一种多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体及制备方法与流程

1.本发明属于a61k技术领域，更具体的涉及一种多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体及制备方法。


背景技术：

2.女性从20岁时胶原蛋白就开始流失，25岁会进入胶原蛋白流失的高峰期，据统计，一般到40岁时，胶原蛋白含量会下降至18岁人体中胶原蛋白含量的一半。然后胶原蛋白对皮肤的水润度、光滑度、紧致度和皮肤年龄有较大的影响。如何提升大于25岁年龄段皮肤中胶原蛋白的含量，是目前消费者和研究者同时面临的一项难题。
3.现阶段有研究者或者相应的一些美白产品和抗衰产品出现，以期通过产品的使用，提升人体的美白或者抗衰作用，但是由于人体皮肤屏障导致配方中的活性成分难以发挥其实际的功效；如针对黑色素的美白成分或者针对成纤维细胞的抗衰老成分，这些活性成分存在作用的靶点，会因为皮肤的屏障作用，导致这些有效成分难以渗透皮肤进而被吸收，因此，无法发挥其功效。
4.另一方面，现阶段还有一些传统的促渗方法，例如
5.1)通过物理性促渗，比如激光和射频的热促渗，或者电穿孔的电促渗以及微针机械促渗；
6.2)通过配方技术：包裹技术，微乳技术；
7.3)促渗剂促渗：通过影响细胞间脂质及其流动性，促进活性成分的透皮吸收。
8.以上促渗方法往往伴随着一定的刺激性，从而限制了其在配方中的应用。
9.面对上述现阶段的缺陷，研究者们开发了一些新的方法促进胶原吸收，中国发明专利cn113599281a公开了一种胶原多肽羧甲基壳聚糖纳米缓释颗粒及其制造方法，在公开的专利中通过对胶原蛋白的提取，制备成小分子胶原多肽，然后对制备的小分子胶原多肽进行包封，制备成胶原多肽羧甲基壳聚糖纳米缓释颗粒。但是在公开的专利中并未提出如何实现对胶原的促进和吸收，也无法证明此效果；中国发明专利cn115778844a提供了一种多肽组合物及其制备方法和用途，在公开的专利中提出了通过多种多肽的组合，制备得到一种新的组合物，有效促进多肽类物质的透皮吸收；公开专利中提出了多肽组合物形成纳米颗粒，但是并未提出其纳米颗粒的粒径，所以无法判断其纳米颗粒的透皮吸收效果。


技术实现要素：

10.为了解决上述技术问题，本发明的第一方面提供了一种多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，组分至少包括：表面活性剂、含羟基化合物、多肽、胶原蛋白、水。
11.在一些优选的实施方式中，所述的表面活性剂包括peg-40氢化蓖麻油、peg-60氢化蓖麻油、多元醇表面活性剂、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-6中的至少一种。
12.进一步优选的，所述的表面活性剂包括peg-40氢化蓖麻油。
13.在一些优选的实施方式中，所述的多元醇表面活性剂为碳原子数大于5的二元或
者多元醇。
14.碳原子数大于5的二元或者多元醇包括但不限于1,2-己二醇、1,2-戊二醇、1,2-辛二醇、1,8-辛二醇、1,2-庚二醇、1,7-庚二醇、1,10-癸二醇。
15.进一步优选的，碳原子数大于5的二元或者多元醇可以选择1,2-己二醇。
16.在一些优选的实施方式中，所述的peg-40氢化蓖麻油和多元醇表面活性剂的重量比为(10～30)：(5～20)。
17.进一步优选的，所述的peg-40氢化蓖麻油和1,2-己二醇的重量比为(10～30)：(5～20)。
18.更优选的，所述的peg-40氢化蓖麻油和1,2-己二醇的重量比为15：7.554。
19.在实验过程中，发明人发现，将制备原料混合对有效成分进行包裹的过程中，会出现整个体系浑浊的现象，这个直接影响本技术所述的胶原蛋白纳米载体实验的成功，对于此现象，本技术的发明人对制备原料进行了追一排查，最终发现，改变peg-40氢化蓖麻油和1,2-己二醇的比例，对体系的浑浊现象出现有直接影响，从理论上来看，发明人认为peg-40氢化蓖麻油和1,2-己二醇作为表活其比例可以为任何比例，但是在发明人排查的过程中发现，当peg-40氢化蓖麻油和1,2-己二醇的重量比为15：7.554时，才能避免体系出现浑浊现象，发明人推测可能的原因是因为：在此比例下，peg-40氢化蓖麻油和1,2-己二醇表面的亲水、亲油基团之间可以形成更进一步的平衡，与体系中存在的其他碳原子数小于5的一元醇或者二元醇之间的羟基形成配合的强氢键相互作用，在体系中紧密结合，将本体系中的胶原蛋白和多肽类物质包裹更紧密，避免了体系中活性成分之间的碰撞频率，进而避免了活性成分的聚沉而造成的浑浊现象。
20.在一些优选的实施方式中，所述的胶原蛋白为重组胶原蛋白。
21.进一步优选的，所述的重组胶原蛋白为ⅰ+ⅲ+xⅶ胶原蛋白的重组。
22.进一步优选的，所述的重组胶原蛋白为ⅰ+ⅲ+xⅶ胶原蛋白分别为100kdaⅰ型胶原蛋白、5kdaⅲ型胶原蛋白和23.8kdaxⅶ型胶原蛋白。
23.所述的重组胶原蛋白购于创建医疗，按照仿生皮肤技术，重组胶原蛋白ⅰ+ⅲ+xⅶ的比例为(1-5):(2-10):1；进一步优选的，所述的重组胶原蛋白ⅰ+ⅲ+xⅶ的比例为2.5:6.5:1。
24.在一些优选的实施方式中，所述的多肽包括三肽-1、乙酰基六肽-8、棕榈酰三肽-8、乙酰基四肽-5中的至少一种。
25.进一步优选的，所述的多肽可选自三肽-1和棕榈酰三肽-8。
26.在一些优选的实施方式中，所述的含羟基化合物为碳原子数小于5的一元醇或者二元醇。
27.所述的碳原子数小于5的一元醇或者二元醇包括但不限于1,2-戊二醇、乙醇、异丙醇、丙三醇、丙二醇、1,2-丁二醇、1,4-丁二醇、丁二醇。
28.更优选的，所述的碳原子数小于5的一元醇或者二元醇为1,2-戊二醇、丙三醇、丁二醇的组合。
29.更优选的，所述的1,2-戊二醇、丙三醇、丁二醇的重量比为1.45：0.45：0.45。
30.在一些优选的实施方式中，所述的含羟基化合物的用量为表面活性剂的8-15wt％。
31.申请人在实验过程中发现，确定了表面活性剂的类型和用量的前提下，改变含羟基化合物的用量，会影响胶原蛋白纳米载体在水溶液的稳定性以及在-10℃/40℃循环稳定性，出现这种现象的原因推测可能是：1,2-戊二醇、丙三醇、丁二醇会通过带有的羟基和本体系中的羟基等物质形成氢键，同时，1,2-戊二醇、丙三醇、丁二醇结构中的烷基在一定数量下，促进了表面活性剂对胶原蛋白ⅰ+ⅲ+xⅶ的成型，避免在-10℃/40℃温度循环的过程中，分子无规则撞击造成的沉降，保证了在-10℃/40℃高低温环境的稳定性。
32.在一些优选的实施方式中，组分还包括棕榈酸异丙酯、对羟基苯乙酮。
33.在一些优选的实施方式中，组分还包括高分子多糖。
34.进一步优选的，所述的高分子多糖为羟乙基脱乙酰壳多糖。
35.更优选的，所述的羟乙基脱乙酰壳多糖的分子量为2000da，粒径约30nm，所述的羟乙基脱乙酰壳多糖购于中科院。
36.在实验过程中申请人发现，本技术中使用peg-40氢化蓖麻油和1,2-己二醇可以改善胶原蛋白纳米载体的稳定性，尤其peg-40氢化蓖麻油和1,2-己二醇的重量比为15：7.55时，可以保证制备得到的纳米载体实现粒径为100-400nm，pdi＜0.4的前提下，产品不出现沉淀现象，出现这种现象的原因申请人推测：在本技术中，存在的多肽以及重组胶原蛋白其在水中溶解性不佳，但是随着peg-40氢化蓖麻油的加入，溶解效果越来越好，尤其分批次加入1,2-己二醇，且peg-40氢化蓖麻油和1,2-己二醇的重量比为15：7.55时，体系中羟基之间的相互作用，可以保证在表面活性剂在多肽和重组胶原蛋白界面层形成更高的粘度，促进了胶原蛋白的包覆，同时也限制了包覆后的重组胶原蛋白以及多肽等活性物质的运动速率，保证其在水体系中的稳定性，避免了出现沉淀现象，使载体的粒径达到100-400nm，pdi＜0.4。
37.本发明的第二方面提供了一种多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体的制备方法，包括如下步骤：
38.(1)于单独的容器中，先加入部分表面活性剂，中速搅拌5～10min，混合均匀后得到混合物a，备用；
39.(2)称取棕榈酸异丙酯，备用；
40.(3)称取10wt％表面活性剂、对羟基苯乙酮、含羟基化合物，水，50℃以下加热溶解，得混合物b，备用；
41.(4)称取除表面活性剂外剩余组分，加入水溶解完全，得混合物c；
42.(5)将混合物a、棕榈酸异丙酯、剩余表面活性剂，混合搅拌5～10min，得混合物d；
43.(6)将混合物c、混合物b和混合物d混合，混合搅拌5～10min，静置；
44.(7)取样送检，检测颜色、味道、粘度、ph、状态，检测合格后出料。
45.有益效果：
46.本发明具有如下积极的进步：
47.1.纳米包裹指由高分子材料构成的双分子层小囊泡，可将活性成分，包裹在直径为纳米级的微粒中。本发明采用纳米包裹技术，将重组复合胶原(ⅰ+ⅲ+xⅶ)、美容复合肽、羟乙基脱乙酰壳多糖等活性成分进行包裹；从而实现全方位精准补充、促生胶原：
48.2.本发明中使用的重组复合胶原(ⅰ+ⅲ+xⅶ)人源化胶原蛋白科学合理的配比，从不同的分子量切入皮肤内部，实现从外部对皮肤精准抗衰护理；
49.3.本发明中的加入的多肽激活纤维细胞，生成胶原蛋白和弹性蛋白；抑制神经传导素乙酰胆碱的释放，减弱肌肉收缩，同时增加弹力蛋白活性；
50.4.本发明中的羟乙基脱乙酰壳多糖，协同重组复合胶原(ⅰ+ⅲ+xⅶ)和多肽，能高效穿越角质层屏障进入真皮层，从而增强纳米包裹的促渗率，实现对皮肤表面皱纹的减缓；
51.5.本发明的多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，可以有效调节活性成分的释放速度，增加活性成分透过生物膜的能力。减少活性物的皮肤刺激性、增加活性物稳定性、经皮渗透更好吸收，更高转化、增加皮肤滞留性；
52.6.本发明在研究的过程中创造性的探究出使羟乙基脱乙酰壳多糖、重组复合胶原蛋白、多肽在体系中稳定存在的方法，保证了其在使用的过程中避免出现沉淀、聚沉现象，并且可以实现在-10℃/40℃温度循环的过程中的稳定性，保证了其使用的效果；
53.7.经本发明的探究，确保了制备得到的载体为纳米载体，粒径范围为100-400nm，pdi＜0.4，真正从纳米层面实现产品的渗透以及功效的展现。
附图说明
54.图1为游离胶原、胶原纳米载体及本技术实施例1多靶点胶原蛋白纳米载体对hsf细胞氧化损伤模型的保护作用效果图；
55.图2为实施例1实验组和安慰剂组产品用于志愿者0天和28天后面部皱纹改善情况示意图；a、b分别代表安慰剂组使用不含申请制备的多靶点胶原蛋白纳米载体的膏霜0天和28天的测试图；c、d分别代表实验组使用多靶点胶原蛋白纳米载体的膏霜0天和28天的测试图；
56.图3为实施例1产品实物图；
57.图4为对比例产品制备过程中的沉降、浑浊实物图，其中，a1对应对比例1，a2对应对比例2，a3对应对比例3。
具体实施方式
58.实施例
59.实施例1
60.一种多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，组分和含量如下表1：
61.表1：
[0062][0063]
对比例
[0064]
对比例1
[0065]
一种多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，组分和含量如下表2：
[0066]
表2：
[0067][0068]
对比例2
[0069]
一种多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，组分和含量如下表3：
[0070]
表3：
[0071]
[0072][0073]
对比例3
[0074]
一种多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，组分和含量如下表4：
[0075]
表4：
[0076][0077]
说明书
[0078][0079]
实施例1以及对比例1-3提供的一种多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体的制备方法，包括如下步骤：
[0080]
(1)于单独的容器中，先加入组分peg-40氢化蓖麻油、30wt％1,2-己二醇，中速搅拌6min，混合均匀后得到混合物a，备用。
[0081]
(2)称取棕榈酸异丙酯，备用；
[0082]
(3)称取10wt％1,2-己二醇、对羟基苯乙酮、丁二醇，加入10wt％水，45℃加热溶解，备用；
[0083]
(4)称取除1,2-己二醇的剩余物之，加入水溶解完全，得混合物c；
[0084]
(5)将混合物a、棕榈酸异丙酯、剩余1,2-己二醇，混合搅拌7min，得混合物d；
[0085]
(6)将混合物c、混合物b和混合物d混合，混合搅拌8min，静置；
[0086]
(7)取样送检，检测颜色、味道、粘度、ph、状态，检测合格后出料。
[0087]
性能测试：
[0088]
1.粒径测试：
[0089]
采用90plus pals高灵敏度zeta电位及粒度分析仪测量，在塑料比色皿中加入实施例1实验样品1ml，盖上仓盖插入样品槽中。设定测量波长为658nm，散射角173
°
，平衡时间60s，间隔时间10s，软件自动记录粒径分组数据。每个样品扫描3次，重复测试两遍，得z-average值和pdi值。
[0090][0091]
通过以上粒径测试可以看出，经本发明提供的载体的粒径为100-400nm，在纳米载体粒径为10-1000nm标准范围内，且pdi＜0.4。
[0092]
2.对氧化损伤hacat细胞的保护作用
[0093]
以800μm h2o2作用于人皮肤成纤维细胞(hsf)24小时制备细胞氧化损伤模型。实验中，以胶原浓度作为参照标准，考察游离胶原、胶原纳米载体及多靶点胶原蛋白纳米载体对hsf细胞氧化损伤模型的保护作用，结果见图1；
[0094]
通过性能测试和图1中数据显示，游离胶原仅在高浓度对氧化损伤细胞有保护作用。胶原纳米载体和多靶点胶原蛋白纳米载体的细胞保护效果明显优于游离胶原；共输送纳米载体在多种功效成分的共同作用下对氧化损伤细胞表现出更好的保护作用。
[0095]
3.人体皮肤延衰测试
[0096]
对10名志愿者(年龄40至50岁)进行胶原蛋白纳米载体的皮肤试验，受试者使用含5wt％本技术实施例1制备的多靶点胶原蛋白纳米载体的膏霜，每天两次，连续28天。28天后将硅氧烷涂在志愿者试验区域皮肤表面，制作成与人体皮肤纹路相吻合的反向复制硅膜片，使用激光扫描显微镜分析硅膜片上的纹路，结果见图2：图2a、b分别代表安慰剂组使用不含申请制备的多靶点胶原蛋白纳米载体的膏霜0天和28天的测试图；图2c、d分别代表实验组使用多靶点胶原蛋白纳米载体的膏霜0天和28天的测试图。
[0097]
安慰剂组：同样志愿者10名(年龄40至50岁)，使用不含申请制备的多靶点胶原蛋白纳米载体的膏霜，每天两次，连续28天。
[0098]
实验结果：28天后，使用多靶点胶原蛋白纳米载体膏霜志愿者的皮肤相对于安慰剂组，皱纹深度和皱纹长度均显著减少。
[0099]
4.耐寒耐热稳定性测试
[0100]
将本技术实施例和对比例制备得到的对多靶点胶原蛋白纳米载体进行耐寒耐热
测试，5种条件：室温(25℃)、高温(40℃)、冷藏(4℃)、冷冻(-10℃)、循环(-10℃/40℃)。对第一周、第二周、第三周、第四周5种条件下进行对比观察，以判断其是否稳定，测试类目及判断标准见表5，并将实施例1和对比例1-3测试结果分别记录于表6、7、8、9；
[0101]
表5：
[0102][0103]
表6：
[0104][0105]
表7：
[0106][0107]
表8：
[0108][0109]
表9：
[0110]

技术特征：
1.一种多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，其特征在于，组分至少包括：表面活性剂、含羟基化合物、多肽、胶原蛋白、水。2.根据权利要求1所述的多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，其特征在于，所述的表面活性剂包括peg-40氢化蓖麻油、peg-60氢化蓖麻油、多元醇表面活性剂、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-6中的至少一种。3.根据权利要求2所述的多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，其特征在于，所述的多元醇表面活性剂为碳原子数大于5的二元或者多元醇。4.根据权利要求3所述的多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，其特征在于，所述的peg-40氢化蓖麻油和多元醇表面活性剂的重量比为(10～30)：(5～20)。5.根据权利要求1所述的多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，其特征在于，所述的胶原蛋白为重组胶原蛋白。6.根据权利要求1所述的多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，其特征在于，所述的多肽包括三肽-1、乙酰基六肽-8、棕榈酰三肽-8、乙酰基四肽-5中的至少一种。7.根据权利要求1所述的多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，其特征在于，所述的含羟基化合物为碳原子数小于5的一元醇或者二元醇。8.根据权利要求7所述的多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，其特征在于，所述的含羟基化合物的用量为表面活性剂的8-15wt％。9.根据权利要求1-8任一项所述的多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，其特征在于，组分还包括棕榈酸异丙酯、对羟基苯乙酮。10.一种根据权利要求9所述的多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)于单独的容器中，先加入部分表面活性剂，中速搅拌5～10min，混合均匀后得到混合物a，备用；(2)称取棕榈酸异丙酯，备用；(3)称取10wt％表面活性剂、对羟基苯乙酮、含羟基化合物，水，50℃以下加热溶解，得混合物b，备用；(4)称取除表面活性剂外剩余组分，加入水溶解完全，得混合物c；(5)将混合物a、棕榈酸异丙酯、剩余表面活性剂，混合搅拌5～10min，得混合物d；(6)将混合物c、混合物b和混合物d混合，混合搅拌5～10min，静置；(7)取样送检，检测颜色、味道、粘度、ph、状态，检测合格后出料。

技术总结
本发明属于A61K技术领域，更具体的涉及一种多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体及制备方法。本发明的第一方面提供了一种多靶点促渗缓释抗衰的胶原蛋白纳米载体，组分至少包括：表面活性剂、含羟基化合物、多肽、胶原蛋白、水。纳米包裹指由高分子材料构成的双分子层小囊泡，可将活性成分，包裹在直径为纳米级的微粒中。本发明采用纳米包裹技术，将重组复合胶原(Ⅰ+Ⅲ+XⅦ)、美容复合肽、羟乙基脱乙酰壳多糖等活性成分进行包裹；从而实现全方位精准补充、促生胶原。促生胶原。促生胶原。


技术研发人员：李竞 杜立波 陈瑞
受保护的技术使用者：上海幸研生物科技有限公司
技术研发日：2023.05.26
技术公布日：2023/10/19