一种抗肾脏损伤化合物的医药用途

1.本发明属于医药领域，涉及已知化合物的新用途，具体涉及一种红车轴草素-7-o-β-d-吡喃葡糖苷的医药用途。


背景技术：

2.红车轴草素-7-o-β-d-吡喃葡糖苷(pratensein 7-o-glucopyranoside)是从黄芪中分离出来的一种天然化合物，化学结构如下：
[0003][0004]
基于红车轴草素-7-o-β-d-吡喃葡糖苷的活性研究结果，特提出本发明创造。


技术实现要素：

[0005]
本发明的目的在于提供一种红车轴草素-7-o-β-d-吡喃葡糖苷的医药用途。
[0006]
本发明上述目的通过如下技术方案实现：
[0007]
红车轴草素-7-o-β-d-吡喃葡糖苷用于制备抗肾脏损伤的药物的医药用途。
[0008]
进一步地，所述药物以红车轴草素-7-o-β-d-吡喃葡糖苷为活性成分，以药学上可以接受的载体或辅料，制成药学上可以接受的剂型。
[0009]
更进一步地，所述载体或辅料为固体、液体或半固体。
[0010]
更进一步地，所述剂型包括片剂、注射剂、胶囊、丸剂。
[0011]
有益效果：
[0012]
本发明发现，pratensein 7-o-glucopyranoside具有抗肾脏损伤的作用，该作用可能与其具有抑制ages诱导的足细胞损伤作用有关。因此，pratensein 7-o-glucopyranoside具备开发成抗肾脏损伤的药物的前景。
附图说明
[0013]
图1为肾脏损伤模型中pratensein 7-o-glucopyranoside对ages诱导的mpc-5小鼠肾足细胞ldh释放的影响；其中：ages为糖基化终末产物，给药浓度为5、10、20μm。
[0014]
图2为肾脏损伤模型中pratensein 7-o-glucopyranoside对ages诱导的肾足细胞
细胞活力影响；其中：ages为糖基化终末产物，给药浓度为5、10、20μm。
具体实施方式
[0015]
下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。
[0016]
一、实验材料
[0017]
1、实验用药品及细胞：
[0018]
pratensein 7-o-glucopyranoside自制，其纯度经hplc检测不低于95％。小鼠肾脏足细胞mpc-5为申请人实验室前期冻存。
[0019]
2、实验用试剂：
[0020]
表1实验用试剂及生产商名称
[0021][0022]
二、实验方法
[0023]
1、细胞培养
[0024]
(1)培养基的配制：用于小鼠肾足细胞mpc-5的培养基是基于rpmi 1640配置而成，所有培养基均含有10％胎牛血清(fetal bovine serum,fbs)、100u/ml青霉素、100u/ml链霉素。
[0025]
(2)细胞复苏：取冻存在液氮罐中的实验用细胞，置于提前准备好的37℃水浴锅中快速解冻，然后将细胞悬液按照1:2的比例与完全培养基混合，1000rpm，离心5min，弃上清，取适量完全培养基重悬细胞，均匀接种于直径10cm培养皿中。
[0026]
(3)细胞传代：细胞复苏以后，换液频率为1次/天，待细胞的融合率达到90％时进行传代。首先，弃去原有培养基，并用已经预热的pbs缓冲液2ml荡洗细胞，抽去pbs，加入浓度为0.25％的胰蛋白酶细胞消化液(含有edta)1ml，并保证所有细胞均被消化液覆盖，置于细胞培养箱中孵育约2min至细胞间隙变大，培养瓶底部呈现花斑状，即可用2ml的完全培养基进行消化的终止，轻轻吹打，将细胞悬液收集至5ml的离心管中，1000rpm，离心5min，弃上清，用完全培养基重悬细胞，取适量细胞悬液均匀接种于新的10cm培养皿中进行培养。
[0027]
(4)细胞冻存：上述细胞的冻存液按照空白培养基:fbs:dmso＝7:2:1的体积比进行配制。细胞经多次传代，融合率达到90％时，弃去原有培养基，并用已经预热的pbs缓冲液2ml荡洗细胞，抽去pbs，加入浓度为0.25％的胰蛋白酶细胞消化液(含有edta)1ml，并保证
所有细胞均被消化液覆盖，置于细胞培养箱中，消化至多数细胞间隙变大，培养瓶底部呈现花斑状，即可用2ml的完全培养基进行消化的终止，轻轻吹打，将细胞悬液收集至5ml的离心管中，1000rpm，离心5min，弃上清，用提前配制的细胞冻存液进行重悬，将细胞悬液分装于冻存管中，然后置于程序性细胞冻存盒中，-80℃条件下放置24h，最后转移至液氮罐中进行长期保存。
[0028]
2、分组、造模和给药
[0029]
取pratensein 7-o-glucopyranoside适量，精密称取，用dmso溶解配制成浓度为10mm的药物储备液，分装后置于-20℃保存。使用age诱导mpc-5细胞构建肾脏损伤模型。在此基础上，使用相应的完全培养基稀释得到5、10、20μm三个浓度，抽取原有培养基，并以换液的形式将所配置的药物溶液加入各孔，同时设置含有0.1％dmso的培养基的孔作为对照组，不含细胞的孔作为空白对照组，药物作用时间为24h。
[0030]
3、ldh释放水平检测
[0031]
(1)药物作用结束以后，将96孔板置于离心机中，按照400g的转速离心5min。按照分组，分别取各孔的上清液120μl置于一块新的96孔板中，备用。
[0032]
(2)ldh工作液的配制首先，根据需要将试剂盒中的10
×
的int溶液稀释10倍，配制得到1
×
int溶液；接下来按照乳酸溶液:1
×
int溶液:酶溶液＝1:1:1的方式配制得到ldh工作液。
[0033]
(3)样本中ldh检测取准备好的样本，加入现配的ldh工作液60μl/孔，充分混匀后，置于摇床上，40r/min，25℃条件下，避光孵育30min，使用酶标仪在490nm处进行吸光度值的检测，其中各样本组的吸光度值值记为a，相对应的酶活性最大释放组的吸光度值记为am，空白对照组的吸光度值记为ab，则ldh释放率(％)＝(a-ab)/(am-ab)
×
100。
[0034]
4、cck8细胞存活率检测
[0035]
(1)获取需要检测的mpc-5细胞，并将其接种在96孔板中。
[0036]
(2)在每个孔中加入适量的培养基和试验物质(如药物、化合物等)，并进行不同浓度的处理。
[0037]
(3)将板放入培养箱中，在适当的温度和co2条件下进行培养。
[0038]
(4)培养一定时间后，向每个孔中加入cck-8试剂，并继续培养一段时间。
[0039]
(5)检测吸收率，一般使用酶标仪或多功能酶标仪，读取波长为450nm时的od值。
[0040]
(6)根据od值计算细胞存活率。
[0041]
5、统计学分析
[0042]
所有的实验结果均使用graphpad prism 5.0软件进行分析，并以均数
±
标准偏差(mean
±
sd)的形式表示。其中，两组数据之间均值的比较采用t检验，三组或三组以上数据间均值的比较采用的是one-wayanova检验。p《0.05表示在统计学上具有显著性差异。
[0043]
三、实验结果
[0044]
如图1所示，模型组mpc-5细胞的ldh释放率较对照组显著升高，说明造模成功。与模型组相比，pratensein 7-o-glucopyranoside给药组能浓度依赖性的抑制对应损伤模型细胞的ldh释放。如图2所示，模型组mpc-5细胞的细胞存活率较对照组显著降低，说明造模成功。与模型组相比，pratensein 7-o-glucopyranoside给药组能浓度依赖性的提高对应损伤模型细胞的存活率。
[0045]
上述研究结果说明，pratensein 7-o-glucopyranoside具有抗肾脏损伤的作用，该作用可能与其具有抑制age诱导的足细胞有关。因此，pratensein 7-o-glucopyranoside具备开发成抗肾脏损伤的药物的前景。
[0046]
上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。

技术特征：
1.红车轴草素-7-o-β-d-吡喃葡糖苷用于制备抗肾脏损伤的药物的医药用途。2.根据权利要求1所述的医药用途，所述药物以红车轴草素-7-o-β-d-吡喃葡糖苷为活性成分，以药学上可以接受的载体或辅料，制成药学上可以接受的剂型。3.根据权利要求2所述的医药用途，所述载体或辅料为固体、液体或半固体。4.根据权利要求2所述的医药用途，所述剂型包括片剂、注射剂、胶囊、丸剂。

技术总结
本发明公开了一种抗肾脏损伤化合物的医药用途。本发明发现，红车轴草素-7-O-β-D-吡喃葡糖苷具有抗肾脏损伤的作用，红车轴草素-7-O-β-D-吡喃葡糖苷的这些作用可能与其具有抑制糖基化终末产物(advanced glycation endproducts，AGEs)诱导的肾脏损伤功能有关。因此，红车轴草素-7-O-β-D-吡喃葡糖苷具备开发成为抗肾脏损伤药物的前景。发成为抗肾脏损伤药物的前景。发成为抗肾脏损伤药物的前景。


技术研发人员：徐江雁 张效威 张振强 王潘 谢治深 向世勰 孙意冉 马慧芬
受保护的技术使用者：河南中医药大学
技术研发日：2023.08.05
技术公布日：2023/10/15