一种从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统及方法

1.本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统及方法。


背景技术：

2.忍冬叶为忍冬科忍冬属植物忍冬的叶子，它作为忍冬的非药用部位，不仅产量高，而且具有清热解毒、疏风通络之功效。忍冬叶中含有黄酮类、有机酸类、环烯醚萜类、挥发油等组分，与忍冬花及忍冬藤的活性成分相似，甚至要优于花及藤。现代研究表明，忍冬叶具有抗菌、抗氧化、保肝等活性。目前，从忍冬叶中分离出的活性成分有木犀草素、槲皮素、异绿原酸c、木犀草苷、忍冬苷等。其中，木犀草苷(luteoloside，c
21h20o11
，cas号：5373-11-5)及忍冬苷(lonicerin，c
27h30o15
，cas号：25694-72-8)具有优良的抗炎、抑菌、抗氧化等功效。
3.目前，忍冬叶的提取常用溶剂提取法，根据忍冬叶中各组分在溶剂中的溶解性，选择对木犀草苷及忍冬苷等活性成分溶解度大、对不需要的成分溶解度小的溶剂，具体包括浸渍法、加热回流法、超声波法及闪氏提取法；在忍冬叶提取后，对于天然产物活性物质的分离纯化，主要采用溶剂萃取法、碱提酸沉法、柱层析法、大孔树脂吸附法、高速逆流色谱法等。
4.公开号为cn115531918a的专利公开了一种分离提取植物有效成分的装置，包括支架总成，支架总成的内侧上方固定连接有粉碎箱，粉碎箱内开设有水平通道，水平通道内侧底部滚筒配合有粉碎轮总成，粉碎箱的上方连接有往复驱动机构，粉碎轮总成通过往复驱动机构自转和沿水平通道移动，水平通道的两相对斜面上分别交替滑动连接有压板总成，压板总成在竖直平面内移动且还通过往复驱动机构驱动，粉碎箱的底部出料口连通有加压过滤箱，通过加压过滤箱滤出植物的有效成分。该装置能够充分粉碎植物残渣，并通过加压浸泡以及加压过滤加快对残渣进行有效成分的提取，但为了忍冬叶的下一步分离纯化，还需要增设储液罐、浓缩设备及连接管路。公开号为cn103830306b的专利公开了一种忍冬叶有效提取物的制备方法，包括如下步骤：取忍冬叶，用乙醇溶液回流提取，滤过，合并滤液，减压浓缩；浓缩液调ph值至5.0，过滤；滤液以3bv/h的速度加于预处理好的径高比为1∶5的ls-300b型大孔树脂柱上，调节纯水ph至5.0，洗至洗脱液澄清，再用7倍柱床体积的60％的乙醇以2bv/h的流速洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩、干燥、粉碎，得忍冬叶有效提取物；但该有效提取物含总黄酮和总酚酸，并未有效分离。文献《高速逆流色谱法分离忍冬叶中木犀草素-7-o-β-d-葡萄糖苷和忍冬苷》中公开了忍冬叶提取步骤为：称取忍冬叶(40℃烘干至恒重、粉碎过60目筛)，用10倍量80％甲醇浸泡24h，70℃水浴回流提取(2h
×
4)，减压浓缩至无醇味，用等体积石油醚脱除脂溶性成分，用正丁醇(30ml
×
3)萃取，得到正丁醇相浸膏，即忍冬叶粗提物；对于忍冬叶粗提物采用tlc(薄层色谱)和hplc(高效液相色谱)法测定分配系数，以正己烷∶正丁醇∶甲醇∶水(1∶4∶2∶6)为溶剂体系，溶解忍冬叶粗提物35.2mg作为样品，分离得到目标化合物1(木犀草素-7-o-β-d-葡萄糖苷)7.9mg和化合物2(忍冬苷)5.6mg，化
合物1、2的保留时间分别约65min和77min，但两者出峰位置没有完全分离。
5.从上述方法可见，对于天然产物复杂体系的提取与分离，需要较多设备联用以及大量溶剂消耗，容易造成原材料的浪费，且效率低。因此，开发出适合工业生产的忍冬叶提取分离纯化系统是十分重要的，不仅可以有效地利用植物资源，也可为利用天然活性物质木犀草苷及忍冬苷提供了良好的物质基础。


技术实现要素：

6.基于现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统，依次通过提取浓缩、树脂柱层析、硅胶柱色谱、凝胶柱层析及重结晶处理，分离出高纯度的木犀草苷及忍冬苷；本发明还公开了利用该提取分离纯化系统从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的方法。
7.为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
8.一种从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统，包括提取单元、分离单元及纯化单元，所述提取单元包括提取浓缩釜、提取溶剂罐、冷凝回流器、溶剂回收组件、充氮气组件及减压组件；所述分离单元包括依次设置的第一配液罐、树脂柱层析装置、第一洗脱液弃液罐、第一洗脱液收集罐及第一浓缩干燥器；所述纯化单元包括初级纯化组件及终级纯化组件，所述初级纯化组件包括依次设置的第二配液罐、硅胶柱色谱装置、第二洗脱液弃液罐、第二洗脱液收集罐及第二浓缩干燥器，所述终级纯化组件包括依次设置的第三配液罐、凝胶柱层析装置、流出液收集器、液相色谱仪、第三浓缩干燥器及重结晶装置；
9.其中，所述提取浓缩釜包括釜体，釜体上套装有控温夹套，釜体的底部设置有用于支撑釜体的底座，釜体的顶部紧固安装有盖体，盖体上安装有压力表及压力控制阀；釜体内设置有搅拌组件，所述搅拌组件包括旋转滤筒，旋转滤筒底面的中心处垂直固定有转轴，转轴向上延伸至旋转滤筒的中部，旋转滤筒上端口处同轴设置有内环体，旋转滤筒内底面沿圆周方向间隔固定有第一叶片，内环体与旋转滤筒之间沿圆周方向间隔固定有第二叶片，釜体底部安装有用于驱动转轴转动的电机；盖体的中部设置有加料口，加料口处插接有环形架，环形架上压接有用于密封加料口的上端盖；环形架的底面均匀间隔固定有若干沿竖直方向延伸的导向杆，环形架的下方设置有滤篮，滤篮上、下两端的外缘均匀间隔设置有安装耳，安装耳上开设有与导向杆相适配的导孔，所述滤篮通过导孔实现沿导向杆上下移动；导向杆的底部套装有压缩弹簧，导向杆的底端安装有限位块，所述压缩弹簧的下端与限位块相顶接，压缩弹簧的上端与滤篮下端的安装耳相顶接；滤篮的上端口设置有压板，压板的顶面固定有推杆，推杆的顶部穿过上端盖、并连接有压滤油缸；盖体上固定有进液管、气管、蒸发出液管、冷凝回流管，釜体侧壁的顶部连接有蒸发回液管，釜体侧壁的底部连接有出液管，所述冷凝回流器设于蒸发出液管与冷凝回流管之间，所述溶剂回收组件设于蒸发出液管与蒸发回液管之间，所述充氮气组件及减压组件均与气管相连。
10.为了使滤篮内生药提取得更充分，所述导向杆的底部向下延伸至旋转滤筒的中部，所述滤篮的直径小于内环体，滤篮的下部伸入旋转滤筒中，且滤篮的底部与转轴的顶部相靠接；转轴的顶部设置有转盘，转盘的上表面固定有若干半球形的第一凸块，所述第一凸块呈环形阵列分布，滤篮的下底面固定有若干半球形的第二凸块，所述第二凸块与第一凸块错位分布。
11.为了优化旋转滤筒的搅拌效果，所述旋转滤筒包括上下相对设置的外环体，上下两个外环体之间沿圆周方向均匀间隔固定有过滤条，位于下侧的外环体内沿水平方向固定有过滤板，所述过滤板与釜体的内底面相靠接；所述第一叶片的一端与转轴固定连接，第一叶片的另一端与位于下侧的外环体固定连接，第一叶片的底面与过滤板无缝连接，转轴与第一叶片之间设置有加固肋板。
12.为了保证上端盖的封闭、并方便上端盖的打开，所述加料口包括管状部及连接于管状部顶部的外沿部，所述外沿部的外径大于管状部的外径，外沿部的内径呈阶梯状，所述环形架插接于外沿部的内侧，所述上端盖与外沿部之间安装有密封环，加料口处设置有用于固定上端盖的锁扣组件；所述锁扣组件包括呈u形的卡槽、第一固定片及第二固定片，所述第一固定片及第二固定片均固定于外沿部的外侧面，第一固定片上连接有伸缩气缸，所述伸缩气缸的缸筒底部与第一固定片铰接，所述伸缩气缸的活塞杆沿水平伸出，且活塞杆的伸出端铰接有转接件，所述转接件上沿竖直方向设有第一铰接轴及第二铰接轴，所述第一铰接轴与第二固定片转动连接，第二铰接轴与活塞杆转动连接，所述转接件与卡槽的竖直侧面固定连接；通过伸缩气缸的活塞杆伸缩，带动卡槽绕第一铰接轴发生转动。
13.优选地，所述溶剂回收组件包括依次连接的气液分离器、冷凝器、冷却器及集液罐，蒸发出液管的出液端与气液分离器的进口相连接，气体分离器的液相出口与蒸发回液管相连接，蒸发回液管的出液端设置有u形缓冲管；所述集液罐的出口与提取溶剂罐的进口相连接，所述提取溶剂罐的进口还连接有乙醇进管及纯水进管，提取溶剂罐的出口及纯水进管均与进液管相连接；所述控温夹套内设置有流道，流道内流通有传热介质。
14.优选地，所述充氮气组件包括氮气罐及加压泵，所述减压组件包括真空泵及真空罐。
15.为了方便上端盖及环形架向上打开，提取浓缩釜的四周沿竖直方向设置有支撑杆，支撑杆之间设置有支撑板，所述支撑杆及支撑板形成支撑架，且支撑板位于支撑架的下部；支撑架的上部设置有活动板，所述活动板呈十字形，活动板的四角与支撑杆滑动连接，支撑板上设置有支撑柱，支撑柱上沿竖直方向固定有支撑油缸，支撑油缸的活塞杆竖直向上伸出、并与活动板的底部相顶接；活动板的上方设置有安装板，所述安装板的四角与支撑杆滑动连接；所述釜体的底部安装于支撑板上，所述上端盖与环形架的内侧通过螺纹紧固连接，上端盖与活动板紧固连接，活动板上设置有供压滤油缸穿过的通孔，所述压滤油缸的顶部固定在安装板上。
16.利用上述系统从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化方法，包括以下步骤：
17.s1、以经过清洗、干燥、粉碎的忍冬叶为生药，以质量分数50～70％的乙醇水溶液为提取溶剂，利用提取溶剂对生药提取2～4次；每次提取时，于60～85℃搅拌45～90min后，减压回收乙醇，排出提取浓缩液，再加入提取溶剂重复提取；提取结束后，合并提取浓缩液，经过滤，得到含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液；
18.s2、用纯水稀释步骤s1中所得含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液，得到样品液；样品液用树脂柱富集纯化，经上样、吸附后，先以纯水或质量分数8～12％的乙醇水溶液为一次洗脱剂，进行一次分离洗脱，再以质量分数50～70％的乙醇水溶液为二次洗脱剂，进行二次分离洗脱，收集二次分离洗脱液，浓缩至呈浸膏状，干燥，得到浸膏粉；
19.s3、取步骤s2所得浸膏粉，加甲醇或乙醇溶解后，加入柱层析硅胶，混匀后干燥，得到干样；将干样填充到中压制备仪的样品管中，连接到中压硅胶色谱柱前端，先以石油醚与丙酮的混合液作为一次流动相，进行一次纯化洗脱，再以丙酮与甲醇的混合液作为二次流动相，进行二次纯化洗脱，收集二次纯化洗脱液，经浓缩、干燥，得到木犀草苷及忍冬苷的粗品；
20.s4、取步骤s3所得木犀草苷及忍冬苷的粗品，加甲醇溶解后，采用凝胶柱层析分离，以甲醇洗脱，分若干份收集流出液，采用液相色谱法检测流出液组分，分别合并含木犀草苷的流出液及含忍冬苷的流出液，经浓缩、干燥后，用甲醇重结晶，分别得到木犀草苷及忍冬苷。
21.优选地，步骤s1中，每次提取时，提取溶剂的用量为生药质量的8～10倍，并且至少有一次提取为充入氮气进行加压提取，压力控制为1.2～2.0atm；
22.步骤s2中，用纯水稀释时，按照生药质量与样品液体积的比值为0.125～0.167g/ml进行定容；所述树脂柱中填充有d101大孔树脂，生药与d101大孔树脂的质量比为1:1.8～2.2，所述上样的速度为2～4bv/h，所述吸附的时长为4～14h；步骤s2中所述一次洗脱剂的用量为样品液中生药质量的6～8倍，所述二次洗脱剂的用量为样品液中生药质量的7～11倍，所述一次分离洗脱及二次分离洗脱时的洗脱速度均为3～4bv/h；
23.步骤s3中，柱层层析硅胶的用量为步骤s2所得浸膏粉的1.8～2.5倍；所述一次流动相采用四级不同浓度比例的石油醚与丙酮进行洗脱，一级：石油醚与丙酮的体积比为2:1、用量为浸膏粉质量的50～130倍，二级：石油醚与丙酮的体积比为1:1、用量为浸膏粉质量的90～130倍，三级：石油醚与丙酮的体积比为1:2、用量为浸膏粉质量的90～130倍，四级：石油醚与丙酮的体积比为1:4、用量为浸膏粉质量的90～130倍；所述二次流动相中丙酮与甲醇的体积比为4:1，二次流动相的用量为浸膏粉质量的90～130倍；一次纯化洗脱及二次纯化洗脱的洗脱速度均为8～12ml/min；
24.步骤s4中，所述洗脱的速度为0.5～1.0ml/min。
25.进一步，步骤s2中树脂柱的尺寸为步骤s3中柱层层析硅胶的粒度为200～300目，样品管的尺寸为中压硅胶色谱柱中填充的硅胶粒度为200～300目，中压硅胶色谱柱的尺寸为步骤s4中所述凝胶柱型号为sephadex lh20，凝胶柱尺寸为
26.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
27.1.本发明所述提取分离纯化系统，通过提取单元对忍冬叶进行充分提取、浓缩，得到含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液，然后通过分离单元得到含木犀草苷及忍冬苷的浸膏粉，再经过纯化单元的两步纯化，最终分别得到木犀草苷及忍冬苷，实现了木犀草苷及忍冬苷高效率高纯度的提取、分离与纯化；其中，得率以原药材(生药)质量计，浓缩液中提取物的得率达到40％以上，浸膏粉的得率达到11％以上，粗品中木犀草苷及忍冬苷的总含量大于84％，最终得到的木犀草苷及忍冬苷纯度均不小于99％；
28.2.本发明所述提取浓缩釜内设置搅拌组件，通过电机驱动转轴转动、带动旋转滤筒、第一叶片、第二叶片及加固肋板转动，对釜体内的液体起到搅拌作用，使受热更为均匀，加速了提取与浓缩效率，并通过旋转滤筒的过滤条进一步起到过滤作用，避免了提取过程中从滤篮中漏出的忍冬叶碎屑影响提取浓缩液的纯度；
29.3.本发明所述滤篮可使忍冬叶生药与提取浓缩液固液分离，实现了提取与浓缩均在釜体内完成，一批忍冬叶生药在经历常压提取、减压蒸馏、加压提取等过程中，发生膨胀、细胞破裂等，加速了提取效率；转盘上表面的第一凸块与滤篮下底面的第二凸块相互作用，在转轴转动及压缩弹簧的配合下，实现滤篮的上下震动，使提取溶剂能够充分浸润忍冬叶生药，有助于忍冬叶提取的充分性，提取、浓缩完成后，压板向下压滤，可将忍冬叶中的提取液充分挤压出来，避免了浪费；
30.4.本发明所述从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化方法，步骤简单，获得的木犀草苷及忍冬苷纯度高，该方法中所用溶剂可回收、重复利用，大孔树脂及凝胶可反复使用，制备成本低、污染较少，适合工业化生产，为利用天然活性物质木犀草苷及忍冬苷提供了良好的物质基础。
附图说明
31.图1为所述提取单元的示意图；
32.图2为所述分离单元及纯化单元的示意图；
33.图3为从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化方法的流程图；
34.图4为含木犀草苷及忍冬苷的混标溶液的液相色谱图；
35.图5为图1中提取浓缩釜的结构示意图；
36.图6为图5的主视图；
37.图7为图5的右视图；
38.图8为图5的俯视图(不含控温夹套及锁扣组件)；
39.图9为图8沿a-a线的剖视图；
40.图10为图9中旋转滤筒的结构示意图；
41.图11为图9中环形架、导向杆、滤篮、压板及推杆的结构示意图；
42.图12为图9中b处的放大图；
43.图13为图9中c处的放大图；
44.图14为图5中所述锁扣组件的结构示意图；
45.图15为实施例2所述支撑架的结构示意图；
46.图16为实施例3所得粗品的液相色谱图；
47.图17为实施例3所得木犀草苷的液相色谱图；
48.图18为实施例3所得忍冬苷的液相色谱图；
49.图19为实施例3所得木犀草苷的
13
c nmr图谱；
50.图20为实施例3所得忍冬苷的
13
c nmr图谱；
51.图21为实施例4所得粗品的液相色谱图；
52.图22为实施例4所得木犀草苷的液相色谱图；
53.图23为实施例4所得忍冬苷的液相色谱图。
54.图1、2、5～15中，各附图标记所对应的名称如下：1.提取浓缩釜；101釜体；102.控温夹套；103.底座；104.盖体；105.上端盖；106.把手；2.提取溶剂罐；3.冷凝回流器；4.气液分离器；5.冷凝器；6.冷却器；7.集液罐；8.u形缓冲管；9.进液管；10.气管；11.蒸发出液管；12.冷凝回流管；13.蒸发回液管；14.乙醇进管；15.纯水进管；16.氮气罐；17.加压泵；18.真
空泵；19.真空罐；20.出液管；21.第一配液罐；22.树脂柱层析装置；23.第一洗脱液弃液罐、24.第一洗脱液收集罐；25.第一浓缩干燥器；26.第二配液罐；27.硅胶柱色谱装置；28.第二洗脱液弃液罐；29.第二洗脱液收集罐；30.第二浓缩干燥器；31.第三配液罐；32.凝胶柱层析装置；33.流出液收集器；34.液相色谱仪；35.第三浓缩干燥器；36.重结晶装置；37.压力表；38.卡箍；39.压滤油缸；40.锁扣组件；401卡槽；402.第一固定片；403.第二固定片；404.支撑块；405.第三铰接轴；406.伸缩气缸；407.转接件；408.第一铰接轴；409.第二铰接轴；41.电机；42.旋转滤筒；421.外环体；422.过滤条；423.过滤板；424.限位环；43.转轴；44.内环体；45.第一叶片；46.第二叶片；47.加固肋板；48.转盘；49.第一凸块；50.第二凸块；51.环形架；52.导向杆；53.滤篮；54.安装耳；55.压缩弹簧；56.限位块；57.压板；58.推杆；59.密封环；60.加料口；601.管状部；602.外沿部；61.支撑板；62.活动板；63.安装板；64.通孔；65.安装孔；66.支撑柱；67.支撑油缸；68.支撑杆。图4及图16～23中横纵坐标均为仪器自动生成。
具体实施方式
55.为了使本发明的技术目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面结合具体实施例对本发明的技术方案作出进一步的说明，但所述实施例旨在解释本发明，而不能理解为对本发明的限制，实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。
56.一种从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统，如图1、2所示，包括提取单元、分离单元及纯化单元。所述提取单元包括提取浓缩釜1、提取溶剂罐2、冷凝回流器3、溶剂回收组件、充氮气组件及减压组件，提取浓缩釜1顶部连接有进液管9、气管10、蒸发出液管11、冷凝回流管12及蒸发回液管13，提取浓缩釜1侧壁的底部连接有出液管20，所述冷凝回流器3设于蒸发出液管11与冷凝回流管12之间，所述溶剂回收组件设于蒸发出液管11与蒸发回液管13之间，所述充氮气组件及减压组件均与气管10相连；所述溶剂回收组件包括依次连接的气液分离器4、冷凝器5、冷却器6及集液罐7，蒸发出液管11的出液端与气液分离器4的进口相连接，气体分离器4的液相出口与蒸发回液管13相连接，蒸发回液管13的出液端设置有u形缓冲管8；所述集液罐7的出口与提取溶剂罐2的进口相连接，所述提取溶剂罐2的进口还连接有乙醇进管14及纯水进管15，提取溶剂罐2的出口及纯水进管15均与进液管9相连；所述充氮气组件包括氮气罐16及加压泵17，所述减压组件包括真空泵18及真空罐19。所述分离单元包括依次设置的第一配液罐21、树脂柱层析装置22、第一洗脱液弃液罐23、第一洗脱液收集罐24、第一浓缩干燥器25。所述纯化单元包括初级纯化组件及终级纯化组件，所述初级纯化组件包括依次设置的第二配液罐26、硅胶柱色谱装置27、第二洗脱液弃液罐28、第二洗脱液收集罐29、第二浓缩干燥器30，所述终级纯化组件包括依次设置的第三配液罐31、凝胶柱层析装置32、流出液收集器33、液相色谱仪34、第三浓缩干燥器35及重结晶装置36。其中，树脂柱层析装置22、第一浓缩干燥器25、硅胶柱色谱装置27、第二浓缩干燥器30、凝胶柱层析装置32、液相色谱仪34、第三浓缩干燥器35及重结晶装置36的结构及使用方式均采用本领域现有技术的常规技术手段即可，并非本发明创新所在，故不再详细赘述。
57.一种从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化方法，如图3所示，包括以
下步骤：
58.s1、以经过清洗、干燥、粉碎的忍冬叶为生药，以质量分数50～70％的乙醇水溶液为提取溶剂，利用提取溶剂对生药提取2～4次；每次提取时，提取溶剂的用量为生药质量的8～10倍，于60～85℃搅拌45～90min后，减压回收乙醇，排出提取浓缩液，再加入提取溶剂重复提取；并且，第二次提取时，充入氮气进行加压提取，压力控制为1.2～2.0atm；提取结束后，合并提取浓缩液，经过滤，得到含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液；
59.s2、用纯水稀释步骤s1中所得含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液，得到样品液(生药质量与样品液体积的比值为0.125～0.167g/ml)；样品液用d101大孔树脂柱富集纯化(样品液对应的生药质量与d101大孔树脂的质量之比为1:1.8～2.2)，以2～4bv/h的速度上样，吸附4～14h后，先以纯水或质量分数10％的乙醇水溶液为一次洗脱剂(一次洗脱剂的用量为样品液中生药质量的6～8倍)，以3～4bv/h的速度进行一次分离洗脱(得到一次分离洗脱液)，流出液颜色由浅至深后呈近无色，再以质量分数50～70％的乙醇水溶液为二次洗脱剂(二次洗脱剂的用量为样品液中生药质量的7～11倍)，以3～4bv/h的速度进行二次分离洗脱，收集二次分离洗脱液，浓缩至呈浸膏状，干燥，得到浸膏粉；
60.s3、取步骤s2所得浸膏粉，加甲醇或乙醇溶解后，加入柱层层析硅胶(浸膏粉与柱层层析硅胶的质量比为1:1.8～2.5)，混匀后干燥，得到干样；将干样填充到中压制备仪的样品管中，连接到中压硅胶色谱柱前端，先以石油醚与丙酮的混合液作为一次流动相(分为四级，一级：石油醚与丙酮的体积比为2:1、用量为浸膏粉质量的50～130倍，二级：石油醚与丙酮的体积比为1:1、用量为浸膏粉质量的90～130倍，三级：石油醚与丙酮的体积比为1:2、用量为浸膏粉质量的90～130倍，四级：石油醚与丙酮的体积比为1:4、用量为浸膏粉质量的90～130倍)，以8～12ml/min的速度进行一次纯化洗脱(得到一次纯化洗脱液)，再以丙酮与甲醇的混合液(丙酮与甲醇的体积比4:1，用量为浸膏粉质量的90～130倍)作为二次流动相，以8～12ml/min的速度进行二次纯化洗脱，收集二次纯化洗脱液，经浓缩、干燥，得到木犀草苷及忍冬苷的粗品；
61.s4、取步骤s3所得木犀草苷及忍冬苷的粗品，加甲醇溶解后，采用sephadex lh20凝胶柱层析分离，用甲醇以0.5～1.0ml/min的速度洗脱，分若干份收集流出液，利用液相色谱法检测流出液组分，分别合并含木犀草苷的流出液及含忍冬苷的流出液，经浓缩、干燥后，用甲醇重结晶，分别得到木犀草苷及忍冬苷。
62.对木犀草苷及忍冬苷的检测分析采用美国agilent 6400型超高效液相色谱仪，色谱柱为agilent elipse plus c18色谱柱(4.6
×
100mm，3.5μm)，流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液，流动相梯度洗脱(0
→
20min，14％乙腈；20
→
50min，14％
→
17％乙腈；50
→
60min，17％
→
32％乙腈；60
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61min，32％
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90％乙腈；61
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69min，90％乙腈；69
→
70min，90％
→
14％乙腈；70
→
80min，14％乙腈)，流速0.5ml/min，柱温30℃，进样量4μl，检测器为二极管阵列检测器(dad)，检测波长350nm。将木犀草苷及忍冬苷标准品混合溶于甲醇中，得到混标溶液(木犀草苷浓度144.25μg/ml、忍冬苷浓度177.56μg/ml)，经超高效液相色谱(uplc)检测，混标溶液的液相色谱图如图4所示，木犀草苷及忍冬苷的保留时间分别为28.30min及33.61min，有良好的峰形，根据该uplc环境条件，建立木犀草苷及忍冬苷的标准曲线，以便于后续测定浓缩。
63.实施例1
64.一种从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统，如图1、2及5～14所示，包括提取单元、分离单元及纯化单元。所述提取单元包括提取浓缩釜1、提取溶剂罐2、冷凝回流器3、溶剂回收组件、充氮气组件及减压组件。所述分离单元包括依次设置的第一配液罐21、树脂柱层析装置22、第一洗脱液弃液罐23、第一洗脱液收集罐24、第一浓缩干燥器25。所述纯化单元包括初级纯化组件及终级纯化组件，所述初级纯化组件包括依次设置的第二配液罐26、硅胶柱色谱装置27、第二洗脱液弃液罐28、第二洗脱液收集罐29、第二浓缩干燥器30，所述终级纯化组件包括依次设置的第三配液罐31、凝胶柱层析装置32、流出液收集器33、液相色谱仪34、第三浓缩干燥器35及重结晶装置36。
65.所述提取浓缩釜1包括釜体101，釜体101上套装有控温夹套102，所述控温夹套102内设置有流道，流道内流通有传热介质，所述传热介质包括用于釜体101升温的蒸汽、热水、热油以及用于釜体101降温的冷却水；釜体101侧壁的上部对称设置有把手106，所述把手106位于控温夹套102的上方；釜体101的底部设置有用于支撑釜体101的底座103，所述底座103呈空心结构；釜体101的顶部紧固安装有盖体104，盖体104上安装有压力表37及压力控制阀。盖体104上固定有进液管9、气管10、蒸发出液管11、冷凝回流管12，盖体104上还设置有用于进一步加固进液管9及气管10的卡箍38，所述卡箍38与盖体104紧固连接；釜体101侧壁的顶部连接有蒸发回液管13，釜体101侧壁的底部连接有出液管20。所述溶剂回收组件包括依次连接的气液分离器4、冷凝器5、冷却器6及集液罐7，蒸发出液管11的出液端分为两个支路，蒸发出液管11的其中一个支路与冷凝回流器3的进口相连接，冷凝回流器3的出口连接冷凝回流管12，蒸发出液管11的另一个支路与气液分离器4的进口相连接，气体分离器的液相出口与蒸发回液管13相连接，蒸发回液管13的出液端设置有u形缓冲管8；所述集液罐7的出口与提取溶剂罐2的进口相连接，所述提取溶剂罐2的进口还连接有乙醇进管14及纯水进管15，提取溶剂罐2的出口及纯水进管15均与进液管9相连接。所述充氮气组件包括氮气罐16及加压泵17，所述减压组件包括真空泵18及真空罐19，所述充氮气组件及减压组件均通过输气管10路与气管10相连。
66.釜体101内设置有搅拌组件，所述搅拌组件包括旋转滤筒42，所述旋转滤筒42包括上下相对设置的外环体421，上下两个外环体421之间沿圆周方向均匀间隔固定有过滤条422，位于下侧的外环体421内沿水平方向固定有过滤板423，所述过滤板423与釜体101的内底面相靠接。釜体101的内底部设置有限位环424，所述限位环424的截面呈直角梯形，限位环424的底面与釜体101的底面无缝靠接，限位环424的外侧面与釜体101的内侧壁无缝靠接，限位环424的内侧面与外环体421无缝靠接，限位环424的顶面从外至内呈向下倾斜的斜面，限位环424与出液管20的相对处设置有缺口，以使釜体101内的液体可通过限位环424的缺口直接进入出液管20。旋转滤筒42底面的中心处垂直固定有转轴43，转轴43向上延伸至旋转滤筒42的中部，旋转滤筒42上端口处同轴设置有内环体44，内环体44与旋转滤筒42之间沿圆周方向间隔固定有第二叶片46；旋转滤筒42内底面沿圆周方向间隔固定有第一叶片45，所述第一叶片45的一端与转轴43固定连接，第一叶片45的另一端与位于下侧的外环体421固定连接，第一叶片45的底面与过滤板423无缝连接，转轴43与第一叶片45之间设置有加固肋板47；釜体101底部安装有用于驱动转轴43转动的电机41。
67.盖体104的中部设置有加料口60，所述加料口60包括管状部601及连接于管状部601顶部的外沿部602，所述外沿部602的外径大于管状部601的外径，外沿部602的内径呈阶
梯状；加料口60处插接有环形架51，所述环形架51插接于外沿部602的内侧；环形架51上压接有用于密封加料口60的上端盖105，上端盖105与环形架51的内侧通过螺纹紧固连接，且上端盖105与外沿部602之间安装有密封环59。环形架51的底面均匀间隔固定有4个沿竖直方向延伸的导向杆52，环形架51的下方设置有滤篮53，所述滤篮53呈圆柱形，滤篮53的上端敞口，滤篮53的网孔需满足滤篮53内的物料不会漏出；滤篮53上、下两端的外缘均匀间隔设置有安装耳54，所述安装耳54与导向杆52相对应，且安装耳54上开设有与导向杆52相适配的导孔，所述滤篮53通过导孔实现沿导向杆52上下移动。导向杆52的底部套装有压缩弹簧55，导向杆52的底端安装有限位块56，所述压缩弹簧55的下端与限位块56相顶接，压缩弹簧55的上端与滤篮53下端的安装耳54相顶接。滤篮53的上端口设置有压板57，所述压板57与滤篮53的上端口相适配，压板57顶面的中心处固定有推杆58，推杆58的顶部穿过上端盖105、并连接有压滤油缸39。
68.所述导向杆52的底部向下延伸至旋转滤筒42的中部，所述滤篮53的直径小于内环体44，滤篮53的下部伸入旋转滤筒42中，且滤篮53的底部与转轴43的顶部相靠接。转轴43的顶部设置有转盘48，转盘48的上表面固定有若干半球形的第一凸块49，所述第一凸块49呈环形阵列分布，滤篮53的下底面固定有若干半球形的第二凸块50，所述第二凸块50与第一凸块49错位分布。当电机41驱动转轴43转动，转轴43带动转盘48同步转动，第一凸块49绕转轴43的轴向中心线转动，当第一凸块49与第二凸块50碰撞，第二凸块50会被顶起，然后再落下，在第一凸块49与第二凸块50的相对运动过程中，同时在压缩弹簧55的作用下，滤篮53发生上下振动，可保持滤篮53内物料的松散状态，有助于提高物料的提取效率。
69.加料口60处设置有用于固定上端盖105的锁扣组件40。所述锁扣组件40包括呈u形的卡槽401、伸缩气缸406、转接件407、第一固定片402及第二固定片403，所述第一固定片402及第二固定片403均固定于外沿部602的外侧面，所述第一固定片402平行贴合于外沿部602，所述第二固定片403垂直于外沿部602的外侧面；第一固定片402上垂直固定有支撑块404，支撑块404上沿竖直方向安装有第三铰接轴405，所述伸缩气缸406的缸筒底部与第三铰接轴405转动连接，所述伸缩气缸406通过第三铰接轴405实现与第一固定片402铰接；所述转接件407与卡槽401的竖直侧面固定连接，所述转接件407上沿竖直方向设有第一铰接轴408及第二铰接轴409，所述第一铰接轴408位于第二铰接轴409与外沿部602之间，所述第一铰接轴408与第二固定片403转动连接，所述伸缩气缸406的活塞杆沿水平伸出，活塞杆的伸出端与第二铰接轴409转动连接。所述卡槽401的槽宽与外沿部602及上端盖105的厚度相适配，通过伸缩气缸406的活塞杆伸出，带动卡槽401绕第一铰接轴408发生转动，使卡槽401将上端盖105锁扣在加料口60处；通过伸缩气缸406的活塞杆缩回，带动卡槽401绕第一铰接轴408发生转动，使卡槽401松开对上端盖105的锁扣作用。
70.上述提取分离纯化系统工作时，依次经过以下过程：
71.一、提取：将经过清洗、干燥、粉碎的忍冬叶放置于滤篮53内，然后将上端盖105及环形架51安装在加料口60处，以使滤篮53插入釜体101内，调节压滤油缸39伸缩，使压板57刚好位于滤篮53的上端口，使压板57封闭滤篮53的上端口，避免忍冬叶从滤篮53的上端口漏出；然后将提取溶剂通过进液管9注入釜体101内，通过控制控温夹套102内的传热介质，使釜体101内达到所需的提取温度，在常压时进行一次提取，提取过程中，为了维持提取溶剂平衡，蒸发的提取溶剂从蒸发出液管11逸出，进入冷凝回流器3冷却后，从冷凝回流管12
流回釜体101内；一次提取结束后，利用真空泵18及真空罐19对釜体101内减压，在保温状态下，釜体101内的提取液被减压蒸馏，通过蒸发出液管11进入气液分离器4，水溶液通过蒸发回液管13流回釜体101，乙醇蒸汽经冷凝器5及冷却器6进入集液罐7；当蒸发出液管11不再有乙醇馏出后，通过氮气罐16及加压泵17向釜体101内充入氮气，使釜体101内恢复常压，将釜体101内的提取浓缩液通过出液管20排出；然后关闭出液管20，将提取溶剂再次通过进液管9注入釜体101内，充入氮气，并通过控制控温夹套102使釜体101内达到所需的提取温度和气压(大于1atm)，进行二次提取；二次提取结束后，利用真空泵18及真空罐19对釜体101内减压，在保温状态下，釜体101内的提取液被减压蒸馏，回收乙醇后，使釜体101内恢复常压，将釜体101内的提取浓缩液通过出液管20排出；然后按照一次提取的方法再进行三次提取，三次提取结束后，同样采用减压蒸馏回收乙醇，排出提取浓缩液，并控制压滤油缸39的活塞杆伸出，带动推杆58向下推动压板57，以使滤篮53内的提取浓缩液被充分挤压出来，避免了浪费；进入集液罐7的乙醇可泵入提取溶剂罐2，用于配制提取溶剂。滤篮53里的忍冬叶经过常压提取、减压蒸馏、加压提取、减压蒸馏、常压提取、减压蒸馏，在压力变化过程中，发生体积膨胀、细胞破裂等，有助于提取物的充分溶出，提高了提取效率。
72.二、分离：在第一配液罐21内用纯水稀释含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液，经过滤，得到样品液；然后利用树脂柱层析装置22对样品液进行层析分离，先以纯水或质量分数10％的乙醇水溶液为一次洗脱剂，进行一次分离洗脱，使用第一洗脱液弃液罐23收集洗脱液；再以质量分数50％的乙醇水溶液为二次洗脱剂，进行二次分离洗脱，使用第一洗脱液收集罐24收集洗脱液；利用第一浓缩干燥器25将第一洗脱液收集罐24内的洗脱液浓缩、干燥，得到浸膏粉。
73.三、纯化：在第二配液罐26内用甲醇溶解浸膏粉，然后利用硅胶柱色谱装置27进行初级纯化，先以石油醚与丙酮的混合液作为一次流动相，进行一次纯化洗脱，使用第二洗脱液弃液罐28收集洗脱液；再以丙酮与甲醇的混合液作为二次流动相，进行二次纯化洗脱，使用第二洗脱液收集罐29收集洗脱液；利用第二浓缩干燥器30将第二洗脱液收集罐29内的洗脱液浓缩、干燥，得到木犀草苷及忍冬苷的粗品；在第三配液罐31内用甲醇溶解木犀草苷及忍冬苷的粗品，然后利用凝胶柱层析装置32进行终级纯化，用甲醇进行洗脱，使用流出液收集器33分若干份收集流出液，采用液相色谱仪34检测流出液组分，分别合并含木犀草苷的流出液及含忍冬苷的流出液，利用第三浓缩干燥器35将流出液浓缩、干燥，使用重结晶装置36进行甲醇重结晶，分别得到木犀草苷及忍冬苷。
74.实施例2
75.一种从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统，在实施例1的基础上，为了方便将滤篮53从釜体101中取出，所述提取分离纯化系统还包括支撑架，所述支撑架包括沿竖直方向设置的4个支撑杆68，所述支撑杆68位于提取浓缩釜1的四周，支撑杆68之间设置有支撑板61，所述支撑板61位于支撑架的下部。支撑架的上部设置有活动板62，所述活动板62呈十字形，活动板62的四角与支撑杆68滑动连接，支撑板61上设置有支撑柱66，支撑柱66上沿竖直方向固定有支撑油缸67，支撑油缸67的活塞杆竖直向上伸出、并与活动板62的底部相顶接，支撑柱66及支撑油缸67的高度需满足导向杆52可从加料口60提出。活动板62的上方设置有安装板63，所述安装板63的四角与支撑杆68滑动连接。所述支撑板61的中心处开设有安装孔65，所述釜体101的底部安装于安装孔65处，安装孔65对釜体101有
限位作用；所述上端盖105与活动板62紧固连接，活动板62上设置有供压滤油缸39穿过的通孔64，所述压滤油缸39的顶部固定在安装板63上。
76.提取浓缩釜1安装固定在支撑架上后，当需要向上提起上端盖105、导向杆52及滤篮53时，支撑油缸67的活塞杆向上伸出，活动板62沿支撑杆68向上移动，带动上端盖105上移，将导向杆52从加料口60逐渐提出。
77.实施例3
78.一种从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化方法，包括以下步骤：
79.s1、以经过清洗、干燥、粉碎的忍冬叶为生药(250g)，以质量分数60％的乙醇水溶液为提取溶剂，利用提取溶剂对生药提取3次，每次提取时，于60℃搅拌60min后，减压回收乙醇，排出提取浓缩液，再加入提取溶剂重复提取；3次提取的提取溶剂用量分别为生药质量的10倍、8倍及8倍，并且第二次提取时，充入氮气进行加压提取，压力控制为1.5～1.6atm；提取结束后，合并提取浓缩液，经过滤，得到含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液(取部分浓缩液干燥称重，然后按照体积再折合成出总的提取率，即提取物质量为100.5g，得率以原药材计，得率为40.2％)；
80.s2、用纯水稀释步骤s1中所得含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液，经过滤，得到样品液(定容至1750ml)；样品液用d101大孔树脂柱(d101大孔树脂500g)富集纯化，以2bv/h的速度上样，吸附14h后，先以质量分数10％的乙醇水溶液(1700ml)为一次洗脱剂，以4bv/h的速度进行一次分离洗脱，再以质量分数50％的乙醇水溶液(1900ml)为二次洗脱剂，以4bv/h的速度进行二次分离洗脱，收集二次分离洗脱液，浓缩至呈浸膏状，干燥，得到浸膏粉(浸膏粉29.5g，得率以原药材计，即得率为11.8％)；
81.s3、取步骤s2所得浸膏粉(4.9g)，加甲醇溶解后，加入柱层层析硅胶(9.8g，200～300目)，混匀后干燥，得到干样；将干样填充到中压制备仪的样品管中，连接到中压硅胶色谱柱(硅胶200～300目)前端，先以石油醚与丙酮的混合液(体积比依次为2:1、1:1、1:2、1:4，石油醚与丙酮体积比2:1的用量为600ml，石油醚与丙酮体积比1:1的用量为600ml，石油醚与丙酮体积比1:2的用量为600ml，石油醚与丙酮的体积比1:4的用量为600ml)作为一次流动相，以10ml/min的速度进行一次纯化洗脱，再以丙酮与甲醇的混合液(体积比4:1，用量为600ml)作为二次流动相，以10ml/min的速度进行二次纯化洗脱，收集二次纯化洗脱液，经浓缩、干燥，得到木犀草苷及忍冬苷的粗品；
82.将5.02mg粗品溶于5ml甲醇中(浓度1.004mg/ml)，经uplc检测，液相色谱图如图16所示，粗品中木犀草苷及忍冬苷的浓度分别为0.5191mg/ml、0.3390mg/ml，即粗品中木犀草苷及忍冬苷的含量分别为51.70％、33.76％；
83.s4、取步骤s3所得木犀草苷及忍冬苷的粗品，加甲醇溶解后，采用sephadex lh20凝胶柱层析分离，用甲醇以0.6ml/min的速度进行洗脱，分若干份收集流出液(每10～12ml流出液收集一管)，采用液相色谱法检测流出液组分，分别合并含木犀草苷的流出液及含忍冬苷的流出液，经浓缩、干燥后，用甲醇重结晶，分别得到木犀草苷及忍冬苷；将木犀草苷及忍冬苷分别溶于甲醇，分别配制成浓度为0.514mg/ml、0.338mg/ml的溶液，经uplc检测，液相色谱图如图17、18所示，经计算，木犀草苷及忍冬苷的纯度分别为99.0％、99.6％。
84.上述制得的木犀草苷及忍冬苷
13
c nmr图谱分别如图19、20所示。木犀草苷
13
c nmr
(100mhz，dmso-d6)：181.8565，164.4276，162.9087，161.0982，156.9060，149.8760，145.7381，121.3535，119.1316，115.9398，113.5372，105.2983，103.1396，99.8439，99.4957，94.6753，77.1259，76.3564，73.0789，69.5029，60.5749；忍冬苷
13
c nmr(100mhz，dmso-d6)：181.8331，164.4422，162.4697，161.1211，156.9323，149.9294，145.7576，121.2949，119.1216，115.9721，113.4655，105.3723，103.1947，100.4306，99.2417，97.6865，94.3337，77.1326，76.9538，76.2354，71.8198，70.4456，70.3644，69.5912，68.2984，60.4432，18.0515。
85.实施例4
86.一种从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化方法，包括以下步骤：
87.s1、以经过清洗、干燥、粉碎的忍冬叶为生药(250g)，以质量分数70％的乙醇水溶液为提取溶剂，利用提取溶剂对生药提取3次，每次提取时，于85℃搅拌60min后，减压回收乙醇，排出提取浓缩液，再加入提取溶剂重复提取；3次提取的提取溶剂用量分别为生药质量的10倍、8倍及8倍，并且第二次提取时，充入氮气进行加压提取，压力控制为1.5～1.6atm；提取结束后，合并提取浓缩液，经过滤，得到含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液；
88.s2、用纯水稀释步骤s1中所得含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液，经过滤，得到样品液(定容至1750ml)；样品液用d101大孔树脂柱(d101大孔树脂500g)富集纯化，以4bv/h的速度上样，吸附4h后，先以纯水(1900ml)为一次洗脱剂，以4bv/h的速度进行一次分离洗脱，再以质量分数50％的乙醇水溶液(2800ml)为二次洗脱剂，以4bv/h的速度进行二次分离洗脱，收集二次分离洗脱液，浓缩至呈浸膏状，干燥，得到浸膏粉(27.5g，得率以原药材计，收率为11.0％)；
89.s3、取步骤s2所得浸膏粉(5.0g)，加甲醇溶解后，加入柱层层析硅胶(10.0g，200～300目)，混匀后干燥，得到干样；将干样填充到中压制备仪的样品管中，连接到中压硅胶色谱柱(硅胶200～300目)前端，先以石油醚与丙酮的混合液(体积比依次为2:1、1:1、1:2、1:4，石油醚与丙酮体积比2:1的用量为300ml，石油醚与丙酮体积比1:1的用量为600ml，石油醚与丙酮体积比1:2的用量为600ml，石油醚与丙酮的体积比1:4的用量为600ml)作为一次流动相，以10ml/min的速度进行一次纯化洗脱，再以丙酮与甲醇的混合液(体积比4:1，用量为600ml)作为二次流动相，以10ml/min的速度进行二次纯化洗脱，收集二次纯化洗脱液，经浓缩、干燥，得到木犀草苷及忍冬苷的粗品；将5.07mg粗品溶于5ml甲醇中，经uplc检测，液相色谱图如图21所示，粗品中木犀草苷及忍冬苷的浓度分别为0.5192mg/ml、0.3352mg/ml，即粗品中木犀草苷及忍冬苷的含量分别为51.20％、33.06％；
90.s4、取步骤s3所得木犀草苷及忍冬苷的粗品，加甲醇溶解后，采用sephadex lh20凝胶柱层析分离，用甲醇以0.6ml/min的速度进行洗脱，分若干份收集流出液(每10～12ml流出液收集一管)，采用液相色谱法检测流出液组分，分别合并含木犀草苷的流出液及含忍冬苷的流出液，经浓缩、干燥后，用甲醇重结晶，分别得到木犀草苷及忍冬苷；将木犀草苷及忍冬苷分别溶于甲醇，分别配制成浓度为0.518mg/ml、0.336mg/ml的溶液，经uplc检测，液相色谱图如图22、23所示，经计算，木犀草苷及忍冬苷的纯度分别为99.1％、99.3％。
91.实施例5
92.一种从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化方法，包括以下步骤：
93.s1、以经过清洗、干燥、粉碎的忍冬叶为生药(250g)，以质量分数50％的乙醇水溶液为提取溶剂，利用提取溶剂对生药提取3次，每次提取时，于85℃搅拌60min后，减压回收乙醇，排出提取浓缩液，再加入提取溶剂重复提取；3次提取的提取溶剂用量分别为生药质量的10倍、8倍及8倍，并且第二次提取时，充入氮气进行加压提取，压力控制为1.5～1.6atm；提取结束后，合并提取浓缩液，经过滤，得到含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液；
94.s2、用纯水稀释步骤s1中所得含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液，经过滤，得到样品液(定容至1750ml)；样品液用d101大孔树脂柱(d101大孔树脂500g)富集纯化，以3bv/h的速度上样，吸附14h后，先以纯水(2000ml)为一次洗脱剂，以4bv/h的速度进行一次分离洗脱，再以质量分数70％的乙醇水溶液(2500ml)为二次洗脱剂，以4bv/h的速度进行二次分离洗脱，收集二次分离洗脱液，浓缩至呈浸膏状，干燥，得到浸膏粉；
95.s3、取步骤s2所得浸膏粉(5.0g)，加甲醇溶解后，加入柱层层析硅胶(10.0g，200～300目)，混匀后干燥，得到干样；将干样填充到中压制备仪的样品管中，连接到中压硅胶色谱柱(硅胶200～300目)前端，先以石油醚与丙酮的混合液(体积比依次为2:1、1:1、1:2、1:4，石油醚与丙酮体积比2:1的用量为600ml，石油醚与丙酮体积比1:1的用量为600ml，石油醚与丙酮体积比1:2的用量为600ml，石油醚与丙酮的体积比1:4的用量为600ml)作为一次流动相，以10ml/min的速度进行一次纯化洗脱，再以丙酮与甲醇的混合液(体积比4:1，用量为600ml)作为二次流动相，以10ml/min的速度进行二次纯化洗脱，收集二次纯化洗脱液，经浓缩、干燥，得到木犀草苷及忍冬苷的粗品；经测算，粗品中木犀草苷及忍冬苷的含量分别为53.46％、35.53％；
96.s4、取步骤s3所得木犀草苷及忍冬苷的粗品，加甲醇溶解后，采用sephadex lh20凝胶柱层析分离，用甲醇以0.6ml/min的速度进行洗脱，分若干份收集流出液(每10～12ml流出液收集一管)，采用液相色谱法检测流出液组分，分别合并含木犀草苷的流出液及含忍冬苷的流出液，经浓缩、干燥后，用甲醇重结晶，分别得到木犀草苷及忍冬苷，经测算，木犀草苷及忍冬苷的纯度分别为99.2％、99.4％。

技术特征：
1.一种从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统，包括提取单元、分离单元及纯化单元，其特征在于：所述提取单元包括提取浓缩釜、提取溶剂罐、冷凝回流器、溶剂回收组件、充氮气组件及减压组件；所述分离单元包括依次设置的第一配液罐、树脂柱层析装置、第一洗脱液弃液罐、第一洗脱液收集罐及第一浓缩干燥器；所述纯化单元包括初级纯化组件及终级纯化组件，所述初级纯化组件包括依次设置的第二配液罐、硅胶柱色谱装置、第二洗脱液弃液罐、第二洗脱液收集罐及第二浓缩干燥器，所述终级纯化组件包括依次设置的第三配液罐、凝胶柱层析装置、流出液收集器、液相色谱仪、第三浓缩干燥器及重结晶装置；其中，所述提取浓缩釜包括釜体，釜体上套装有控温夹套，釜体的底部设置有用于支撑釜体的底座，釜体的顶部紧固安装有盖体，盖体上安装有压力表及压力控制阀；釜体内设置有搅拌组件，所述搅拌组件包括旋转滤筒，旋转滤筒底面的中心处垂直固定有转轴，转轴向上延伸至旋转滤筒的中部，旋转滤筒上端口处同轴设置有内环体，旋转滤筒内底面沿圆周方向间隔固定有第一叶片，内环体与旋转滤筒之间沿圆周方向间隔固定有第二叶片，釜体底部安装有用于驱动转轴转动的电机；盖体的中部设置有加料口，加料口处插接有环形架，环形架上压接有用于密封加料口的上端盖；环形架的底面均匀间隔固定有若干沿竖直方向延伸的导向杆，环形架的下方设置有滤篮，滤篮上、下两端的外缘均匀间隔设置有安装耳，安装耳上开设有与导向杆相适配的导孔，所述滤篮通过导孔实现沿导向杆上下移动；导向杆的底部套装有压缩弹簧，导向杆的底端安装有限位块，所述压缩弹簧的下端与限位块相顶接，压缩弹簧的上端与滤篮下端的安装耳相顶接；滤篮的上端口设置有压板，压板的顶面固定有推杆，推杆的顶部穿过上端盖、并连接有压滤油缸；盖体上固定有进液管、气管、蒸发出液管、冷凝回流管，釜体侧壁的顶部连接有蒸发回液管，釜体侧壁的底部连接有出液管，所述冷凝回流器设于蒸发出液管与冷凝回流管之间，所述溶剂回收组件设于蒸发出液管与蒸发回液管之间，所述充氮气组件及减压组件均与气管相连。2.根据权利要求1所述从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统，其特征在于：所述导向杆的底部向下延伸至旋转滤筒的中部，所述滤篮的直径小于内环体，滤篮的下部伸入旋转滤筒中，且滤篮的底部与转轴的顶部相靠接；转轴的顶部设置有转盘，转盘的上表面固定有若干半球形的第一凸块，所述第一凸块呈环形阵列分布，滤篮的下底面固定有若干半球形的第二凸块，所述第二凸块与第一凸块错位分布。3.根据权利要求1所述从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统，其特征在于：所述旋转滤筒包括上下相对设置的外环体，上下两个外环体之间沿圆周方向均匀间隔固定有过滤条，位于下侧的外环体内沿水平方向固定有过滤板，所述过滤板与釜体的内底面相靠接；所述第一叶片的一端与转轴固定连接，第一叶片的另一端与位于下侧的外环体固定连接，第一叶片的底面与过滤板无缝连接，转轴与第一叶片之间设置有加固肋板。4.根据权利要求1所述从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统，其特征在于：所述加料口包括管状部及连接于管状部顶部的外沿部，所述外沿部的外径大于管状部的外径，外沿部的内径呈阶梯状，所述环形架插接于外沿部的内侧，所述上端盖与外沿部之间安装有密封环，加料口处设置有用于固定上端盖的锁扣组件；所述锁扣组件包括呈u形的卡槽、第一固定片及第二固定片，所述第一固定片及第二固定片均固定于外沿部的外侧面，第一固定片上连接有伸缩气缸，所述伸缩气缸的缸筒底部与第一固定片铰接，所述伸
缩气缸的活塞杆沿水平伸出，且活塞杆的伸出端铰接有转接件，所述转接件上沿竖直方向设有第一铰接轴及第二铰接轴，所述第一铰接轴与第二固定片转动连接，第二铰接轴与活塞杆转动连接，所述转接件与卡槽的竖直侧面固定连接；通过伸缩气缸的活塞杆伸缩，带动卡槽绕第一铰接轴发生转动。5.根据权利要求1所述从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统，其特征在于：所述溶剂回收组件包括依次连接的气液分离器、冷凝器、冷却器及集液罐，蒸发出液管的出液端与气液分离器的进口相连接，气体分离器的液相出口与蒸发回液管相连接，蒸发回液管的出液端设置有u形缓冲管；所述集液罐的出口与提取溶剂罐的进口相连接，所述提取溶剂罐的进口还连接有乙醇进管及纯水进管，提取溶剂罐的出口及纯水进管均与进液管相连接；所述控温夹套内设置有流道，流道内流通有传热介质。6.根据权利要求1所述从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统，其特征在于：所述充氮气组件包括氮气罐及加压泵，所述减压组件包括真空泵及真空罐。7.根据权利要求1所述从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统，其特征在于：提取浓缩釜的四周沿竖直方向设置有支撑杆，支撑杆之间设置有支撑板，所述支撑杆及支撑板形成支撑架，且支撑板位于支撑架的下部；支撑架的上部设置有活动板，所述活动板呈十字形，活动板的四角与支撑杆滑动连接，支撑板上设置有支撑柱，支撑柱上沿竖直方向固定有支撑油缸，支撑油缸的活塞杆竖直向上伸出、并与活动板的底部相顶接；活动板的上方设置有安装板，所述安装板的四角与支撑杆滑动连接；所述釜体的底部安装于支撑板上，所述上端盖与环形架的内侧通过螺纹紧固连接，上端盖与活动板紧固连接，活动板上设置有供压滤油缸穿过的通孔，所述压滤油缸的顶部固定在安装板上。8.利用权利要求1至7任一所述系统从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、以经过清洗、干燥、粉碎的忍冬叶为生药，以质量分数50～70％的乙醇水溶液为提取溶剂，利用提取溶剂对生药提取2～4次；每次提取时，于60～85℃搅拌45～90min后，减压回收乙醇，排出提取浓缩液，再加入提取溶剂重复提取；提取结束后，合并提取浓缩液，经过滤，得到含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液；s2、用纯水稀释步骤s1中所得含木犀草苷及忍冬苷的浓缩液，得到样品液；样品液用树脂柱富集纯化，经上样、吸附后，先以纯水或质量分数8～12％的乙醇水溶液为一次洗脱剂，进行一次分离洗脱，再以质量分数50～70％的乙醇水溶液为二次洗脱剂，进行二次分离洗脱，收集二次分离洗脱液，浓缩至呈浸膏状，干燥，得到浸膏粉；s3、取步骤s2所得浸膏粉，加甲醇或乙醇溶解后，加入柱层析硅胶，混匀后干燥，得到干样；将干样填充到中压制备仪的样品管中，连接到中压硅胶色谱柱前端，先以石油醚与丙酮的混合液作为一次流动相，进行一次纯化洗脱，再以丙酮与甲醇的混合液作为二次流动相，进行二次纯化洗脱，收集二次纯化洗脱液，经浓缩、干燥，得到木犀草苷及忍冬苷的粗品；s4、取步骤s3所得木犀草苷及忍冬苷的粗品，加甲醇溶解后，采用凝胶柱层析分离，以甲醇洗脱，分若干份收集流出液，采用液相色谱法检测流出液组分，分别合并含木犀草苷的流出液及含忍冬苷的流出液，经浓缩、干燥后，用甲醇重结晶，分别得到木犀草苷及忍冬苷。9.根据权利要求8所述从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化方法，其特征在于：步骤s1中，每次提取时，提取溶剂的用量为生药质量的8～10倍，并且至少有一次提
取为充入氮气进行加压提取，压力控制为1.2～2.0atm；步骤s2中，用纯水稀释时，按照生药质量与样品液体积的比值为0.125～0.167g/ml进行定容；所述树脂柱中填充有d101大孔树脂，生药与d101大孔树脂的质量比为1:1.8～2.2，所述上样的速度为2～4bv/h，所述吸附的时长为4～14h；步骤s2中所述一次洗脱剂的用量为样品液中生药质量的6～8倍，所述二次洗脱剂的用量为样品液中生药质量的7～11倍，所述一次分离洗脱及二次分离洗脱时的洗脱速度均为3～4bv/h；步骤s3中，柱层层析硅胶的用量为步骤s2所得浸膏粉的1.8～2.5倍；所述一次流动相采用四级不同浓度比例的石油醚与丙酮进行洗脱，一级：石油醚与丙酮的体积比为2:1、用量为浸膏粉质量的50～130倍，二级：石油醚与丙酮的体积比为1:1、用量为浸膏粉质量的90～130倍，三级：石油醚与丙酮的体积比为1:2、用量为浸膏粉质量的90～130倍，四级：石油醚与丙酮的体积比为1:4、用量为浸膏粉质量的90～130倍；所述二次流动相中丙酮与甲醇的体积比为4:1，二次流动相的用量为浸膏粉质量的90～130倍；一次纯化洗脱及二次纯化洗脱的洗脱速度均为8～12ml/min；步骤s4中，所述洗脱的速度为0.5～1.0ml/min。10.根据权利要求8所述从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化方法，其特征在于：步骤s2中树脂柱的尺寸为步骤s3中柱层层析硅胶的粒度为200～300目，样品管的尺寸为中压硅胶色谱柱中填充的硅胶粒度为200～300目，中压硅胶色谱柱的尺寸为步骤s4中所述凝胶柱型号为sephadex lh20，凝胶柱尺寸为

技术总结
本发明公开了一种从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的提取分离纯化系统，包括提取单元、分离单元及纯化单元，利用提取浓缩釜完成对忍冬叶的提取与浓缩，利用树脂柱层析装置分离出含木犀草苷及忍冬苷的浸膏粉，利用硅胶柱色谱装置对浸膏粉进行初级纯化，得到木犀草苷及忍冬苷的粗品，再通过凝胶柱层析装置终极纯化、液相色谱仪定性分析及重结晶装置处理，得到木犀草苷及忍冬苷；本发明还公开了利用该提取分离纯化系统从忍冬叶中提取木犀草苷及忍冬苷的方法，步骤简单，获得的木犀草苷及忍冬苷纯度高，所用溶剂可回收、重复利用，大孔树脂及凝胶可反复使用，制备成本低、污染较少。污染较少。污染较少。


技术研发人员：马艳妮 李智宁 王韬 李飞飞 魏悦 赵一真 董然 王学方 李晓 王伟 朱杰 刘灵飞
受保护的技术使用者：河南省科学院
技术研发日：2023.08.04
技术公布日：2023/10/19