基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法与流程

1.本发明属于葡萄糖氧化酶电极技术领域，特别是基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法。


背景技术：

2.随着现代技术的不断发展，通过采用葡萄糖氧化酶电极对葡萄糖浓度进行快速检测得到不断的发展，其检测方法尤其是在医药、食品领域受到了广泛的应用。
3.家用血糖仪专用试纸的制备，是血糖检测的方便快捷的途径，而家用血糖仪专用试纸的制备原理是通过丝网印刷技术将制得的葡萄糖氧化酶电极试纸对血糖浓度产生电流响应，利用电子设备检测电流强度，并根据电流强度判断血糖浓度，进而实现血液中葡萄糖浓度的快速检测，检测方法简单快捷。
4.再家用血糖仪专用试纸的制备过程中，以使用电子媒介体的葡萄糖氧化酶电极最为常见，在众多电子媒介体中，二茂铁由于其具有良好的氧化还原可逆性，且不易溶解于水中发生流失，被作为葡萄糖氧化酶电极制作中常用的电子媒介体。二茂铁又称为环戊二烯基铁，是一种夹心型化合物，不溶于水，溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。由于化合物中含有铁元素，因此常被用作葡萄糖氧化酶电极的电子介体。由于二茂铁不溶于水，而葡萄糖氧化酶溶于水，因此在构建葡萄糖氧化酶电极的过程中，一般是采用分步法进行，即先将二茂铁的乙醇溶液覆盖在电极表面，待溶液挥发后形成二茂铁沉积层，然后再在二茂铁层上进一步修饰葡萄糖氧化酶层。该方法需要两个步骤方能完成，操作繁琐，而且该方法限制了二茂铁和葡萄糖氧化酶的接触面积，不利于二茂铁和酶之间的电子传递，从而影响电极的响应。另外，直接滴涂到电极表面的二茂铁和葡萄糖氧化酶在长时间使用时会逐渐脱落，从而影响电极的稳定性和灵敏度。
5.因此，需要对现有技术进行进一步的改善。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，以解决现有技术中的不足。
7.本发明采用的技术方案如下：
8.基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，包括以下步骤：
9.(1)取二茂铁，将过量的二茂铁添加到乙醇中，在常温下，搅拌混合均匀，配制得到成混合溶液；
10.对上述混合溶液进行高速离心处理，然后静置30min，取上清溶液，得到二茂铁的乙醇饱和溶液；
11.(2)取90-120μl二茂铁的乙醇饱和溶液，将其加入800-900μl的醋酸溶液中，以150r/min转速进行搅拌混合20min，混合均匀后，停止搅拌，得到复合溶液；
12.(3)随后向上述得到的复合溶液中加入0.8-1.2mg的葡萄糖氧化酶和10-30mg复合
改性介孔材料，以100r/min转速搅拌混合均匀，然后将在30℃水浴中超声处理1-12h，得到覆盖液；
13.(4)将上述制备得到的覆盖液覆盖在电极表面，待覆盖液挥发后再在电极表面涂覆质量分数为5％的nafion溶液，干燥后，得到基于介孔材料的葡萄糖氧化酶电极。
14.作为进一步的技术方案：步骤(1)中所述的高速离心处理的离心转速为5500r/min。
15.作为进一步的技术方案：步骤(2)中所述醋酸溶液质量分数为2％。
16.作为进一步的技术方案：步骤(3)中所述复合改性介孔材料制备方法为：
17.将石墨进行超微粉碎，得到石墨粉；
18.取3-4g的石墨粉添加到280ml的浓硫酸中，然后再在搅拌的条件下，添加1.2g的硝酸钠和12.5g的高锰酸钾，调节温度至42℃，保温搅拌8小时，然后再缓慢添加550ml的去离子水，边添加，边搅拌，同时，继续调节温度至48℃，保温反应2小时，然后进行抽滤，洗涤至中性，干燥，得到中间料；
19.将上述制备得到的18-25mg中间料、0.12-0.14g纳米膨润土、10-14mg溴代十六烷基三甲胺、150-160ml异丙醇添加到120ml氨水溶液中，以200r/min转速搅拌10min，再进行超声波处理5mimn，然后再添加0.8-1.2ml四乙氧基硅烷，调节温度至42℃，保温搅拌反应10小时，进行旋蒸干燥，再进行清洗，再干燥，即可。
20.作为进一步的技术方案：所述石墨粉粒度为750目。
21.作为进一步的技术方案：所述浓硫酸的浓度为18.4mol/l；
22.所述干燥的温度均为60℃，干燥时间不低于4小时。
23.作为进一步的技术方案：所述纳米膨润土平均粒度为35nm。
24.作为进一步的技术方案：步骤(3)所述的超声处理的频率为40khz。
25.作为进一步的技术方案：步骤(4)中覆盖液覆盖在电极表面为采用浸渍的方式实现：
26.具体为将电极完全插入到覆盖液中30s，然后取出，即可。
27.作为进一步的技术方案：步骤(4)所述在电极表面涂覆质量分数为5％的nafion溶液，其中电极与nafion溶液质量比为1:25-28。
28.有益效果：
29.本发明提供了基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，与现有酶电极制备方法相比，本发明方法通过以电子介体二茂铁和葡萄糖氧化酶同时固定在复合改性介孔材料的孔隙之中，能够大幅度的增强了电子介体二茂铁和葡萄糖氧化酶的稳定性，从而增强了葡萄糖氧化酶酶电极的稳定性，提高了葡萄糖氧化酶电极的灵敏性，本发明制备的复合改性介孔材料具有更高的比表面积和更复杂的孔隙结构，能够更好的对葡萄糖氧化酶进行吸附结合；
30.与现有分步法制备酶电极相比，本发明方法仅需一步便将复合改性介孔材料、电子介体二茂铁和葡萄糖氧化酶同时稳定地覆盖在电极表面，操作简便，大大增加了二茂铁和葡萄糖氧化酶的接触面积，从而实现电极响应信号、灵敏度和稳定性的增强，另外本方法制备的电极一致性也得到了提高。
附图说明
31.图1是实施例与对比例葡萄糖氧化酶电极电流响应时间柱状图。
具体实施方式
32.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
33.实施例1
34.基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，包括以下步骤：
35.(1)取二茂铁，将过量的二茂铁添加到乙醇中，在常温下，搅拌混合均匀，配制得到成混合溶液；
36.对上述混合溶液进行高速离心处理，然后静置30min，取上清溶液，得到二茂铁的乙醇饱和溶液；高速离心处理的离心转速为5500r/min。
37.(2)取90μl二茂铁的乙醇饱和溶液，将其加入800μl的醋酸溶液中，以150r/min转速进行搅拌混合20min，混合均匀后，停止搅拌，得到复合溶液；所述醋酸溶液质量分数为2％。
38.(3)随后向上述得到的复合溶液中加入0.8mg的葡萄糖氧化酶和10mg复合改性介孔材料，以100r/min转速搅拌混合均匀，然后将在30℃水浴中超声处理1h，得到覆盖液；超声处理的频率为40khz。
39.复合改性介孔材料制备方法为：
40.将石墨进行超微粉碎，得到石墨粉；
41.取3g的石墨粉添加到280ml的浓硫酸中，然后再在搅拌的条件下，添加1.2g的硝酸钠和12.5g的高锰酸钾，调节温度至42℃，保温搅拌8小时，然后再缓慢添加550ml的去离子水，边添加，边搅拌，同时，继续调节温度至48℃，保温反应2小时，然后进行抽滤，洗涤至中性，干燥，得到中间料；
42.将上述制备得到的18mg中间料、0.12g纳米膨润土、10mg溴代十六烷基三甲胺、150ml异丙醇添加到120ml氨水溶液中，以200r/min转速搅拌10min，再进行超声波处理5mimn，然后再添加0.8ml四乙氧基硅烷，调节温度至42℃，保温搅拌反应10小时，进行旋蒸干燥，再进行清洗，再干燥，即可；石墨粉粒度为750目；浓硫酸的浓度为18.4mol/l；
43.所述干燥的温度均为60℃，干燥时间不低于4小时。
44.纳米膨润土平均粒度为35nm。
45.(4)将上述制备得到的覆盖液覆盖在电极表面，待覆盖液挥发后再在电极表面涂覆质量分数为5％的nafion溶液，干燥后，得到基于介孔材料的葡萄糖氧化酶电极；覆盖液覆盖在电极表面为采用浸渍的方式实现：
46.具体为将电极完全插入到覆盖液中30s，然后取出，即可；在电极表面涂覆质量分数为5％的nafion溶液，其中电极与nafion溶液质量比为1:25。
47.电极表面葡萄糖氧化酶含量为22μg/cm3；
48.实施例2
49.基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，包括以下步骤：
50.(1)取二茂铁，将过量的二茂铁添加到乙醇中，在常温下，搅拌混合均匀，配制得到成混合溶液；
51.对上述混合溶液进行高速离心处理，然后静置30min，取上清溶液，得到二茂铁的乙醇饱和溶液；高速离心处理的离心转速为5500r/min。
52.(2)取100μl二茂铁的乙醇饱和溶液，将其加入820μl的醋酸溶液中，以150r/min转速进行搅拌混合20min，混合均匀后，停止搅拌，得到复合溶液；所述醋酸溶液质量分数为2％。
53.(3)随后向上述得到的复合溶液中加入0.9mg的葡萄糖氧化酶和12mg复合改性介孔材料，以100r/min转速搅拌混合均匀，然后将在30℃水浴中超声处理2h，得到覆盖液；超声处理的频率为40khz。
54.复合改性介孔材料制备方法为：
55.将石墨进行超微粉碎，得到石墨粉；
56.取3.5g的石墨粉添加到280ml的浓硫酸中，然后再在搅拌的条件下，添加1.2g的硝酸钠和12.5g的高锰酸钾，调节温度至42℃，保温搅拌8小时，然后再缓慢添加550ml的去离子水，边添加，边搅拌，同时，继续调节温度至48℃，保温反应2小时，然后进行抽滤，洗涤至中性，干燥，得到中间料；
57.将上述制备得到的20mg中间料、0.13g纳米膨润土、11mg溴代十六烷基三甲胺、152ml异丙醇添加到120ml氨水溶液中，以200r/min转速搅拌10min，再进行超声波处理5mimn，然后再添加0.9ml四乙氧基硅烷，调节温度至42℃，保温搅拌反应10小时，进行旋蒸干燥，再进行清洗，再干燥，即可；石墨粉粒度为750目；浓硫酸的浓度为18.4mol/l；
58.所述干燥的温度均为60℃，干燥时间不低于4小时。
59.纳米膨润土平均粒度为35nm。
60.(4)将上述制备得到的覆盖液覆盖在电极表面，待覆盖液挥发后再在电极表面涂覆质量分数为5％的nafion溶液，干燥后，得到基于介孔材料的葡萄糖氧化酶电极；覆盖液覆盖在电极表面为采用浸渍的方式实现：
61.具体为将电极完全插入到覆盖液中30s，然后取出，即可；在电极表面涂覆质量分数为5％的nafion溶液，其中电极与nafion溶液质量比为1:26。
62.电极表面葡萄糖氧化酶含量为22.6μg/cm3；
63.实施例3
64.基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，包括以下步骤：
65.(1)取二茂铁，将过量的二茂铁添加到乙醇中，在常温下，搅拌混合均匀，配制得到成混合溶液；
66.对上述混合溶液进行高速离心处理，然后静置30min，取上清溶液，得到二茂铁的乙醇饱和溶液；高速离心处理的离心转速为5500r/min。
67.(2)取110μl二茂铁的乙醇饱和溶液，将其加入880μl的醋酸溶液中，以150r/min转速进行搅拌混合20min，混合均匀后，停止搅拌，得到复合溶液；所述醋酸溶液质量分数为2％。
68.(3)随后向上述得到的复合溶液中加入1.0mg的葡萄糖氧化酶和18mg复合改性介
孔材料，以100r/min转速搅拌混合均匀，然后将在30℃水浴中超声处理3h，得到覆盖液；超声处理的频率为40khz。
69.复合改性介孔材料制备方法为：
70.将石墨进行超微粉碎，得到石墨粉；
71.取3.6g的石墨粉添加到280ml的浓硫酸中，然后再在搅拌的条件下，添加1.2g的硝酸钠和12.5g的高锰酸钾，调节温度至42℃，保温搅拌8小时，然后再缓慢添加550ml的去离子水，边添加，边搅拌，同时，继续调节温度至48℃，保温反应2小时，然后进行抽滤，洗涤至中性，干燥，得到中间料；
72.将上述制备得到的22mg中间料、0.13g纳米膨润土、12mg溴代十六烷基三甲胺、158ml异丙醇添加到120ml氨水溶液中，以200r/min转速搅拌10min，再进行超声波处理5mimn，然后再添加1.0ml四乙氧基硅烷，调节温度至42℃，保温搅拌反应10小时，进行旋蒸干燥，再进行清洗，再干燥，即可；石墨粉粒度为750目；浓硫酸的浓度为18.4mol/l；
73.所述干燥的温度均为60℃，干燥时间不低于4小时。
74.纳米膨润土平均粒度为35nm。
75.(4)将上述制备得到的覆盖液覆盖在电极表面，待覆盖液挥发后再在电极表面涂覆质量分数为5％的nafion溶液，干燥后，得到基于介孔材料的葡萄糖氧化酶电极；覆盖液覆盖在电极表面为采用浸渍的方式实现：
76.具体为将电极完全插入到覆盖液中30s，然后取出，即可；在电极表面涂覆质量分数为5％的nafion溶液，其中电极与nafion溶液质量比为1:26。
77.电极表面葡萄糖氧化酶含量为23.1μg/cm3；
78.实施例4
79.基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，包括以下步骤：
80.(1)取二茂铁，将过量的二茂铁添加到乙醇中，在常温下，搅拌混合均匀，配制得到成混合溶液；
81.对上述混合溶液进行高速离心处理，然后静置30min，取上清溶液，得到二茂铁的乙醇饱和溶液；高速离心处理的离心转速为5500r/min。
82.(2)取115μl二茂铁的乙醇饱和溶液，将其加入880μl的醋酸溶液中，以150r/min转速进行搅拌混合20min，混合均匀后，停止搅拌，得到复合溶液；所述醋酸溶液质量分数为2％。
83.(3)随后向上述得到的复合溶液中加入1.1mg的葡萄糖氧化酶和20mg复合改性介孔材料，以100r/min转速搅拌混合均匀，然后将在30℃水浴中超声处理4h，得到覆盖液；超声处理的频率为40khz。
84.复合改性介孔材料制备方法为：
85.将石墨进行超微粉碎，得到石墨粉；
86.取3.8g的石墨粉添加到280ml的浓硫酸中，然后再在搅拌的条件下，添加1.2g的硝酸钠和12.5g的高锰酸钾，调节温度至42℃，保温搅拌8小时，然后再缓慢添加550ml的去离子水，边添加，边搅拌，同时，继续调节温度至48℃，保温反应2小时，然后进行抽滤，洗涤至中性，干燥，得到中间料；
87.将上述制备得到的23mg中间料、0.13g纳米膨润土、13mg溴代十六烷基三甲胺、
158ml异丙醇添加到120ml氨水溶液中，以200r/min转速搅拌10min，再进行超声波处理5mimn，然后再添加1.1ml四乙氧基硅烷，调节温度至42℃，保温搅拌反应10小时，进行旋蒸干燥，再进行清洗，再干燥，即可；石墨粉粒度为750目；浓硫酸的浓度为18.4mol/l；
88.所述干燥的温度均为60℃，干燥时间不低于4小时。
89.纳米膨润土平均粒度为35nm。
90.(4)将上述制备得到的覆盖液覆盖在电极表面，待覆盖液挥发后再在电极表面涂覆质量分数为5％的nafion溶液，干燥后，得到基于介孔材料的葡萄糖氧化酶电极；覆盖液覆盖在电极表面为采用浸渍的方式实现：
91.具体为将电极完全插入到覆盖液中30s，然后取出，即可；在电极表面涂覆质量分数为5％的nafion溶液，其中电极与nafion溶液质量比为1:27。
92.电极表面葡萄糖氧化酶含量为23.3μg/cm3；
93.实施例5
94.基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，包括以下步骤：
95.(1)取二茂铁，将过量的二茂铁添加到乙醇中，在常温下，搅拌混合均匀，配制得到成混合溶液；
96.对上述混合溶液进行高速离心处理，然后静置30min，取上清溶液，得到二茂铁的乙醇饱和溶液；高速离心处理的离心转速为5500r/min。
97.(2)取120μl二茂铁的乙醇饱和溶液，将其加入900μl的醋酸溶液中，以150r/min转速进行搅拌混合20min，混合均匀后，停止搅拌，得到复合溶液；所述醋酸溶液质量分数为2％。
98.(3)随后向上述得到的复合溶液中加入1.2mg的葡萄糖氧化酶和30mg复合改性介孔材料，以100r/min转速搅拌混合均匀，然后将在30℃水浴中超声处理4h，得到覆盖液；超声处理的频率为40khz。
99.复合改性介孔材料制备方法为：
100.将石墨进行超微粉碎，得到石墨粉；
101.取4g的石墨粉添加到280ml的浓硫酸中，然后再在搅拌的条件下，添加1.2g的硝酸钠和12.5g的高锰酸钾，调节温度至42℃，保温搅拌8小时，然后再缓慢添加550ml的去离子水，边添加，边搅拌，同时，继续调节温度至48℃，保温反应2小时，然后进行抽滤，洗涤至中性，干燥，得到中间料；
102.将上述制备得到的25mg中间料、0.14g纳米膨润土、14mg溴代十六烷基三甲胺、160ml异丙醇添加到120ml氨水溶液中，以200r/min转速搅拌10min，再进行超声波处理5mimn，然后再添加1.2ml四乙氧基硅烷，调节温度至42℃，保温搅拌反应10小时，进行旋蒸干燥，再进行清洗，再干燥，即可；石墨粉粒度为750目；浓硫酸的浓度为18.4mol/l；
103.所述干燥的温度均为60℃，干燥时间不低于4小时。
104.纳米膨润土平均粒度为35nm。
105.(4)将上述制备得到的覆盖液覆盖在电极表面，待覆盖液挥发后再在电极表面涂覆质量分数为5％的nafion溶液，干燥后，得到基于介孔材料的葡萄糖氧化酶电极；覆盖液覆盖在电极表面为采用浸渍的方式实现：
106.具体为将电极完全插入到覆盖液中30s，然后取出，即可；在电极表面涂覆质量分
数为5％的nafion溶液，其中电极与nafion溶液质量比为1:28。
107.电极表面葡萄糖氧化酶含量为23.5μg/cm3；
108.对比例1：
109.在实施例1的基础上，调整步骤(3)中不添加复合改性介孔材料，其余步骤与实施例1技术方案相同。
110.对比例2：
111.在实施例1的基础上，调整步骤(3)中复合改性介孔材料制备过程中不添加石墨粉，其余步骤与实施例1技术方案相同。
112.试验
113.以铂片作为电极，进行试验：
114.灵敏度试验：
115.通过在葡萄糖氧化酶电极，饱和甘汞电极，铂电极组成的三电极体系中，通过用pbs缓冲液为电解液，其中，pbs缓冲液的ph为5.5，在相同的通电的条件下，当电流趋于平稳时，向电解液体系中加入低浓度的葡萄糖溶液，当电流出现变化，且电流变化值大于电流基线的波动值3倍，即信噪比大于3时，可以认为葡萄糖氧化酶电极对该浓度的葡萄糖有响应，依次检测不同浓度的葡萄糖，从而得到有响应的最低葡萄糖浓度，为最低检测限，如表1所示：
116.表1
[0117][0118][0119]
由表1可以看出，本发明方法制备的葡萄糖氧化酶电极的灵敏度具有大幅度的提高。
[0120]
对实施例与对比例葡萄糖氧化酶电极的电流响应时间进行记录，对比，其中，葡萄糖溶液浓度为1.0mmol/ml：
[0121]
表2
[0122]
电流响应时间/s实施例12.31实施例22.26实施例32.22实施例42.18
实施例52.13对比例18.34对比例25.63
[0123]
由表2可以看出，本发明制备的葡萄糖氧化酶电极的电流响应时间更短。
[0124]
以实施例1为基础试样，对比不同nafion溶液的质量分数，对于制备的葡萄糖氧化酶电极电流响应时间的影响：
[0125]
表3
[0126]
nafion溶液的质量分数电流响应时间/s12.5422.4652.3172.35102.39
[0127]
由表3可以看出，由表3可以看出，随着nafion溶液的质量分数的增加，葡萄糖氧化酶电极的电流响应时间先降低，后增加。
[0128]
图1为实施例与对比例葡萄糖氧化酶电极电流响应时间柱状图。
[0129]
以上所述仅为本发明的较佳实施例，但本发明不以所示限定实施范围，凡是依照本发明的构想所作的改变，或修改为等同变化的等效实施例，仍未超出说明书所涵盖的精神时，均应在本发明的保护范围内。

技术特征：
1.基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)取二茂铁，将过量的二茂铁添加到乙醇中，在常温下，搅拌混合均匀，配制得到成混合溶液；对上述混合溶液进行高速离心处理，然后静置30min，取上清溶液，得到二茂铁的乙醇饱和溶液；(2)取90-120μl二茂铁的乙醇饱和溶液，将其加入800-900μl的醋酸溶液中，以150r/min转速进行搅拌混合20min，混合均匀后，停止搅拌，得到复合溶液；(3)随后向上述得到的复合溶液中加入0.8-1.2mg的葡萄糖氧化酶和10-30mg复合改性介孔材料，以100r/min转速搅拌混合均匀，然后将在30℃水浴中超声处理1-12h，得到覆盖液；(4)将上述制备得到的覆盖液覆盖在电极表面，待覆盖液挥发后再在电极表面涂覆质量分数为5％的nafion溶液，干燥后，得到基于介孔材料的葡萄糖氧化酶电极。2.根据权利要求1所述的基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的高速离心处理的离心转速为5500r/min。3.根据权利要求1所述的基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，其特征在于：步骤(2)中所述醋酸溶液质量分数为2％。4.根据权利要求1所述的基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，其特征在于：步骤(3)中所述复合改性介孔材料制备方法为：将石墨进行超微粉碎，得到石墨粉；取3-4g的石墨粉添加到280ml的浓硫酸中，然后再在搅拌的条件下，添加1.2g的硝酸钠和12.5g的高锰酸钾，调节温度至42℃，保温搅拌8小时，然后再缓慢添加550ml的去离子水，边添加，边搅拌，同时，继续调节温度至48℃，保温反应2小时，然后进行抽滤，洗涤至中性，干燥，得到中间料；将上述制备得到的18-25mg中间料、0.12-0.14g纳米膨润土、10-14mg溴代十六烷基三甲胺、150-160ml异丙醇添加到120ml氨水溶液中，以200r/min转速搅拌10min，再进行超声波处理5mimn，然后再添加0.8-1.2ml四乙氧基硅烷，调节温度至42℃，保温搅拌反应10小时，进行旋蒸干燥，再进行清洗，再干燥，即可。5.根据权利要求4所述的基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，其特征在于：所述石墨粉粒度为750目。6.根据权利要求4所述的基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，其特征在于：所述浓硫酸的浓度为18.4mol/l；所述干燥的温度均为60℃，干燥时间不低于4小时。7.根据权利要求4所述的基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，其特征在于：所述纳米膨润土平均粒度为35nm。8.根据权利要求1所述的基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，其特征在于：步骤(3)所述的超声处理的频率为40khz。9.根据权利要求1所述的基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，其特征在于：步骤(4)中覆盖液覆盖在电极表面为采用浸渍的方式实现：具体为将电极完全插入到覆盖液中30s，然后取出，即可。
10.根据权利要求1所述的基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，其特征在于：步骤(4)所述在电极表面涂覆质量分数为5％的nafion溶液，其中电极与nafion溶液质量比为1:25-28。

技术总结
本发明公开了基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，涉及葡萄糖氧化酶电极技术领域，包括以下步骤：（1）得到二茂铁的乙醇饱和溶液；（2）得到复合溶液；（3）得到覆盖液；（4）得到基于介孔材料的葡萄糖氧化酶电极；本发明提供了基于介孔材料的一步法制备葡萄糖氧化酶电极的方法，与现有酶电极制备方法相比，本发明方法通过以电子介体二茂铁和葡萄糖氧化酶同时固定在复合改性介孔材料的孔隙之中，能够大幅度的增强了电子介体二茂铁和葡萄糖氧化酶的稳定性，从而增强了葡萄糖氧化酶酶电极的稳定性，提高了葡萄糖氧化酶电极的灵敏性。性。性。


技术研发人员：请求不公布姓名
受保护的技术使用者：深圳可孚生物科技有限公司
技术研发日：2023.08.30
技术公布日：2023/10/19