子的环系。
[0097]
术语“稠环”是指两个环共用2个成环原子的环系。
[0098]
术语“桥环”是指两个环共用3个以上成环原子的环系。
[0099]
除非另有说明，杂环基、杂芳基或亚杂芳基包括其所有可能的异构形式，例如其位置异构体。因此，对于一些说明性的非限制性实例，可以包括在其1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-、10-、11-、12-位等(如果存在)中的1、2个或更多个位置上取代或与其他基团键合的形式，包括吡啶-2-基、亚吡啶-2-基、吡啶-3-基、亚吡啶-3-基、吡啶-4-基和亚吡啶-4-基；噻吩基或亚噻吩基包括噻吩-2-基、亚噻吩-2-基、噻吩-3-基和亚噻吩-3-基；吡唑-1-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡唑-5-基。
[0100]
术语“氧代”是指取代基中的碳原子、氮原子或硫原子被氧化后形成的氧基取代(＝o)。
[0101]
术语“烷基氨基”指-nh-(烷基)或-n-(烷基)2，其中烷基的定义如上所述。烷基氨基的非限制性实例包括：甲氨基、乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、丁基氨基、二甲基氨基、甲基乙基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基、甲基丙基氨基、二异丙基氨基、二丁基氨基等。
[0102]
术语“烷基氧基”指-o-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷基氧基、烷基氨基、
卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷基氧基或杂环烷基氧基。
[0103]
术语“亚烷基氧基”和“氧基亚烷基”指-亚烷基-o-或-o-亚烷基-，其中的亚烷基表示直链或支链饱和二价烃基。关于“亚烷基”的碳原子数的定义适用上文对“烷基”的定义。本领域技术人员能够理解，亚烷基氧基或氧基亚烷基可以以任意方向与包含它的分子的其余部分连接，即二者可以互换地使用。
[0104]“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。
[0105]
在本发明中，所涉及的化合物亦包括经同位素标记的化合物，所述经同位素标记的化合物与式i中所示的那些相同，但是其中一或多个原子被原子质量或质量数不同于通常天然存在的原子质量或质量数的原子替代。可掺入本发明的化合物的同位素的实例包括h、c、n、o、s、f及cl的同位素，分别诸如2h、3h、
13
c、
11
c、
14
c、
15
n、
18
o、
17
o、
32
p、
35
s、
18
f及
36
cl。含有上述同位素和/或其他原子的其他同位素的本发明的化合物、其前药、或者所述化合物或所述前药的药学上可接受的盐在本发明的范围内。本发明的某些经同位素标记的化合物，例如掺入放射性同位素(诸如3h和
14
c)的化合物可用于药物和/或底物组织分布测定。氚(即3h)和碳14(即
14
c)同位素因易于制备和可检测性而成为特别优选的。再者，以较重的同位素(诸如氘，即2h或d)替代可提供源自更高的代谢稳定性的某些治疗优势(例如增加的体内半衰期或减少的剂量需求)，并因此可在某些情况下是优选的。如权利要求所请求保护的本发明化合物可特别地限定以氘或氚替代。此外，取代基中出现的氢未单独列明术语氘或氚并不表示排除氘或氚，而是同样也可以包含氘或氚。
[0106]
本领域技术人员可以理解，式i所示化合物可以以各种药学上可接受的盐的形式存在。如果这些化合物具有碱性中心，则其可以形成酸加成盐；如果这些化合物具有酸性中心，则其可以形成碱加成盐；如果这些化合物既包含酸性中心(例如羧基)又包含碱性中心(例如氨基)，则其还可以形成内盐。
[0107]
本发明的化合物可以溶剂合物(如水合物)的形式存在，其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。
[0108]
根据其分子结构，本发明的化合物可以是手性的，因此可能存在各种对映异构体形式。因而这些化合物可以以消旋体形式或光学活性形式存在。本发明的化合物涵盖了各手性碳为r或s构型的异构体或其混合物、消旋体。本发明的化合物或其中间体可以通过本领域技术人员公知的化学或物理方法分离为对映异构体化合物，或者以此形式用于合成。在外消旋的胺的情况中，通过与光学活性的拆分试剂反应，从混合物制得非对映异构体。适当的拆分试剂的示例是光学活性的酸，例如r和s形式的酒石酸、二乙酰酒石酸、二苯甲酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸、适当的n-保护的氨基酸(例如n-苯甲酰脯氨酸或n-苯磺酰基脯氨酸)或各种光学活性的樟脑磺酸。借助光学活性的拆分试剂(例如固定在硅胶上的二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸、三乙酸纤维素或其它碳水化合物的衍生物或手性衍生化的异丁烯酸酯聚合物)，也可有利地进行色谱对映体拆分。用于此目的的适当的洗脱剂是含水或含醇的溶剂混合物，例如，己烷/异丙醇/乙腈。
[0109]
可以根据已知的方法，例如通过萃取、过滤或柱层析来分离相应的稳定异构体。
[0110]
术语“患者”是指包括哺乳动物在内的任何动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿类动
物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物，最优选人。
[0111]
术语“治疗有效量”是指研究人员、兽医、医师或其它临床医师正在组织、系统、动物、个体或人中寻找的引起生物学或医学反应的活性化合物或药物的量，它包括以下一项或多项：(1)预防疾病：例如在易感染疾病、紊乱或病症但尚未经历或出现疾病病理或症状的个体中预防疾病、紊乱或病症。(2)抑制疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中抑制疾病、紊乱或病症(即阻止病理和/或症状的进一步发展)。(3)缓解疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中缓解疾病、紊乱或病症(即逆转病理和/或症状)。
具体实施方式
[0112]
下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。
[0113]
除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
[0114]
部分原料制备：
[0115]
1、2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺的合成
[0116][0117]
在反应瓶中加入2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶(20g,0.089mol)和甲醇(45ml)，体系于-10℃搅拌10分钟，然后加入三乙胺(12.5ml,0.089mol)和甲胺的甲醇溶液(2m,45ml)，体系继续搅拌1小时后自然升温，并于室温下搅拌过夜。浓缩，往反应体系中加入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，残余物用柱层析纯化得2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(8.5g,45％)
[0118]
ms m/z(esi):212[m+1]
+
.
[0119]
2、2-氯-n-乙基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺的合成
[0120][0121]
合成参见2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺
[0122]
ms m/z(esi):226[m+1]
+
.
[0123]
3、2-氯-n-环丙基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺的合成
[0124]
[0125]
合成参见2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺
[0126]
ms m/z(esi):238[m+1]
+
.
[0127]
4、2-氯-n-(2,2-二氟乙基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺的合成
[0128][0129]
合成参见2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺
[0130]
ms m/z(esi):262[m+1]
+
.
[0131]
5、2-氯-n-(2,2,2-三氟乙基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺的合成
[0132][0133]
合成参见2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺
[0134]
ms m/z(esi):280[m+1]
+
.
[0135]
实施例1
[0136]
(s)-2-氨基-3-(3-甲氧基-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸
[0137][0138]
第一步
[0139]
(r)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-碘丙酸苄酯的制备
[0140]
将三苯基膦(1.2g，4.5mmol)和咪唑(0.3g，4.5mmol)加入茄形瓶中，置换氮气三次，随后加入二氯甲烷(10ml)和碘(1.1g，4.5mmol)。反应液在室温下搅拌10分钟后降温至0℃，随后缓慢滴入(n-苄氧羰基)-l-丝氨酸苄酯cpd-01a(1.0g，3.0mmol)的二氯甲烷溶液。反应液保持0℃搅拌2小时。待反应结束后过滤除去反应液中的固体，滤液旋干，用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)分离纯化后得到(r)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-碘丙酸苄酯cpd-01b(1.2g，白色固体)，产率：83％。
[0141]
ms m/z(esi):462[m+23]
+
.
[0142]
第二步
[0143]
(r)-(3-(苄氧基)-2-(苄氧羰基)氨基)-3-氧丙基)碘化锌的制备
[0144]
将活化后的锌粉(0.75g，11.5mmol)和碘(0.15g，0.6mmol)加入三口瓶中，置换氮气三次后用吹风机将碘吹至升华，随后将(r)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-碘丙酸苄酯cpd-01b(1.0g，2.3mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(10ml)溶液一次性加入三口瓶中，维持瓶内温度搅拌10分钟。反应液用注射器抽出，直接用于下一步反应，不做任何处理。
[0145]
第三步
[0146]
(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)丙酸苄酯的制备
[0147]
将4-溴-2-甲氧基-1-硝基苯(0.27g，1.2mmol)、双三苯基膦二氯化钯(0.08g，0.1mmol)、碘化亚铜(0.05g，0.3mmol)和n,n-二甲基甲酰胺加入三口瓶中，置换氮气三次后置于80℃油浴中预热10分钟，随后用注射器缓慢滴入(r)-(3-(苄氧基)-2-(苄氧羰基)氨基)-3-氧丙基)碘化锌cpd-01c的n,n-二甲基甲酰胺溶液。反应液在80℃下搅拌0.5小时。待反应结束后，反应液用硅藻土过滤，随后倒入水(200ml)中，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，有机相合并后用饱和食盐水(50ml)洗，无水硫酸钠干燥并浓缩。得到的粗品用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)分离纯化后得到(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)丙酸苄酯cpd-01d(0.45g，棕色油状物)，产率：70％。
[0148]
ms m/z(esi):487[m+23]
+
.
[0149]
第四步
[0150]
(s)-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-2-((苄氧羰基)氨基)丙酸苄酯的制备
[0151]
将(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)丙酸苄酯cpd-01d(400mg，0.86mmol)、铁粉(385mg，6.89mmol)和乙醇(5ml)加入反应瓶中，随后向其中加入饱和氯化铵溶液(5ml)。反应液在90℃下搅拌1小时。待反应结束后，反应液用硅藻土过滤，加水稀释后用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机相合并后用饱和食盐水(10ml)洗，无水硫酸钠干燥并浓缩，得到的粗品用制备板(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)分离纯化后得到(s)-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-2-((苄氧羰基)氨基)丙酸苄酯cpd-01e(340mg，淡棕色油状物)，产率：73％
[0152]
ms m/z(esi):435[m+1]
+
.
[0153]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.78(d,j＝7.9hz,1h),7.50-7.09(m,10h),6.70(s,1h),6.52(s,2h),5.09(s,2h),4.99(s,2h),4.57(s,2h),4.33-4.16(m,1h),3.68(s,3h),2.96-2.67(m,2h).
[0154]
第五步
[0155]
(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(3-甲氧基-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸苄酯的制备
[0156]
将(s)-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-2-((苄氧羰基)氨基)丙酸苄酯cpd-01e(226mg，0.52mmol)、2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(111mg，0.52mmol)加入叔丁醇(5ml)中，随后向其中加入三氟乙酸(5mg，0.052mmol)并置换氮气三次。反应液在110℃下反应1小时。待反应结束后，将溶剂用旋蒸除去，残留物分散在乙酸乙酯(5ml)中，抽滤，固体用乙酸乙酯(2ml)洗2次，真空干燥后得到(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(3-甲氧基-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸苄酯cpd-01f(260mg，白色固体)，产率：74％。
[0157]
ms m/z(esi):610[m+1]
+
.
[0158]
第六步
[0159]
(s)-2-氨基-3-(3-甲氧基-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸的制备
[0160]
将(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(3-甲氧基-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸苄酯cpd-01f(250mg，0.41mmol)、钯碳(10mg)加入甲醇(5ml)中。反应液在氢气气氛下室温搅拌1小时。待反应结束后，垫硅藻土抽滤将钯碳除去，滤液旋干，得到的粗品通过反相色谱法纯化，得到(s)-2-氨基-3-(3-甲氧基-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸cpd-01(40mg)，产率25％。
[0161]
ms m/z(esi):386[m+1]
+
.
[0162]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.26-8.18(m,1h),8.14(s,1h),8.10(d,j＝8.1hz,1h),7.95(s,1h),7.15(d,j＝4.2hz,1h),6.98(s,1h),6.82(d,j＝8.2hz,1h),3.85(s,3h),3.50(s,1h),3.22-3.06(m,1h),2.90(d,j＝4.4hz,3h),2.87-2.77(m,1h).
[0163]
实施例2
[0164]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸
[0165][0166]
参考实施例1的合成步骤，不同之处在于用2-氯-n-乙基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺替换2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺，获得化合物(s)-2-氨基-3-(4-((4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸cpd-02(180mg)，产率62％。ms m/z(esi):400[m+1]
+
.
[0167]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.14(s,1h),8.05(d,j＝8.2hz,1h),7.94(s,1h),7.38(s,2h),7.15(s,1h),6.97(s,1h),6.81(d,j＝8.3hz,1h),3.84(d,j＝7.9hz,3h),3.46(m,2h),3.38(m,1h),3.14(dd,j＝14.3,3.9hz,1h),2.79(dd,j＝14.4,8.8hz,1h),1.15(t,j＝7.1hz,3h).
[0168]
实施例3
[0169]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸
[0170][0171]
参考实施例1的合成步骤，不同之处在于用2-氯-n-环丙基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺替换2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺，获得(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸cpd-03(45mg)，产率：30％。ms m/z(esi):412[m+1]
+
.
[0172]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.34(s,1h),8.17(s,1h),7.95(s,1h),7.29(d,j＝73.0hz,3h),6.98(s,1h),6.82(d,j＝8.3hz,1h),3.86(s,3h),3.45-3.24(m,1h),3.14(dd,
j＝14.4,3.6hz,1h),2.79(dd,j＝14.4,8.8hz,2h),0.78(d,j＝5.4hz,2h),0.67(d,j＝2.8hz,2h).
[0173]
实施例4
[0174]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-((2,2-二氟乙基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸
[0175][0176]
参考实施例1的合成步骤，不同之处在于用2-氯-n-(2,2-二氟乙基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺替换2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺，获得化合物(s)-2-氨基-3-(4-((4-((2,2-二氟乙基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸cpd-04(50mg)，产率：33％。
[0177]
ms m/z(esi):436[m+1]
+
.
[0178]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.30(s,1h),8.21(s,1h),7.82(d,j＝8.1hz,1h),7.37(s,3h),6.99(s,1h),6.80(d,j＝8.1hz,1h),6.20(t,j＝56.6hz,1h),3.83(s,3h),3.76(t,j＝12.6hz,2h),3.36(ddt,j＝36.7,26.0,5.2hz,1h),3.14(dd,j＝14.3,3.7hz,1h),2.79(dd,j＝14.2,8.6hz,1h).
[0179]
实施例5
[0180]
(s)-2-氨基-3-(3-甲氧基-4-((4-((2,2,2-三氟乙基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸的制备
[0181][0182]
参考实施例1的合成步骤，不同之处在于用2-氯-n-(2,2,2-三氟乙基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺替换2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺，获得化合物(s)-2-氨基-3-(3-甲氧基-4-((4-((2,2,2-三氟乙基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸cpd-05(100mg)，产率：57％。
[0183]
ms m/z(esi):454[m+1]
+
.
[0184]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.30(s,1h),8.26(s,1h),7.82(d,j＝8.1hz,1h),7.54(br,3h),6.99(d,j＝1.2hz,1h),6.87
–
6.73(m,1h),4.23(d,j＝9.3hz,2h),3.82(s,3h),3.38(dd,j＝8.6,4.1hz,1h),3.14(dd,j＝14.6,4.2hz,1h),2.80(dd,j＝14.3,8.7hz,1h).
[0185]
实施例6
[0186]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)-n-甲基丙酰胺
[0187][0188]
第一步至第四步依次参考实施例1中的第二步至第五步进行，不同之处在于以化合物cpd-07a作为起始化合物替换(r)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-碘丙酸苄酯cpd-01b以及用2-氯-n-环丙基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺替换2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺，获得化合物(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸甲酯cpd-07e(1.8g，白色固体)，产率：35％。
[0189]
ms m/z(esi):526[m+1]
+
.第五步
[0190]
(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸的制备
[0191]
将(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸甲酯cpd-07e(1.8g，3.4mmol)溶于四氢呋喃(10ml)，滴加氢氧化锂(0.4g，10.2mmol)水溶液(10ml)，在室温下反应1小时。反应结束后，用1mol/l的hcl调ph＝4，析出的固体过滤收集并用甲醇和乙酸乙酯洗，真空干燥后得到(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸cpd-07f(1.2g，白色固体)，产率：65％。
[0192]
ms m/z(esi):512[m+1]
+
.
[0193]
第六步
[0194]
(s)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)-1-(甲氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0195]
将(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸cpd-07f(100mg，19.5mmol)、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(148mg，39.0mmol)、n,n-二异丙基乙胺(126mg，97.5mmol)加入n,n-二甲基甲酰胺(10ml)，室温反应30分钟后加入盐酸甲胺(20mg，29.2mmol)，继续反应2小时。反应结束后，反应液中加入水(30ml)，用乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥并浓缩，得到的残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)分离纯化后得到(s)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)-1-(甲氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯cpd-07g(100mg,白色固体)，产率：92％。
[0196]
ms m/z(esi):525[m+1]
+
.
[0197]
第七步
[0198]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)-n-甲基丙胺的制备
[0199]
将(s)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)-1-(甲氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯cpd-07g(100mg，19.0mmol)溶于hcl的二氧六环溶液(10ml)，室温下搅拌1小时。将反应液浓缩，真空干燥得到(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)-n-甲基丙酰胺cpd-07(70mg)的盐酸盐，产率：82％。
[0200]
ms m/z(esi):425[m+1]
+
.
[0201]1h nmr(400mhz,meod)δ8.26(s,2h),7.05(s,1h),6.92(d,j＝8.0hz,1h),4.13
–
4.00(m,1h),3.98(s,3h),3.20(dd,j＝13.8,6.9hz,1h),3.08(dd,j＝13.6,7.6hz,1h),2.96(s,1h),2.74(s,3h),1.04
–
0.86(m,2h),0.86
–
0.71(m,2h).
[0202]
实施例7
[0203]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)-n,n-二甲基丙酰胺
[0204][0205]
第一步：参考实施例6的合成步骤获得化合物cpd-07f，然后参考实施例6第六步，将其中的盐酸甲胺替换为盐酸二甲胺。
[0206]
第二步：参考实施例6第七步获得化合物(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)-n,n-二甲基丙酰胺cpd-08(70mg，白色固体)的盐酸盐，产率：90％。
[0207]
ms m/z(esi):439[m+1]
+
.
[0208]1h nmr(400mhz,meod)δ8.29(s,2h),7.05(s,1h),6.95(d,j＝8.2hz,1h),4.69(t,j＝7.3hz,1h),3.98(s,3h),3.14(d,j＝7.3hz,2h),3.03
–
2.94(m,1h),2.93(s,3h),2.82(s,3h),0.99
–
0.90(m,2h),0.86
–
0.75(m,2h).
[0209]
实施例8
[0210]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸异丙酯
[0211][0212]
第一步
[0213]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸异丙酯的制备
[0214]
将异丙醇(40.3mg，67.1mmol)冷却至0℃，随后缓慢滴入乙酰氯(5.8mg，
10.9mmol)，0℃下搅拌1小时，随后加入(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸cpd-07f(80.0mg，15.6mmol)，升温至70℃反应过夜。反应结束后，将反应液浓缩，真空干燥得到(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸异丙酯cpd-09(50mg)的盐酸盐，产率：66％。
[0215]
ms m/z(esi):454[m+1]
+
.
[0216]1h nmr(400mhz,meod)δ8.36(s,1h),8.24(s,1h),7.04(s,1h),6.93(d,j＝8.3hz,1h),5.15
–
4.99(m,1h),4.31(t,j＝7.0hz,1h),3.97(s,3h),3.28
–
3.13(m,2h),3.00
–
2.86(m,1h),1.29(d,j＝6.2hz,3h),1.23(d,j＝6.2hz,3h),0.97
–
0.88(m,2h),0.81
–
0.72(m,2h).
[0217]
实施例9
[0218]
(s)-2-氨基-3-(2-氟-5-甲氧基-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸
[0219][0220]
参考实施例1的合成步骤，首先制得化合物cpd-01c，然后将第三步中的4-溴-2-甲氧基-1-硝基苯替换为1-溴-2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯继续反应，最终获得化合物(s)-2-氨基-3-(2-氟-5-甲氧基-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸cpd-10(180mg)，产率72％。ms m/z(esi):404[m+1]
+
.
[0221]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.39(br,2h),8.25-8.16(m,2h),8.03(s,1h),7.32(d,j＝4.3hz,1h),7.06(d,j＝7.0hz,1h),4.08(t,j＝6.6hz,1h),3.87(s,3h),3.12(ddd,j＝35.9,14.3,6.7hz,2h),2.93(d,j＝4.3hz,3h).
[0222]
实施例10
[0223]
(s)-2-氨基-3-(2-氟-5-甲氧基-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸异丙酯
[0224][0225]
参考实施例8的合成步骤，以化合物cpd-10开始，获得(s)-2-氨基-3-(2-氟-5-甲氧基-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸异丙酯cpd-11(27mg)的盐酸盐，产率75％。ms m/z(esi):446[m+1]
+
.
[0226]1h nmr(400mhz,meod)δ8.32(s,1h),8.05(s,1h),7.10(d,j＝6.7hz,1h),5.06(dt,j＝12.5,6.3hz,1h),4.28(t,j＝7.2hz,1h),3.97(s,3h),3.14(s,3h),1.23(dd,j＝
23.6,6.3hz,6h).
[0227]
实施例11
[0228]
4-氨基-3-(2-氟-5-甲氧基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丁酸
[0229][0230]
第一步
[0231]
(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0232]
将4-溴-5-氟-2-甲氧基苯胺cpd-12a(2.0g，9.2mmol)，二叔丁基二碳酸酯(3.0g，6.5mmol)和碳酸铯(9.9g，45.8mmol)溶于甲醇(60ml)中，70℃搅拌过夜。待反应结束后，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)得(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯cpd-12b(2.25g，淡黄色油状物)，产率：77％。
[0233]
ms m/z(esi):320[m+1]
+
.
[0234]
第二步
[0235]
(e)-3-(4-((叔丁氧羰基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)丙烯酸乙酯的制备
[0236]
将(4-溴-5-氟-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯cpd-12b(500mg，1.57mmol)，(e)-2-(乙氧羰基)乙烯基硼酸频哪醇酯(530mg，2.35mmol)，双三苯基膦二氯化钯(110mg，0.16mmol)和碳酸钠(248mg，2.35mmol)溶于1,4-二氧六环(10ml)和水(1ml)中，在100℃下反应12小时。反应结束后冷却至室温并用硅藻土过滤反应液，加入水(5ml)淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品。粗品经过柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝9/1)得到(e)-3-(4-((叔丁氧羰基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)丙烯酸乙酯cpd-12c(450mg，白色油状物)，产率：84.5％。
[0237]
ms m/z(esi):340[m+1]
+
.
[0238]
第三步
[0239]
3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)-4-硝基丁酸乙酯的制备
[0240]
将硝基甲烷(0.8g，13.2mmol)和1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(1.0g，6.6mmol)溶于乙腈(7.5ml)中，在0℃下搅拌10分钟，将(e)-3-(4-((叔丁氧羰基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)丙烯酸乙酯cpd-12c(450mg，1.3mmol)缓慢加入上述反应液中，在0℃下反应12小时。反应结束后，将反应液倒入大量水中，用10％hcl调ph至2，用乙酸乙酯萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)-4-硝基丁酸乙酯cpd-12d(0.39g，白色油状物)，产率：73.8％。
[0241]
ms m/z(esi):401[m+1]
+
.
[0242]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.93(d,j＝12.6hz,1h),7.74(d,j＝16.1hz,1h),7.22(s,1h),6.88(d,j＝6.4hz,1h),6.36(d,j＝16.1hz,1h),4.23(q,j＝7.1hz,2h),3.86(s,3h),
1.51(s,9h),1.31(t,j＝7.1hz,3h),0.85(dt,j＝8.3,3.0hz,2h).
[0243]
第四步
[0244]
3-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)-4-硝基丁酸乙酯的制备
[0245]
将3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)-4-硝基丁酸乙酯cpd-12d(0.39g，0.98mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入三氟乙酸(2.2g，19.5mmol)在25℃下搅拌1小时。反应结束后，旋蒸得到3-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)-4-硝基丁酸乙酯cpd-12e(0.4g，白色固体)，产率：99％。
[0246]
ms m/z(esi):301[m+1]
+
.
[0247]
第五步
[0248]
3-(2-氟-5-甲氧基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-4-硝基丁酸乙酯的制备
[0249]
将3-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)-4-硝基丁酸乙酯cpd-12e(0.4g，0.96mmol)，2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(0.2g，0.98mmol)溶于正丁醇中(10ml)，加入三氟乙酸(0.12g，0.98mmol)，在90℃下反应1小时。反应结束后冷却至室温，加入水(5ml)淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝30/1)得3-(2-氟-5-甲氧基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-4-硝基丁酸乙酯cpd-12f(0.21g，白色固体)，产率：46.8％。
[0250]
ms m/z(esi):476[m+1]
+
.
[0251]
第六步
[0252]
3-(2-氟-5-甲氧基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-4-硝基丁酸的制备
[0253]
将3-(2-氟-5-甲氧基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-4-硝基丁酸乙酯cpd-12f(0.12g，0.25mmol)溶于四氢呋喃(5ml)中，加入饱和氢氧化锂水溶液(0.5ml)，在室温下反应1小时。反应结束后用稀盐酸调ph至4，用混合溶剂(二氯甲醇/甲醇＝10/1)萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化得3-(2-氟-5-甲氧基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-4-硝基丁酸cpd-12g(0.1g，白色固体)，产率：89％。
[0254]
ms m/z(esi):448[m+1]
+
.
[0255]
第七步
[0256]
4-氨基-3-(2-氟-5-甲氧基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丁酸的制备
[0257]
将3-(2-氟-5-甲氧基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)-4-硝基丁酸cpd-12g(0.1g，0.22mmol)溶于甲醇(5ml)中，加入雷尼镍(0.5ml)，在氢气气氛下室温反应2小时。反应结束后，用硅藻土过滤，旋蒸得到4-氨基-3-(2-氟-5-甲氧基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丁酸cpd-12(0.02g)，产率：21.8％。
[0258]
ms m/z(esi):418[m+1]
+
.
[0259]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.19(s,1h),8.09(d,j＝12.3hz,1h),7.96(s,1h),7.25(s,1h),6.92(d,j＝6.6hz,1h),3.84(s,3h),3.30(s,9h),2.92(d,j＝3.7hz,3h),2.80(s,1h),2.25(d,j＝11.7hz,1h),1.23(s,2h).
[0260]
实施例12
[0261]
4-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丁酸
[0262][0263]
参考实施例11的合成步骤，不同之处在于在实施例11的第一步中用4-溴-2-甲氧基苯胺cpd-13a替换4-溴-5-氟-2-甲氧基苯胺cpd-12a和在第五步中用2-氯-n-环丙基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺替换2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺，获得化合物4-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丁酸cpd-13(68mg)，产率：29％。ms m/z(esi):426[m+1]
+
.
[0264]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.34(s,1h),8.17(s,1h),7.97(s,1h),7.19(s,1h),6.93(s,1h),6.80(d,j＝8.3hz,1h),3.87(s,3h),3.06(dd,j＝10.2,5.7hz,1h),2.99(d,j＝8.9hz,1h),2.90(dd,j＝11.7,3.4hz,1h),2.82(d,j＝3.1hz,1h),2.71(dd,j＝16.1,9.0hz,1h),2.42(d,j＝13.0hz,1h),0.84
–
0.70(m,2h),0.70
–
0.50(m,2h).
[0265]
实施例13
[0266]
(s)-2-氨基-3-(2-氯-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧苯基)丙酸
[0267][0268]
第一步
[0269]
1-溴-2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯的制备
[0270]
将1-溴-2-氯-5-氟-4-硝基苯cpd-16a(2.0g，7.9mmol)溶于甲醇(20ml)中，在0℃下搅拌并加入甲醇钠(1.4g，7.9mmol)，混合物在0℃下反应1.5小时。待反应结束后，反应液中加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取。合并有机相，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝9/1)得到1-溴-2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯cpd-16b(2.1g，黄色固体)，产率：95％。
[0271]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.99(s,1h),7.36(s,1h),3.97(s,3h).
[0272]
第二步
[0273]
(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)丙酸甲酯的制备
[0274]
将锌粉(0.98g，18.8mmol)和碘(0.19g，0.91mmol)加入三口烧瓶中置换氮气，加热至碘升华。将1-溴-2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯cpd-16b(1.0g，3.70mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中，将溶液快速注入三口烧瓶中搅拌。与此同时，在另一个三口烧瓶中加入碘化亚铜(0.07g，0.40mmol)，双三苯基膦二氯化钯(0.11g，0.20mmol)，(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-碘丙酸甲酯(0.40g，1.80mmol)和n,n-二甲基甲酰胺(10ml)，并置换氮气，预热至80℃。将呈有锌粉的混合溶液用注射器吸出并缓慢滴入在80℃反应的三口瓶中，继续反应1小时。反应结束后冷却至室温并用硅藻土过滤反应液，加入水(20ml)淬灭，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)得(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)丙酸甲酯cpd-16c(400mg，黄色油状物)，产率：28％。
[0275]
ms m/z(esi):389[m+1]
+
.
[0276]
第三步
[0277]
(s)-3-(4-氨基-2-氯-5-甲氧苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸甲酯的制备
[0278]
将(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)丙酸甲酯cpd-16c(400mg，1.03mmol)，铁粉(287mg，5.15mmol)和氯化铵饱和水溶液(275mg，5.15mmol)溶于乙醇(5ml)中，回流反应2小时。反应结束后冷却至室温并用硅藻土过滤反应液，加入水(5ml)淬灭，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得(s)-3-(4-氨基-2-氯-5-甲氧苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸甲酯cpd-16d(200mg，黄色油状物)，产率：54％。
[0279]
ms m/z(esi):359[m+1]
+
.
[0280]
第四步
[0281]
(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧苯基)丙酸甲酯的制备
[0282]
将(s)-3-(4-氨基-2-氯-5-甲氧苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸甲酯cpd-16d(200mg，0.56mol)，2-氯-n-环丙基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(160mg，0.67mmol)和三氟乙酸(32mg，0.28mmol)溶于正丁醇(10ml)中，在90℃下反应1小时。反应结束后冷却至室温，加入水(5ml)淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)得到(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧苯基)丙酸甲酯cpd-16e(100mg，白色固体)，产率：32％。
[0283]
ms m/z(esi):560[m+1]
+
.
[0284]
第五步
[0285]
(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧苯基)丙酸的制备
[0286]
将(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧苯基)丙酸甲酯cpd-16e(100mg，0.18mmol)溶于四氢呋喃(5ml)中，加入氢氧化锂水溶液(0.5ml)，在室温下反应1小时。反应结束后用稀盐酸调ph至4，用混合溶剂(二氯甲醇/甲醇＝10/1)萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)
氨基)-5-甲氧苯基)丙酸cpd-16f(70mg，白色固体)，产率：87％。
[0287]
ms m/z(esi):546[m+1]
+
.
[0288]
第六步
[0289]
(s)-2-氨基-3-(2-氯-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧苯基)丙酸的制备
[0290]
将(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧苯基)丙酸cpd-16f(70mg，0.13mmol)加入氯化氢甲醇溶液(4ml，4mol/l)。反应液于25℃反应4小时。反应结束后，将反应液浓缩得到(s)-2-氨基-3-(2-氯-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧苯基)丙酸cpd-16(30mg)的盐酸盐，产率：51％。
[0291]
ms m/z(esi):446[m+1]
+
.
[0292]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.73(s,1h),8.23(s,1h),8.02(s,1h),7.39(s,1h),7.10(s,1h),3.88(s,3h),3.61(s,1h),3.37(d,j＝5.1hz,1h),2.91-2.70(m,2h),0.93-0.85(m,2h),0.74-0.66(m,2h).
[0293]
实施例14
[0294]
(s)-2-氨基-3-(5-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基吡啶-2-基)丙酸
[0295][0296]
参考实施例13的合成步骤，不同之处在于以化合物2,4-二溴-5-硝基吡啶cpd-17a替换化合物cpd-16a，获得化合物(s)-2-氨基-3-(5-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧基吡啶-2-基)丙酸cpd-17。
[0297]
ms m/z(esi):413[m+1]
+
.
[0298]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.40(s,1h),8.88(s,1h),8.27(s,1h),7.47(d,j＝18.4hz,2h),4.47(t,j＝6.7hz,1h),4.04(s,3h),3.44(dd,j＝15.3,6.3hz,1h),3.33(dd,j＝15.3,7.2hz,1h),2.97
–
2.72(m,1h),0.79(dd,j＝6.9,4.6hz,2h),0.71
–
0.60(m,2h).
[0299]
实施例15
[0300]
(s)-2-氨基-3-(2-氰基-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基苯基)丙酸
[0301][0302]
第一步
[0303]
2-溴-4-氟-5-硝基苯甲腈的制备
[0304]
将2-溴-4-氟苯甲腈cpd-18a(3.0g，15mmol)和浓硫酸(5ml)加入反应瓶，0℃下加入硝酸钾(1.6g，16mmol)，室温下反应1.5小时。待反应结束后，随后倒入冰水(20ml)中，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机相合并后用饱和食盐水(200ml)洗，无水硫酸钠干燥并浓缩，得到2-溴-4-氟-5-硝基苯甲腈cpd-18b(3.4g，淡黄色固体)，产率：83％。
[0305]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.89(d,j＝7.6hz,1h),8.38(d,j＝10.7hz,1h).
[0306]
参考实施例13的合成步骤，不同之处在于在实施例13的第一步中用化合物cpd-18b替换化合物cpd-16a，获得(s)-2-氨基-3-(2-氰基-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基苯基)丙酸cpd-18。
[0307]
ms m/z(esi):437[m+1]
+
.
[0308]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.90(s,1h),9.32(s,1h),8.86(s,1h),8.66(s,3h),8.48(s,1h),8.19(s,1h),7.45(s,1h),4.25(d,j＝4.8hz,1h),3.98(s,3h),3.47
–
3.22(m,2h),2.84(dt,j＝6.9,3.1hz,1h),1.02
–
0.67(m,4h).
[0309]
实施例16
[0310]
(s)-2-氨基-3-(4-甲氧基-3-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸
[0311][0312]
第一步
[0313]
(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(4-羟基-3-硝基苯基)丙酸苄酯的制备
[0314]
将(苄氧羰基)-l-酪氨酸苄酯cpd-21a(1.0g，2.5mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，并向其中缓慢加入20％稀硝酸(240mg，3.7mmol)。反应液在室温下反应8小时。反应结束后向其中加入二氯甲烷(20ml)稀释然后用水(50ml)洗涤。收集有机相，无水硫酸钠干燥并浓缩。
将得到的残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)分离纯化后得到(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(4-羟基-3-硝基苯基)丙酸苄酯cpd-21b(730mg，黄色固体)，产率：60％。
[0315]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.83(s,1h),7.90(d,j＝8.2hz,1h),7.80(d,j＝1.8hz,1h),7.43(dd,j＝8.5,2.1hz,1h),7.30(tt,j＝7.6,6.6hz,10h),7.02(d,j＝8.5hz,1h),5.12(s,2h),4.99(s,2h),4.34(td,j＝9.9,5.3hz,1h),3.05(dd,j＝13.9,5.2hz,1h),2.87(dd,j＝13.8,10.3hz,1h).
[0316]
第二步
[0317]
(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(4-甲氧基-3-硝基苯基)丙酸苄酯的制备
[0318]
将(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(4-羟基-3-硝基苯基)丙酸苄酯cpd-21b(470mg，1.0mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(8ml)，向其中加入碳酸氢钠(132mg，1.5mmol)和碘甲烷(444mg，3.0mmol)。反应液在25℃反应8小时。反应结束后向其中加水(10ml)，然后用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机相合并，无水硫酸钠干燥并浓缩。将得到的残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)分离纯化后得到(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(4-甲氧基-3-硝基苯基)丙酸苄酯cpd-21c(510mg，黄色油状物)，产率：81％。
[0319]
ms m/z(esi):487[m+23]
+
.
[0320]
参考实施例1的合成步骤，不同之处在于用化合物cpd-21c替换化合物cpd-01d，获得化合物(s)-2-氨基-3-(4-甲氧基-3-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸cpd-21(230mg)，产率：88％。
[0321]
ms m/z(esi):386[m+1]
+
.
[0322]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.83(s,1h),8.21(s,1h),8.17(s,1h),8.00(s,1h),7.21(d,j＝4.4hz,1h),7.01(d,j＝8.4hz,1h),6.92(dd,j＝8.4,1.8hz,1h),4.04(s,1h),3.85(s,3h),3.04(d,j＝6.3hz,2h),2.93(d,j＝4.3hz,3h).
[0323]
实施例17
[0324]
(s)-2-氨基-3-(3-甲氧基-4-((4-间甲苯基-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸
[0325][0326]
第一步
[0327]
2-氯-4-间甲苯基-5-(三氟甲基)嘧啶的制备
[0328]
将2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶cpd-27a(3.24g，14.8mmol)，间甲基苯硼酸频哪醇
脂(3.24g，14.8mmol)，双三苯基膦二氯化钯(1.04g，1.48mmol)和碳酸钠(2.36g，22.2mmol)溶于乙二醇(52ml)和水(13ml)中并置换氮气，在40℃下反应12小时。反应结束后冷却至室温用硅藻土过滤反应液，反应液中加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取。合并有机相，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到2-氯-4-间甲苯基-5-(三氟甲基)嘧啶cpd-27b(600mg，白色油状物)。产率：15％。
[0329]
ms m/z(esi):273[m+1]
+
.
[0330]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.93(s,1h),7.39(dd,j＝16.0,9.5hz,4h),2.43(s,3h).
[0331]
参考实施例13的第四步至第六步，使化合物cpd-07d与化合物cpd-27b反应，获得化合物(s)-2-氨基-3-(3-甲氧基-4-((4-间甲苯基-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸cpd-27。
[0332]
ms m/z(esi):447[m+1]
+
.
[0333]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.15(s,1h),8.77(s,1h),8.42(d,j＝3.5hz,3h),7.72(d,j＝8.1hz,1h),7.42-7.27(m,4h),7.06(d,j＝1.5hz,1h),6.83(dd,j＝8.1,1.3hz,1h),4.26-4.10(m,1h),3.83(s,3h),3.13(qd,j＝14.3,6.2hz,2h),2.37(s,3h).
[0334]
实施例18
[0335]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-乙氧基苯基)丙酸
[0336][0337]
第一步
[0338]
4-溴-2-乙氧基-1-硝基苯的制备
[0339]
将5-溴-2-硝基苯酚cpd-28a(1.0g，4.6mmol)、碘乙烷(1.0g，6.9mmol)和碳酸铯(3.0g，9.2mmol)加入丙酮(10ml)，65℃下反应3小时。待反应结束后，加入水(20ml)中，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机相合并后用饱和食盐水(30ml)洗，无水硫酸钠干燥并浓缩后得到4-溴-2-乙氧基-1-硝基苯cpd-28b(1.1g，黄色固体)，产率：91％。
[0340]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.85(d,j＝8.6hz,1h),7.61(d,j＝1.9hz,1h),7.34(dd,j＝8.6,1.9hz,1h),4.27(q,j＝7.0hz,2h),1.35(t,j＝7.0hz,3h).
[0341]
参考实施例13的第二步至第六步，不同之处在于用化合物cpd-28b替换化合物cpd-16b，获得化合物(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-乙氧基苯基)丙酸cpd-28。
[0342]
ms m/z(esi):426[m+1]
+
.
[0343]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.84(s,1h),8.78(s,1h),8.38(s,5h),7.89(s,1h),7.05(s,1h),6.86(d,j＝8.2hz,1h),4.27
–
4.00(m,2h),3.11(s,2h),2.88(s,1h),1.49
–
1.23(m,4h),0.94
–
0.58(m,4h).
[0344]
实施例19
[0345]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-乙炔基苯基)丙酸
[0346][0347]
第一步
[0348]
(s)-3-(4-氨基-3-碘苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸甲酯的制备
[0349]
将(s)-3-(4-氨基苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸甲酯cpd-32a(1.8g，6.1mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(30ml)，加入n-碘代丁二酰亚胺(1.5g，6.7mmol)，70℃下搅拌反应16小时。向反应液中加入乙酸乙酯(100ml)，水(100ml)洗一次，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到(s)-3-(4-氨基-3-碘苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸甲酯cpd-32b(1.8g，黄色油状物)，产率：67％。
[0350]
ms m/z(esi):443[m+23]
+
.
[0351]
第二步
[0352]
(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-碘苯基)丙酸甲酯的制备
[0353]
将(s)-3-(4-氨基-3-碘苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸甲酯cpd-32b(1.3g，3.1mmol)溶于正丁醇(20ml)，加入2-氯-n-环丙基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(0.74g，3.1mmol)和三氟乙酸(0.18g，1.6mmol)，80℃搅拌16小时。向反应液中加入乙酸乙酯(150ml)，有机相依次用水和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，粗品用硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)进行纯化得到(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-碘苯基)丙酸甲酯cpd-32c(0.75g，淡黄色油状物)，产率：35％。
[0354]
ms m/z(esi):622[m+1]
+
.
[0355]
第三步
[0356]
(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)丙酸甲酯的制备
[0357]
将(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-碘苯基)丙酸甲酯cpd-32c(200mg，0.32mmol)溶于乙腈(5ml)，加入乙炔基三甲基硅烷(35mg，0.35mmol)，三乙烯二胺(180mg，1.6mmol)，氯烯丙基钯(ii)二聚物(47mg，0.13mmol)，和三叔丁基膦(13mg，0.06mmol)。氮气保护下，40℃搅拌4小时。将反应液过滤，
减压浓缩得粗品，粗品用硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)进行纯化得到(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)丙酸甲酯cpd-32d(60mg，白色固体)，产率：47％。
[0358]
ms m/z(esi):592[m+1]
+
.
[0359]
第四步
[0360]
(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-乙炔基苯基)丙酸的制备
[0361]
将(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)丙酸甲酯cpd-32d(80mg，0.13mmol)溶于四氢呋喃/水＝1/4(2ml)的混合溶剂，向其中加入一水合氢氧化锂(11mg，0.27mmol)，室温下搅拌1小时。反应液用乙酸乙酯(20ml
×
2)萃取，将水相用20％的盐酸调ph至3到4，乙酸乙酯(50ml
×
2)萃取，饱和食盐水(50ml
×
2)洗，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-乙炔基苯基)丙酸cpd-32e(60mg，黄色油状物)，产率：87％。
[0362]
ms m/z(esi):506[m+1]
+
.
[0363]
第五步
[0364]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-乙炔基苯基)丙酸的制备
[0365]
将(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-乙炔基苯基)丙酸cpd-32e(50mg，0.10mmol)加入到盐酸/二氧六环(4n，2ml)溶液中，室温下搅拌1小时。将反应液浓缩，残留物加水冻干得到(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-乙炔基苯基)丙酸cpd-32(40mg)，99％
[0366]
ms m/z(esi):406[m+1]
+
.
[0367]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.89(s,1h),8.37(d,j＝27.3hz,5h),7.85(s,1h),7.44(s,1h),7.35(d,j＝8.6hz,1h),4.70(s,1h),4.20(d,j＝5.5hz,1h),3.15-3.06(m,2h),2.85-2.83(m,1h),0.81-0.69(m,4h).
[0368]
实施例20
[0369]
(s)-2-氨基-3-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸
[0370][0371]
参考实施例13的第四步至第六步，使化合物cpd-07d与化合物2-氯-n-(2-(二甲基磷酰基)苯基)-5-氯嘧啶-4-胺反应，最终获得化合物(s)-2-氨基-3-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酸cpd-34。
[0372]
cpd-34：
[0373]
ms m/z(esi):490[m+1]
+
.
[0374]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.20(s,1h),8.50(dd,j＝8.3,4.2hz,1h),8.15(s,
1h),8.06(s,1h),7.79(d,j＝8.1hz,1h),7.54(m,3h),7.16(t,j＝7.2hz,1h),6.98(s,1h),6.79(d,j＝8.1hz,1h),3.82(s,3h),3.56(s,1h),3.16(dd,j＝14.2,4.2hz,1h),2.85(dd,j＝14.3,8.3hz,1h),1.78(d,j＝13.5hz,6h).
[0375]
实施例21
[0376]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-(氘代甲氧基)苯基)丙酸：
[0377][0378]
第一步
[0379]
4-溴-2-(氘代甲氧基)-1-硝基苯的制备
[0380]
将5-溴-2-硝基苯酚cpd-35a(1.0g，4.6mmol)、氘代碘甲烷(1.0g，6.9mmol)和碳酸铯(3.0g，9.2mmol)加入丙酮(10ml)中，65℃下反应3小时。待反应结束后，加入水(20ml)中，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机相合并后用饱和食盐水(30ml)洗，无水硫酸钠干燥并浓缩后得到4-溴-2-(氘代甲氧基)-1-硝基苯cpd-35b(1.0g，黄色固体)，产率：87％。
[0381]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.85(d,j＝8.6hz,1h),7.61(d,j＝1.9hz,1h),7.34(dd,j＝8.6,1.9hz,1h).
[0382]
参考实施例13的合成步骤，不同之处在于用化合物cpd-35b替换化合物cpd-16b，获得化合物(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-(氘代甲氧基)苯基)丙酸cpd-35。
[0383]
ms m/z(esi):415[m+1]
+
.
[0384]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.85(s,1h),8.80(s,1h),8.40(d,j＝36.3hz,5h),7.87(s,1h),7.05(d,j＝1.3hz,1h),6.86(dd,j＝8.3,1.5hz,1h),4.19(s,1h),3.11(qd,j＝14.3,6.4hz,2h),2.87(s,1h),1.25(s,1h),0.86
–
0.68(m,4h).
[0385]
实施例22
[0386]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧苯基)丙酸叔丁酯
[0387][0388]
第一步
[0389]
(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧苯基)丙酸叔丁酯的制备
[0390]
将(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧苯基)丙酸cpd-07f(120mg，0.23mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，在0℃下加
2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酰基)氧基)新戊酸甲酯cpd-37b(320mg，0.51mmol)溶于盐酸/二氧六环(4m，10ml)，室温下搅拌1小时。将反应液浓缩，真空干燥得到(s)-((2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)丙酰基)氧基)新戊酸甲酯cpd-37(250mg)的盐酸盐，产率：88％。
[0407]
ms m/z(esi):526[m+1]
+
.
[0408]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.61(s,3h),8.36(s,2h),7.08(s,1h),6.84(d,j＝8.2hz,1h),5.84(d,j＝5.9hz,1h),5.78(d,j＝5.9hz,1h),4.46(s,2h),3.90(s,3h),3.11(s,2h),2.88(s,1h),1.15(s,9h),0.89
–
0.65(m,4h).
[0409]
实施例24
[0410]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧苯基)丙酸庚酯
[0411][0412]
参考实施例22的合成步骤，不同之处在于用庚醇替换叔丁醇，获得化合物(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧苯基)丙酸庚酯cpd-38。
[0413]
ms m/z(esi):510[m+1]
+
.
[0414]1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.29(s,2h),7.07(s,1h),6.94(d,j＝8.2hz,1h),4.37(t,j＝7.1hz,1h),4.19(t,j＝6.6hz,2h),3.98(s,3h),3.24(dd,j＝6.2,4.4hz,2h),3.05-2.89(m,1h),1.66-1.54(m,2h),1.27(s,8h),0.95(dd,j＝7.1,5.4hz,2h),0.87(t,j＝6.9hz,3h),0.83-0.73(m,2h).
[0415]
实施例25
[0416]
(s)-2-氨基-3-(3-甲基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)丙酸
[0417][0418]
第一步
[0419]
(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(3-甲基-4-硝基-1h-吡唑-1-基)丙酸苄酯的制备
[0420]
将3-甲基-4-硝基-1h-吡唑cpd-39a(0.8g，6.5mmol)，(r)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-碘丙酸苄酯(3.0g，6.5mmol)和碳酸铯(2.7g，7.8mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(20ml)中，室温下搅拌过夜。待反应结束后，反应液中加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取。合并有机相，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(3-甲基-4-硝基-1h-吡唑-1-基)丙酸苄酯cpd-39b(2.2g，白色油状物)，产率：70％。
[0421]
ms m/z(esi):439[m+1]
+
.
[0422]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.72(s,1h),7.96(dd,j＝11.9,8.5hz,1h),7.37-7.30(m,10h),5.15(s,2h),5.02(d,j＝3.7hz,2h),4.68(dt,j＝8.3,4.2hz,1h),4.03(q,j＝7.1hz,2h),1.17(t,j＝7.1hz,3h).
[0423]
第二步
[0424]
(s)-3-(4-氨基-3-甲基-1h-吡唑-1-基)-2-((苄氧羰基)氨基)丙酸苄酯的制备
[0425]
将(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(3-甲基-4-硝基-1h-吡唑-1-基)丙酸苄酯cpd-39b(1.0g，2.3mmol)，铁粉(0.96g，17mmol)和氯化铵饱和水溶液(0.18g，3.5mmol)溶于乙醇(10ml)中，回流2小时。反应结束后冷却至室温并用硅藻土过滤反应液，加入水(5ml)，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/2)得(s)-3-(4-氨基-3-甲基-1h-吡唑-1-基)-2-((苄氧羰基)氨基)丙酸苄酯cpd-39c(0.4g，棕色油状物)，产率：42％。
[0426]
ms m/z(esi):409[m+1]
+
.
[0427]
第三步
[0428]
(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(3-甲基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)丙酸苄酯的制备
[0429]
将(s)-3-(4-氨基-3-甲基-1h-吡唑-1-基)-2-((苄氧羰基)氨基)丙酸苄酯cpd-39c(0.4g，0.98mmol),2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(0.2g，0.98mmol)溶于正丁醇中(10ml)，加入三氟乙酸(0.12g，0.98mmol)，在90℃下反应1小时。反应结束后冷却至室温，加入水(5ml)淬灭，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(3-甲基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)丙酸苄酯cpd-39d(0.29g，0.5mmol)，产率：51％。
[0430]
ms m/z(esi):584[m+1]
+
.
[0431]
第四步
[0432]
(s)-2-氨基-3-(3-甲基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)丙酸的制备
[0433]
将(s)-2-((苄氧羰基)氨基)-3-(3-甲基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)丙酸苄酯cpd-39d(0.2g，0.34mmol)，钯碳(0.04g)加入甲醇(10ml)中，并用氢气置换，室温反应1小时。反应结束后用硅藻土过滤反应液，滤液旋干得粗品，通过反向制备(乙腈/水(三氟乙酸1
‰
))分离纯化得到(s)-2-氨基-3-(3-甲基-4-((4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)丙酸cpd-39(0.08g，0.22mmol)，产率：67％
[0434]
ms m/z(esi):360[m+1]
+
.
[0435]1h nmr(400mhz,meod)δ7.98-7.72(m,2h),4.61(s,2h),4.36(s,1h),3.05(s,3h),2.20(s,3h).
[0436]
实施例26
[0437]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)丙酸
[0438][0439]
第一步
[0440]
(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-甲基-4-硝基-1h-吡唑-1-基)丙酸甲酯的制备
[0441]
将3-甲基-4-硝基-1h-吡唑cpd-40a(1.9g，15.2mmol)，(r)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-碘丙酸甲酯(5.0g，15.2mmol)和碳酸铯(6.0g，18.2mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(40ml)中，室温下搅拌过夜。待反应结束后，反应液中加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取。合并有机相，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-甲基-4-硝基-1h-吡唑-1-基)丙酸甲酯cpd-40b(3.5g，白色油状物)，产率：70％。
[0442]
ms m/z(esi):329[m+1]
+
.
[0443]
第二步
[0444]
(s)-3-(4-氨基-3-甲基-1h-吡唑-1-基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯的制备
[0445]
将(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3-甲基-4-硝基-1h-吡唑-1-基)丙酸甲酯cpd-40b(0.5g，1.5mmol)，钯碳(0.05g)加入甲醇(10ml)中，并用氢气置换，室温反应1小时。反应结束后用硅藻土过滤反应液，滤液旋干得粗品(s)-3-(4-氨基-3-甲基-1h-吡唑-1-基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯cpd-40c(0.4g，粉色油状物)，产率：88％。
[0446]
ms m/z(esi):299[m+1]
+
.
[0447]
第三步
[0448]
(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)丙酸甲酯的制备
[0449]
将(s)-3-(4-氨基-3-甲基-1h-吡唑-1-基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯cpd-40c(0.40g，1.3mmol)，2-氯-n-环丙基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(0.32g，1.3mmol)溶于正丁醇(8ml)中，加入三氟乙酸(0.15g，1.3mmol)，在90℃下反应1小时。反应结束后冷却至室温，加入水(5ml)淬灭，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)丙酸甲酯cpd-40d(0.2g，0.4mmol)，产率：30％。
[0450]
ms m/z(esi):500[m+1]
+
.
[0451]
第四步
[0452]
(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)丙酸的制备
[0453]
将(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)丙酸甲酯cpd-40d(0.2g，0.4mmol)，溶于四氢呋喃(5ml)中，加入饱和氢氧化锂水溶液(0.5ml)，在室温下反应1小时。反应结束后用稀盐酸调ph至4，用混合溶剂(二氯甲醇/甲醇＝10/1)萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化得(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)丙酸cpd-40e(0.15g，白色固体)，产率：77％。
[0454]
ms m/z(esi):486[m+1]
+
.
[0455]
第五步
[0456]
(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)丙酸的制备
[0457]
将(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)丙酸cpd-40e(0.15g，0.31mmol)溶于hcl/1,4-二氧六环(15ml)中，在25℃下搅拌1小时。反应结束后，滤液旋干得粗品，通过反向制备(乙腈/水(甲酸1
‰
))分离纯化得到(s)-2-氨基-3-(4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)丙酸cpd-40(46mg)，产率：39％。
[0458]
ms m/z(esi):386[m+1]
+
.
[0459]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.14(s,1h),8.22(s,1h),8.12(s,1h),7.61(s,3h),7.02(s,1h),4.39(s,1h),4.20(dd,j＝14.4,8.0hz,1h),3.55(d,j＝4.8hz,1h),2.92(s,1h),2.19(s,3h),0.81(s,2h),0.64(s,2h).
[0460]
实施例27
[0461]
(s)-2-氨基-3-(3-环丙基-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)丙酸
[0462][0463]
参考实施例26的合成步骤，不同之处在于用化合物3-环丙基-4-硝基-1h-吡唑cpd-41a替换3-甲基-4-硝基-1h-吡唑cpd-40a作为起始化合物，获得化合物(s)-2-氨基-3-(3-环丙基-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)丙酸cpd-41。
[0464]
ms m/z(esi):412[m+1]
+
.
[0465]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.18(s,1h),8.29
–
8.09(m,3h),7.02(s,1h),4.36(d,j＝13.2hz,1h),4.15(dd,j＝14.4,7.8hz,1h),3.49(d,j＝4.8hz,2h),2.93(s,1h),2.18(s,1h),0.80
–
0.61(m,8h).
[0466]
实施例28
[0467]
(s)-2-氨基-3-(4-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)苯基)丙酸
[0468][0469]
第一步
[0470]
(3s,4s)-3-氟-4-(4-硝基-1h-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
[0471]
将(3s,4r)-3-氟-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯cpd-42a(2.0g，91mmol)，4-硝基-1h-吡唑(1.1g，10mmol)，三苯基磷(3.6g，14mmol)溶于四氢呋喃(100ml)中，氮气保护，0℃下滴加偶氮二甲酸二异丙酯(2.8g，14mmol)。滴加完毕后35℃搅拌过夜。待反应结束后，减压浓缩，向残余物中加入二氯甲烷(100ml)，用水洗涤一次，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品。粗品用硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)进行纯化，得到化合物(3s,4s)-3-氟-4-(4-硝基-1h-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯cpd-42b(2.6g，淡黄色油状物)，产率：86％。
[0472]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.27(s,1h),8.13(s,1h),4.83-4.69(m,2h),4.28(dt,j＝10.5,6.3hz,2h),2.87(s,2h),2.28-2.14(m,2h),1.49(s,9h).
[0473]
第二步
[0474]
(3s,4s)-4-(5-氯-4-硝基-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
[0475]
将(3s,4s)-3-氟-4-(4-硝基-1h-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯cpd-42b(2.6g，8.2mmol)溶于四氢呋喃(50ml)中，氮气保护，-78℃滴加双三甲基硅基胺基锂的四氢呋喃溶液(16.4ml，1mol/l，16.4mmol)。滴加完毕后，-78℃下继续搅拌40分钟。随后-78℃滴加六氯乙烷(3.9g，16.4mmol)的四氢呋喃溶液。滴加完毕后，-78℃下继续搅拌30分钟。待反应结束后，向反应液中加入饱和氯化铵(50ml)淬灭。乙酸乙酯萃取(100ml
×
2)，有机层用无水硫酸钠干燥并减压浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)进行纯化得到(3s,4s)-4-(5-氯-4-硝基-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯cpd-42c(2.5g，淡黄色油状物)，产率：83％。
[0476]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.24(s,1h),4.97-4.78(m,1h),4.57-4.51(m,2h),4.27(s,1h),2.90(d,j＝10.8hz,2h),2.26-2.18(m,1h),2.00-1.98(m,1h),1.49(s,9h).
[0477]
第三步
[0478]
(3s,4s)-4-(4-氨基-5-氯-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
[0479]
将(3s,4s)-4-(5-氯-4-硝基-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯cpd-42c(2.4g，6.9mmol)溶于混合溶剂(60ml，乙醇/水＝5/1)的中，加入还原铁粉(2.9g，51mmol)和氯化铵(1.1g，21mmol)，75℃搅拌2小时。反应结束后，反应液趁热通过硅藻土过滤，减压浓缩，向残留物中加乙酸乙酯萃取(200ml)，水洗一次，有机层用无水硫酸钠干燥并浓缩。粗品用硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)进行纯化得到(3s,4s)-4-(4-氨基-5-氯-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯cpd-42d(1.7g，黄色油状物)，产率：74％。
[0480]
ms m/z(esi):319[m+1]
+
.
[0481]
第四步
[0482]
(3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
[0483]
将(3s,4s)-4-(4-氨基-5-氯-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯cpd-42d(1.6g，5.0mmol)溶于乙二醇单甲醚(30ml)，加入2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(2.1g，10mmol)和三氟乙酸(0.57g，5.0mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入乙酸乙酯(500ml)，有机相依次用水和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，粗品用硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)进行纯化得到(3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯cpd-42e(1.9g，淡黄色油状物)，产率：72％。
[0484]
ms m/z(esi):494[m+1]
+
.
[0485]
第五步
[0486]n2-(5-氯-1-((3s,4s)-3-氟哌啶-4-基)-1h-吡唑-4-基)-n
4-甲基-5-)三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺的制备
[0487]
将(3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯cpd-42e(1.9g，3.8mmol)二氯甲烷(10ml)中，加入三氟乙酸(5ml)，室温搅拌1小时。反应结束后，反应液减压浓缩，向残留物中加饱和碳酸钠溶液调ph到8-9，乙酸乙酯(200ml
×
2)萃取，有机层用无水硫酸钠干燥并减压浓缩得n
2-(5-氯-1-((3s,4s)-3-氟哌啶-4-基)-1h-吡唑-4-基)-n
4-甲基-5-)三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺cpd-42f(1.6g，淡黄色固体)，产率：95％。
[0488]
ms m/z(esi):394[m+1]
+
.
[0489]
第六步
[0490]
(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯的制备
[0491]
将n
2-(5-氯-1-((3s,4s)-3-氟哌啶-4-基)-1h-吡唑-4-基)-n
4-甲基-5-)三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺cpd-42f(500mg，1.3mmol)溶于二氧六环(10ml)，向其中加入n-(叔丁氧羰基)-l-4-溴苯丙氨酸甲酯(1.4g，3.8mmol)，碳酸铯(495mg，1.5mmol)和xphos pd g3(214mg，0.25mmol)，氮气保护下105℃反应16小时。将反应液通过硅藻土过滤，向滤液中加入乙酸乙酯(50ml)，水洗一次，有机相无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到的残留物硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)得到(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)苯基)丙
酸甲酯cpd-42g(100mg，淡黄色油状物)，产率：11％。
[0492]
ms m/z(esi):671[m+1]
+
.
[0493]
第七步
[0494]
(s)-2-氨基-3-(4-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯的制备
[0495]
将(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(4-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯cpd-42g(90mg，0.13mmol)溶于二氧六环(0.1ml)，向其中加入hcl/二氧六环(2ml，4m)，室温下搅拌1小时。将反应液浓缩得到(s)-2-氨基-3-(4-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯cpd-42h(70mg，淡黄色固体)，产率：87％。
[0496]
ms m/z(esi):571[m+1]
+
.
[0497]
第八步
[0498]
(s)-2-氨基-3-(4-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)苯基)丙酸的制备
[0499]
将(s)-2-氨基-3-(4-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)苯基)丙酸甲酯的制备cpd-42h(70mg，0.12mmol)溶于混合溶剂(1ml，甲醇/水＝10/1)中，向其中加入氢氧化锂(6mg，0.25mmol)，室温下搅拌1小时。将反应液用20％的盐酸调ph至3到4，得到的溶液直接反相制备纯化(acn/h2o(0.1％tfa))，得到(s)-2-氨基-3-(4-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)苯基)丙酸cpd-42(10mg)，产率：14％。
[0500]
ms m/z(esi):557[m+1]
+
.
[0501]
h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.00(s,1h),8.09(s,1h),7.90(s,1h),7.14(d,j＝8.2hz,2h),7.03(s,1h),6.97(d,j＝8.3hz,2h),5.05-4.86(m,1h),4.68-4.59(m,1h),4.13(d,j＝11.8hz,1h),3.77(s,1h),3.32(s,1h),3.03-2.97(m,4h),2.82(s,3h),2.21-2.13(m,1h),2.11-2.00(m,1h).
[0502]
实施例29
[0503]
(s)-2-氨基-3-(3-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)苯基)丙酸
[0504][0505]
参考实施例28的合成步骤首先制得化合物cpd-42f，在其中的第六步中用(s)-3-(4-溴苯基)-2-(叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯替换n-(叔丁氧羰基)-l-3-溴苯丙氨酸甲酯，获得化合物(s)-2-氨基-3-(3-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)苯基)丙酸cpd-43(35mg)，产率：49％。
[0506]
ms m/z(esi):557[m+1]
+
.
[0507]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.50(s,1h),8.45(d,j＝38.1hz,4h),8.09(d,j＝41.9hz,2h),7.20(t,j＝7.8hz,1h),7.02-6.97(m,2h),6.73(d,j＝7.4hz,1h),4.96(d,j＝52.1hz,1h),4.76-4.71(m,,1h),4.19(s,2h),3.85-3.82(m,1h),3.15-3.03(m,4h),2.92(s,3h),2.22-2.10(m,2h).
[0508]
实施例30
[0509]
(s)-2-氨基-3-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)丙酸
[0510][0511]
第一步
[0512]
(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)丙酸的制备
[0513]
将n
2-(5-氯-1-((3s,4s)-3-氟哌啶-4-基)-1h-吡唑-4-基)-n
4-甲基-5-)三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺cpd-42f(200mg，0.51mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，向其中加入化合物f-1(142mg，0.76mmol)，室温下反应16小时。将反应液减压浓缩，得到的残留物硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)丙酸cpd-44b(60mg，淡黄色油状物)，产率：19％。
[0514]
ms m/z(esi):581[m+1]
+
.
[0515]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.63(s,1h),8.99(s,1h),8.09(s,1h),7.87(s,1h),7.00(d,j＝11.3hz,2h),4.88-4.70(m,1h),4.40-4.35(m,1h),4.16-4.04(m,4h),2.88-2.75(m,6h),2.34
ꢀ‑
2.29(m,2h),2.02-1.89(m,1h),1.40(s,9h).
[0516]
第二步
[0517]
(s)-2-氨基-3-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)丙酸
[0518]
将(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)丙酸cpd-44b(50mg，0.09mmol)溶于二氧六环(0.5ml)，向其中加入hcl/二氧六环(2ml，4m)，室温下搅拌1小时。将反应液浓缩，真空干燥得到(s)-2-氨基-3-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(甲氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)丙酸cpd-44(27mg)的盐酸盐，产率：50％。
[0519]
ms m/z(esi):481[m+1]
+
.
[0520]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.30(s,1h),8.44(s,4h),8.02(s,1h),5.09(d,j＝48.5hz,1h),4.51-4.30(m,2h),3.77-3.49(m,1h),3.05-2.91(m,6h),2.67(s,1h),2.19(dd,j＝17.8,10.2hz,1h),2.01(s,1h).
[0521]
实施例31
[0522]
(s)-2-氨基-3-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)丙酸
[0523][0524]
第一步
[0525]
(3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
[0526]
将(3s,4s)-4-(4-氨基-5-氯-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯cpd-42d(500mg，1.6mmol)溶于乙二醇单甲醚(10ml)，加入2-氯-n-环丙基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(447mg，1.9mmol)和三氟乙酸(178mg，1.6mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入乙酸乙酯(150ml)，有机相依次用水和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，粗品用硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)进行纯化得到(3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯cpd-45b(580mg，淡黄色油状物)，产率：70％。
[0527]
ms m/z(esi):520[m+1]
+
.
[0528]
第二步：参考实施例28第五步，使化合物cpd-45b脱boc保护获得化合物n
2-(5-氯-1-((3s,4s)-3-氟哌啶-4-基)-1h-吡唑-4-基)-n
4-环丙基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺cpd-45c(180mg，淡黄色固体)，产率：98％。
[0529]
ms m/z(esi):420[m+1]
+
.
[0530]
第三步和第四步参考实施例30的第一步和第二步，获得化合物(s)-2-氨基-3-((3s,4s)-4-(5-氯-4-((4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-1h-吡唑-1-基)-3-氟哌啶-1-基)丙酸cpd-45(30mg)的盐酸盐，产率：50％。
[0531]
ms m/z(esi):507[m+1]
+
.
[0532]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.51(s,1h),8.49(d,j＝22.2hz,4h),8.17(s,1h),5.15(d,j＝48.9hz,1h),4.61-4.56(m,1h),4.42(s,1h),3.83-3.73(m,1h),3.30-3.11(m,3h),2.90(s,3h),2.30(m,1h),2.09(s,1h),0.74(d,j＝3.9hz,4h).
[0533]
实施例32
[0534]
(s)-2-氨基-3-(5-氯-2-甲氧基-4-((4-(甲胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸
[0535][0536]
第一步
[0537]
1-溴-5-氯-2-甲氧基-4-硝基苯的制备
[0538]
将2-溴-4-氯-5-硝基苯酚cpd-54a(1.0g，3.9mmol)、碘甲烷(1.0g，5.9mmol)和碳酸铯(3.0g，7.9mmol)加入丙酮(20ml)中，65℃下反应5小时。待反应结束后，加入水(20ml)中，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机相合并后用饱和食盐水(30ml)洗，无水硫酸钠干燥并浓缩。得到的粗品用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)分离纯化后得到1-溴-5-氯-2-甲氧基-4-硝基苯cpd-54b(1.0g，黄色固体)，产率：97％。
[0539]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.11(s,1h),7.82(s,1h),3.95(s,3h).
[0540]
第二步
[0541]
(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-氯-2-甲氧基-4-硝基苯)丙酸甲酯的制备
[0542]
将1-溴-5-氯-2-甲氧基-4-硝基苯cpd-54b(1.0g，3.8mmol)、双三苯基膦二氯化钯(0.27g，0.38mmol)、碘化亚铜(0.17g，0.92mmol)和n,n-二甲基甲酰胺(20ml)加入三口瓶中，置换氮气三次后置于80℃油浴中预热10分钟，随后用注射器缓慢滴入(r)-2-(叔丁氧羰基)氨基)-3-碘丙酸甲酯碘化锌的n,n-二甲基甲酰胺溶液。反应液在80℃下搅拌0.5小时。待反应结束后，反应液垫硅藻土过滤，随后倒入水(30ml)中，乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，有机相合并后用饱和食盐水(50ml)洗，无水硫酸钠干燥并浓缩。得到的粗品用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)分离纯化后得到(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-氯-2-甲氧基-4-硝基苯)丙酸甲酯cpd-54c(700mg，黄色固体)，产率：47％。
[0543]
ms m/z(esi):411[m+23]
+
.
[0544]
第三步
[0545]
(s)-3-(4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯的制备
[0546]
将(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-氯-2-甲氧基-4-硝基苯)丙酸甲酯cpd-54c(700mg，1.8mmol)、氯化铵(144mg，2.7mmol)和铁粉(753mg，13mmol)加入混合溶剂(乙醇/水＝5/1，18ml)，在75℃氮气氛围下反应1小时。反应结束后，反应液垫硅藻土过滤，滤液浓缩后倒入水(30ml)中，乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，无水硫酸钠干燥并浓缩，得到的粗品用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)分离纯化后得到(s)-3-(4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯cpd-54d(500mg，橙红色固体)，产率：78％。
[0547]
ms m/z(esi):381[m+23]
+
.
[0548]
第四步
[0549]
(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-氯-2-甲氧基-4-((4-(甲胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸甲酯的制备
[0550]
将(s)-3-(4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯cpd-54d(500mg，1.4mmol)、2-氯-n-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(357mg，1.7mmol)加入叔丁醇(10ml)中，随后向其中加入三氟乙酸(80mg，0.70mmol)、二氯甲烷(10ml)并置换氮气三次。反应液在80℃下反应1小时。待反应结束后，将反应液浓缩，随后加入乙酸乙酯，搅拌后过滤，并用乙酸乙酯洗涤滤饼，得到(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-氯-2-甲氧基-4-((4-(甲胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸甲酯cpd-54e(360mg，白色固体)，产率：48％。
[0551]
ms m/z(esi):534[m+1]
+
.
[0552]
第五步
[0553]
(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-氯-2-甲氧基-4-((4-(甲胺基)-5-(三氟甲基)
嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸的制备
[0554]
将(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-氯-2-甲氧基-4-((4-(甲胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸甲酯cpd-54e(360mg，0.67mmol)溶于四氢呋喃(5ml)，滴加氢氧化锂(49mg，2.0mmol)的水(5ml)溶液，在室温下反应1小时。反应结束后，倒入水(20ml)中，水相用稀盐酸(1mol/l)调ph至4，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机相合并浓缩，得到(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-氯-2-甲氧基-4-((4-(甲胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸cpd-54f(190mg，白色固体)，产率：54％。
[0555]
ms m/z(esi):520[m+1]
+
.
[0556]
第六步
[0557]
(s)-2-氨基-3-(5-氯-2-甲氧基-4-((4-(甲胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸的制备
[0558]
将(s)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(5-氯-2-甲氧基-4-((4-(甲胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸cpd-54f(190mg，0.37mmol)溶于氯化氢的二氧六环溶液(10ml)中，室温下搅拌1小时。将反应液浓缩，真空干燥得到(s)-2-氨基-3-(5-氯-2-甲氧基-4-((4-(甲胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙酸cpd-54(168mg)，产率：95％。
[0559]
ms m/z(esi):420[m+1]
+
.
[0560]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.73(s,1h),9.54(s,1h),8.35(s,4h),8.00(s,1h),7.67(s,1h),7.35(s,1h),4.06(d,j＝5.5hz,1h),3.78(s,3h),3.19
–
2.96(m,2h),2.91(d,j＝4.4hz,3h).
[0561]
实施例33
[0562]
2-氨基-3-(2,5-二甲氧基-4-(4-甲基氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-基氨基)苯基)丙酸
[0563][0564]
第一步
[0565]
2,5-二甲氧基-4-硝基溴苯的制备
[0566]
将2-溴-1,4-二甲氧基苯cpd-55a(1.0g，4.6mmol)溶于乙腈(2ml)中，在室温下搅拌并缓慢加入浓硝酸(0.4ml)，混合物在室温下反应15分钟。待反应结束后，反应液中加入水(10ml)，过滤反应液得到固体，旋蒸粗品得2,5-二甲氧基-4-硝基溴苯cpd-55b(1.1g，黄色固体)，产率：92％。
[0567]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.68(d,j＝1.9hz,1h),7.64(s,1h),3.91(s,3h),3.87(s,3h).
[0568]
第二步
[0569]
2-(叔丁氧羰基)氨基-3-(2,5-二甲氧基-4-硝基苯基)丙酸甲酯的制备
[0570]
将锌粉(0.98g，15mmol)和碘(0.19g，0.75mmol)在三口烧瓶中置换氮气，并加热使碘升华。将2,5-二甲氧基-4-硝基溴苯cpd-55b(0.4g，1.5mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中，将溶液快速注入三口烧瓶中搅拌。与此同时，在另一个三口烧瓶中加入碘化亚铜(0.07g，0.36mmol)，双三苯基膦二氯化钯(0.11g，0.15mmol)，甲基(r)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-碘丙酸酯(1.0g，3mmol)，溶于n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中并置换氮气，在80℃下反应30分钟。将呈有锌粉的混合溶液用注射器吸出并快速注入在80℃反应的三口瓶中，继续反应1小时。反应结束后冷却至室温并用硅藻土过滤反应液，加入水(20ml)淬灭，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)得2-(叔丁氧羰基)氨基-3-(2,5-二甲氧基-4-硝基苯基)丙酸甲酯cpd-55c(400mg，黄色油状物)。产率：35％。
[0571]
ms m/z(esi):385[m+1]
+
.
[0572]
第三步
[0573]
3-(4-氨基-2,5-二甲氧基苯基)-2-(叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯的制备
[0574]
将2-(叔丁氧羰基)氨基-3-(2,5-二甲氧基-4-硝基苯基)丙酸甲酯cpd-55c(400mg，1mmol)溶于甲醇(10ml)中，加入钯碳(109mg，0.1mmol)，在氢气保护下室温反应1小时，反应结束后用硅藻土过滤反应液，用甲醇冲洗，旋蒸得粗品3-(4-氨基-2,5-二甲氧基苯基)-2-(叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯cpd-55d(200mg，黄色油状物)。产率：55％。
[0575]
ms m/z(esi):355[m+1]
+
.
[0576]
第四步
[0577]
2-叔丁氧羰基氨基-3-(2,5-二甲氧基-4-(4-甲基氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-基氨基)苯基)丙酸甲酯的制备
[0578]
将3-(4-氨基-2,5-二甲氧基苯基)-2-(叔丁氧羰基)氨基)丙酸甲酯cpd-55d(200mg，0.56mol)，2-氯-n-环丙基-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(159.61mg，0.67mmol)和三氟乙酸(32mg，0.28mmol)溶于正丁醇(10ml)中，在90℃下反应1小时。反应结束后冷却至室温，旋蒸得粗品，经柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)得到2-叔丁氧羰基氨基-3-(2,5-二甲氧基-4-(4-甲基氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-基氨基)苯基)丙酸甲酯cpd-55e(100mg，白色固体)。产率：34％。
[0579]
ms m/z(esi):530[m+1]
+
.
[0580]
第五步
[0581]
2-叔丁氧羰基氨基-3-(2,5-二甲氧基-4-(4-甲基氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-基氨基)苯基)丙酸的制备
[0582]
将2-叔丁氧羰基氨基-3-(2,5-二甲氧基-4-(4-甲基氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-基氨基)苯基)丙酸甲酯cpd-55e(100mg，0.18mmol)溶于四氢呋喃(5ml)中，加入氢氧化锂水溶液(0.5ml)，在室温下反应1小时。反应结束后用稀盐酸调ph至中性，用二氯甲醇/甲醇(10/1)萃取，有机相经饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋蒸得2-叔丁氧羰基氨基-3-(2,5-二甲氧基-4-(4-甲基氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-基氨基)苯基)丙酸cpd-55f(70mg，白色固体)，产率：76％。
[0583]
ms m/z(esi):516[m+1]
+
.
[0584]
第六步
[0585]
2-氨基-3-(2,5-二甲氧基-4-(4-甲基氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-基氨基)苯基)丙酸的制备
[0586]
将2-叔丁氧羰基氨基-3-(2,5-二甲氧基-4-(4-甲基氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-基氨基)苯基)丙酸cpd-55f(70mg，0.13mmol)加入氯化氢二氧六环溶液(4ml，4mol/l)。反应液于室温反应1小时。反应结束后，将反应液浓缩，经反向制备纯化，得到2-氨基-3-(2,5-二甲氧基-4-(4-甲基氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-基氨基)苯基)丙酸cpd-55(30mg)。产率：56％。
[0587]
ms m/z(esi):416[m+1]
+
.
[0588]1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.29(s,1h),8.16(s,1h),8.10(s,1h),6.92(s,1h),3.90(s,3h),3.87(s,3h),3.87
–
3.80(m,2h),3.37(dd,j＝14.3,4.1hz,1h),3.09(s,3h),2.95(dd,j＝14.3,8.8hz,1h).
[0589]
生物学评价
[0590]
测试例1、本发明化合物对重组人lrrk2蛋白抑制活性的测定
[0591]
(一)化合物的生物化学测定
[0592]
·
实验目的：
[0593]
通过均相时间分辨荧光检测磷酸化fluorescein-erm(lrrktide)peptide的磷酸基团与lanthascreen.tb-perm(plrrktide)antibody抗体结合后产生的能量信号转移(520nm/485nm荧光信号比值)。计算待测化合物的lrrk2激酶抑制ic50值。
[0594]
·
实验材料：
[0595]
1.反应溶液：
[0596]
lrrk2:invitrogen-pr8604b
[0597]
fluorescein-erm(lrrktide)peptide:invitrogen-pv4901
[0598]
atp:sigma-a7699
[0599]
tb-anti-plrrktide antibody:invitrogen-pv4900
[0600]
2.lrrk2最终浓度
[0601]
lrrk2:2nm
[0602]
fluorescein-erm(lrrktide)peptide:400nm
[0603]
atp:38μm
[0604]
tb-anti-plrrktide antibody:0.25nm
[0605]
·
实验操作：
[0606]
1.采用echo进行化合物稀释，最终浓度为10μm～0.17nm；
[0607]
2.将5μl蛋白酶和肽混合物加至检测板孔中(含化合物)；
[0608]
3.1000转/分，离心15秒左右，23℃温育15分钟；
[0609]
4.加入5μl/孔atp溶液开始反应；
[0610]
5.以1000转/分离心检测板约15秒，并用密封薄膜封闭；
[0611]
6.23℃孵育120min；
[0612]
7.加入10μl/孔抗体检测液停止反应；
[0613]
8.1000转/分离心检测板15秒左右，23℃孵育60分钟；
[0614]
9.在envision读取检测板。
[0615]
10.通过信号比值计算相对dmso空白的相对酶活性抑制，利用软件xlfit5拟合曲线计算ic50值。
[0616]
·
实验结果：
[0617]
表1lrrk2激酶抑制活性测试结果
[0618][0619][0620]
该实验表明此类化合物具有较好的lrrk2酶抑制活性。
[0621]
(二)药代动力学测定
[0622]
·
实验目的：
[0623]
研究化合物在c57bl/6小鼠体内药代动力学:脑组织和血浆药物浓度比(b/p比例)
[0624]
·
实验材料：
[0625]
c57bl/6小鼠(雄性，8周龄，体重25g-30g)
[0626]
·
实验操作：
[0627]
1.候选化合物配成0.6mg/ml溶液，小鼠单次静脉注射给药。溶媒为5％二甲亚砜/10％solutol/85％生理盐水。实验使用雄性c57bl/6小鼠，单次静脉注射给药，给药剂量为3mg/kg，给药体积为5ml/kg。在给药后0.25，1，4和24小时，收集血液和全脑组织样本。
[0628]
2.脑组织用3x的0.9％ nacl进行匀浆，将匀浆液保存于-80℃，备于后续lc-ms/ms分析。
[0629]
3.血液样品在收集半小时内，4000rpm，15分钟离心处理分离上清得血浆。将血浆样品储存在聚丙烯管中。
[0630]
4.lc-ms/ms检测前，将脑匀浆液和血浆加入含内标的乙腈溶液沉淀蛋白，充分混匀离心取上清液进样，以lc-ms/ms分析方法定量分析脑药和血药浓度，并计算药代参数，如达峰浓度(cmax)，半衰期(t1/2)，达峰时间(tmax)，药时不同组织药物浓度(auc0-last)，脑组织和血浆药物浓度比例(b/p)。由于cpd-11为cpd-10的前药，故通过检测小鼠体内cpd-10的浓度评估cpd-11的药代动力学。
[0631]
·
实验结果：
[0632]
表2：体内药代动力学检测结果
[0633][0634]
该实验表明此类化合物在小鼠中具有较好的脑部分布特性。
[0635]
以上对本发明技术方案的实施方式进行了示例性的说明。应当理解，本发明的保护范围不拘囿于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，本领域技术人员所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本技术权利要求书的保护范围之内。

技术特征：
1.一种式i所示的化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或其前药：其中，r1选自无取代或任选被1个、2个或更多个r
11
取代的下列基团：nh2、c
6-20
芳基、5-20元杂芳基；每个r
11
相同或不同，彼此独立地选自c
1-40
烷基、卤代c
1-40
烷基、c
3-20
环烷基、二c
1-40
烷基-磷酰基-c
6-20
芳基；r2选自c
1-40
烷基、c
1-40
烷氧基、卤代c
1-40
烷基、卤素；r3选自h、c
1-40
烷基、c
1-40
烷氧基；或者，r1、r2与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
21
取代的下列基团：c
3-20
环烷基、3-20元杂环基、5-20元杂芳基；每个r
21
相同或不同，彼此独立地选自卤素、cn、氧代(＝o)、c
1-40
烷基、c
3-20
环烷基；或者，r2、r3与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
22
取代的下列基团：c
3-20
环烷基、3-20元杂环基、5-20元杂芳基；每个r
22
相同或不同，彼此独立地选自卤素、cn、氧代(＝o)、c
1-40
烷基、c
3-20
环烷基；x选自n或ch；r4选自h、卤素、cn、oh、无取代或任选被1个、2个或更多个r
41
取代的下列基团：oh、c
1-40
烷基、c
2-40
烯基、c
2-40
炔基、c
3-20
环烷基、c
1-40
烷氧基、c
3-20
环烷基氧基；每个r
41
相同或不同，彼此独立地选自氘、卤素、c
1-40
烷基、卤代c
1-40
烷基、c
3-20
环烷基；和/或，x和其中一个r4与它们连接的环原子和亚氨基(nh)一起形成5-6元杂环基；m选自0-6的整数；例如1、2、3、4、5；环a选自c
6-20
芳基、5-20元杂芳基；e选自化学键或r
e1
选自c
1-40
烷基、c
1-40
烷氧基、卤代c
1-40
烷基、卤素；g选自化学键、c
6-20
芳基或5-20元杂芳基；n选自0、1、2、3或4；r5、r6、r7、r8相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-40
烷基、c
1-40
烷氧基、nh2或nh
2-c
1-40
烷基或彼此连接成环，或与其中一个r4连接形成与环a稠合的c
3-20
环烷基、c
3-20
环烯基、c
3-20
环炔基、3-20元杂环基、5-20元杂芳基，或者r5、r6与其连接的原子形成c
3-20
环烷基、3-20元杂环基；且r5、r6、r7、r8中的至少一个为nh2或nh
2-c
1-40
烷基；y选自or
a
、n(r
b
)(r
c
)；r
a
选自h、c
1-40
烷基或r
b
、r
c
相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-40
烷基。2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，r1选自无取代或任选被1个、2个或更多个
r
11
取代的下列基团：nh2、c
6-14
芳基；每个r
11
相同或不同，彼此独立地选自c
1-12
烷基、卤代c
1-12
烷基、c
3-12
环烷基、二c
1-12
烷基-磷酰基-c
6-14
芳基；r2可以选自c
1-12
烷基、c
1-12
烷氧基、卤代c
1-12
烷基、卤素；r3可以选自h、c
1-12
烷基、c
1-12
烷氧基；或者，r1、r2与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
21
取代的下列基团：c
3-12
环烷基、3-14元杂环基、5-14元杂芳基；每个r
21
相同或不同，彼此独立地选自卤素、cn、氧代(＝o)、c
1-12
烷基、c
3-12
环烷基；或者，r2、r3与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
22
取代的下列基团：c
3-12
环烷基、3-14元杂环基、5-14元杂芳基；每个r
22
相同或不同，彼此独立地选自卤素、cn、氧代(＝o)、c
1-12
烷基、c
3-12
环烷基；优选地，r1选自无取代或任选被1个、2个或更多个r
11
取代的下列基团：nh2、苯基；每个r
11
相同或不同，彼此独立地选自c
1-6
烷基、卤代c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、二c
1-6
烷基-磷酰基-苯基；r2可以选自卤代c
1-6
烷基、卤素；r3可以为h；或者，r1、r2与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
21
取代的3-8元杂环基、5-8元杂芳基；每个r
21
相同或不同，彼此独立地选自卤素、氧代(＝o)、c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基；或者，r2、r3与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
22
取代的3-8元杂环基、5-8元杂芳基；每个r
22
相同或不同，彼此独立地选自卤素、cn、氧代(＝o)、c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基；优选地，r1选自甲氨基、乙氨基、丙氨基、异丙基氨基、环丙基氨基、环丁基氨基、二氟乙氨基、三氟乙氨基、甲苯基、二甲基-磷酰基-苯氨基；r2可以选自三氟甲基、f、cl、br；或者，r1、r2与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
21
取代的四氢吡咯基；每个r
21
相同或不同，彼此独立地选自f、氧代(＝o)、环丙基；例如或者，r2、r3与它们连接的原子一起形成被1个、2个或更多个r
22
取代的下列基团：四氢吡咯基、1h-吡咯基；每个r
22
相同或不同，彼此独立地选自f、cn、氧代(＝o)、环丙基；例如3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，r4选自h、卤素、cn、无取代或任选被1个、2个或更多个r
41
取代的下列基团：c
1-12
烷基、c
2-12
炔基、c
3-12
环烷基、c
1-12
烷氧基、c
3-12
环烷基氧基；每个r
41
相同或不同，彼此独立地选自氘、卤素、c
1-12
烷基、卤代c
1-12
烷基、c
3-12
环烷基；和/或，x和其中一个r4与它们连接的环原子和亚氨基(nh)一起形成5-6元杂环基；和/或，r5和其中一个r4连接形成与环a稠合的c
3-12
环烷基、c
3-12
环烯基、或3-12元杂环基
或5-12元杂芳基；优选地，r4选自h、卤素、cn、c
1-12
烷基、c
2-12
炔基、c
3-12
环烷基、c
1-12
烷氧基、c
3-12
环烷基氧基、卤代c
1-12
烷氧基、氘代c
1-12
烷氧基；和/或，x和其中一个r4与它们连接的环原子和亚氨基(nh)一起形成5-6元杂环基；和/或，r4和r5连接形成与环a稠合的5-6元杂环基；优选地，r4选自h、f、cl、br、i、cn、c
1-6
烷基、c
2-6
炔基、c
3-6
环烷基、c
1-6
烷氧基、c
3-6
环烷基氧基、卤代c
1-6
烷氧基、氘代c
1-6
烷氧基；和/或，x和其中一个r4与它们连接的环原子和亚氨基(nh)一起形成6元杂环基；和/或，r5和其中一个r4连接形成与环a稠合的5元杂环基或5元杂芳基；优选地，r4选自h、f、cl、cn、甲基、甲氧基、乙氧基、环丙基、环丙基氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、三氘代甲氧基、乙炔基；和/或，x和其中一个r4与它们连接的环原子和亚氨基(nh)一起形成吗啉基；和/或，r4和r5连接形成与环a稠合的4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其特征在于，r5、r6、r7、r8相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-12
烷基、nh2或nh
2-c
1-12
烷基；且r5、r6、r7、r8中的至少一个为nh2或nh
2-c
1-12
烷基；或者，r5、r6与其连接的原子形成c
3-12
环烷基、3-12元杂环基；优选地，r5、r6、r7、r8相同或不同，彼此独立地选自h、c
1-6
烷基、nh2或nh
2-c
1-6
烷基，例如h、甲基、nh2、nh
2-甲基；且r5、r6、r7、r8中的至少一个为nh2或nh
2-甲基，例如当r5、r6、r7均为h时，r8为nh2；当r5、r7、r8均为h时，r6为nh2或nh
2-甲基；当r5、r6均为h时，r7为甲基，r8为nh2；当r5、r7均为h时，r6为甲基或乙基，r8为nh2；优选地，当r8为nh2时，为s构型；或者，r5、r6与其连接的原子形成c
3-6
环烷基，例如环丙基。5.根据权利要求1-4任一项所述的化合物，其特征在于，环a选自c
6-14
芳基、5-14元杂芳基；例如选自c
6-8
芳基、5-8元杂芳基；如选自苯基、吡啶基、噻吩基、吡唑基；优选地，e选自化学键或r
e1
选自氟、氯、溴、碘；g选自化学键、c
6-14
芳基；n选自1或2；优选地，当n为1时，r
e1
为r构型；e例如选自化学键、
选自优选地，y选自or
a
、n(r
b
)(r
c
)；r
a
选自h、c
1-12
烷基或r
b
、r
c
相同或不同，彼此独立地选自c
1-12
烷基；优选地，y选自or
a
、n(r
b
)(r
c
)；r
a
选自h、c
1-6
烷基或r
b
、r
c
相同或不同，彼此独立地选自c
1-6
烷基；y例如选自oh、甲氨基、二甲氨基、异丙基氧基、叔丁基氧基、庚基氧基或6.根据权利要求1-5任一项所述的化合物，其特征在于，式i所示化合物选自式ii或式iii所示的结构：其中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、e、y和m独立地具有权利要求1-5任一项所述的定义；优选地，式i所示化合物选自式i-1、i-2、i-3或i-4所示的结构：其中，r1、r4、r5、r6、g和y独立地具有权利要求1-5任一项所述的定义。
7.根据权利要求1-6任一项所述的化合物，其特征在于，式i的化合物具有选自如下所示的结构：
8.权利要求1-7任一项所述化合物的制备方法，其特征在于，包括以下方案一或方案二：方案一：化合物i-1脱保护，得到式i所示化合物；方案二：化合物i-2脱保护，得到式i所示化合物；其中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、m、a、e、x、y独立地具有权利要求1-7任一项所述的定义，pg选自氨基保护基，例如为叔丁氧羰基、苄氧基羰基。
9.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-7任一项所述化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或其前药中的至少一种。10.权利要求1-7任一项所述化合物、其消旋体、立体异构体、互变异构体、同位素标记物、溶剂化物、多晶型物、药学上可接受的盐或其前药在制备药物中的应用，例如在制备lrrk2抑制剂中的应用；优选地，所述药物或药物组合物用于预防或治疗与lrrk2介导的疾病或症状；优选地，所述与lrrk2介导的疾病或症状选自帕金森、麻风病、ibd、阿兹海默氏症、l-多巴诱发性运动障碍、痴呆症、肌肉萎缩性侧索硬化、肾癌、乳腺癌、前列腺癌、血癌、乳头状癌、肺癌、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、麻风病、克罗恩氏病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、肌肉萎缩性侧索硬化、类风湿性关节炎或强直性脊椎炎。

技术总结
本发明涉及氨基酸衍生物、药物组合物及其制备方法和应用，具体提供了一种式I所示的化合物，具有良好的LRRK2抑制作用，可用于治疗或预防与LRRK2相关的病症和疾病，以及制备用于此类病症和疾病的药物。此类病症和疾病的药物。此类病症和疾病的药物。


技术研发人员：黄悦 俞立挺 骆庆和 傅啸云 范景荣 傅东林 梁妍琦 张智全 杨方龙 王思勤 金磊
受保护的技术使用者：长春金赛药业有限责任公司
技术研发日：2023.04.04
技术公布日：2023/10/19