一种在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶及其制备方法

1.本发明涉及多肽水凝胶制备技术领域，具体涉及一种在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶及其制备方法。


背景技术：

2.水凝胶是由聚合物链交联形成的高度水合的三维网络，在生物医学、组织工程、药物输送、软机器人和传感等领域有着广泛的应用，受到了广泛的关注。可注射水凝胶是可以通过注射的方式输送到靶部位的水凝胶，由于其粘弹性和扩散性，注射水凝胶可以通过多种方式促进组织再生，从简单的机械支撑、时空控制的细胞或治疗剂递送到局部募集和调节宿主细胞以促进组织再生。目前，可注射水凝胶已被广泛地应用于局部储药、药物缓释、避免首过效应和提高患者依从性，并在治疗创伤、心血管疾病、骨修复和肿瘤等多种疾病中取得了令人鼓舞的效果。
3.然而，由于已被报道的可注射水凝胶须以成型水凝胶的形式植入体内，其可注射性能对于水凝胶材料本身流动性要求较高，因而，已开发的可注射水凝胶与周围受损组织的粘合力一般较差，大多可注射凝胶仅具有较为单一的生物活性，限制了其对于治疗部位多重促进效果。此外，强度低是可注射水凝胶最明显且不可避免的缺点，其在体内发生物理破损可能导致感染并进一步诱发炎症反应。
4.因此，开发一种可以液体形式植入动物体内并能在植入处快速原位成型，同时可根据治疗要求调节强度的生物安全性可注射水凝胶是十分有必要的。


技术实现要素：

5.为了解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶及其制备方法，水凝胶具有响应于ph、强度可调节、通过液体形态进行注射、并在生理环境中能快速原位形成水凝胶等特点，有效解决了现有可注射水凝胶技术中水凝胶机械强度低、生物安全性差以及水凝胶与受损组织粘合力较差等问题。
6.本发明解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
7.(1)在多肽两端分别修饰上巯基与马来酰亚胺的点击反应活性基团，得杂化多肽分子；然后配置成50-70mg/ml的水溶液，此时杂化多肽分子处于α-螺旋平行二聚体的状态，得α-螺旋平行二聚体水溶液；
8.(2)向步骤(1)所得α-螺旋平行二聚体水溶液中加入0.6当量的三(2-羧乙基)膦盐酸盐，混匀得混合溶液；然后在室温下聚合反应24h后加入马来酰亚胺终止反应，得刚性聚合物溶液；
9.(3)将步骤(2)所得刚性聚合物溶液调节ph值至7.5，在室温下静置或以溶液形态注射到体内，得在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶。
10.进一步，步骤(1)中，多肽为switcch多肽或p9sn多肽。
11.进一步，switcch多肽的氨基酸序列如seq id no.1所示，序列为：enqsleqensqlkqeisqleqeiqqlhyg；p9sn多肽的氨基酸序列如seq id no.2所示，序列为：enqsleqknsqlkqeisqleqeiqqleyg。
12.进一步，步骤(1)中，杂化多肽分子为mal-switcch-cys或mal-p9sn-cys。
13.进一步，杂化多肽分子mal-switcch-cys，其化学分子式为c
157h244n44o60
s，具体为在switcch多肽序列两端分别修饰点击反应活性基团马来酰亚胺与巯基(通过半胱氨酸引入)，其结构如图1所示。
14.进一步，mal-switcch-cys分子通过以下方法制备得到：
15.s1、采用美国cem liberty blue全自动多肽仪进行合成，合成当量为0.25mmol，根据预设序列计算出各种氨基酸的用量，称取天冬酰胺2.51g溶解在21ml n’n二甲基甲酰胺中，称取半胱氨酸1.88g溶解在16ml n’n二甲基甲酰胺中，称取谷氨酰胺8.43g溶解在69ml n’n二甲基甲酰胺中，称取谷氨酸4.52g溶解在53ml n’n二甲基甲酰胺中，称取甘氨酸0.36g溶解在6ml n’n二甲基甲酰胺中，称取组氨酸0.58g溶解在6ml n’n二甲基甲酰胺中，称取异亮氨酸1.14g溶解在16ml n’n二甲基甲酰胺中，称取亮氨酸2.62g溶解在37ml n’n二甲基甲酰胺中，称取赖氨酸1.04g溶解在11ml n’n二甲基甲酰胺中，称取丝氨酸2.46g溶解在32ml n’n二甲基甲酰胺中，称取酪氨酸0.56g溶解在6ml n’n二甲基甲酰胺中；在超声中使多肽溶解，溶解后将各试剂管安装至仪器上，另称取14.21g 2-肟氰乙酸乙酯固体溶解在100ml n’n二甲基甲酰胺中，配制成2-肟氰乙酸乙酯溶液；另取7.8ml n,n-二异丙基碳二亚胺溶液混合在92.2ml n’n二甲基甲酰胺中，配置成dic溶液；量取168ml 20wt％哌啶溶液作为脱保护溶剂；最后称取0.367mg rink amide am树脂放置在反应釜内；cem liberty blue全自动多肽仪对于多肽合成的步骤为：溶胀树脂、加入脱保护溶剂、开启微波加热至70℃、除去脱保护溶剂、清洗3遍、加入对应氨基酸、加入偶联剂、开启微波加热至70℃反应110s或230s、清洗3遍为一个氨基酸耦合过程；序列内共30个氨基酸、此过程重复30次后固相合成结束；
16.s2、向s1中固相合成结束后的树脂内加入0.45g马来酰亚胺丁酸、0.38g苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯、0.435ml n,n-二异丙基乙胺和8ml n’n二甲基甲酰胺，在室温下旋转反应1h，重复进行2次；
17.s3、将s2所得树脂中加入10ml裂解液，然后放置在旋转仪上裂解2h，再加入30ml无水乙醚充分混合，在8000rpm条件下离心5min，重复离心3次，得白色杂化多肽粗产物；
18.s4、将s3所得白色杂化多肽粗产物用10mg/ml的混合溶剂溶解，然后采用液相提纯，其中流动相a为乙腈，流动相b为水含0.3vt％三氟乙酸，洗脱梯度为水80％-20％、乙腈20％-80％，洗脱30min，并在17min接收纯产物；
19.s5、将s4所得纯产物旋蒸出去乙腈和水分，并保留20ml水，置于液氮中降温，在-80℃和1.0pa真空度条件下冻干72h，得mal-switcch-cys纯产物粉末。
20.进一步，步骤s3中，裂解液中含有9.25ml三氟乙酸、0.25ml水、0.25ml1,2-乙二硫醇和0.25ml三异丙基硅烷。
21.进一步，步骤s4中，混合溶剂由水和乙腈按体积比6:4混合而成的。
22.进一步，杂化多肽分子mal-p9sn-cys，其化学分子式为c
157h249n43o60
s，具体为p9sn多肽序列两端分别修饰点击反应活性基团马来酰亚胺与巯基(通过半胱氨酸引入)，其结构如图2所示。
23.进一步，杂化多肽分子mal-p9sn-cys通过以下方法制备得到：
24.s1、采用美国cem liberty blue全自动多肽仪进行合成，合成当量为0.25mmol，根据预设序列计算出各种氨基酸的用量，称取天冬酰胺2.51g溶解在21ml n’n二甲基甲酰胺中，称取半胱氨酸1.88g溶解在16ml n’n二甲基甲酰胺中，称取谷氨酰胺8.43g溶解在69ml n’n二甲基甲酰胺中，称取谷氨酸4.09g溶解在48ml n’n二甲基甲酰胺中，称取甘氨酸0.36g溶解在6ml n’n二甲基甲酰胺中，称取组氨酸0.58g溶解在6ml n’n二甲基甲酰胺中，称取异亮氨酸1.14g溶解在16ml n’n二甲基甲酰胺中，称取亮氨酸2.62g溶解在37ml n’n二甲基甲酰胺中，称取赖氨酸1.97g溶解在20ml n’n二甲基甲酰胺中，称取丝氨酸2.46g溶解在32ml n’n二甲基甲酰胺中，称取酪氨酸0.56g溶解在6ml n’n二甲基甲酰胺中；在超声中使多肽溶解，溶解后将各试剂管安装至仪器上，另称取14.21g 2-肟氰乙酸乙酯固体溶解在100ml n’n二甲基甲酰胺中，配制成2-肟氰乙酸乙酯溶液；另取7.8ml n,n-二异丙基碳二亚胺溶液混合在92.2ml n’n二甲基甲酰胺中，配置成dic溶液；量取168ml 20wt％哌啶溶液作为脱保护溶剂；最后称取0.367mg rink amide am树脂放置在反应釜内；cem liberty blue全自动多肽仪对于多肽合成的步骤为：溶胀树脂、加入脱保护溶剂、开启微波加热至70℃、除去脱保护溶剂、清洗3遍、加入对应氨基酸、加入偶联剂、开启微波加热至70℃反应110s或230s、清洗3遍为一个氨基酸耦合过程；序列内共30个氨基酸、此过程重复30次后固相合成结束；
25.s2、向s1中固相合成结束后的树脂内加入0.45g马来酰亚胺丁酸、0.38g苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯、0.435ml n,n-二异丙基乙胺和8ml n’n二甲基甲酰胺，在室温下旋转反应1h，重复进行2次；
26.s3、将s2所得树脂中加入10ml裂解液，然后放置在旋转仪上裂解2h，再加入30ml无水乙醚充分混合，在8000rpm条件下离心5min，重复离心3次，得白色杂化多肽粗产物；
27.s4、将s3所得白色杂化多肽粗产物用10mg/ml的混合溶剂溶解，然后采用液相提纯，其中流动相a为乙腈，流动相b为水含0.3vt％三氟乙酸，洗脱梯度为水80％-20％、乙腈20％-80％，洗脱30min，并在17min接收纯产物；
28.s5、将s4所得纯产物旋蒸出去乙腈和水分，并保留20ml水，置于液氮中降温，在-80℃和1.0pa真空度条件下冻干72h，得mal-p9sn-cys纯产物粉末。
29.进一步，步骤s3中，裂解液中含有9.25ml三氟乙酸、0.25ml水、0.25ml1,2-乙二硫醇和0.25ml三异丙基硅烷。
30.进一步，步骤(1)中，配置成60mg/ml的水溶液。
31.进一步，将步骤(2)所得刚性聚合物溶液置于去离子水中透析24h，冻干，得白色刚性聚合物粉。
32.采用上述在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶的制备方法制得的在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶。
33.本发明具有以下有益效果：
34.1、本发明首先在多肽上接枝上马来酰亚胺和半胱氨酸形成杂化多肽，配置成水溶液后杂化多肽处于α-螺旋平行二聚体的状态，其在酸性条件下(ph 4)通过首尾共价聚合形成刚性聚合物；通过调节环境ph至中性可以促使刚性聚合物一分为二形成能发生相互交缠的多肽柔性链，从而形成水凝胶网络，如图3所示。且该多肽分子可被替换为其他具有响应性能的α-螺旋二聚体多肽，而不仅局限于switcch、p9sn；多肽是通过马来酰亚胺与半胱氨
酸上的巯基之间的点击反应实现多肽的首尾共价聚合，该过程可替换为其他形式的分子间共价缩合方式实现二聚体之间的首尾相接，从而形成刚性聚合物，如图4所示。同时，水凝胶具有响应于ph、强度可调节、通过液体形态进行注射、并在生理环境中能快速原位形成水凝胶等特点，有效解决了现有技术中强度低、生物安全性差以及水凝胶与受损组织粘合力较差等问题。
35.2、本发明开发了一种可以液体形式注射至体内的水凝胶，该水凝胶于室温下缓慢成型，而升温能够显著加速其溶液-水凝胶的转化进程，因此，水凝胶溶液植入体内后在体温的加热作用下仅在5分钟内即可原位成型。
36.3、本发明在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶不仅具有良好的可注射性，还可以通过在体内原位成胶的过程与其所接触的组织产生黏附。且水凝胶的强度可以通过浓度在大范围内进行调节，以适应不同组织或器官的要求，能改善传统可注射水凝胶强度不高的不足。多肽水凝胶的前体刚性聚合物溶液在高浓度时仍是液体状态，可以通过注射在体内原位形成高强度的水凝胶；也具有较高生物安全性及良好的组织相容性。
37.4、本发明的在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶的前体为刚性聚合物冻干粉末，便于长期储存以及远距离运输。
附图说明
38.图1为杂化多肽分子mal-switcch-cys的结构示意图；
39.图2为杂化多肽分子mal-p9sn-cys的结构示意图；
40.图3为多肽水凝胶柔性链交缠示意图；
41.图4为形成刚性聚合物的示意图；
42.图5为杂化多肽分子mal-switcch-cys质谱结果示意图；
43.图6为杂化多肽分子mal-switcch-cys处于α-螺旋平行二聚体的状态的示意图；
44.图7为刚性聚合物溶液的ph调节至7.5后形成水凝胶以及水凝胶的流变结果；
45.图8为调节ph至中性后在小鼠体内快速形成水凝胶的示意图。
具体实施方式
46.以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
47.实施例1
48.一种在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶，其制备方法包括以下步骤：
49.(1)在switcch多肽两端分别修饰上巯基与马来酰亚胺的点击反应活性基团，得杂化多肽分子mal-switcch-cys，其质谱结果如图5所示；然后配置成60mg/ml的水溶液，此时杂化多肽分子处于α-螺旋平行二聚体的状态，如图6所示，得α-螺旋平行二聚体水溶液；
50.(2)向步骤(1)所得mal-switcch-cys杂化多肽平行二聚体水溶液中加入0.6当量的三(2-羧乙基)膦盐酸盐，混匀得混合溶液；然后在室温下聚合反应24h后加入马来酰亚胺终止反应，得刚性聚合物溶液；
51.(3)将步骤(2)所得刚性聚合物溶液调节ph值至7.5，室温下静置2h，得在体内快速
原位成型的可注射多肽水凝胶，该过程即流变结果如图7所示。
52.其中，杂化多肽分子mal-switcch-cys，其化学分子式为c
157h244n44o60
s，具体为在switcch多肽序列两端分别修饰点击反应活性基团马来酰亚胺与巯基(通过半胱氨酸引入)，其结构如图1所示。
53.步骤(1)中，杂化多肽分子mal-switcch-cys通过以下方法制备得到：
54.s1、采用美国cem liberty blue全自动多肽仪进行合成，合成当量为0.25mmol，根据预设序列计算出各种氨基酸的用量，称取天冬酰胺2.51g溶解在21ml n’n二甲基甲酰胺中，称取半胱氨酸1.88g溶解在16ml n’n二甲基甲酰胺中，称取谷氨酰胺8.43g溶解在69ml n’n二甲基甲酰胺中，称取谷氨酸4.52g溶解在53ml n’n二甲基甲酰胺中，称取甘氨酸0.36g溶解在6ml n’n二甲基甲酰胺中，称取组氨酸0.58g溶解在6ml n’n二甲基甲酰胺中，称取异亮氨酸1.14g溶解在16ml n’n二甲基甲酰胺中，称取亮氨酸2.62g溶解在37ml n’n二甲基甲酰胺中，称取赖氨酸1.04g溶解在11ml n’n二甲基甲酰胺中，称取丝氨酸2.46g溶解在32ml n’n二甲基甲酰胺中，称取酪氨酸0.56g溶解在6ml n’n二甲基甲酰胺中；在超声中使多肽溶解，溶解后将各试剂管安装至仪器上，另称取14.21g 2-肟氰乙酸乙酯固体溶解在100ml n’n二甲基甲酰胺中，配制成2-肟氰乙酸乙酯溶液；另取7.8ml n,n-二异丙基碳二亚胺溶液混合在92.2ml n’n二甲基甲酰胺中，配置成dic溶液；量取168ml 20wt％哌啶溶液作为脱保护溶剂；最后称取0.367mg rink amide am树脂放置在反应釜内；cem liberty blue全自动多肽仪对于多肽合成的步骤为：溶胀树脂、加入脱保护溶剂、开启微波加热至70℃、除去脱保护溶剂、清洗3遍、加入对应氨基酸、加入偶联剂、开启微波加热至70℃反应110s或230s、清洗3遍为一个氨基酸耦合过程；序列内共30个氨基酸、此过程重复30次后固相合成结束；
55.s2、向s1中固相合成结束后的树脂内加入0.45g马来酰亚胺丁酸、0.38g苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯、0.435ml n,n-二异丙基乙胺和8ml n’n二甲基甲酰胺，在室温下旋转反应1h，重复进行2次；
56.s3、将s2所得树脂中加入10ml裂解液，然后放置在旋转仪上裂解2h，再加入30ml无水乙醚充分混合，在8000rpm条件下离心5min，重复离心3次，得白色杂化多肽粗产物；裂解液中含有9.25ml三氟乙酸、0.25ml水、0.25ml 1,2-乙二硫醇和0.25ml三异丙基硅烷；
57.s4、将s3所得白色杂化多肽粗产物用10mg/ml的混合溶剂溶解，然后采用液相提纯，其中流动相a为乙腈，流动相b为水含0.3vt％三氟乙酸，洗脱梯度为水80％-20％、乙腈20％-80％，洗脱30min，并在17min接收纯产物；混合溶剂由水和乙腈按体积比6:4混合而成的；
58.s5、将s4所得纯产物旋蒸出去乙腈和水分，并保留20ml水，置于液氮中降温，在-80℃和1.0pa真空度条件下冻干72h，得mal-switcch-cys纯产物粉末。
59.将步骤(2)所得刚性聚合物溶液置于去离子水中透析24h，冻干，得白色刚性聚合物粉；将该粉末以去离子水溶解并将ph调节至7.5后注射至小鼠皮下，2分钟内水凝胶成型，5分钟内即可得到稳定的胶体，如图8所示。
60.实施例2
61.一种在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶，其制备方法包括以下步骤：
62.(1)在p9sn多肽两端分别修饰上巯基与马来酰亚胺的点击反应活性基团，得杂化多肽分子mal-p9sn-cys；然后配置成60mg/ml的水溶液，此时杂化多肽分子处于α-螺旋平行
二聚体的状态，得α-螺旋平行二聚体水溶液；
63.(2)向步骤(1)所得杂化多肽平行二聚体水溶液中加入0.6当量的三(2-羧乙基)膦盐酸盐，混匀得混合溶液；然后在室温下聚合反应24h后加入马来酰亚胺终止反应，得刚性聚合物溶液；
64.(3)将步骤(2)所得刚性聚合物溶液调节ph值至7.5，室温下静置2h，得在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶。
65.其中，步骤(1)中，杂化多肽分子mal-p9sn-cys通过以下方法制备得到：
66.s1、采用美国cem liberty blue全自动多肽仪进行合成，合成当量为0.25mmol，根据预设序列计算出各种氨基酸的用量，称取天冬酰胺2.51g溶解在21ml n’n二甲基甲酰胺中，称取半胱氨酸1.88g溶解在16ml n’n二甲基甲酰胺中，称取谷氨酰胺8.43g溶解在69ml n’n二甲基甲酰胺中，称取谷氨酸4.09g溶解在48ml n’n二甲基甲酰胺中，称取甘氨酸0.36g溶解在6ml n’n二甲基甲酰胺中，称取组氨酸0.58g溶解在6ml n’n二甲基甲酰胺中，称取异亮氨酸1.14g溶解在16ml n’n二甲基甲酰胺中，称取亮氨酸2.62g溶解在37ml n’n二甲基甲酰胺中，称取赖氨酸1.97g溶解在20ml n’n二甲基甲酰胺中，称取丝氨酸2.46g溶解在32ml n’n二甲基甲酰胺中，称取酪氨酸0.56g溶解在6ml n’n二甲基甲酰胺中；在超声中使多肽溶解，溶解后将各试剂管安装至仪器上，另称取14.21g 2-肟氰乙酸乙酯固体溶解在100ml n’n二甲基甲酰胺中，配制成2-肟氰乙酸乙酯溶液；另取7.8ml n,n-二异丙基碳二亚胺溶液混合在92.2ml n’n二甲基甲酰胺中，配置成dic溶液；量取168ml 20wt％哌啶溶液作为脱保护溶剂；最后称取0.367mg rink amide am树脂放置在反应釜内；cem liberty blue全自动多肽仪对于多肽合成的步骤为：溶胀树脂、加入脱保护溶剂、开启微波加热至70℃、除去脱保护溶剂、清洗3遍、加入对应氨基酸、加入偶联剂、开启微波加热至70℃反应110s或230s、清洗3遍为一个氨基酸耦合过程；序列内共30个氨基酸、此过程重复30次后固相合成结束；
67.s2、向s1中固相合成结束后的树脂内加入0.45g马来酰亚胺丁酸、0.38g苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯、0.435ml n,n-二异丙基乙胺和8ml n’n二甲基甲酰胺，在室温下旋转反应1h，重复进行2次；
68.s3、将s2所得树脂中加入10ml裂解液，然后放置在旋转仪上裂解2h，再加入30ml无水乙醚充分混合，在8000rpm条件下离心5min，重复离心3次，得白色杂化多肽粗产物；裂解液中含有9.25ml三氟乙酸、0.25ml水、0.25ml 1,2-乙二硫醇和0.25ml三异丙基硅烷；
69.s4、将s3所得白色杂化多肽粗产物用10mg/ml的混合溶剂溶解，然后采用液相提纯，其中流动相a为乙腈，流动相b为水含0.3vt％三氟乙酸，洗脱梯度为水80％-20％、乙腈20％-80％，洗脱30min，并在17min接收纯产物；
70.s5、将s4所得纯产物旋蒸出去乙腈和水分，并保留20ml水，置于液氮中降温，在-80℃和1.0pa真空度条件下冻干72h，得mal-switcch-cys纯产物粉末。
71.以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在多肽两端分别修饰上巯基与马来酰亚胺的点击反应活性基团，得杂化多肽分子；然后配置成50-70mg/ml的水溶液，此时杂化多肽分子处于α-螺旋平行二聚体的状态，得α-螺旋平行二聚体水溶液；(2)向步骤(1)所得α-螺旋平行二聚体水溶液中加入0.6当量的三(2-羧乙基)膦盐酸盐，混匀得混合溶液；然后在室温下聚合反应24h后加入马来酰亚胺终止反应，得刚性聚合物溶液；(3)将步骤(2)所得刚性聚合物溶液调节ph值至7.5，在室温下静置或以溶液形态注射到体内，得在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶。2.如权利要求1所述的在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述多肽为switcch多肽或p9sn多肽。3.如权利要求1所述的在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶的制备方法，其特征在于，所述switcch多肽的氨基酸序列如seq id no.1所示，序列为：enqsleqensqlkqeisqleqeiqqlhyg；所述p9sn多肽的氨基酸序列如seq id no.2所示，序列为：enqsleqknsqlkqeisqleqeiqqleyg。4.如权利要求1所述的在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述杂化多肽分子为mal-switcch-cys或mal-p9sn-cys。5.如权利要求1所述的在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，配置成60mg/ml的水溶液。6.如权利要求1所述的在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶的制备方法，其特征在于，将步骤(2)所得刚性聚合物溶液置于去离子水中透析24h，冻干，得白色刚性聚合物粉。7.权利要求1-6任一项所述的在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶的制备方法制得的在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶。

技术总结
本发明公开了一种在体内快速原位成型的可注射多肽水凝胶及其制备方法，涉及多肽水凝胶制备技术领域，其制备方法包括以下步骤：(1)在多肽两端分别修饰上巯基与马来酰亚胺的点击反应活性基团，得杂化多肽分子；配置成水溶液，得α-螺旋平行二聚体水溶液；(2)加入三(2-羧乙基)膦盐酸盐，混匀得混合溶液；然后在室温下聚合反应，得刚性聚合物溶液；(3)调节pH值，在室温下静置或注射到体内，得水凝胶。本发明的水凝胶具有pH响应、机械强度可调节、通过液体形态进行注射、并在生理环境中能快速原位形成水凝胶等特点，有效解决了现有可注射水凝胶技术中水凝胶机械强度低、生物安全性差以及水凝胶与受损组织粘合力较差等问题。凝胶与受损组织粘合力较差等问题。


技术研发人员：吴冬冬 韦玥婷 高占山 陈天姿 刘印
受保护的技术使用者：四川大学
技术研发日：2023.07.20
技术公布日：2023/10/19