一种连翘叶中连翘苷含量的检测方法及连翘苷提取方法与流程

1.本发明属于连翘苷提取与检测技术领域，具体涉及一种连翘叶中连翘苷含量检测方法及连翘苷提取方法。


背景技术：

2.连翘，木樨科连翘属灌木，枝开展或下垂，棕色或淡黄褐色，叶通常为单叶，叶片呈卵形或椭圆形，先端锐尖，叶缘上面呈深绿色，下面为淡黄绿色；花通常单生或2至数朵着生于叶腋，花萼绿色，裂片呈长圆形；
3.连翘叶是整株连翘的干燥叶片部分，临床上除了连翘果实、花、根茎外，连翘叶也能入药，其主要功效和作用是清热解毒。连翘叶性微寒、味苦，归心经、肺经、小肠经，苦能通泄，寒能清热泻火。功擅清热泻火解毒、生津止渴、消肿散结。
4.传统的含量测定方法通常是将待检测样品采用甲醇超声提取法，然后将提取的溶液进行检测，但仅仅依靠甲醇超声提取不能完全将连翘酯苷类的相关成分，进而影响连翘苷的检测结果，因此有待改进。


技术实现要素：

5.本发明的目的是：旨在提供一种连翘叶中连翘苷含量检测方法及连翘苷提取方法，操作简单实用，有利于提高连翘叶中连翘苷含量的检测效率，同时还能够运用到工厂化的生产中，利用高效液相色谱仪鉴定的方法，准确的将连翘苷的含量进行检测。
6.为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：
7.一种连翘叶中连翘苷含量的检测方法，包括：
8.步骤100：将连翘苷提取物5mg溶解于95％甲醇，将不溶物过滤后加甲醇持续溶解，此过程在超声环境中进行；
9.步骤200：将溶液中加入氯仿水浴回流提取2-3次，然后水浴蒸干重新加入甲醇溶液进行溶解，将原溶液稀释成每1ml溶液含原料连翘苷0.1-0.5mg/ml的原料药连翘苷待检测液；
10.步骤300：将待检测液通过微孔滤膜过滤后至室温称重，若注入液相色谱仪，测量连翘苷峰面积，按照外标法计算得连翘苷含量；
11.液相色谱仪色谱及系统调节：键合氨基柱(4.6mm
×
25mm,10μm)，流动相为氯仿：甲醇＝6：1，检测波长为277nm，流速1.0ml/min，进样量20μl。
12.所述步骤200中氯仿水浴回流提取时，氯仿的容量为20ml。
13.步骤:110：将连翘叶进行处理：将连翘叶进行清洗和烘干，然后将烘干后的连翘叶进行研磨得到80-100目的连翘叶粉末；
14.步骤120：将50％-70％的乙醇溶液加热至50℃时加入连翘叶粉末，然后持续对乙醇溶液加温，使温度保持在60-70℃；
15.步骤130：在步骤二的基础上调节溶液ph值，使ph＝5-6时降低混合温度使温度稳
定在40-50摄氏度，然后加入复合酶进行酶解得到连翘酶解物；
16.步骤140：在步骤三提取的连翘酶解物在超声波的作用下进行提取60-80min；
17.步骤150：将提取的溶液加入氯仿后加热回流萃取2-3次，过滤浓缩干燥得到连翘苷提取物。
18.步骤121：加入连翘叶粉末后进行搅拌，步骤130和步骤140均在步骤121的基础上持续搅拌，且步骤130和步骤140的搅拌速度大于步骤121的搅拌速度。
19.步骤150加热回流的温度为：80-100℃，得到萃取液中减压浓缩时降温至室温。
20.步骤141：将提取也冷却至室温后静置分层，提取液进入到步骤150中。
21.将步骤140中的残渣再加入乙醇浸泡超声波加热静置过滤，然后将滤液添加入步骤150中。
22.本发明操作简单实用，有利于提高连翘叶中连翘苷含量的检测效率，同时还能够运用到工厂化的生产中，利用高效液相色谱仪鉴定的方法，准确的将连翘苷的含量进行检测。
具体实施方式
23.为了使本领域的技术人员可以更好地理解本发明，下面结合实施例对本发明技术方案进一步说明。
24.本发明的一种连翘叶中连翘苷含量的检测方法，包括板框压滤机本体(1)，其特征在于：
25.步骤100：首先提取连翘叶中的连翘苷，然后将连翘苷提取物5mg溶解于95％甲醇，将不溶物过滤后加甲醇持续溶解，此过程在超声环境中进行；
26.步骤:110：将连翘叶进行处理：将连翘叶进行清洗和烘干，然后将烘干后的连翘叶进行研磨得到80-100目的连翘叶粉末；
27.步骤120：将50％-70％的乙醇溶液加热至50℃时加入连翘叶粉末，然后持续对乙醇溶液加温，使温度保持在60-70℃；
28.步骤121：加入连翘叶粉末后进行搅拌，步骤130和步骤140均在步骤121的基础上持续搅拌，且步骤130和步骤140的搅拌效率大于步骤121的搅拌效率。
29.步骤130：在步骤二的基础上调节溶液ph值，使ph＝5-6时降低混合温度使温度稳定在40-50℃，然后加入复合酶进行酶解得到连翘酶解物；
30.步骤140：在步骤三提取的连翘酶解物在超声波的作用下进行提取60-80min；
31.步骤141：将提取也冷却至室温后静置分层，残渣再加入乙醇浸泡超声波加热静置过滤，然后将滤液添加入步骤150中。
32.步骤150：将提取的溶液加入氯仿后加热回流萃取2-3次，回流的温度：80-100℃，得到萃取液中减压浓缩时降温至室温，过滤浓缩干燥得到连翘苷提取物。
33.步骤200：将溶液中加入氯仿水浴回流提取2-3次，每次加入氯仿的容量为20ml。然后水浴蒸干重新加入甲醇溶液进行溶解，将原溶液稀释成每1ml溶液含原料连翘苷0.1-0.5mg/ml的原料药连翘苷待检测液；
34.步骤300：将待检测液通过微孔滤膜过滤后至室温称重，若注入液相色谱仪，液相色谱仪色谱及系统调节：键合氨基柱(4.6mm
×
25mm,10μm)，流动相为氯仿：甲醇＝6：1，检测
波长为277nm，流速1.0ml/min，进样量20μl。测量连翘苷峰面积，按照外标法计算得连翘苷含量；
35.本发明操作简单实用，有利于提高连翘叶中连翘苷含量的检测效率，同时还能够运用到工厂化的生产中，利用高效液相色谱仪鉴定的方法，准确的将连翘苷的含量进行检测。
36.溶液制备：
37.精密称取连翘苷标准样品加入到甲醇中，超声溶解后稀释至每1ml含连翘苷0.1-0.5mg的连翘苷对照组溶液，同理取2-3份；
38.精密称取待测连翘苷样品加入甲醇中，超声溶解后稀释至每1ml含连翘苷0.1-0.5mg的连翘苷待检测溶液，同理取2-3份；
39.然后将连翘苷对照组溶液取10-20μl注入液相色谱仪内部调节检测系数，调节好后再分别对剩下的连翘苷对照组溶液和连翘苷待检测溶液分别注入液相色谱仪进行检测，最后连翘苷待检测溶液的检测结果差异不大时则表示该连翘苷的含量检测可取，若几组连翘苷待检测溶液检测结果差异过大则重复试验，而连翘苷对照组溶液能够检测液相色谱仪具体的系统数据，同时还能够与连翘苷待检测溶液进行对比。
40.上述实施例仅示例性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

技术特征：
1.一种连翘叶中连翘苷含量的检测方法，其特征在于，包括：步骤100：将连翘苷提取物5mg溶解于95％甲醇，将不溶物过滤后加甲醇持续溶解，此过程在超声环境中进行；步骤200：将溶液中加入氯仿水浴回流提取2-3次，然后水浴蒸干重新加入甲醇溶液进行溶解，将原溶液稀释成每1ml溶液含原料连翘苷0.1-0.5mg/ml的原料药连翘苷待检测液；步骤300：将待检测液通过微孔滤膜过滤后至室温称重，若注入液相色谱仪，测量连翘苷峰面积，按照外标法计算得连翘苷含量。2.根据权利要求1所述的一种连翘叶中连翘苷含量的检测方法，其特征在于：液相色谱仪色谱及系统调节：键合氨基柱(4.6mm
×
25mm,10μm)，流动相为氯仿：甲醇＝6：1，检测波长为277nm，流速1.0ml/min，进样量20μl。3.根据权利要求1所述的一种连翘叶中连翘苷含量的检测方法，其特征在于：所述步骤200中氯仿水浴回流提取时，氯仿的容量为20ml。4.根据权利要求1所述的一种连翘叶中连翘苷提取方法，其特征在于：步骤:110：将连翘叶进行处理：将连翘叶进行清洗和烘干，然后将烘干后的连翘叶进行研磨得到80-100目的连翘叶粉末；步骤120：将50％-70％的乙醇溶液加热至50℃时加入连翘叶粉末，然后持续对乙醇溶液加温，使温度保持在60-70℃；步骤130：在步骤二的基础上调节溶液ph值，使ph＝5-6时降低混合温度使温度稳定在40-50摄氏度，然后加入复合酶进行酶解得到连翘酶解物；步骤140：在步骤三提取的连翘酶解物在超声波的作用下进行提取60-80min；步骤150：将提取的溶液加入氯仿后加热回流萃取2-3次，过滤浓缩干燥得到连翘苷提取物。5.根据权利要求1所述的一种连翘叶中连翘苷提取方法，其特征在于：步骤121：加入连翘叶粉末后进行搅拌，步骤130和步骤140均在步骤121的基础上持续搅拌，且步骤130和步骤140的搅拌速度大于步骤121的搅拌速度。6.根据权利要求1所述的一种连翘叶中连翘苷提取方法，其特征在于：步骤150加热回流的温度为：80-100℃，得到萃取液中减压浓缩时降温至室温。7.根据权利要求1所述的一种连翘叶中连翘苷提取方法，其特征在于：步骤141：将提取也冷却至室温后静置分层，提取液进入到步骤150中。8.根据权利要求1所述的一种连翘叶中连翘苷提取方法，其特征在于：将步骤140中的残渣再加入乙醇浸泡超声波加热静置过滤，然后将滤液添加入步骤150中。

技术总结
本发明属于连翘苷提取与检测技术领域，具体涉及一种连翘叶中连翘苷含量检测方法及连翘苷提取方法，包括：步骤100：将连翘苷提取物5mg溶解于95％甲醇，将不溶物过滤后加甲醇持续溶解，此过程在超声环境中进行；步骤200：将溶液中加入氯仿水浴回流提取2-3次，然后水浴蒸干重新加入甲醇溶液进行溶解，将原溶液稀释成每1ml溶液含原料连翘苷0.1-0.5mg/ml的原料药连翘苷待检测液；步骤300：将待检测液通过微孔滤膜过滤后至室温称重，若注入液相色谱仪，测量连翘苷峰面积，按照外标法计算得连翘苷含量；本发明操作便捷实用，能够提高连翘苷检测时的准确性和效率。时的准确性和效率。


技术研发人员：王海萍 周林 武旭辉 张彩霞
受保护的技术使用者：陕西一方平康制药有限公司
技术研发日：2023.07.26
技术公布日：2023/10/19