一种用于治疗脓毒症的纳米粒子及其制备方法

1.本发明属于生物材料技术领域，尤其是涉及一种用于治疗脓毒症的纳米粒子及其制备方法。


背景技术：

2.脓毒症是对真菌、细菌或病毒感染的一种危及生命的全身炎症反应。近年来对脓毒症的治疗取得了进展，但脓毒症的死亡率仍然很高，全球每年约有4900万脓毒症病例，然而与之相关的死亡高达1100万例。在脓毒症的进展过程中，病原体相关分子模式和宿主细胞释放的损伤相关分子模式引发强烈炎症反应，可导致细胞因子风暴、多器官衰竭和死亡。
3.生物药物由生物活性大分子组成，如多肽、蛋白质、核酸、益生菌和单细胞等，表面含有糖蛋白和脂质，被广泛用作治疗剂。乌司他丁(uti)是一种精制的生物大分子糖蛋白，分子量为40000
±
3000da，结构为氨基酸组成的多肽链，链末端带有糖链，属蛋白酶抑制剂，作为临床强效抗炎药物主要用于治疗急性胰腺炎、急性循环衰竭，近年来，根据临床经验和循证证实，uti可有效抑制脓毒症患者体内tnf-α、il-6和il-8等炎症因子释放，减轻免疫系统的过度反应，中断可能引发的免疫因子风暴，阻断多器官功能衰竭。然而游离的uti难以避免在生理环境中降解和变性的趋势，体内半衰期极短，易于被代谢，难以被持续吸收，作为生物药物的疗效受到限制。因此迫切需要开发设计生物药物以有效利用生物大分子的新策略。
4.随着纳米技术的飞速发展，纳米材料已然成为一种新型的给药系统。多酚作为天然的抗氧化化合物在大分子自组装领域受到广泛关注。多酚是自然界中存在的一大类含有一个或多个酚羟基的化合物，丰度很高。其化学结构各异，功能多样，作为生物活性物质，绝大多数多酚都可以减少自由基、活性氧的产生，能有效对抗炎症、氧化应激和dna损伤，减缓衰老与年龄相关的疾病的发生，因而具有潜在的治疗和医疗价值。
5.然而现有技术中缺少能够有效利用生物大分子功能，并能够抑制其降解和变质，同时具有治疗脓毒症功效的纳米生物材料。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于一种用于治疗脓毒症的纳米粒子及其制备方法。
7.本发明首先提供一种用于治疗脓毒症纳米组装体及其制备方法。本发明克服了乌司他丁(uti)作为一种游离的蛋白药物存在的半衰期短的问题。
8.本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
9.本发明首先提供一种用于治疗脓毒症的纳米粒子分散体的制备方法，通过在室温且无需催化剂存在的条件下，使用单宁酸粉末(ta)和乌司他丁(uti)作为原料，制备得到具有表面负电荷、可调节粒径和zeta电位的纳米粒子分散体，称之为tu纳米粒子分散体，所述tu纳米粒子分散体可直接以水溶液形式注射使用。
10.在本发明的一个实施方式中，所述tu纳米粒子分散体的制备方法为：
11.a.取十万单位的uti溶解在蒸馏水中配置成母液待用；
12.b.将单宁酸超声溶解在uti溶液中搅拌反应得到tu纳米粒子分散体。
13.在本发明的一个实施方式中，当十万单位的uti配置成母液量为1ml-10ml时，单宁酸加入量为10mg-1000mg。
14.本发明还进一步提供基于所述制备方法制备得到的纳米粒子分散体。
15.本发明还进一步提供基于所述制备方法制备得到的纳米粒子分散体的应用，所述tu纳米粒子分散体可直接使用，亦可经液氮冻干后贮存待用，加入蒸馏水溶解随用随配。
16.本发明还提供一种用于治疗脓毒症的纳米粒子的制备方法，使用六水合硝酸铈(ce(no3)3·
6h2o)、单宁酸粉末(ta)和乌司他丁(uti)作为原料，制备得到具有表面负电荷、可调节粒径和zeta电位的纳米粒子，称之为ctu纳米粒子，可直接以水溶液形式注射使用。
17.在本发明的一个实施方式中，所述ctu纳米粒子的制备方法为：
18.a.取十万单位的uti溶解在蒸馏水中配置成母液待用；
19.b.将ta超声溶解在uti溶液中搅拌反应，随后加入六水合硝酸铈(ce(no3)3·
6h2o)继续搅拌反应；
20.c.将上述反应液离心处理，倒去上清液，将底部的沉淀重新分散在水中通过离心的方式水洗，除去未反应的原料；
21.d.最后将离心得到的沉淀转移至液氮中冷冻，放入冻干机冷冻干燥，即收集到ctu纳米粒子粉末，贮存待用。
22.在本发明的一个实施方式中，当十万单位的uti配置成母液量为1ml-10ml时，六水合硝酸铈加入量为10mg-1000mg，单宁酸加入量为10mg-1000mg。
23.本发明还进一步提供基于所述制备方法制备得到的纳米粒子。
24.本发明还进一步提供基于所述制备方法制备得到的纳米粒子的应用，所述纳米粒子制成水溶液使用。
25.tu纳米粒子分散体及ctu纳米粒子的命名根据组分名和用量，例如，某样品制备时单宁酸用量x mg，六水合硝酸铈用量y mg，乌司他丁母液用量z ml，则该样品命名为tx-cy-uz。
26.本发明通过一锅法，利用ce
3+
、ta、uti之间广泛的配位、氢键、静电以及疏水作用将游离蛋白成功组装制备了ctu纳米粒子。纳米粒子在不影响蛋白生物功能的同时，抑制其降解和变质，此外由于单宁酸和稀土硝酸铈的抗菌抗炎功能，实现了与蛋白药物的协同作用，赋予了ctu纳米粒子增强的治疗效果。
27.本发明的发明构思主要体现在以下方面：
28.单宁酸(ta)是一种最常见且应用最广泛的天然多酚，普遍存在于红酒和茶叶中，具有多个儿茶酚/没食子酰基组成的树突状结构(每一分子含五个邻苯二酚和五个邻苯三酚)。其邻苯二酚和邻苯三酚的数量多、密度高，赋予了ta很强的结合亲和力，决定了其可通过各种相互作用与生物大分子(如多肽、蛋白质等)结合，包括氢键、疏水相互作用、静电相互作用、π-π相互作用、金属配位等，为ta和uti组装制备纳米材料提供了可能。
29.稀土金属由于其特殊的外电子构型，具有特殊的化学和物理性质，进入动物体内后可被吸收、富集并在组织中重新分配，能够引起包括中枢神经、消化、内分泌、运动及生殖等系统的广泛影响，通过调节激素水平、酶活性、蛋白及脂类代谢等多种方式影响中间代谢
过程，其中，稀土铈(ce)是镧系金属，为人体必需的微量元素，具有良好的生物相容性，因而逐步受到医学领域关注。三价铈离子(ce
3+
)可改变细菌形态、促进新陈代谢，被证实具有较好的抑菌和抗炎作用，因此具有良好的医学应用潜力，在抗菌作用、烧伤、抗肿瘤以及口腔方面有应用报道，但是其在脓毒症治疗中的作用鲜见报道。同时由于稀土元素特有的4f轨道赋予其其强大的配位络合能力，ce
3+
与uti分子结构中的o-硫酸软骨素糖链、n-糖链以及蛋白结构域都可能通过配位或静电作用结合，可为大分子自组装提供额外的作用力。
30.综上，由ta、ce
3+
和uti介导的超分子络合制备生物活性的功能纳米粒子，是使用多功能组分设计构建新型生物药物的有效方法。
31.本发明结合具有抗炎、抗菌、抗氧化性能的单宁酸和硝酸铈，与药物乌司他丁之间通过内在的结合亲和力，即各种相互作用，通过两种不同技术方案制备了tu纳米粒子分散体及ctu纳米粒子，具有比单独乌司他丁增强的治疗脓毒症的效果，同时研究了通过改变单宁酸和乌司他丁组分的含量可以制备得到不同zeta电位和平均粒径的纳米分散体系。
附图说明
32.图1为本发明中实施例一(a)、实施例二(b)制备得到的tu纳米粒子分散体和ctu纳米粒子的红外谱图。
33.证明了tu纳米粒子分散体和ctu纳米粒子均含有单宁酸和乌司他丁，同时由组分间的相互作用导致了吸收波数的位移。
34.图2为本发明中各所述实施例制备得到的ctu纳米粒子的zeta电位。
35.表征得到ctu纳米粒子表面带负电荷，zeta电位绝对值越大证明体系分散稳定性越强，同时负电荷的ctu纳米粒子易于在带有正电荷的炎症位点聚集。
36.图3为本发明中实施例四制备得到的ctu纳米粒子的tem图像和粒径分布。
37.在组装体系中，随着单宁酸含量的增加，ctu纳米粒子的平均粒径出现先增大后减小的的趋势。随着乌司他丁用量增加，ctu纳米粒子的分散性更好，粒径分布均匀。
38.图4为本发明中实施例六制备的ctu纳米粒子的体外lps清除能力的表征。
39.随着ctu加入到lps的鲎试剂溶液中后，通过灭活lps使得其磷酸基团与鲎试剂的特异性结合减弱，在显色基质下产生的紫红色变淡消失。
40.图5是本发明中实施例七制备的ctu纳米粒子在脓毒症小鼠模型中的应用以及对脓毒症小鼠的治疗效果。
41.为了研究纳米粒子对lps诱导的脓毒症小鼠的治疗效果，将sd大鼠分为lps、pbs、uti、nps四组。lps组为脓毒症组，pbs组对正常小鼠注射生理盐水，uti组和nps组分别对小鼠诱导脓毒症后注射乌司他丁和ctu纳米粒子，随后观察两周。nps组和uti组的小鼠临床表现缓和，nps组的生存率达到80％，相比之下uti组不到40％，而诱导脓毒症后不进行干预的小鼠在三天内均表现出精神萎靡、丧失恐惧反应，生存率指标为零。经ctu纳米粒子处理后，所有存活的小鼠体重均恢复正常，摆脱体重减轻的脓毒症体征。结果表明，与uti相比，ctu纳米粒子对lps诱导的脓毒症的治疗效果更好，能显著提高存活率。
具体实施方式
42.下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
43.实施例一：
44.在本实施例中，一种用于治疗脓毒症的tu纳米粒子分散体t
500-u
25
的制备方法，包括如下步骤：
45.(1)取十万单位的uti溶解在蒸馏水中配置成5ml母液待用。
46.(2)室温下，取uti母液2.5ml，加蒸馏水稀释至25ml。取500mg单宁酸超声溶解在uti溶液中搅拌反应30min制备得到t
500-u
25
。
47.实验测试分析：
48.实施例一制备得到的tu纳米粒子分散体的红外谱图参考图1(a)，原本单宁酸在1084cm-1
、1199cm-1
的吸收蓝移至1096cm-1
、1203cm-1
，同时1258cm-1
处的小吸收峰衍生于1203cm-1
，证明tu纳米粒子分散体由单宁酸和乌司他丁两组分组装制备而成，同时由组分间的相互作用导致了吸收波数的位移。
49.实施例二：
50.在本实施例中，一种用于治疗脓毒症的ctu纳米粒子t
125-c
100-u
25
的制备方法，包括如下步骤：
51.(1)室温下，取uti母液2.5ml，加蒸馏水稀释至25ml uti溶液。取125mg ta超声溶解在25ml uti溶液中，搅拌反应15min，随后加入100mg六水合硝酸铈继续搅拌反应15min。
52.(2)将反应液转移至50ml离心管中，以9000r/min的转速离心15min，倒去上清液，离心管内得少量淡黄色沉淀。重新加入蒸馏水，经涡旋振荡仪震荡分散清洗沉淀，以除去水溶性的未反应的小分子等，随后继续以9000r/min的转速离心15min。
53.(3)离心结束后，倒去上清液，将底部收集到沉淀的离心管转移到液氮中冷冻，并放入冻干机冷冻干燥24h，即可收集到ctu纳米粒子粉末。
54.实施例二制备得到的tu纳米粒子分散体的红外谱图参考图1(b)，证明了tu纳米粒子分散体和ctu纳米粒子均含有单宁酸和乌司他丁
55.实施例三：
56.本实施例与实施例二基本相同，特别之处在于：
57.在本实施例中，原料的添加次序不同，具体体现为如下步骤：
58.(1)室温下，取uti母液2.5ml，加蒸馏水稀释至25ml uti溶液。在uti溶液中加入100mg六水合硝酸铈，搅拌反应15min，随后加入125mg ta粉末，超声溶解后继续搅拌反应15min。
59.实验测试分析：
60.实施例二与三制备的ctu纳米粒子在制备上改变了原料添加的先后次序，但体系内各组分含量相同(此条件下单宁酸分子与铈离子的物质的量比为1：3.2)。根据tem图像结果来看，两例制备得到的ctu纳米粒子无明显差异，均为t
125-c
100-u
25
，nano zetasizer表征其zeta电位为-14.65
±
1.78mv，平均粒径为14.5nm，部分粒子互相团聚。结果表明ta和硝酸铈的投料顺序对反应结果无影响，侧面印证了一锅法实验操作的合理性。但是由于单宁酸的用量低，纳米粒子的粒径小。
61.实施例四：
62.本实施例与实施例二基本相同，特别之处在于：
63.在本实施例中，通过改变ta组分的用量，制备了t
250-c
100-u
25
，具体体现为如下步
骤：
64.(1)室温下，取uti母液2.5ml，加蒸馏水稀释至25ml uti溶液。取250mg ta超声溶解在25ml uti溶液中，搅拌反应15min，随后加入100mg六水合硝酸铈继续搅拌反应15min。
65.实验测试分析：
66.将ta的用量增加一倍后制备得到了t
250-c
100-u
25
(此条件下单宁酸分子与铈离子的物质的量比为1：1.6)。本实施例四制备得到的ctu纳米粒子的tem图像和粒径分布如图3所示。从纳米粒子的形貌来看，粒子呈现更规则的球形，同时具有良好的分散性，其zeta电位为-21.19
±
1.68mv，平均粒径为17.2nm。结果表明，随着单宁酸含量增加，体系中配位、氢键、静电、疏水作用的强度都可能增加，从而组装形成更大的纳米粒子，随着体系的zeta电位增大，纳米粒子的分散性增加。在组装体系中，随着单宁酸含量的增加，ctu纳米粒子的平均粒径出现先增大后减小的的趋势。随着乌司他丁用量增加，ctu纳米粒子的分散性更好，粒径分布均匀。
67.实施例五：
68.本实施例与实施例二基本相同，特别之处在于：
69.在本实施例中，通过改变ta组分的用量，制备了t
500-c
100-u
25
，具体体现为如下步骤：
70.(1)室温下，取uti母液2.5ml，加蒸馏水稀释至25ml uti溶液。取500mg ta超声溶解在25ml uti溶液中，搅拌反应15min，随后加入100mg六水合硝酸铈继续搅拌反应15min。
71.实验测试分析：
72.进一步增加单宁酸的用量制备得到t
500-c
100-u
25
(此条件下单宁酸分子与铈离子的物质的量比为1：0.8)，从图像等表征数据得出，随着单宁酸含量的进一步增加，单宁酸与铈离子的配位模式可能出现变化，但是纳米粒子依旧表现出粒径增大的趋势，纳米粒子以球形粒子团聚的形式存在，zeta电位为-17.10
±
3.58mv，平均粒径为25.8nm。
73.实施例六：
74.本实施例与实施例二基本相同，特别之处在于：
75.在本实例中，通过改变uti组分的用量，制备了t
125-c
100-u
50
，具体体现为如下步骤：
76.(1)室温下，取uti母液5ml，加蒸馏水稀释至25ml uti溶液。取125mg ta超声溶解在25ml uti溶液中，搅拌反应15min，随后加入100mg六水合硝酸铈继续搅拌反应15min。
77.实验测试分析：
78.本实施例较实施例二乌司他丁的用量增加了一倍，粒径和zeta电位的变化非常显著，t
125-c
100-u
50
的平均粒径增加到38.2nm且粒径均一性好，同时体系分散稳定性高，zeta电位为-25.90
±
1.54mv。结果表明，乌司他丁的含量增加，体系的zeta电位绝对值增大，会显著增加纳米粒子的平均粒径和粒径均一性，对体系的分散稳定性具有调控作用。
79.本发明中各所述实施例制备得到的ctu纳米粒子的zeta电位如图2所示。表征得到ctu纳米粒子表面带负电荷，zeta电位绝对值越大证明体系分散稳定性越强，同时负电荷的ctu纳米粒子易于在带有正电荷的炎症位点聚集。
80.实施例七：
81.在本实施例中，对实施例六制备得到的t
125-c
100-u
50
进行了脓毒症小鼠模型的动物实验，具体实验步骤如下：
82.(1)构建小鼠脓毒症模型
83.将6-8周龄雄性c57bl/6j小鼠，适应环境饲养一周后，随机分为4组(各5只)：pbs组(对照组)、lps组(空白组，诱导脓毒症)、uti组(诱导脓毒症后注射乌司他丁处理)、nps组(诱导脓毒症后注射ctu纳米粒子处理)。其中pbs组仅对小鼠注射生理盐水，其余三组腹腔注射200ul lps(20mg/kg)建立小鼠脓毒症模型，模拟与临床脓毒症患者初始特征相似的全身炎症反应。造模后2h，对uti组和nps组腹腔注射已知耐受剂量的同等当量uti、nps，操作结束，继续饲养于spf级饲养室的标准环境中(23℃
±
2℃、湿度50％
±
20％)，观察小鼠存活率和典型的脓毒症体征变化，总观察周期为2周。对小鼠脓毒症进行临床评分：无症状(0分)；毛发竖起或蜷缩(1分)；毛发竖起或蜷缩，轻度腹泻(2分)；对周围环境缺乏兴趣，严重腹泻(3分)；活动少，精神萎靡(4分)；恐惧反射消失(5分)。评分达到5分时，立即对小鼠实施安乐死。
84.(2)h&e染色评估组织器官病理生理形态
85.取各组小鼠心、肝、脾、肺、肾、肠组织，分别投入预先配好的4％多聚甲醛(pfa)固定液中，经不同浓度的乙醇逐级脱水，使用二甲苯透明，用石蜡包埋，切片，贴片，45℃恒温箱烘干；然后用二甲苯脱蜡，苏木素染色，1％盐酸酒精分化，1％氨水返蓝，再放入伊红染液中染色，之后再使用二甲苯透明，树脂封片，观察各组小鼠器官组织形态变化并拍照。
86.(3)免疫荧光染色评估脓毒症小鼠炎症信号通路相关因子表达
87.对所有建模后2h、6h、24h和48h的小鼠，以及观察期间濒死、2周观察期结束后的小鼠，使用1％戊巴比妥钠(50mg/kg)麻醉，眼球采血法收集小鼠血样于edta抗凝ep离心管中静置凝固后，在4℃下以3000rpm离心15min，取上清液分装，零下80℃冷冻存放，用elisa检测血清、腹腔中促炎细胞因子tnf-α及炎症信号通路相关tlr4、nf-κb标志物的表达水平。
88.图4为本实施例六制备的ctu纳米粒子的体外lps清除能力的表征。随着ctu加入到lps的鲎试剂溶液中后，通过灭活lps使得其磷酸基团与鲎试剂的特异性结合减弱，在显色基质下产生的紫红色变淡消失。
89.图5是本发明中实施例七制备的ctu纳米粒子在脓毒症小鼠模型中的应用以及对脓毒症小鼠的治疗效果。为了研究纳米粒子对lps诱导的脓毒症小鼠的治疗效果，将sd大鼠分为lps、pbs、uti、nps四组。lps组为脓毒症组，pbs组对正常小鼠注射生理盐水，uti组和nps组分别对小鼠诱导脓毒症后注射乌司他丁和ctu纳米粒子，随后观察两周。nps组和uti组的小鼠临床表现缓和，nps组的生存率达到80％，相比之下uti组不到40％，而诱导脓毒症后不进行干预的小鼠在三天内均表现出精神萎靡、丧失恐惧反应，生存率指标为零。经ctu纳米粒子处理后，所有存活的小鼠体重均恢复正常，摆脱体重减轻的脓毒症体征。结果表明，与uti相比，ctu纳米粒子对lps诱导的脓毒症的治疗效果更好，能显著提高存活率。
90.实验测试分析：
91.t
125-c
100-u
50
在脓毒症小鼠模型中有效改善了小鼠体重减轻的典型脓毒症症状，提高了存活率；对小鼠心、肝、脾、肺、肾的组织切片结果显示，经t
125-c
100-u
50
处理后，减轻了组织病变；对小鼠血清的elisa检测结果表明，t
125-c
100-u
50
可抑制tlr4/nf-κb炎症信号通路和tnf-α等炎症因子的表达，从而治疗脓毒症。
92.综上所述，本发明结合具有抗炎、抗菌、抗氧化性能的单宁酸和硝酸铈，与药物乌司他丁之间通过内在的结合亲和力，即各种相互作用，通过两种不同技术方案制备了tu纳
米粒子分散体及ctu纳米粒子，具有比单独乌司他丁增强的治疗脓毒症的效果，同时研究了通过改变单宁酸和乌司他丁组分的含量可以制备得到不同zeta电位和平均粒径的纳米分散体系。
93.上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种用于治疗脓毒症的纳米粒子分散体的制备方法，其特征在于，通过在室温且无催化剂存在的条件下，使用单宁酸粉末和乌司他丁作为原料，制备得到具有表面负电荷、可调节粒径和zeta电位的纳米粒子分散体。2.根据权利要求1所述的纳米粒子分散体的制备方法，其特征在于，所述纳米粒子分散体的制备方法为：a.取十万单位的uti溶解在蒸馏水中配置成母液待用；b.将单宁酸超声溶解在uti溶液中搅拌反应得到tu纳米粒子分散体。3.根据权利要求2所述的纳米粒子分散体的制备方法，其特征在于，当十万单位的uti配置成母液量为1ml-10ml时，单宁酸加入量为10mg-1000mg。4.基于权利要求1-3中任一项所述制备方法制备得到的纳米粒子分散体。5.基于权利要求1-3中任一项所述制备方法制备得到的纳米粒子分散体的应用，其特征在于，所述tu纳米粒子分散体直接使用，或经液氮冻干后贮存待加入蒸馏水溶解随用随配。6.一种用于治疗脓毒症的纳米粒子的制备方法，其特征在于，使用六水合硝酸铈、单宁酸粉末和乌司他丁作为原料，制备得到具有表面负电荷、可调节粒径和zeta电位的纳米粒子。7.根据权利要求6所述的纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述ctu纳米粒子的制备方法为：a.取十万单位的uti溶解在蒸馏水中配置成母液待用；b.将ta超声溶解在uti溶液中搅拌反应，随后加入六水合硝酸铈继续搅拌反应；c.将上述反应液离心处理，倒去上清液，将底部的沉淀重新分散在水中通过离心的方式水洗，除去未反应的原料；d.最后将离心得到的沉淀转移至液氮中冷冻，放入冻干机冷冻干燥，即收集到ctu纳米粒子粉末，贮存待用。8.根据权利要求7所述的纳米粒子的制备方法，其特征在于，当十万单位的uti配置成母液量为1ml-10ml时，六水合硝酸铈加入量为10mg-1000mg，单宁酸加入量为10mg-1000mg。9.基于权利要求6-8中任一项所述制备方法制备得到的纳米粒子。10.基于权利要求6-8中任一项所述制备方法制备得到的纳米粒子的应用，其特征在于，所述纳米粒子制成水溶液使用。

技术总结
本发明涉及一种用于治疗脓毒症的纳米粒子及其制备方法。通过在室温且无需催化剂存在的条件下，使用单宁酸粉末和乌司他丁作为原料，制备得到具有表面负电荷、可调节粒径和Zeta电位的纳米粒子分散体。使用六水合硝酸铈、单宁酸粉末和乌司他丁作为原料，制备得到具有表面负电荷、可调节粒径和Zeta电位的纳米粒子。与现有技术相比，本发明通过两种不同技术方案制备了TU纳米粒子分散体及CTU纳米粒子，具有比单独乌司他丁增强的治疗脓毒症的效果。果。果。


技术研发人员：张坤玺 潘宇清 曾九江 宋艳丽 刘引烽
受保护的技术使用者：上海大学
技术研发日：2023.07.11
技术公布日：2023/10/19