鱼精蛋白的用途的制作方法

1.本发明涉及鱼精蛋白的用途，具体地，本发明涉及鱼精蛋白在制备口腔护理产品中的应用。


背景技术：

2.随着人们生活水平的逐步提高，口腔健康问题正受到前所未有的关注。口腔漱口水作为一种新型的口腔保健用品逐渐进入人们的视野，并越来越受到快节奏都市人的喜爱。漱口水多以多种治疗口腔及咽喉疾病的有效成分相配合而成，具有良好的渗透性。在治疗口腔疾病的同时，还能清除因吃异味食物(生葱、大蒜、烟、酒等)，以及口疾、睡眠不良、精神紧张及消化不良等引起的口腔异味，且具有口腔清洁等作用。
3.口腔健康作为身体健康的重要组成部分，直接或间接影响全身健康。近年来，口腔健康的重要性愈发引起医学界的关注，尤其牙周病及牙菌斑方面，其核心是“炎症”问题，而炎症的有效控制在于“提高机体抵抗力”和“降低微生物数量”。最常用的降低口腔微生物数量的方法是刷牙和漱口，但刷牙并不能完全清除这些炎症。功能性的抑菌漱口水作为一种补充方法，具有良好的渗透性，可深入口腔各部位，包括牙刷难接触的牙龈边缘及牙缝间，从而起到有效的抑菌作用，改善口腔健康。
4.目前市面上漱口水中抗(抑)菌成分主要为溶霉菌，效果单一，或传统抑菌成分，会带来其他副作用，危害人体健康。
5.专利文献cn1373652公布了一种含茶多酚的口腔清洁剂组成物，用于祛除口臭，清新口气，但存在添加成分单一，作用有限，因此很难赋予漱口水多重功效。
6.专利文献cn105411914a公开了一种漱口水，该漱口水的原料按质量百分比计，包括：田七：8-10％、野菊花：68％、金银花：8-12％、薄荷：3-5％、洗必泰：3-5％、香精油：10-15％、聚氧乙烯氢化蓖麻油：3-6％、单氟磷酸钠：0.1-0.2％、去离子水：38-45％。该漱口水可以防止牙菌滋生、消除口臭、清热解毒、消肿止血、防敏感等功能。但该漱口水中含有的洗必泰将导致血压升高，进而增加心脏病和中风的几率等。
7.专利文献cn103006525a公开了一种去烟渍漱口水，其由矿化水、添加剂活性成分和中草药提取物组成，其中活性成分包括葡聚糖酶0.1份、蛋白酶0.2份、氢氧化钠0.2份、苯甲酸钠0.05份，中草药提取物包括木贼3-6份、乌鱼骨3-6份、田七2-3份、金银花2-3份、菊花2-3份、青果2-3份、冰片2-3份、侧柏叶3-4份、麦冬2-3份，添加剂包括蜂胶、乙醇、薄荷、维生素、丁香油、柠檬油等。该发明中的漱口水能够对口腔烟味和牙齿烟渍予以去除，但该漱口水中存在苯甲酸钠，众所周知，苯甲酸钠与胃酸反应会生产苯甲酸，苯甲酸有一定的毒性，长期饮用会引起人慢性苯中毒，尽管微量的苯甲酸钠目前来看对人体并不危害，但仍不确定长期使用后的情况。
8.针对目前漱口水存在的抗(抑)菌效果单一、副作用大、口感差等问题，亟需寻找一种多重抗(抑)菌效果、疗效好、副作用小、口感好的漱口水，在取得良好口腔防护效果的同时更加满足公众需求。


技术实现要素：

9.为了克服现有技术的缺点，本发明的目的是提供鱼精蛋白的用途，具体地，本发明提供鱼精蛋白在制备口腔护理产品中的应用。该口腔护理产品具有杀灭口腔致病菌、清新口气、改善口腔健康的功能，而且不会产生耐药性，没有副作用，温和安全。
10.本发明是通过下述技术方案来解决上述技术问题。
11.本发明提供了一种鱼精蛋白作为抑制口腔菌成分的非治疗目的的应用。
12.在某一方案中，所述的应用为制备口腔护理产品。
13.在某一方案中，所述口腔护理产品为牙膏、漱口水、牙齿清洁剂或牙齿护理敷料，优选为漱口水。
14.在某一方案中，所述的鱼精蛋白为鲑鱼来源的鱼精蛋白；进一步地，所述的鱼精蛋白来源上海辉文生物技术股份有限公司。
15.在某一方案中，所述口腔菌为变形链球菌(streptococcus mutans)；较佳地，所述变形链球菌(streptococcus mutans)的编号为atcc 35668。
16.所述的鱼精蛋白的有效抑菌浓度为＞0.001％，其中，“％”表示质量百分数。
17.本发明还提供了一种鱼精蛋白在制备抑制口腔菌药物中的应用，较佳地，所述口腔菌为变形链球菌(streptococcus mutans)；更佳地，所述变形链球菌(streptococcus mutans)的编号为atcc 35668。
18.所述的鱼精蛋白可如前任一方案所述。
19.所述的鱼精蛋白的有效抑菌浓度为＞0.001％，其中，“％”表示质量百分数。
20.本发明还提供了一种口腔护理产品，其包括以下组分：鱼精蛋白和水；所述鱼精蛋白的质量分数为0.001％-10％。
21.所述口腔护理产品中，各组分的质量分数之和为100％。
22.所述口腔护理产品中，所述鱼精蛋白的质量分数优选为0.001％-1％，例如0.001％、0.01％、0.1％、0.5％或1％。
23.所述口腔护理产品中，所述鱼精蛋白的质量分数优选为0.1％-1％。
24.所述口腔护理产品中，进一步还可包括口腔护理产品常规的添加剂。
25.所述口腔护理产品中，所述添加剂可选自润湿剂、ph调节剂、抑菌剂、防腐剂、清凉剂、甜味剂和赋香剂中的一种或多种。
26.所述口腔护理产品中，所述润湿剂为本领域口腔护理产品常规的润湿剂，其可提高口感顺滑口感，例如山梨醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇和甘油中的一种或多种，优选为1,3-丙二醇。
27.所述口腔护理产品中，所述润湿剂的质量分数为本领域常规，例如为3％-15％，优选10％。
28.所述口腔护理产品中，所述ph调节剂为本领域口腔护理产品常规的ph调节剂，例如精氨酸和/或柠檬酸钠-柠檬酸缓冲对，优选为精氨酸。
29.所述口腔护理产品中，所述ph调节剂的质量分数为本领域常规，例如0.001％-1％，优选为0.001％-0.01％，更优选为0.01％。
30.所述口腔护理产品中，所述抑菌剂为本领域口腔护理产品常规的抑菌剂，优选为西吡氯铵。
31.所述口腔护理产品中，所述抑菌剂的质量分数为本领域常规，优选为0.001％-1％，更优选为0.001％-0.05％，例如0.05％。
32.所述口腔护理产品中，所述防腐剂为本领域口腔护理产品常规的防腐剂，例如：山梨酸钾、尼泊金乙酯和尼泊金甲酯中的一种或多种，优选为尼泊金甲酯。
33.所述口腔护理产品中，所述防腐剂的质量分数为本领域常规，例如0.001％-0.4％，优选0.001％-0.2％，更优选为0.1％。
34.所述口腔护理产品中，所述清凉剂为本领域口腔护理产品常规的清凉剂，例如薄荷醇乳酸酯、薄荷醇、薄荷醇乙基氨基草酸酯和薄荷脑中的一种或多种，优选为薄荷脑。
35.所述口腔护理产品中，所述清凉剂的质量分数为本领域常规，例如0.001％-1％，优选0.001％-0.05％，更优选为0.05％。
36.所述口腔护理产品中，所述甜味剂为本领域口腔护理产品常规的甜味剂，例如木糖醇、甜菊糖苷和赤藓糖醇中的一种或多种，优选为甜菊糖苷和/或赤藓糖醇。
37.所述口腔护理产品中，所述甜味剂的质量分数为本领域常规，例如0.001％-5％，优选0.11-1％，更优选为0.11％或1％。
38.所述口腔护理产品中，当所述甜味剂为甜菊糖苷时，所述甜菊糖苷的质量分数为本领域常规，例如0.001％-1％，优选0.001％-0.11％，更优选为0.11％。
39.所述口腔护理产品中，当所述甜味剂为赤藓糖醇时，所述赤藓糖醇的质量分数为本领域口腔护理产品常规的质量分数，例如0.001％-5％，优选0.001％-1％，更优选为1％。
40.所述口腔护理产品中，所述赋香剂为本领域口腔护理产品常规的赋香剂，优选为香精，进一步优选为水蜜桃香精。
41.所述口腔护理产品中，所述赋香剂的质量分数可为本领域口腔护理产品常规的质量分数，优选为0.001％-1％，更优选0.001％-0.5％，例如0.5％。
42.所述口腔护理产品中，所述水优选为去离子水，所述去离子水优选为灭菌去离子水。
43.在某一方案中，所述口腔护理产品中，包括以下组分：所述鱼精蛋白、所述润湿剂、所述清凉剂、所述甜味剂和所述赋香剂，水补足余量。
44.在某一方案中，所述口腔护理产品中，包括以下组分：所述鱼精蛋白、所述润湿剂、所述清凉剂、所述甜味剂、所述赋香剂和所述ph调节剂，水补足余量。
45.在某一方案中，所述口腔护理产品中，包括以下组分：所述鱼精蛋白、所述润湿剂、所述清凉剂、所述甜味剂、所述赋香剂、所述ph调节剂和所述抑菌剂，水补足余量。
46.在某一方案中，所述口腔护理产品中，包括以下组分：所述鱼精蛋白、所述润湿剂、所述清凉剂、所述甜味剂、所述赋香剂、所述ph调节剂和所述防腐剂，水补足余量。
47.在某一方案中，所述口腔护理产品中，包括以下组分：所述鱼精蛋白、所述润湿剂、所述清凉剂、所述甜味剂、所述赋香剂、所述ph调节剂、所述抑菌剂和所述防腐剂，水补足余量。
48.在某一方案中，所述口腔护理产品中，包括以下组分：鱼精蛋白以及1,3-丙二醇、薄荷脑、甜菊糖苷、赤藓糖醇、香精、精氨酸、西吡氯铵和尼泊金甲酯中的一种或多种，水补足余量；
49.所述鱼精蛋白的质量分数为0.001-10％；
50.所述1,3-丙二醇的质量分数为10％；
51.所述精氨酸的质量分数为0.01％；
52.所述西吡氯铵的质量分数为0.05％；
53.所述尼泊金甲酯的质量分数为0.1％；
54.所述薄荷脑的质量分数为0.05％；
55.所述甜菊糖苷的质量分数为0.11％；
56.所述赤藓糖醇的质量分数为1％；
57.所述香精的质量分数为0.5％。
58.在某一方案中，所述口腔护理产品中，其包括下述任一配方：
59.配方1：0.5％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精和水，水补足余量；
60.配方2：1％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精和水，水补足余量；
61.配方3：0.1％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸、0.05％的西吡氯铵、0.1％的尼泊金甲酯和水，水补足余量；
62.配方4：0.1％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸、0.1％的尼泊金甲酯和水，水补足余量；
63.配方5：1％的鱼精蛋白和水，去离子水补足余量；
64.配方6：10％的鱼精蛋白和水，去离子水补足余量；
65.配方7：0.1％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸和水，水补足余量；
66.配方8：0.01％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸和水，水补足余量；
67.配方9：0.001％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸和水，水补足余量；
68.配方10：0.008％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸、0.002％的西吡氯铵和水，水补足余量；
69.配方11：0.005％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸、0.005％的西吡氯铵和水，水补足余量。
70.所述的鱼精蛋白可如前任一方案所述。
71.所述的口腔护理产品可如前任一方案所述。
72.本发明还提供了一种口腔护理产品，其由以下原料制备得到，所述原料包括以下组分：鱼精蛋白和水；所述鱼精蛋白的质量分数为0.001％-10％。
73.所述组分的定义可如前任一方案所述。
74.所述的鱼精蛋白可如前任一方案所述。
75.本发明还提供了所述口腔护理产品的制备方法，其包括如下步骤：将灭菌水与鱼
精蛋白混合即得到所述口腔护理产品；所述灭菌优选为高温灭菌，所述高温灭菌优选在85℃下进行；所述混合的温度优选为45℃以下。
76.所述制备方法优选还包括如下步骤：将灭菌水、鱼精蛋白混合和添加剂混合即得到所述口腔护理产品；所述灭菌优选为高温灭菌，所述高温灭菌优选在85℃下进行；所述混合的温度优选为45℃以下。
77.所述制备方法还可包括如下步骤：所述润湿剂和所述清凉剂加入前预先混合均匀。
78.所述制备方法还可包括如下步骤：所述混合后使用ph调节剂调节ph至6.5-7.0。
79.所述的鱼精蛋白可如前任一方案所述。
80.所述的口腔护理产品可如前任一方案所述。
81.在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
82.本发明所用试剂和原料均市售可得。
83.本发明的积极进步效果在于：本发明提供了鱼精蛋白的用途，具体地，本发明提供鱼精蛋白在制备口腔护理产品中的应用。该口腔护理产品具有杀灭口腔致病菌、清新口气、改善口腔健康的功能，而且不会产生耐药性，没有副作用，温和安全。
附图说明
84.图1为效果实施例7中阴性对照组和阳性对照组的鸡胚实验图。
85.图2为效果实施例7中实施例5的鸡胚实验图。
86.图3为效果实施例7中实施例6的鸡胚实验图。
具体实施方式
87.下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0088] 商品来源鱼精蛋白上海辉文生物技术股份有限公司(鲑鱼来源)金黄色葡萄球菌atcc6538金黄色葡萄球菌(中科质检)铜绿假单胞菌atcc 9027铜绿假单胞菌(中科质检)大肠杆菌atcc 8739大肠杆菌(中科质检)黑曲霉atcc 16404黑曲霉(中科质检)白色念球菌atcc 10231白色念球菌(中科质检)变形链球菌atcc 35668变形链球菌(中科质检)
[0089]
实施例1-11
[0090]
各实施例以及对比例漱口水中的各原料组分的种类及比例为如表1所示的原料组分及比例。
[0091]
表1：实施例漱口水中各原料组分的种类及比例
[0092][0093]
注：表中“/”表示不含该组分。
[0094]
表2：对比例漱口水中各原料组分的种类及比例
[0095]
[0096][0097]
注：表中“/”表示不含该组分
[0098]
实施例制备方法
[0099]
实施例1：
[0100]
1、将去离子水加入主锅，加热至85℃高温灭菌10min，开始降温搅拌；
[0101]
2、将1,3-丙二醇和薄荷脑预先混合溶解均匀，待主锅降温至45℃以下，加入主锅中，搅拌均匀；
[0102]
3、依次将甜菊糖苷、赤藓糖醇、香精、鱼精蛋白加入，搅拌溶解至无颗粒。
[0103]
实施例2：
[0104]
1、将去离子水加入主锅，加热至85℃高温灭菌10min，开始降温搅拌；
[0105]
2、将1,3-丙二醇和薄荷脑预先混合溶解均匀，待主锅降温至45℃以下，加入主锅中，搅拌均匀；
[0106]
3、依次将甜菊糖苷、赤藓糖醇、香精、鱼精蛋白加入，搅拌溶解至无颗粒。
[0107]
实施例3：
[0108]
1、将去离子水和尼泊金甲酯混合加入主锅，开启搅拌，加热至85℃，搅拌至完全溶解均匀；
[0109]
2、将1,3-丙二醇和薄荷脑预先混合溶解均匀，待主锅降温至45℃以下，加入主锅中，搅拌均匀；
[0110]
3、依次将甜菊糖苷、赤藓糖醇、香精、鱼精蛋白、西吡氯铵加入主锅，搅拌溶解至无颗粒；
[0111]
4、检测ph，加入精氨酸，ph调节至6.5-7.0。
[0112]
实施例4：
[0113]
1、将去离子水和尼泊金甲酯混合加入主锅，开启搅拌，加热至85℃，搅拌至完全溶解均匀；
[0114]
2、将1,3-丙二醇和薄荷脑预先混合溶解均匀，待主锅降温至45℃以下，加入主锅中，搅拌均匀；
[0115]
3、依次将甜菊糖苷、赤藓糖醇、香精、鱼精蛋白加入主锅，搅拌溶解至无颗粒；
[0116]
4、检测ph，加入精氨酸，ph调节至6.5-7.0。
[0117]
实施例5：
[0118]
1、将去离子水加入主锅，加热至85℃高温灭菌10min，开始降温搅拌；
[0119]
2、主锅降温至45℃以下，加入鱼精蛋白，搅拌溶解均匀。
[0120]
实施例6：
[0121]
1、将去离子水加入主锅，加热至85℃高温灭菌10min，开始降温搅拌；
[0122]
2、主锅降温至45℃以下，加入鱼精蛋白，搅拌溶解均匀。
[0123]
实施例7：
[0124]
1、将去离子水加入主锅，加热至85℃高温灭菌10min，开始降温搅拌；
[0125]
2、将1,3-丙二醇和薄荷脑预先混合溶解均匀，待主锅降温至45℃以下，加入主锅中，搅拌均匀；
[0126]
3、依次将甜菊糖苷、赤藓糖醇、香精、鱼精蛋白加入，搅拌溶解至无颗粒；
[0127]
4、检测ph，加入精氨酸，ph调节至6.5-7.0。
[0128]
实施例8：
[0129]
1、将去离子水加入主锅，加热至85℃高温灭菌10min，开始降温搅拌；
[0130]
2、将1,3-丙二醇和薄荷脑预先混合溶解均匀，待主锅降温至45℃以下，加入主锅中，搅拌均匀；
[0131]
3、依次将甜菊糖苷、赤藓糖醇、香精、鱼精蛋白加入，搅拌溶解至无颗粒；
[0132]
4、检测ph，加入精氨酸，ph调节至6.5-7.0
[0133]
实施例9：
[0134]
1、将去离子水加入主锅，加热至85℃高温灭菌10min，开始降温搅拌；
[0135]
2、将1,3-丙二醇和薄荷脑预先混合溶解均匀，待主锅降温至45℃以下，加入主锅中，搅拌均匀；
[0136]
3、依次将甜菊糖苷、赤藓糖醇、香精、鱼精蛋白加入，搅拌溶解至无颗粒；
[0137]
4、检测ph，加入精氨酸，ph调节至6.5-7.0。
[0138]
实施例10：
[0139]
1、将去离子水加入主锅，加热至85℃高温灭菌10min，开始降温搅拌；
[0140]
2、将1,3-丙二醇和薄荷脑预先混合溶解均匀，待主锅降温至45℃以下，加入主锅中，搅拌均匀；
[0141]
3、依次将甜菊糖苷、赤藓糖醇、香精、鱼精蛋白、西吡氯铵加入，搅拌溶解；
[0142]
4、检测ph，加入精氨酸，ph调节至6.5-7.0。
[0143]
实施例11：
[0144]
1、将去离子水加入主锅，加热至85℃高温灭菌10min，开始降温搅拌；
[0145]
2、将1,3-丙二醇和薄荷脑预先混合溶解均匀，待主锅降温至45℃以下，加入主锅中，搅拌均匀；
[0146]
3、依次将甜菊糖苷、赤藓糖醇、香精、鱼精蛋白、西吡氯铵加入，搅拌溶解；
[0147]
4、检测ph，加入精氨酸，ph调节至6.5-7.0。
[0148]
对比例1：
[0149]
1、将去离子水和尼泊金甲酯混合加入主锅，开启搅拌，加热至85℃，搅拌至完全溶解均匀；
[0150]
2、将1,3-丙二醇和薄荷脑预先混合溶解均匀，待主锅降温至45℃以下，加入主锅中，搅拌均匀；
[0151]
3、依次将甜菊糖苷、赤藓糖醇、香精加入主锅，搅拌溶解至无颗粒；
[0152]
4、检测ph，加入精氨酸，ph调节至6.5-7.0。
[0153]
对比例2：
[0154]
1、将去离子水加入主锅，加热至85℃高温灭菌10min，开始降温搅拌；
[0155]
2、将1,3-丙二醇和薄荷脑预先混合溶解均匀，待主锅降温至45℃以下，加入主锅
中，搅拌均匀；
[0156]
3、依次将甜菊糖苷、赤藓糖醇、香精、西吡氯铵加入，搅拌溶解；
[0157]
4、检测ph，加入精氨酸，ph调节至6.5-7.0。
[0158]
效果实施例
[0159]
1、鱼精蛋白在漱口水中应用对不同菌快速杀菌测试
[0160]
测试方法：
[0161]
①
取适量的菌体接种于tsa琼脂斜面，36
±
1℃，培养18-24h。用接种环取第1代培养物，划线接种于tsa琼脂斜面，36
±
1℃，培养18-24h。吸取1ml无菌生理盐水加入斜面试管内，反复吹洗，洗下菌苔。将洗液转移至另一无菌试管中，涡旋混匀20s。用无菌生理盐水将其稀释，使的菌液od
600nm
在0.1-1之间，od
600
＝1时对应的细菌浓度约为2
×
109cfu/ml，按照比例稀释菌液100到1000倍，使得菌液终浓度在1-2
×
107cfu/ml。
[0162]
②
快速杀菌测试：取100微升稀释好的菌液，加入到装有10ml漱口水的试管中，震荡2min，取100微升涂布tsa平板，三个平行。对照组取100微升菌液，加入到装有10ml无菌生理盐水的试管中，涡旋震荡2min，取100微升涂布tsa平板，三个平行。将tsa平板置于恒温培养箱中37℃培养24小时，计数统计。
[0163]
结果如下所示：
[0164]
表3实施例7对不同菌的2min快速杀菌测试结果
[0165]
样品名称杀菌体系菌种cfu/ml杀菌率对照组\\1.6
×
105\实施例70.1％鱼精蛋白金黄色葡萄球菌1232092.3％实施例70.1％鱼精蛋白大肠杆菌624096.1％实施例70.1％鱼精蛋白变形链球菌0＞99.9％
[0166]
测试结果：鱼精蛋白对变形链球菌的2min快速杀菌率大于99.9％，对金黄色葡萄球菌的2min快速杀菌率为92.3％，对大肠杆菌的2min快速杀菌率为96.1％，可确定鱼精蛋白对变形链球菌的抑菌效果，比对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果更佳。
[0167]
2、实施例4及对比例1对金黄色葡萄球菌快速杀菌测试：
[0168]
测试方法同效果实施例1。
[0169]
结果如下所示：
[0170]
表4实施例4和对比例1对金黄色葡萄球菌的2min快速杀菌测试结果
[0171]
样品名称杀菌体系cfu/ml杀菌率对照组/1.1
×
105/实施例40.1％甲酯+0.1％鱼精蛋白330097％对比例10.1％甲酯1200089.1％
[0172]
测试结果表明实施例4相对于对比例1，对金黄色葡萄球菌的2min快速杀菌效果增加了7.9％，可确定鱼精蛋白对金黄色葡萄球菌有明显的快速杀菌效果。
[0173]
3、实施例1-4及对比例1在漱口水中应用2min快速抑菌测试(口腔菌)
[0174]
测试方法同效果实施例1。
[0175]
结果如下所示：
[0176]
表5实施例1-4以及对比例1对变形链球菌的2min快速杀菌测试结果
[0177][0178]
测试结果：实施例1-4对变形链球菌的2min快速杀菌率大于99.9％，并且相对于对比例1，对变形链球菌的2min快速杀菌效果增加了11.8％，可确定鱼精蛋白对变形链球菌有明显的快速杀菌效果。
[0179]
4、鱼精蛋白在漱口水中应用快速杀菌有效浓度范围测试
[0180]
测试方法同效果实施例1。
[0181]
结果如下所示：
[0182]
表6实施例7-9对变形链球菌的2min快速杀菌测试结果
[0183][0184][0185]
测试结果：实施例7对变形链球菌的2min快速杀菌率大于99.9％，实施例8对变形链球菌的2min快速杀菌率为99.8％，实施例9对变形链球菌的2min快速杀菌率为89.1％。判断漱口水中的鱼精蛋白的有效抑菌浓度为＞0.001％。
[0186]
5、鱼精蛋白(组合物)在漱口水中应用快速杀菌有效浓度范围测试测试方法同效果实施例1。
[0187]
结果如下所示：
[0188]
表7实施例对变形链球菌的2min快速杀菌测试结果
[0189][0190]
测试结果：
[0191]
①
实施例8对变形链球菌的2min快速杀菌率99.8％，并且相对于对比例1，对变形链球菌的2min快速杀菌效果增加了20.7％，可确定鱼精蛋白对变形链球菌抑菌效果比西吡氯铵高。
[0192]
②
实施例10对变形链球菌的2min快速杀菌率＞99.9％，相对于对比例，对变形链球菌的2min快速杀菌效果增加了20.8％，可确定鱼精蛋白能够增效西吡氯铵对变形链球菌抑菌效果。
[0193]
6、实施例1-2鱼精蛋白在漱口水中应用防腐挑战测试
[0194]
测试方法：
[0195]
6.1微生物接种物培养方法
[0196]
6.1.1铜绿假单胞菌\金黄色葡萄球菌\大肠杆菌菌液的制备
[0197]
保存好的试管斜面上(或菌种保存管中)取适量的菌体接种于tsa琼脂斜面，36
±
1℃，培养18-24h。用接种环取第1代培养物，划线接种于tsa平板，36
±
1℃，培养18-24h。挑取上述第2代培养物中典型菌落，划线接种于tsa琼脂斜面，36
±
1℃，培养18-24h，即为第3代培养物。吸取适量的无菌生理盐水加入斜面试管内，反复吹洗，洗下菌苔。将洗液转移至另一无菌试管中，涡旋混匀20s。用无菌生理盐水将其稀释成约1.0
×
107cfu/ml～1.0
×
108cfu/ml的菌悬液。
[0198]
6.1.2白色念球菌菌液的制备
[0199]
从保存好的试管斜面上(或菌种保存管中)取适量的菌体接种于沙氏葡萄糖琼脂斜面，28
±
2℃，培养18-24h。用接种环取第1代培养物，划线接种于sda平板，28
±
2℃，培养18-24h。挑取上述第2代培养物中典型菌落，划线接种于sda琼脂斜面，28
±
2℃，培养18-24h，即为第3代培养物。吸取适量的无菌pbs缓冲液加入斜面试管内，反复吹洗，洗下菌苔。将洗液转移至另一无菌试管中，涡旋混匀20s。用pbs缓冲液将其稀释成约1.0-106cfu/ml～1.0-107cfu/ml的菌悬液。
[0200]
6.1.3黑曲霉孢子悬液的制备
[0201]
从保存好的试管斜面上(或菌种保存管中)取适量的菌体接种于马铃薯葡萄糖琼脂斜面，22.5
±
2.5℃，培养7-11d。吸取适量的无菌0.05％(v/v)吐温80生理盐水加入斜面试管内，刮洗黑曲霉分生孢子于溶液中。将孢子悬液转移至装有玻璃珠的无菌三角瓶中，轻轻振摇1min后，用无菌玻璃棉过滤除去菌丝。用无菌0.05％(v/v)吐温80生理盐水将其稀释成约1.0
×
106cfu/ml～1.0
×
107cfu/ml的孢子悬液。
[0202]
6.2化妆品以及化妆品原料防腐挑战(倾注计数法)
[0203]
6.2.1接种：取0.2ml菌液，分别加入到装有20g或20ml样品的无菌塑料瓶中，彻底混合均匀。接种后的样品置于22.5℃
±
2.5℃培养，分别在7，28天计数。
[0204]
6.2.2计数：取0.1ml样品，涂布到相应的培养皿中进行计数，如平板上生长菌落数较多，可进行10倍系列稀释，选择合适的稀释度进行平板计数。黑曲霉菌在22.5
±
2.5℃培养3-5d；铜绿假单胞菌\金黄色葡萄球菌\大肠杆菌和白色假丝酵母菌在32.5
±
2.5℃培养48-72h。
[0205]
6.2.3选取菌落数在30-300cfu(细菌和白色假丝酵母菌)或者15-150cfu(黑曲霉)的平板进行计数，以对数值作为最终结果。
[0206]
表8测试标准：(参考ctfa的防腐挑战测试标准)
[0207][0208]
根据ctfa法规的测试标准，表中
“‑‑”
表示7天数据未达标，28天则不需要进一步检测。所有计数结果均使用对数值。
[0209]
表9实施例1防腐挑战测试结果
[0210][0211]
所有计数结果均使用对数值。
[0212]
表10实施例2防腐挑战测试结果
[0213][0214]
所有计数结果均使用对数值。
[0215]
测试结果：实施例1和实施例2对铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念球菌均有优秀的防腐性能(28天结果，相当于常规条件下储存3年)。
[0216]
7、鱼精蛋白在漱口水中应用温和性测试(鸡胚实验)
[0217]
测试方法：
[0218]
7.1检测依据：
[0219]
sn/t2329-2009《化妆品眼部刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验》。
[0220]
7.2检测方法
[0221]
7.2.1材料与试剂
[0222]
①
spf级鸡胚：50～60g，购于济南塞斯家禽科技有限公司。检测报告编号：jnbz-2022423
[0223]
②
阴性对照/溶剂对照：氯化钠(nacl)，采用去离子水配制，试验浓度为0.9％。
[0224]
③
阳性对照：氢氧化钠(naoh)，采用去离子水配制，试验浓度为0.1mol/l。asv(脂肪醇醚硫酸钠盐混合物)，采用去离子水配制，试验浓度分别为0.5％、1.0％和5.0％。
[0225]
7.2.2仪器与设备
[0226]
主要仪器设备信息见下表。
[0227][0228]
7.2.3鸡胚制备
[0229]
购买7日龄以内的受精鸡胚。气室朝上贮存于蛋架上运输，避免对鸡胚进行摇动、不必要的倾斜、敲打以及其他机械性刺激。将受精鸡胚放于37.5
±
0.5℃，55％～70％湿度的孵育箱中孵育9日。
[0230]
7.2.4cam制备
[0231]
9日龄鸡胚进行照蛋检查，在蛋壳表面标记气室位置，用牙科锯齿弯镊剥去带标记的蛋壳部分，暴露白色蛋膜，应小心操作不破坏蛋膜完整性。用吸管滴加1毫升0.9％的氯化钠溶液使蛋膜湿润，然后将氯化钠溶液倾出，小心用镊子去除内膜，保证血管膜不受损。
[0232]
7.2.5试验分组
[0233]
阴性对照：0.9％氯化钠溶液，1只鸡胚；
[0234]
阳性对照：0.1mol/lnaoh，1只鸡胚；
[0235]
0.5％asv，1只鸡胚；
[0236]
1％asv，1只鸡胚；
[0237]
5％asv，1只鸡胚；
[0238]
试验组：1％-10％鱼精蛋白溶液，6只鸡胚
[0239]
7.2.6反应时间法
[0240]
如果待测样品为透明液体受试物，采用反应时间法。直接取0.3ml滴加于cam膜表面，观察cam反应情况、并记录作用5min内每种毒性效应出现的时间。
[0241]
7.2.7结果计算
[0242]
①
刺激评分法：采用反应时间法进行测试，应用式(1)计算刺激评分(is)，结果保留小数点后两位：
[0243][0244][0245][0246]
[0247]
式中：
[0248]
sech(出血时间hemorhage time)——cam膜上观察到开始发生出血的平均时间，单位为秒(s)；
[0249]
secl(血管融解时间vessellysis time)——cam膜上观察到开始发生血管融解的平均时间，单位为秒(s)；
[0250]
secc(凝血时间coagulation time)——cam膜上观察到开始出现凝血的平均时间，单位为秒(s)。
[0251]
根据计算的is数值对受试物眼刺激性进行分类。
[0252]
表11刺激评分法结果评价
[0253]
刺激评分刺激性分类is＜1无刺激性1≤is＜5轻刺激性5≤is＜9中度刺激性is≥10强刺激性/腐蚀性
[0254]
7.2.8检测结果
[0255]
阴性对照组未出现出血、凝血和血管溶解现象，刺激性评分is＝0.00,无刺激性；阳性对照组，出现出血和凝血现象，刺激性评分is＝12.98，试验结果可接受；鸡胚检测结果如图1所示。待测物为透明水状无色液体，采用反应时间评价法进行评价，经检测，实施例5作用于6只鸡胚，其中有1只观察到凝血现象，未观察到出血现象和融血现象，刺激性评分is＝0.05分，鸡胚检测结果如图2所示。实施例6作用于6只鸡胚，其中有2只观察到凝血现象，未观察到出血现象和融血现象，刺激性评分is＝0.25分，鸡胚检测结果如图3所示。结果见下表：
[0256]
表12刺激评分结果及评价
[0257][0258]
结论：经检测，实施例5依据sn/t2329-2009《化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验》终点评价法的结果判定标准，is平均值为0.05分。实施例6依据sn/t2329-2009《化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验》终点评价法的结果判定标准，is平均值为0.25分。实施例5、实施例6受试物具有无刺激性，鱼精蛋白在≤10％添加量无刺激性。

技术特征：
1.一种鱼精蛋白作为抑制口腔菌成分的非治疗目的的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的应用为制备口腔护理产品；所述口腔护理产品可为牙膏、漱口水、牙齿清洁剂或牙齿护理敷料，优选为漱口水；和/或，所述的鱼精蛋白为鲑鱼来源的鱼精蛋白；和/或，所述的鱼精蛋白的有效抑菌浓度为＞0.001％，其中，“％”表示质量百分数；和/或，所述口腔菌为变形链球菌(streptococcus mutans)；较佳地，所述变形链球菌(streptococcus mutans)的编号为atcc 35668。3.一种鱼精蛋白在制备抑制口腔菌药物中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述口腔菌为变形链球菌(streptococcus mutans)；较佳地，所述变形链球菌(streptococcus mutans)的编号为atcc 35668；和/或，所述的鱼精蛋白为鲑鱼来源的鱼精蛋白；和/或，所述的鱼精蛋白的有效抑菌浓度为＞0.001％，其中，“％”表示质量百分数。5.一种口腔护理产品，其包括以下组分：鱼精蛋白和水；所述鱼精蛋白的质量分数为0.001％-10％。6.如权利要求5所述的口腔护理产品，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种：(1)所述口腔护理产品中，各组分的质量分数之和为100％；(2)所述鱼精蛋白的质量分数为0.001％-1％，例如0.001％、0.01％、0.1％、0.5％或1％；优选为0.1％-1％；(3)所述口腔护理产品中，还包括添加剂；所述添加剂可选自润湿剂、ph调节剂、抑菌剂、防腐剂、清凉剂、甜味剂和赋香剂中的一种或多种；(4)所述口腔护理产品为牙膏、漱口水、牙齿清洁剂或牙齿护理敷料，优选为漱口水；和(5)所述的鱼精蛋白为鲑鱼来源的鱼精蛋白。7.如权利要求6所述的口腔护理产品，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种：(1)所述口腔护理产品中，所述润湿剂为山梨醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇和甘油中的一种或多种，优选为1,3-丙二醇；(2)所述润湿剂的质量分数为3％-15％，优选10％；(3)所述口腔护理产品中，所述ph调节剂为精氨酸和/或柠檬酸钠-柠檬酸缓冲对，优选为精氨酸；(4)所述口腔护理产品中，所述ph调节剂的质量分数为0.001％-1％，优选为0.001％-0.01％，更优选为0.01％；(5)所述口腔护理产品中，所述抑菌剂为西吡氯铵和葡萄糖氯己定中的一种或两种；优选为西吡氯铵；(6)所述口腔护理产品中，所述抑菌剂的质量分数为0.001％-1％，优选为0.001％-0.05％，例如0.05％；(7)所述口腔护理产品中，所述防腐剂为山梨酸钾、尼泊金乙酯和尼泊金甲酯中的一种或多种，优选为尼泊金甲酯；(8)所述口腔护理产品中，所述防腐剂的质量分数为0.001％-0.4％，优选0.001％-0.2％，更优选为0.1％；(9)所述口腔护理产品中，所述清凉剂选自薄荷醇乳酸酯、薄荷醇、薄荷醇乙基氨基草
酸酯和薄荷脑中的一种或多种，优选为薄荷脑；(10)所述口腔护理产品中，所述清凉剂的质量分数为0.001％-1％，优选0.001％-0.05％，更优选为0.05％；(11)所述口腔护理产品中，所述甜味剂为木糖醇、甜菊糖苷和赤藓糖醇中的一种或多种，优选为甜菊糖苷和/或赤藓糖醇；当所述甜味剂为甜菊糖苷时，所述甜菊糖苷的质量分数为0.001％-1％，优选0.001％-0.11％，更优选为0.11％；当所述甜味剂为赤藓糖醇时，所述赤藓糖醇的质量分数为0.001％-5％，优选0.001％-1％，更优选为1％；(12)所述口腔护理产品中，所述甜味剂的质量分数为0.001％-5％，优选0.11-1％，更优选为0.11％或1％(13)所述赋香剂为香精，优选为水蜜桃香精；(14)所述口腔护理产品中，所述赋香剂的质量分数为0.001％-1％，优选0.001％-0.5％，例如0.5％；和(15)所述口腔护理产品中，所述水为去离子水，所述去离子水优选为灭菌去离子水。8.如权利要求5-7任一项所述的口腔护理产品，其特征在于，所述口腔护理产品中，包括以下任一组分：(1)所述鱼精蛋白、所述润湿剂、所述清凉剂、所述甜味剂和所述赋香剂，水补足余量；(2)所述鱼精蛋白、所述润湿剂、所述清凉剂、所述甜味剂、所述赋香剂和所述ph调节剂，水补足余量；(3)所述鱼精蛋白、所述润湿剂、所述清凉剂、所述甜味剂、所述赋香剂、所述ph调节剂和所述抑菌剂，水补足余量；(4)所述鱼精蛋白、所述润湿剂、所述清凉剂、所述甜味剂、所述赋香剂、所述ph调节剂和所述防腐剂，水补足余量；(5)所述鱼精蛋白、所述润湿剂、所述清凉剂、所述甜味剂、所述赋香剂、所述ph调节剂、所述抑菌剂和所述防腐剂，水补足余量；和(6)鱼精蛋白以及1,3-丙二醇、薄荷脑、甜菊糖苷、赤藓糖醇、香精、精氨酸、西吡氯铵和尼泊金甲酯中的一种或多种，水补足余量；所述鱼精蛋白的质量分数为0.001-10％；所述1,3-丙二醇的质量分数为10％；所述精氨酸的质量分数为0.01％；所述西吡氯铵的质量分数为0.05％；所述尼泊金甲酯的质量分数为0.1％；所述薄荷脑的质量分数为0.05％；所述甜菊糖苷的质量分数为0.11％；所述赤藓糖醇的质量分数为1％；所述香精的质量分数为0.5％。9.如权利要求8所述的口腔护理产品，其特征在于，所述口腔护理产品中，其包括下述任一配方：(1)配方1：0.5％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精和水，水补足余量；(2)配方2：1％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精和水，水补足余量；(3)配方3：0.1％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸、0.05％的西吡氯铵、0.1％的尼泊金甲酯和水，水补足余量；
(4)配方4：0.1％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸、0.1％的尼泊金甲酯和水，水补足余量；(5)配方5：1％的鱼精蛋白和水，去离子水补足余量；(6)配方6：10％的鱼精蛋白和水，去离子水补足余量；(7)配方7：0.1％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸和水，水补足余量；(8)配方8：0.01％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸和水，水补足余量；(9)配方9：0.001％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸和水，水补足余量(10)配方10：0.008％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸、0.002％的西吡氯铵和水，水补足余量；(11)配方11：0.005％的鱼精蛋白、10％的1,3-丙二醇、0.05％的薄荷脑、0.11％的甜菊糖苷、1％的赤藓糖醇、0.5％的香精、0.01％的精氨酸、0.005％的西吡氯铵和水，水补足余量。10.一种口腔护理产品，其特征在于，其由以下原料制备得到，所述原料包括以下组分：鱼精蛋白和水；所述鱼精蛋白的质量分数为0.001％-10％；所述口腔护理产品可为牙膏、漱口水、牙齿清洁剂或牙齿护理敷料，优选为漱口水。11.一种如权利要求5-10任一项所述口腔护理产品的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：将灭菌水与鱼精蛋白混合即得到所述口腔护理产品；所述灭菌优选为高温灭菌，所述高温灭菌优选在85℃下进行；所述混合的温度优选为45℃以下。

技术总结
本发明公开了鱼精蛋白的用途，具体地，本发明涉及鱼精蛋白在制备口腔护理产品中的应用。本发明提供了一种鱼精蛋白作为抑制口腔菌成分的非治疗目的的应用。该口腔护理产品具有杀灭口腔致病菌、清新口气、改善口腔健康的功能，而且不会产生耐药性，没有副作用，温和安全。全。全。


技术研发人员：舒晗莹 白雪冬 杨敏
受保护的技术使用者：上海辉文生物技术股份有限公司
技术研发日：2023.08.07
技术公布日：2023/10/15