一种氨基酸-BSH靶向杂合体化合物及其制备方法和应用与流程

一种氨基酸-bsh靶向杂合体化合物及其制备方法和应用
技术领域
1.本发明涉及药物化学及辐射医学领域，具体涉及一种氨基酸-bsh靶向杂合体化合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.癌症是以细胞出现异常增殖和转移为特点的一大类疾病。在城镇居民中，癌症已成为死因的首位。尽管世界各国科学家多年来从多种学科领域对如何攻克癌症这一世界难题开展深入研究，提出了多种疗法，这些疗法虽对具体对象有一定的效果，但疗效并不如人意，离根治仍有相当的距离。所以，对癌症治疗药物及技术的研究仍然是当今医学领域的热点和难点。
3.硼中子俘获疗法(boron neutron capture therapy,bnct)治疗癌症是一种新型放疗技术，它是基于核俘获和裂变反应的二元疗法。与传统的放射疗法和化学疗法相比，具有明显的低副作用、高选择性、高效率的优势。但该技术既需要高品质的中子束,又需要高靶向性的含硼药物,两者密切配合、缺一不可,在两方面条件都具备的情况下，才能对肿瘤实现细胞级精准的靶向杀伤。目前，bnct中子束装备的研制已经有了长足的进展(科学通报2022，67(14),1471-1478)；硼药方面，被fda批准应用于临床的只有巯基十二硼二钠盐(bsh)和l-对二羟硼酰苯丙氨酸(bpa)，两者均存在肿瘤靶向性不足的问题。对于bsh，它同时还存在着不能透过血脑屏障、肿瘤摄取和滞留较低、一定的毒副作用等问题。可见，临床实用的高靶向性硼药仍跟不上bnct治疗的要求。
4.研究发现，l型氨基酸转运体1(l-amino acid tansporter 1,lat1)可转运中性氨基酸如亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸和组氨酸等。lat1在人类肿瘤组织中高表达。可以通过将含硼化合物设计为模拟氨基酸的底物，利用lat1介导，选择性递送到靶细胞，增加含硼化合物在肿瘤细胞中的蓄积量和选择性，同时提高穿透血脑屏障(bbb)的能力。


技术实现要素：

5.为了提高巯基十二硼二钠盐(bsh)的肿瘤靶向性、穿透bbb的能力以及主动吸收的能力，本发明所解决的技术问题在于提供一种氨基酸-bsh靶向杂合体化合物。
6.本发明所解决的技术问题还在于提供上述靶向杂合体化合物在采用硼中子俘获法治疗癌症过程中，作为制备相关癌症治疗药物中的应用。
7.本发明所解决的上述技术问题通过以下技术方案予以实现：
8.一种氨基酸-bsh靶向杂合体化合物，其结构如式i所示，
9.10.其中，x为chme2、ch2chme2、ch(ch3)ch2ch3、ch2ch2sme、bn、ch2(3-indoyl)、ch2[4-(oh)ph]、ch2[3,4-bis(oh)ph]、ch2(4-imidazolyl)中的任一种；*标记的碳的构型可以为r-或s-；y可以为o或nh；b为
10
b或天然硼(
10
b/
11
b约1/4)；snab
12h11
的结构如下：
[0011][0012]
优选地，所述的氨基酸-bsh靶向杂合体化合物包括以下的具体化合物：
[0013]
[0014][0015]
所述氨基酸-bsh靶向杂合体化合物的制备方法，当y＝o时，包括如下步骤：
[0016]
(o-1)2-(2-(2-羟乙氧基)乙氧基)乙基活泼酯(trg es)的制备：称取二缩三乙二醇溶于干燥重蒸的二氯甲烷(dcm)中，加入搅拌子，冰浴下加入适量的有机碱，分批加入酰化试剂，室温下搅拌反应约30min，保持室温继续反应12小时。加入适量dcm，分别经水洗、酸洗、干燥后，减压浓缩。
[0017]
合成路线如下：
[0018][0019]
上述步骤中，二缩三乙二醇与有机碱的投料摩尔比为1:1.1～1.5；二缩三乙二醇与酰化试剂的投料摩尔比为1:1.1～1.5。
[0020]
所述有机碱为三乙胺、三甲胺、二异丙基乙胺中的任一种；所述酰化试剂为对甲苯磺酰氯、甲磺酰氯、三氟甲磺酰氯中的任一种。
[0021]
(o-2)n-叔丁氧羰基氨基酸酯桥连活泼酯(n-boc-aa-o-trg es)的制备：称取n-boc氨基酸溶解于适量dcm中，将反应瓶置于冰浴下平衡5分钟，依次加入缩合剂和4-二甲氨基吡啶(dmap)，维持冰浴搅拌10分钟之后加入trg es，加料完毕后继续在冰浴下反应30分
钟，后保持在室温下反应12小时。反应结束后，加入适量dcm，dcm层依次用水、1n hcl洗涤，干燥，浓缩得残留物，经硅胶柱层析纯化，浓缩得目标产物。
[0022]
合成路线如下：
[0023][0024]
上述步骤中，n-boc氨基酸与缩合剂的投料摩尔比为1:1.1～1.5；n-boc氨基酸与dmap的投料摩尔比为1:0.1～0.5；n-boc氨基酸与trg es的投料摩尔比为1:1.1～1.5。
[0025]
所述缩合剂为2-(7-氧化苯骈三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)、氯甲酸乙酯、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(edci)、n,n
’‑
二异丙基碳二亚胺(dic)、六氟磷酸苯骈三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(pybop)中的任一种。
[0026]
(o-3)n-叔丁氧碳基氨基酸酯桥连溴(n-boc-aa-o-trg-br)的制备：称取化合物n-boc-aa-o-trg es溶于适量丙酮，加入溴化锂，将反应器置于合适温度的油浴中加热反应2～10小时。反应结束，蒸除溶剂，加适量dcm，水洗涤，干燥，柱层析分离纯化。
[0027]
合成步骤如下：
[0028][0029]
上述步骤中，n-boc-aa-o-trg es与溴化锂的投料摩尔比为1:1.1～1.5；反应温度为40～100℃，优选58℃。
[0030]
(o-4)n-叔丁氧碳基氨基酸酯桥连硼卡(n-boc-aa-o-trg-bsh)的制备：称取化合物n-boc-aa-o-trg br和硼卡钠溶于适量干燥乙腈，搅拌下加入无机碱和碘化钾，将反应体系置于油浴上加热回流5～10小时。反应结束后，旋蒸除去溶剂，残留物用快速柱层析分离纯化。
[0031]
合成路线如下：
[0032][0033]
上述步骤中，n-boc-aa-o-trg-br与硼卡钠的投料摩尔比为1.1～1.5:1；n-boc-aa-o-trg-br与无机碱的投料摩尔比为1:2.0～5.0；n-boc-aa-o-trg-br与碘化钾的投料摩尔比为1:2.0～5.0。
[0034]
所述无机碱为碳酸锂、碳酸铯、碳酸钾，优选碳酸铯。
[0035]
(o-5)氨基酸酯桥连硼卡(aa-o-bsh)的制备：称取化合物n-boc-aa-o-trg-bsh溶于干燥dcm中，置于冰浴中冷切5分钟，搅拌下加入酸，随后升至室温继续反应1～5小时，tlc检测反应转化完全(展开剂：dcm/meoh＝1/1)。饱和碳酸氢钠调节反应体系ph至弱碱性，旋蒸除去溶剂，残留物经柱层析分离，冷冻干燥得产物。
[0036]
合成路线如下：
[0037]
[0038]
上述步骤中，n-boc-aa-o-trg-bsh与酸的投料摩尔比为1.0:100～250；所述的酸为三氟醋酸(tfa)、盐酸/dcm溶液中的任一种。
[0039]
所述氨基酸-bsh靶向杂合体化合物的制备方法，当y＝nh时，包括如下步骤：
[0040]
(n-1)n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连醇(n-boc-aa-n-trg-oh)的制备：称取n-boc氨基酸溶解于适量dcm中，将反应瓶置于冰浴下平衡5分钟，依次加入缩合剂和有机碱，维持冰浴搅拌10分钟之后加入2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙醇，加料完毕后继续在冰浴下反应30分钟，后保持在室温下反应12小时。反应结束后，加入适量dcm，dcm层依次用水、1n hcl洗涤，干燥，浓缩得残留物，经硅胶柱层析纯化，浓缩得目标物。
[0041]
合成路线如下：
[0042][0043]
上述步骤中，n-boc氨基酸与缩合剂的投料摩尔比为1:1.1～1.5；n-boc氨基酸与有机碱的投料摩尔比为1:2.0～5.0；n-boc氨基酸与2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙醇的投料摩尔比为1:1.1～1.5。
[0044]
所述缩合剂与步骤(o-2)相同；所述有机碱为二异丙基乙胺(dipea)、三乙胺、2,2,6,6-四甲基哌啶中的任一种。
[0045]
(n-2)n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连活泼酯(n-boc-aa-n-trg es)的制备：将二缩三乙二醇替换为n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连醇，按照步骤(o-1)所述方法制备。合成路线如下：
[0046][0047]
(n-3)n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连溴(n-boc-aa-n-trg-br)的制备：将n-叔丁氧碳基氨基酸酯桥连活泼酯替换为n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连活泼酯，按照步骤(o-3)所述方法制备。合成路线如下：
[0048][0049]
(n-4)n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连硼卡(n-boc-aa-n-trg-bsh)的制备：将n-叔丁氧碳基氨基酸酯桥连溴替换为n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连溴，按照步骤(o-4)所述方法制备。合成路线如下：
[0050][0051]
(n-5)氨基酸酰胺桥连硼卡(aa-n-bsh)的制备：将n-叔丁氧碳基氨基酸酯桥连硼卡替换为n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连硼卡，按照步骤(o-5)所述方法制备。合成路线如下：
[0052][0053]
本发明利用mtt法检测了系列氨基酸-bsh靶向杂合体化合物对人脐静脉内皮细胞(huvec)、人正常肝细胞(lo2)和人肝癌细胞(hepg2)的细胞毒性，发现该类化合物在500μm浓度范围内没有毒性。
[0054]
本发明利用icp-ms法检测了系列氨基酸-bsh靶向杂合体化合物在人脐静脉内皮细胞(huvec)、人肝癌细胞(hepg2)、人乳腺癌细胞(mda-mb-231)和人神经胶质瘤细胞(u87)中的摄取以及t/n比(肿瘤细胞硼的摄取/正常细胞硼的摄取)。结果发现，系列氨基酸-bsh靶向杂合体化合物在所考察的细胞中硼的摄取均大于109b/细胞，均落在10
11
b/细胞范围，t/n》3；与bsh相比，对不同的肿瘤细胞，都有对应结构的氨基酸-bsh靶向杂合体表现出优越于bsh的摄硼特性。
[0055]
本发明利用摇瓶法结合hplc技术检测了系列氨基酸-bsh靶向杂合体化合物的亲油亲水系数。结果发现，所有的氨基酸-bsh靶向杂合体化合物都表现出优于bsh的亲油亲水特征，它们优化了bsh过于亲水的缺点。
[0056]
相比于现有技术，本发明具有以下有益效果：
[0057]
(1)本发明所述及的如通式(i)的化合物及其其合成法为本发明所首次报道。本发明的合成法具有反应条件温和、实验步骤简便、收率高、产品纯度高、经济实用等特点；
[0058]
(2)本发明所述氨基酸-bsh靶向杂合体化合物具有靶向lat1的特性。相比于bsh，它们在肿瘤细胞中具有更高的t/n比和载硼量；
[0059]
(3)相比于bsh，本发明所述氨基酸-bsh靶向杂合体化合物具有更优良的亲油亲水特征。
具体实施方式
[0060]
以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。
[0061]
实施例1.氨基酸酯桥连硼卡(aa-o-bsh)的制备
[0062]
1.1.缬氨酸酯桥连硼卡(val-o-bsh)的制备
[0063]
经5个步骤合成。
[0064]
1.1.1.2-(2-(2-羟乙氧基)乙氧基)乙基对甲基苯磺酸酯的制备：称取二缩三乙二醇1.5g(10.0mmol)于100ml圆底烧瓶中，放入磁子，搅拌下加入重蒸二氯甲烷5ml。反应瓶置于冰浴下搅拌5分钟之后加入三乙胺(tea)1.2g(11.8mmol)，接着分三次加入对甲苯磺酰氯(tscl)2.25g(11.8mmol)，历时6分钟。继续在室温搅拌30分钟后，将反应体系升温至室温，继续反应12小时。tlc检测反应转化完全(展开剂：pe/ea＝3/1，rf＝0.3)。向反应体系中加入50ml二氯甲烷稀释，依次用纯化水(3
×
60ml)，1mol/l hcl水溶液(3
×
60ml)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，于60℃减压(0.1mpa)浓缩，得无色透明液体2.41g，收率79.1％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.75(d,j＝6.6hz,2h),7.31(d,j＝7.2hz,2h),4.14(m,2h),3.66(m,4h),3.55(m,4h),3.52(m,2h),2.97(s,1h),2.40(s,3h)。
[0065]
1.1.2.n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-val-o-trg ts)的制备：
称取0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸于50ml圆底烧瓶中，加入干燥二氯甲烷20ml，放入磁子，搅拌下使底物溶解。将反应瓶置于冰浴下平衡5分钟，依次加入edci(0.69g,3.6mmol)、dmap(0.11g,0.9mmol)，维持冰浴搅拌10分钟之后加入2-(2-(2-羟乙氧基)乙氧基)乙基对甲基苯磺酸酯(1.0g,3.0mmol)，加料完毕后继续在冰浴下反应30分钟之后转移至室温下反应12小时。tlc检测反应转化完全(展开剂：pe/ea＝1/3to 1/1)。将反应液依次用纯化水(3
×
20ml)、1mol/l hcl溶液(3
×
20ml)洗涤，合并有机相，干燥，浓缩得残留物，经硅胶柱层析(200-300目，洗脱剂：pe/ea＝3/1to 1/1)纯化，浓缩得目标物1.25g，收率82.8％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.79(d,j＝8.3hz,2h),7.34(d,j＝8.1hz,2h),5.06(d,j＝8.8hz,1h),4.29(t,j＝4.9hz,1h),4.25(m,2h),4.18
–
4.13(m,2h),3.71
–
3.63(m,4h),3.57(m,4h),2.44(s,3h),2.13(td,j＝12.7,6.4hz,1h),1.44(s,9h),0.92(m,6h)。
[0066]
1.1.3.n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴(n-boc-val-o-trg br)的制备：称取1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯于50ml圆底烧瓶中，加入磁力搅拌子及乙腈(10ml)，搅拌下加入0.87g(10.0mmol)libr。接着将反应体系置于58℃油浴加热搅拌反应6小时，tlc追踪，直至反应完全。随后减压蒸除溶剂，残留物加入20ml二氯甲烷，用纯化水洗涤(3
×
20ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得无色液体766.9mg，收率93.0％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ5.05(d,j＝8.6hz,1h),4.46(s,1h),4.29(m,2h),3.81(t,j＝6.3hz,2h),3.72(t,j＝4.9hz,2h),3.66(s,4h),3.48(t,j＝6.3hz,2h),2.15(m,1h),1.45(s,9h),0.97(d,j＝6.9hz,3h),0.90(d,j＝6.9hz,3h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ:172.26,155.84,79.75,71.20,70.54,70.33,69.10,64.01,58.51,31.37,30.20,28.32,18.97。
[0067]
1.1.4.n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠(n-boc-val-o-trg bsh)的制备：称取102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴、53.5mg(0.29mmol)硼卡钠(
10
bsh)于100ml圆底三口烧瓶中，放入磁子，加入干燥乙腈15ml，搅拌下加入244.0mg(0.75mmol)碳酸铯和50.0mg(0.3mmol)碘化钾。反应体系置于油浴下加热回流12小时，hplc检测反应底物转化过半，有新的产物生成，停止加热，将反应液降至室温，直接加入5g硅胶拌样，快速柱层析(200-300目，洗脱剂：dcm/meoh＝20/1to 10/1)分离纯化得产物75.3mg，收率57.0％。
[0068]
1.1.5.缬氨酸酯桥连硼卡钠(val-o-bsh)的制备：称取74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠于50ml圆底烧瓶中，加入10ml干燥二氯甲烷，搅拌溶解，将体系置于冰浴下搅拌5分钟，加入2.0ml三氟醋酸(tfa)，并缓慢升至室温，继续搅拌反应2小时，tlc检测追踪至反应完全(展开剂：dcm/meoh＝1/1)。饱和碳酸氢钠调节反应体系ph至中性，浓缩蒸除溶剂，残留物经柱层析分离，冷冻干燥得产物45.0mg,收率76.1％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.61(s,1h),4.44-4.31(m,1h),4.24-4.11(m,2h),4.02-3.98(m,2h),3.79-3.69(m,3h),3.69-3.61(m,3h),3.58-3.45(m,4h),3.44-3.34(m,1h),3.25-3.02(m,2h),2.23-2.09(m,1h),1.83-1.02(m,5h),1.01-0.90(m,6h),0.87-0.47(m,1h)；
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ174.54,116.12,70.06,69.78,68.46,57.54,51.56,48.85,45.38,29.85,18.52。所有数据证明化合物为l-缬氨酸(2-(2-(2-(十二硼烷基钠巯基)乙基)氧乙基)氧乙)醇酯(val-o-bsh)，其结构式如下：
[0069][0070]
1.2.亮氨酸酯桥连硼卡(leu-o-bsh)的制备
[0071]
经5个步骤合成。
[0072]
1.2.1.实验步骤同1.1.1。
[0073]
1.2.2.n-叔丁氧羰基亮氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-leu-o-trg ts)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.69g(3.0mmol)n-boc-l-亮氨酸，按实验步骤1.1.2制备。分离纯化后得无色液体1.31g，收率84.4％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.80(d,j＝8.2hz,2h),7.35(d,j＝8.2hz,2h),4.96(d,j＝8.2hz,1h),4.33-4.29(m,1h),4.26(dd,j＝9.0,4.4hz,2h),4.20-4.13(m,2h),3.69(dt,j＝14.7,5.0hz,4h),3.58(m,4h),2.45(s,3h),1.70(dt,j＝19.4,6.5hz,1h),1.65-1.54(m,1h),1.54-1.47(m,1h),1.44(s,9h),0.93(d,j＝6.6hz,6h)。
[0074]
1.2.3.n-叔丁氧羰基亮氨酸酯桥连溴(n-boc-leu-o-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.04g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基亮氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体738.4mg，收率86.6％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.95(s,1h),4.26(m,2h),3.79(s,1h),3.74-3.54(m,8h),3.45(m,2h),1.69(m,1h),1.58(m,1h),1.48(m,1h),1.42(s,9h),0.92(d,j＝4.7hz,6h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ174.28,155.16,79.69,71.19,70.48,68.97,64.08,61.66,51.93,41.75,30.37,28.42,24.71,22.63。
[0075]
1.2.4.n-叔丁氧羰基亮氨酸酯桥连硼卡钠(n-boc-leu-o-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为106.6mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基亮氨酸酯桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色粘稠液体61mg，收率51.7％。
[0076]
1.2.5.亮氨酸酯桥连硼卡钠(leu-o-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为75.9mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基亮氨酸酯桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体35.0mg，收率56.5％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.40(s,2h),4.49-4.11(m,2h),3.96(s,1h),3.75(s,2h),3.65(s,2h),3.59-3.36(m,6h),3.26-3.04(m,2h),1.81-1.68(m,1h),1.66-1.53(m,2h),1.50-0.32(m,15h)；
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ170.47,72.80,70.28,68.63,66.52,65.41,60.66,51.06,42.07,24.18,22.72,22.47。所有数据证实该化合物为l-亮氨酸(2-(2-(2-(十二硼烷基钠巯基)乙基)氧乙基)氧乙)醇酯(leu-o-bsh)，其结构如下：
[0077][0078]
[0079]
1.3.d-亮氨酸酯桥连硼卡(d-leu-o-bsh)的制备
[0080]
经5个步骤合成。
[0081]
1.3.1.实验步骤同1.1.1。
[0082]
1.3.2.n-叔丁氧羰基d-亮氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-d-leu-o-trgts)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.69g(3.0mmol)n-boc-d-亮氨酸，按实验步骤1.1.2制备。分离纯化后得无色液体1.32g，收率84.7％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.80(d,j＝8.2hz,2h),7.35(d,j＝8.2hz,2h),4.96(d,j＝8.2hz,1h),4.33-4.29(m,1h),4.26(dd,j＝9.0,4.4hz,2h),4.20-4.13(m,2h),3.69(dt,j＝14.7,5.0hz,4h),3.58(m,4h),2.45(s,3h),1.70(dt,j＝19.4,6.5hz,1h),1.65-1.54(m,1h),1.54-1.47(m,1h),1.44(s,9h),0.93(d,j＝6.6hz,6h)。
[0083]
1.3.3.n-叔丁氧羰基d-亮氨酸酯桥连溴(n-boc-d-leu-o-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.04g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基d-亮氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体738.6mg，收率86.7％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.95(s,1h),4.26(m,2h),3.79(s,1h),3.74-3.54(m,8h),3.45(m,2h),1.69(m,1h),1.58(m,1h),1.48(m,1h),1.42(s,9h),0.92(d,j＝4.7hz,6h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ174.28,155.16,79.69,71.19,70.48,68.97,64.08,61.66,51.93,41.75,30.37,28.42,24.71,22.63。
[0084]
1.3.4.n-叔丁氧羰基d-亮氨酸酯桥连硼卡钠(n-boc-d-leu-o-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为106.6mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基亮氨酸酯桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色粘稠液体61mg，收率51.7％。
[0085]
1.3.5.d-亮氨酸酯桥连硼卡钠(leu-o-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为75.9mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基d-亮氨酸酯桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体35.2mg，收率56.6％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.40(s,2h),4.49-4.11(m,2h),3.96(s,1h),3.75(s,2h),3.65(s,2h),3.59-3.36(m,6h),3.26-3.04(m,2h),1.81-1.68(m,1h),1.66-1.53(m,2h),1.50-0.32(m,15h)；
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ170.47,72.80,70.28,68.63,66.52,65.41,60.66,51.06,42.07,24.18,22.72,22.47。所有数据证实该化合物为d-亮氨酸(2-(2-(2-(十二硼烷基钠巯基)乙基)氧乙基)氧乙)醇酯(d-leu-o-bsh)，其结构如下：
[0086][0087]
1.4.异亮氨酸酯桥连硼卡(ile-o-bsh)的制备
[0088]
经5个步骤合成。
[0089]
1.4.1.实验步骤同1.1.1。
[0090]
1.4.2.n-叔丁氧羰基异亮氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-ile-o-trg ts)的制
备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.69g(3.0mmol)n-boc-l-异亮氨酸，按实验步骤1.1.2制备。分离纯化后得无色液体903.0mg，收率85.1％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.79(d,j＝8.1hz,1h),7.34(d,j＝8.1hz,1h),5.08(d,j＝8.7hz,1h),4.28(s,1h),4.24(m,2h),4.17-4.13(m,2h),3.67(m,4h),3.57(m,4h),2.44(s,3h),1.97(m,1h),1.85(m,1h),1.43(s,9h),1.23-1.08(m,1h),0.92(m,3h),0.90(d,j＝7.2hz 3h)。
[0091]
1.4.3.n-叔丁氧羰基异亮氨酸酯桥连溴(n-boc-ile-o-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.04g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基异亮氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体723.9mg，收率84.9％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ5.12(d,j＝6.4hz,1h),3.99-3.88(m,1h),3.82(t,j＝6.1hz,2h),3.65(m,4h),3.56(m,2h),3.49(t,j＝6.1hz,4h),2.14(m,1h),1.87(m,1h),1.44(s,9h),1.21-1.03(m,1h),0.93(d,j＝7.9hz,3h),0.91(t,j＝8.1hz,3h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ171.58,155.84,79.80,71.15,70.40,70.21,69.81,59.22,39.15,37.49,30.34,28.33,24.82,15.56,11.58。
[0092]
1.4.4.n-叔丁氧羰基异亮氨酸酯桥连硼卡钠(n-boc-ile-o-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为106.6mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基异亮氨酸酯桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色粘稠液体85.4mg，收率63.0％。
[0093]
1.4.5.异亮氨酸酯桥连硼卡钠(ile-o-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为75.9mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基异亮氨酸酯桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体50.1mg,收率80.9％。1h nmr(400mhz,d2o)δ:3.95-3.88(m,2h),3.70(s,6h),3.65-3.59(m,2h),3.57-3.51(m,1h),3.39-3.23(m,2h),2.76-2.69(m,1h),1.93-0.82(m,14h)；
13
c nmr(400mhz,d2o)δ:173.68,81.30,79.95,70.76,68.50,68.05,60.84,50.72,34.19,23.35,16.16,11.88。所有数据证实该化合物为l-异亮氨酸(2-(2-(2-(十二硼烷基钠巯基)乙基)氧乙基)氧乙)醇酯(leu-o-bsh)，其结构如下：
[0094][0095]
1.5.甲硫氨酸酯桥连硼卡(met-o-bsh)的制备
[0096]
经5个步骤合成。
[0097]
1.5.1.实验步骤同1.1.1。
[0098]
1.5.2.n-叔丁氧羰基甲硫氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-met-o-trg ts)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.75g(3.0mmol)n-boc-l-甲硫氨酸，按实验步骤1.1.2制备。分离纯化后得无色液体1.32g，收率82.3％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.80(d,j＝7.8hz,2h),7.35(d,j＝7.8hz,2h),5.19(s,1h),4.43(s,1h),4.37-4.22(m,2h),4.20-4.14(m,2h),3.69(dd,j＝9.9,4.8hz,4h),3.59(s,4h),2.54(t,j＝7.5hz,2h),2.45(s,3h),2.09(s,3h),2.03-1.74(m,2h),1.45(s,9h)。
[0099]
1.5.3.n-叔丁氧羰基甲硫氨酸酯桥连溴(n-boc-met-o-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.07g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基甲硫氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体719.9mg，收率81.0％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ5.18(d,j＝7.0hz,1h),4.41(s,1h),4.35-4.19(m,2h),3.80(dd,j＝12.2,6.1hz,2h),3.70(t,j＝4.5hz,2h),3.68-3.57(m,4h),3.46(t,j＝6.2hz,2h),2.53(t,j＝7.5hz,2h),2.18-2.09(m,2h),2.08(s,3h),2.00-1.85(m,1h),1.42(s,9h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ172.17,154.93,79.94,71.18,70.59,68.85,64.31,52.73,30.59,29.83,28.26,15.37。
[0100]
1.5.4.n-叔丁氧羰基甲硫氨酸酯桥连硼卡钠(n-boc-met-o-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为111.1mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基甲硫氨酸酯桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色粘稠液体91.6mg，收率65.4％。
[0101]
1.5.5.甲硫氨酸酯桥连硼卡钠(met-o-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为78.4mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基甲硫氨酸酯桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体37.1mg,收率57.6％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ5.18(d,j＝7.0hz,1h),4.41(s,1h),4.35-4.19(m,2h),3.80(dd,j＝12.2,6.1hz,2h),3.70(t,j＝4.5hz,2h),3.68-3.57(m,4h),3.46(t,j＝6.2hz,2h),2.53(t,j＝7.5hz,2h),2.18-2.09(m,2h),2.08(s,3h),2.00-1.85(m,1h)；
13
c nmr(151mhz,dmso-d6)δ171.13,159.19,158.98,158.77,158.57,118.61,116.63,72.71,72.68,72.62,70.13,69.99,60.54,51.55,30.02,29.02,14.72。所有数据证实该化合物为l-甲硫氨酸(2-(2-(2-(十二硼烷基钠巯基)乙基)氧乙基)氧乙)醇酯(met-o-bsh)，其结构如下：
[0102][0103]
1.6.d-甲硫氨酸酯桥连硼卡(met-o-bsh)的制备
[0104]
经5个步骤合成。
[0105]
1.6.1.实验步骤同1.1.1。
[0106]
1.6.2.n-叔丁氧羰基d-甲硫氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-d-met-o-trg ts)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.75g(3.0mmol)n-boc-d-甲硫氨酸，按实验步骤1.1.2制备。分离纯化后得无色液体1.32g，收率82.3％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.81(d,j＝7.8hz,2h),7.34(d,j＝7.9hz,2h),5.18(s,1h),4.42(s,1h),4.36-4.21(m,2h),4.19-4.13(m,2h),3.68(dd,j＝9.8,4.7hz,4h),3.58(s,4h),2.55(t,j＝7.6hz,2h),2.46(s,3h),2.11(s,3h),2.04-1.75(m,2h),1.45(s,9h)。
[0107]
1.6.3.n-叔丁氧羰基d-甲硫氨酸酯桥连溴(n-boc-d-met-o-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.07g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基d-甲硫氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体
719.7mg，收率80.9％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ5.19(d,j＝7.0hz,1h),4.42(s,1h),4.34-4.18(m,2h),3.81(dd,j＝12.3,6.2hz,2h),3.71(t,j＝4.5hz,2h),3.67-3.56(m,4h),3.47(t,j＝6.3hz,2h),2.54(t,j＝7.4hz,2h),2.19-2.10(m,2h),2.09(s,3h),2.01-1.86(m,1h),1.43(s,9h)；
13
cnmr(101mhz,cdcl3)δ172.18,154.94,79.93,71.17,70.58,68.86,64.32,52.72,30.58,29.84,28.27,15.36。
[0108]
1.6.4.n-叔丁氧羰基d-甲硫氨酸酯桥连硼卡钠(n-boc-d-met-o-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为111.1mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基d-甲硫氨酸酯桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色粘稠液体91.8mg，收率65.5％。
[0109]
1.6.5.甲硫氨酸酯桥连硼卡钠(d-met-o-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为78.4mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基d-甲硫氨酸酯桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体36.8mg,收率57.5％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ5.17(d,j＝7.1hz,1h),4.42(s,1h),4.34-4.18(m,2h),3.81(dd,j＝12.3,6.2hz,2h),3.71(t,j＝4.6hz,2h),3.67-3.56(m,4h),3.47(t,j＝6.1hz,2h),2.54(t,j＝7.6hz,2h),2.17-2.08(m,2h),2.09(s,3h),2.01-1.86(m,1h)；
13
cnmr(151mhz,dmso-d6)δ171.12,159.18,158.97,158.78,158.56,118.62,116.64,72.72,72.67,72.63,70.14,69.98,60.53,51.54,30.03,29.01,14.73。所有数据证实该化合物为d-甲硫氨酸(2-(2-(2-(十二硼烷基钠巯基)乙基)氧乙基)氧乙)醇酯(d-met-o-bsh)，其结构如下：
[0110][0111]
1.7.苯丙氨酸酯桥连硼卡(phe-o-bsh)的制备
[0112]
经5个步骤合成。
[0113]
1.7.1.实验步骤同1.1.1。
[0114]
1.7.2.n-叔丁氧羰基苯丙氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-phe-o-trg ts)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.80g(3.0mmol)n-boc-苯丙氨酸，按实验步骤1.1.2制备。分离纯化后得无色液体1.35g，收率81.6％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.78(d,j＝8.2hz,2h),7.33(d,j＝8.2hz,2h),7.30-7.19(m,3h),7.15(d,j＝6.9hz,2h),5.05(d,j＝8.2hz,1h),4.59(m,1h),4.24(m,2h),4.17-4.11(m,2h),3.69-3.65(m,2h),3.63(m,2h),3.56(m,4h),3.08(m,2h),2.43(s,3h),1.41(s,9h)。
[0115]
1.7.3.n-叔丁氧羰基苯丙氨酸酯桥连溴(n-boc-phe-o-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.10g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基苯丙氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体778.7mg，收率84.8％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ5.19(d,j＝7.0hz,1h),4.42(s,1h),4.34-4.18(m,2h),3.81(dd,j＝12.3,6.2hz,2h),3.71(t,j＝4.5hz,2h),3.67-3.56(m,4h),3.47(t,j＝6.3hz,2h),2.54(t,j＝7.4hz,2h),2.19-2.10(m,2h),2.09(s,3h),2.01-1.86(m,1h),1.43
(s,9h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ172.18,154.94,79.93,71.17,70.58,68.86,64.32,52.72,30.58,29.84,28.27,15.36。
[0116]
1.7.4.n-叔丁氧羰基苯丙氨酸酯桥连硼卡钠(n-boc-phe-o-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为114.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基苯丙氨酸酯桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色粘稠液体70.6mg，收率48.8％。
[0117]
1.7.5.苯丙氨酸酯桥连硼卡钠(phe-o-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为81.0mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基苯丙氨酸酯桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体53.6mg,收率80.1％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.54(s,1h),7.31-7.23(m,5h),4.31(s,1h),4.19(s,2h),3.86-3.46(m,10h),3.26-3.02(m,4h),2.00-0.65(m,10h)；
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ170.48,159.08,158.74,121.24,118.31,115.38,112.45,87.50,81.23,77.64,68.60,66.70,52.94,47.79,42.19,29.36。所有数据证实该化合物为苯丙氨酸(2-(2-(2-(十二硼烷基钠巯基)乙基)氧乙基)氧乙)醇酯(phe-o-bsh)，其结构如下：
[0118][0119]
1.8.d-苯丙氨酸酯桥连硼卡(d-phe-o-bsh)的制备
[0120]
经5个步骤合成。
[0121]
1.8.1.实验步骤同1.1.1。
[0122]
1.8.2.n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-d-phe-o-trg ts)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.80g(3.0mmol)n-boc-d-苯丙氨酸，按实验步骤1.1.2制备。分离纯化后得无色液体1.37g，收率81.7％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.79(d,j＝8.3hz,2h),7.34(d,j＝8.2hz,2h),7.31-7.18(m,3h),7.16(d,j＝6.8hz,2h),5.06(d,j＝8.3hz,1h),4.58(m,1h),4.25(m,2h),4.18-4.12(m,2h),3.68-3.64(m,2h),3.62(m,2h),3.57(m,4h),3.07(m,2h),2.42(s,3h),1.42(s,9h)。
[0123]
1.8.3.n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酸酯桥连溴(n-boc-d-phe-o-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.10g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体778.5mg，收率84.7％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ5.18(d,j＝7.1hz,1h),4.43(s,1h),4.35-4.19(m,2h),3.82(dd,j＝12.4,6.3hz,2h),3.72(t,j＝4.5hz,2h),3.68-3.57(m,4h),3.46(t,j＝6.2hz,2h),2.53(t,j＝7.3hz,2h),2.18-2.11(m,2h),2.08(s,3h),2.02-1.87(m,1h),1.42(s,9h)；
13
cnmr(101mhz,cdcl3)δ172.19,154.95,79.92,71.16,70.57,68.85,64.33,52.71,30.57,29.85,28.26,15.37。
[0124]
1.8.4.n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酸酯桥连硼卡钠(n-boc-d-phe-o-trg bsh)的制
备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为114.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酸酯桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色粘稠液体70.8mg，收率48.9％。
[0125]
1.8.5.d-苯丙氨酸酯桥连硼卡钠(d-phe-o-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为81.0mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酸酯桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体53.8mg,收率80.2％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.55(s,1h),7.32-7.24(m,5h),4.32(s,1h),4.18(s,2h),3.87-3.45(m,10h),3.27-3.03(m,4h),2.02-0.67(m,10h)；
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ170.47,159.06,158.75,121.23,118.32,115.39,112.46,87.51,81.24,77.65,68.62,66.71,52.93,47.78,42.17,29.54。所有数据证实该化合物为d-苯丙氨酸(2-(2-(2-(十二硼烷基钠巯基)乙基)氧乙基)氧乙)醇酯(d-phe-o-bsh)，其结构如下：
[0126][0127]
1.9.色氨酸酯桥连硼卡(trp-o-bsh)的制备
[0128]
经5个步骤合成。
[0129]
1.9.1.实验步骤同1.1.1。
[0130]
1.9.2.n-叔丁氧羰基色氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-trp-o-trg ts)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.91g(3.0mmol)n-boc-色氨酸，按实验步骤1.1.2制备。分离纯化后得无色液体1.24g，收率70.3％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.68(s,1h),7.76(d,j＝8.1hz,2h),7.57(d,j＝7.8hz,1h),7.35(t,j＝7.4hz,1h),7.29(d,j＝9.5hz,2h),7.16(t,j＝7.4hz,1h),7.10(d,j＝7.7hz,2h),5.19(d,j＝8.0hz,1h),4.67(d,j＝7.4hz,1h),4.17-4.12(m,2h),3.69-3.64(m,2h),3.64-3.53(m,6h),3.53-3.47(m,2h),3.30(d,j＝4.9hz,2h),2.42(s,3h),1.45(s,9h)。
[0131]
1.9.3.n-叔丁氧羰基色氨酸酯桥连溴(n-boc-trp-o-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.18g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基色氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体796.0mg，收率79.9％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.51(s,1h),7.59(d,j＝7.9hz,1h),7.36(d,j＝8.0hz,1h),7.19(t,j＝7.5hz,1h),7.13(d,j＝7.7hz,1h),7.08(s,1h),5.17(d,j＝7.9hz,1h),4.69(d,j＝7.1hz,1h),4.25(m,2h),3.80(t,j＝6.0hz,2h),3.78-3.53(m,6h),3.46(t,j＝6.1hz,2h),3.32(d,j＝5.0hz,2h),1.45(s,9h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ172.26,155.48,136.25,127.88,123.35,121.99,119.51,118.74,111.34,109.70,79.91,71.18,70.49,70.45,68.90,64.56,54.62,30.61,28.38。
[0132]
1.9.4.n-叔丁氧羰基色氨酸酯桥连硼卡钠(n-boc-trp-o-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为124.5mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰
基色氨酸酯桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色粘稠液体75.3mg，收率48.8％。
[0133]
1.9.5.色氨酸酯桥连硼卡钠(trp-o-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为86.4mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基色氨酸酯桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体58.4mg,收率80.6％。1h nmr(400mhz,d2o)δ:7.68-7.58(dd,1h),7.52(d,1h,j＝8),7.30-7.23(m,2h),7.18-7.14(m,1h),4.46-4.43(m,1h),4.36-4.31(m,1h),4.24-4.21(m,1h),3.90-3.84(m,1h),3.77-3.73(m,2h),3.70-3.68(m,3h),3.62-3.58(m,2h),3.52-3.44(m,2h),3.42-3.28(m,2h),2.07-0.85(m,3h)；
13
cnmr(400mhz,d2o)δ:170.86,141.92,131.87,125.34,119.58,114.53,114.09,107.04,99.76,94.81,84.38,70.99,67.00,65.87,52.62,44.79,26.95。所有数据证实该化合物为色氨酸(2-(2-(2-(十二硼烷基钠巯基)乙基)氧乙基)氧乙)醇酯(trp-o-bsh)，其结构如下：
[0134][0135]
1.10.酪氨酸酯桥连硼卡(tyr-o-bsh)的制备
[0136]
经5个步骤合成。
[0137]
1.10.1.实验步骤同1.1.1。
[0138]
1.10.2.n-叔丁氧羰基酪氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-tyr-o-trg ts)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.84g(3.0mmol)n-boc-酪氨酸，按实验步骤1.1.2制备。分离纯化后得无色液体1.41g，收率82.6％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.80(d,j＝7.7hz,2h),7.35(d,j＝7.7hz,2h),7.01(d,j＝7.6hz,2h),6.76(d,j＝7.5hz,2h),5.08(d,j＝7.9hz,1h),4.55(d,j＝6.3hz,1h),4.29(m,2h),4.19(m,2h),3.63(m,8h),3.03(s,2h),2.45(s,3h),1.44(s,9h)。
[0139]
1.10.3.n-叔丁氧羰基酪氨酸酯桥连溴(n-boc-tyr-o-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.13g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基酪氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体790.6mg，收率83.2％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.01(d,j＝7.7hz,2h),6.75(d,j＝7.6hz,2h),5.06(d,j＝7.7hz,1h),4.73(m,2h),4.57(d,j＝6.3hz,1h),4.29(m,2h),3.82(t,j＝6.1hz,2h),3.77-3.62(m,4h),3.48(t,j＝6.1hz,2h),3.03(s,2h),1.44(s,9h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ172.07,155.23,155.04,130.60,130.22,115.68,80.08,74.78,71.41,70.60,68.95,64.29,54.65,37.64,30.35,28.23。
[0140]
1.10.4.n-叔丁氧羰基酪氨酸酯桥连硼卡钠(n-boc-tyr-o-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为118.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基酪氨酸酯桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色粘稠液体69.1mg，收率46.5％。
[0141]
1.10.5.酪氨酸酯桥连硼卡钠(tyr-o-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为83.2mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基酪氨酸酯桥连硼卡钠，按
照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体60.9mg,收率88.0％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.01(d,j＝7.7hz,2h),6.75(d,j＝7.6hz,2h),3.97-3.68(m,6h),3.49-3.43(m,4h),3.26-3.17(m,3h),2.83-2.32(m,4h),2.25-0.10(m,11h)；
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ172.87,158.65,132.50,128.42,118.72,108.71,105.40,76.59,72.74,71.20,68.76,66.75,54.19,51.32,43.42,29.24。所有数据证实该化合物为酪氨酸(2-(2-(2-(十二硼烷基钠巯基)乙基)氧乙基)氧乙)醇酯(tyr-o-bsh)，其结构如下：
[0142][0143]
1.11.二羟苯丙氨酸酯桥连硼卡(dpa-o-bsh)的制备
[0144]
经5个步骤合成。
[0145]
1.11.1.实验步骤同1.1.1。
[0146]
1.11.2.n-叔丁氧羰基二羟苯丙氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-dpa-o-trg ts)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.89g(3.0mmol)n-boc-二羟苯丙氨酸，按实验步骤1.1.2制备。分离纯化后得无色液体1.47g，收率84.2％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.79(d,j＝7.6hz,2h),7.36(d,j＝7.5hz,2h),6.87(d,j＝7.5hz,1h),6.76(s,1h),6.72(d,j＝7.5hz,1h),5.08(d,j＝7.9hz,1h),4.54(d,j＝6.2hz,1h),4.28(m,2h),4.17(m,2h),3.62(m,8h),3.04(s,2h),2.43(s,3h),1.45(s,9h)。
[0147]
1.11.3.n-叔丁氧羰基二羟苯丙氨酸酯桥连溴(n-boc-dpa-o-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.17g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基二羟苯丙氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体835.9mg，收率85.1％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ6.92(d,j＝7.6hz,1h),6.75(s,1h),6.73(d,j＝7.6hz,1h),5.07(d,j＝7.5hz,1h),4.74(m,2h),4.56(d,j＝6.4hz,1h),4.28(m,2h),3.83(t,j＝6.2hz,2h),3.76-3.61(m,4h),3.47(t,j＝6.1hz,2h),3.02(s,2h),1.45(s,9h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ172.08,155.24,155.05,130.61,130.21,115.69,80.07,74.79,71.42,70.61,68.96,64.28,54.64,37.65,30.34,28.25。
[0148]
1.11.4.n-叔丁氧羰基二羟苯丙氨酸酯桥连硼卡钠(n-boc-dpa-o-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为118.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基二羟苯丙氨酸酯桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色粘稠液体72.6mg，收率47.6％。
[0149]
1.11.5.二羟苯丙氨酸酯桥连硼卡钠(tyr-o-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为85.4mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基二羟苯丙氨酸酯桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体63.4mg,收率88.7％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ6.92(d,j＝7.6hz,1h),6.75(s,1h),6.73(d,j＝7.6hz,1h),3.97-3.68(m,6h),3.49-3.43(m,4h),3.26-3.17(m,3h),2.83-2.32(m,4h),2.25-0.10(m,11h)；
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ172.87,158.65,132.50,128.42,118.72,108.71,105.40,
76.59,72.74,71.20,68.76,66.75,54.19,51.32,43.42,29.32。所有数据证实该化合物为二羟苯丙氨酸(2-(2-(2-(十二硼烷基钠巯基)乙基)氧乙基)氧乙)醇酯(dpa-o-bsh)，其结构如下：
[0150][0151]
1.12.组氨酸酯桥连硼卡(his-o-bsh)的制备
[0152]
经5个步骤合成。
[0153]
1.12.1.实验步骤同1.1.1。
[0154]
1.12.2.n-叔丁氧羰基组氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-his-o-trg ts)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.77g(3.0mmol)n-boc-组氨酸，按实验步骤1.1.2制备。分离纯化后得无色液体1.35g，收率83.2％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.76(s,1h),7.76(d,j＝7.5hz,2h),7.65(s,1h),7.46(d,j＝7.4hz,2h),7.41(m,1h),6.73(d,j＝7.5hz,1h),5.06(d,j＝7.7hz,1h),4.53(d,j＝6.1hz,1h),4.26(m,2h),4.15(m,2h),3.63(m,8h),3.05(s,2h),2.45(s,3h),1.46(s,9h)。
[0155]
1.12.3.n-叔丁氧羰基组氨酸酯桥连溴(n-boc-his-o-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.08g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基组氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体757.2mg，收率84.3％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.76(s,1h),7.65(s,1h),5.03(d,j＝7.3hz,1h),4.71(m,2h),4.57(d,j＝6.2hz,1h),4.25(m,2h),3.85(t,j＝6.1hz,2h),3.77-3.62(m,4h),3.49(t,j＝5.9hz,2h),3.01(s,2h),1.46(s,9h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ171.53,155.27,136.34,124.82,118.12,80.05,74.76,71.43,70.61,68.95,64.26,54.65,37.64,30.35,28.26。
[0156]
1.12.4.n-叔丁氧羰基组氨酸酯桥连硼卡钠(n-boc-his-o-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为112.3mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基组氨酸酯桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色粘稠液体72.9mg，收率51.3％。
[0157]
1.12.5.组氨酸酯桥连硼卡钠(tyr-o-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为79.6mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基组氨酸酯桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体58.5mg,收率89.2％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.77(s,1h),7.68(s,1h),3.98-3.67(m,6h),3.51-3.45(m,4h),3.27-3.18(m,3h),2.84-2.33(m,4h),2.26-0.11(m,11h)；
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ172.83,132.50,136.42,135.72,118.12,76.54,72.73,71.21,68.75,66.74,54.18,51.31,43.41,29.34。所有数据证实该化合物为组氨酸(2-(2-(2-(十二硼烷基钠巯基)乙基)氧乙基)氧乙)醇酯(his-o-bsh)，其结构如下：
[0158][0159][0160]
实施例2.氨基酰胺桥连硼卡(aa-n-bsh)的制备
[0161]
2.1.缬氨酰胺桥连硼卡(val-n-bsh)的制备
[0162]
经5个步骤合成。
[0163]
2.1.1.n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连醇(n-boc-val-n-trg oh)的制备：称取0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸于50ml圆底烧瓶中，加入干燥二氯甲烷20ml，放入磁子，搅拌下使底物溶解。将反应瓶置于冰浴下平衡5分钟，依次加入edci(0.69g,3.6mmol)、dmap(0.11g,0.9mmol)，维持冰浴搅拌10分钟之后加入2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙醇(0.54g,3.6mmol)，继续冰浴下搅拌5分钟然后转移至室温反应12小时。tlc检测，转化完全(展开剂：pe/ea＝1/1)。将反应液依次用纯化水(3
×
20ml)、1mol/l hcl(3
×
20ml)、饱和nahco3(3
×
20ml)洗涤，合并有机相，干燥，浓缩得残留物，经硅胶柱层析(200-300目，洗脱剂：pe/ea＝1/1to 0/1)纯化，浓缩得目标物845.1mg，收率80.9％。1h nmr(400mhz,dmso)δ7.87(s,1h),6.57(s,1h),4.59(s,1h),3.81-3.70(m,1h),3.50(m,2h),3.35(m,10h),1.88(m,1h),1.38(s,9h),0.82(d,j＝6.8hz,6h)。
[0164]
2.1.2.n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-val-n-trg ts)的制备：称取0.70g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连醇溶于20ml干燥的二氯甲烷中，置于冰浴条件下搅拌5分钟后，缓慢加入0.55ml(4.0mmol)三乙胺，接着加入417.9mg(2.0mmol)tscl，维持冰浴反应30分钟后，升至室温反应12小时。tlc检测反应转化完全(展开剂：pe/ea＝1/1)，依次用纯化水(20ml
×
3),1m hcl((3
×
20ml)洗涤，干燥，过滤，浓缩后经硅胶柱层析(200-300目，洗脱剂：pe/ea＝1/1)纯化得无色油状物927.1mg，收率92.3％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.79(d,j＝8.2hz,2h),7.33(d,j＝8.1hz,2h),6.54(s,1h),5.21(d,j＝7.8hz,1h),4.19-4.12(m,2h),3.90(s,1h),3.72-3.64(m,2h),3.60-3.52(m,4h),3.51(t,j＝5.4hz,2h),3.43(m,2h),2.43(s,3h),2.09(m,1h),1.41(s,9h),0.92(d,j＝6.7hz,3h),0.88(d,j＝6.8hz,3h)。
[0165]
2.1.3.n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连溴(n-boc-val-n-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.00g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体755.5mg，收率92.1％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.86(m,1h),6.51(m,1h),4.91(s,1h),4.11(s,1h),3.84(t,j＝6.1hz,2h),3.67(m,4h),3.58(t,j＝4.9hz,2h),3.54
–
3.48(m,4h),1.69(m,1h),1.46(s,9h),0.96(d,j＝5.5hz,5h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ172.62,155.46,79.97,71.18,70.43,70.25,69.83,67.49,41.71,39.18,30.29,28.33,24.77。
[0166]
2.1.4.n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连硼卡钠(n-boc-val-n-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为102.5mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色油状物78.9mg，收率59.6％。
[0167]
2.1.5.缬氨酰胺桥连硼卡钠(val-n-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧
羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为74.1mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体54.8mg,收率91.2％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.41(s,2h),7.95(s,1h),3.76(s,2h),3.54(s,4h),3.51(s,1h),3.16(s,2h),2.89(s,2h),2.73(s,2h),1.90(s,1h),1.23(br,11h),0.92
–
0.85(m,6h)；
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ172.57,158.80,158.60,158.39,158.19,120.72,118.73,116.74,114.75,70.10,69.86,69.23,66.53,51.50,24.12,22.94,21.59。所有数据证实该化合物为n-(2-(2-(2-十二硼烷基钠巯基)乙氧基)乙氧基)乙基l-缬氨酰胺(val-n-bsh)，其结构如下：
[0168][0169]
2.2.亮氨酰胺桥连硼卡(leu-n-bsh)的制备
[0170]
经5个步骤合成。
[0171]
2.2.1.n-叔丁氧羰基亮氨酰胺桥连醇(n-boc-leu-n-trg oh)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.69g(3.0mmol)n-boc-l-亮氨酸，按照实验步骤2.1.1制备。分离纯化，浓缩得目标物1.02g，收率93.8％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.09(s,1h),5.28(s,1h),4.11(s,1h),3.73(m,2h),3.65-3.57(m,6h),3.54(t,j＝4.8hz,2h),3.44(d,j＝5.1hz,1h),3.36(m,2h),1.61(m,2h),1.46(m,1h),1.40(s,9h),0.90(d,j＝2.7hz,6h)。
[0172]
2.2.2.n-叔丁氧羰基亮氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-leu-n-trg ts)的制备：将0.70g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连醇替换为0.72g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基亮氨酰胺桥连醇，按照实验步骤2.1.2制备。分离纯化得无色油状物931.3mg，收率90.2％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.78(d,j＝7.8hz,2h),7.33(d,j＝7.8hz,2h),6.66(s,1h),5.08(s,1h),4.16(m,2h),4.10(d,j＝7.0hz,1h),3.68(m,2h),3.52(m,6h),3.41(t,j＝4.9hz,2h),2.43(s,3h),1.61(m,2h),1.51-1.44(m,1h),1.41(s,9h),0.90(d,j＝5.6hz,6h)。
[0173]
2.2.3.n-叔丁氧羰基亮氨酰胺桥连溴(n-boc-leu-n-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.03g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基亮氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体692.2mg，收率81.6％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ6.54(s,1h),4.95(s,1h),4.12(s,1h),3.83(t,j＝6.1hz,2h),3.67(m,4h),3.58(t,j＝4.9hz,2h),3.51(m,4h),1.68(m,2h),1.48(m,1h),1.45(s,9h),0.95(d,j＝5.6hz,6h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ172.66,155.59,79.87,71.16,70.41,70.23,69.82,53.09,41.69,39.22,30.35,28.32,24.75,22.96。
[0174]
2.2.4.n-叔丁氧羰基亮氨酰胺桥连硼卡钠(n-boc-leu-n-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为106.0mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基亮氨酰胺桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色油状物71.2mg，收率60.2％。
[0175]
2.2.5.亮氨酰胺桥连硼卡钠(leu-n-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为76.1mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基亮氨酰胺桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体46.6mg,收率77.5％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.75-8.66(m,1h),8.30
(s,2h),3.77-3.75(m,1h),3.55-3.47(m,5h),3.45-3.39(m,3h),3.35-3.28(m,1h),3.25-3.11(m,2h),1.97-1.89(m,1h),1.68-1.58(m,1h),1.57-1.50(m,2h),1.49-0.92(m,7h),0.86(t,j＝24hz,6h),0.79-0.10(m,3h)；
13
cnmr(400mhz,dmso-d6)δ167.59,82.86,72.37,70.66,67.52,60.77,49.60,41.47,40.68,26.27,22.59,21.32。所有数据证实该化合物为n-(2-(2-(2-十二硼烷基钠巯基)乙氧基)乙氧基)乙基l-亮氨酰胺(leu-n-bsh)，其结构如下：
[0176][0177]
2.3.d-亮氨酰胺桥连硼卡(d-leu-n-bsh)的制备
[0178]
经5个步骤合成。
[0179]
2.3.1.n-叔丁氧羰基d-亮氨酰胺桥连醇(n-boc-d-leu-n-trg oh)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.69g(3.0mmol)n-boc-l-亮氨酸，按照实验步骤2.1.1制备。分离纯化，浓缩得目标物1.03g，收率93.9％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.08(s,1h),5.27(s,1h),4.12(s,1h),3.72(m,2h),3.66-3.56(m,6h),3.53(t,j＝4.8hz,2h),3.43(d,j＝5.1hz,1h),3.35(m,2h),1.62(m,2h),1.47(m,1h),1.41(s,9h),0.91(d,j＝2.7hz,6h)。
[0180]
2.3.2.n-叔丁氧羰基d-亮氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-d-leu-n-trg ts)的制备：将0.70g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连醇替换为0.72g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基d-亮氨酰胺桥连醇，按照实验步骤2.1.2制备。分离纯化得无色油状物932.4mg，收率90.3％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.79(d,j＝7.8hz,2h),7.34(d,j＝7.8hz,2h),6.67(s,1h),5.09(s,1h),4.15(m,2h),4.11(d,j＝7.0hz,1h),3.67(m,2h),3.53(m,6h),3.42(t,j＝4.9hz,2h),2.42(s,3h),1.63(m,2h),1.52-1.45(m,1h),1.42(s,9h),0.89(d,j＝5.6hz,6h)。
[0181]
2.3.3.n-叔丁氧羰基d-亮氨酰胺桥连溴(n-boc-d-leu-n-trg br)的制备：将
[0182]
1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.03g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基d-亮氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体664.5mg，收率78.3％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ6.56(s,1h),4.97(s,1h),4.13(s,1h),3.84(t,j＝6.1hz,2h),3.68(m,4h),3.56(t,j＝4.9hz,2h),3.53(m,4h),1.67(m,2h),1.49(m,1h),1.43(s,9h),0.97(d,j＝5.6hz,6h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ172.68,155.61,79.86,71.15,70.43,70.25,69.83,53.07,41.68,39.23,30.36,28.33,24.74,22.95。
[0183]
2.3.4.n-叔丁氧羰基亮氨酰胺桥连硼卡钠(n-boc-d-leu-n-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为106.0mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基d-亮氨酰胺桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色油状物74.0mg，收率62.6％。
[0184]
2.3.5.亮氨酰胺桥连硼卡钠(d-leu-n-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁
氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为76.1mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基d-亮氨酰胺桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体49.4mg,收率82.2％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.74-8.65(m,1h),8.28(s,2h),3.78-3.76(m,1h),3.56-3.48(m,5h),3.43-3.36(m,3h),3.36-3.29(m,1h),3.23-3.08(m,2h),1.96-1.87(m,1h),1.66-1.56(m,1h),1.56-1.51(m,2h),1.47-0.93(m,7h),0.87(t,j＝24hz,6h),0.78-0.12(m,3h)；
13
cnmr(400mhz,dmso-d6)δ167.61,82.87,72.38,70.67,67.53,60.78,49.62,41.46,40.67,26.25,22.57,21.34。所有数据证实该化合物为n-(2-(2-(2-十二硼烷基钠巯基)乙氧基)乙氧基)乙基d-亮氨酰胺(d-leu-n-bsh)，其结构如下：
[0185][0186]
2.4.异亮氨酰胺桥连硼卡(ile-n-bsh)的制备
[0187]
经5个步骤合成。
[0188]
2.4.1.n-叔丁氧羰基异亮氨酰胺桥连醇(n-boc-ile-n-trg oh)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.69g(3.0mmol)n-boc-l-异亮氨酸，按照实验步骤2.1.1制备。分离纯化，浓缩得目标物892.2mg，收率82.1％。1hnmr(400mhz,dmso)δ7.87(s,1h),6.61(d,j＝9.0hz,1h),4.59(t,j＝5.4hz,1h),3.78(t,j＝8.2hz,1h),3.50(m,4h),3.41(m,4h),3.36(m,4h),1.64(m,1h),
[0189]
1.42(m,1h),1.37(s,9h),1.15
–
0.99(m,1h),0.81(d,j＝7.4hz,3h),0.79(d,j＝6.7hz,3h)。
[0190]
2.4.2.n-叔丁氧羰基异亮氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-ile-n-trg ts)的制备：将0.70g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连醇替换为0.72g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基异亮氨酰胺桥连醇，按照实验步骤2.1.2制备。分离纯化得无色油状物935.4mg，收率90.6％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.80(d,j＝8.2hz,2h),7.34(d,j＝8.2hz,2h),6.54(s,1h),5.17(d,j＝7.9hz,1h),4.21-4.15(m,2h),3.99-3.88(m,1h),3.72-3.65(m,2h),3.62-3.49(m,6h),3.44(m,2h),2.44(s,3h),1.83(m,1h),1.47(m,1h),1.42(s,9h),1.19-1.03(m,1h),0.91(d,j＝4.0hz,3h),0.89(d,j＝4.5hz,3h)。
[0191]
2.4.3.n-叔丁氧羰基异亮氨酰胺桥连溴(n-boc-ile-n-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.03g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基异亮氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体736.3mg，收率86.8％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ6.98-6.13(s,1h),5.12(d,j＝6.4hz,1h),3.99-3.88(m,1h),3.82(t,j＝6.1hz,2h),3.65(m,4h),3.56(m,2h),3.49(t,j＝6.0hz,4h),2.14(m,1h),1.87(m,1h),1.44(s,9h),1.21-1.03(m,1h),0.93(d,j＝3.3hz,3h),0.91(t,j＝8.1hz,3h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ171.28,156.14,79.73,71.15,70.40,70.21,69.81,59.24,39.15,37.61,30.46,28.44,24.71,15.55,11.47。
[0192]
2.4.4.n-叔丁氧羰基异亮氨酰胺桥连硼卡钠(n-boc-ile-n-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为106.0mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基异亮氨酰胺桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色油状物83.3mg，收率61.3％。
[0193]
2.4.5.异亮氨酰胺桥连硼卡钠(ile-n-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为76.1mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基异亮氨酰胺桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体47.0mg,收率75.8％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.52(s,1h),8.18(s,2h),4.91-4.43(m,8h),3.74(s,2h),3.63-3.38(m,6h),3.26-3.04(m,2h),1.77-0.94(m,11h),0.90-0.58(s,6h)；
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ168.26,118.53,115.58,70.21,70.14,69.90,69.24,56.92,42.03,36.50,24.62,14.86,11.61。所有数据证实该化合物为n-(2-(2-(2-十二硼烷基钠巯基)乙氧基)乙氧基)乙基l-异亮氨酰胺(ile-n-bsh)，其结构如下：
[0194][0195]
2.5.甲硫氨酰胺桥连硼卡(met-n-bsh)的制备
[0196]
经5个步骤合成。
[0197]
2.5.1.n-叔丁氧羰基甲硫氨酰胺桥连醇(n-boc-met-n-trg oh)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.75g(3.0mmol)n-boc-l-甲硫氨酸，按照实验步骤2.1.1制备。分离纯化，浓缩得目标物947.8mg，收率83.1％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.11(s,1h),5.54(d,j＝7.3hz,1h),4.24(s,1h),3.72(m,2h),3.68
–
3.56(m,6h),3.53(t,j＝4.6hz,2h),3.46
–
3.34(m,2h),3.23(s,1h),2.48(m,2h),2.06(s,3h),2.01(m,1h),1.85(m,1h),1.40(s,9h)。
[0198]
2.5.2.n-叔丁氧羰基甲硫氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-met-n-trg ts)的制备：将0.70g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连醇替换为0.76g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基甲硫氨酰胺桥连醇，按照实验步骤2.1.2制备。分离纯化得无色油状物1.01g，收率94.1％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.76(d,j＝7.7hz,2h),7.31(d,j＝7.8hz,2h),6.73(s,1h),5.40(d,j＝8.0hz,1h),4.22(s,1h),4.13(m,2h),3.66(m,2h),3.52(m,6h),3.40(m,2h),2.50(m,2h),2.41(s,3h),2.05(m,1h),2.04(s,3h),1.87(m,1h),1.39(s,9h)。
[0199]
2.5.3.n-叔丁氧羰基甲硫氨酰胺桥连溴(n-boc-met-n-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.07g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基甲硫氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体733.9mg，收率83.0％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ6.64(s,1h),5.27(s,1h),4.27(s,1h),3.82(t,j＝6.1hz,2h),3.65(m,4h),3.57(t,j＝4.9hz,2h),3.54-3.43(m,4h),2.59-2.53(m,2h),2.11(s,3h),2.07(m,1h),1.91(td,j＝14.3,7.2hz,1h),1.44(s,9h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ171.28,155.47,80.03,71.14,70.49,70.22,69.67,53.44,39.28,30.45,30.14,28.38,15.35,15.28。
[0200]
2.5.4.n-叔丁氧羰基甲硫氨酰胺桥连硼卡钠(n-boc-met-n-trg bsh)的制备：将
102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为110.5mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基甲硫氨酰胺桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色油状物103.6mg，收率73.8％。
[0201]
2.5.5.甲硫氨酰胺桥连硼卡钠(met-n-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为78.6mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基甲硫氨酰胺桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体50.3mg,收率77.9％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.61(s,1h),8.27(s,2h),3.87-3.68(m,2h),3.58-3.49(m,3h),3.47-3.43(m,3h),3.25-3.07(m,2h),2.52-2.44(m,2h),2.06-1.95(m,3h),1.68-0.46(m,13h)；
13
cnmr(101mhz,dmso-d6)δ168.55,70.17,69.85,69.19,52.05,42.05,39.23,31.38,28.61,15.02。所有数据证实该化合物为n-(2-(2-(2-十二硼烷基钠巯基)乙氧基)乙氧基)乙基l-甲硫氨酰胺(met-n-bsh)，其结构如下：
[0202][0203]
2.6.d-甲硫氨酰胺桥连硼卡(d-met-n-bsh)的制备
[0204]
经5个步骤合成。
[0205]
2.6.1.n-叔丁氧羰基d-甲硫氨酰胺桥连醇(n-boc-d-met-n-trg oh)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.75g(3.0mmol)n-boc-d-甲硫氨酸，按照实验步骤2.1.1制备。分离纯化，浓缩得目标物948.2mg，收率83.2％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.12(s,1h),5.53(d,j＝7.3hz,1h),4.23(s,1h),3.74(m,2h),3.69-3.57(m,6h),3.54(t,j＝4.6hz,2h),3.47-3.35(m,2h),3.24(s,1h),2.47(m,2h),2.08(s,3h),2.03(m,1h),1.86(m,1h),1.41(s,9h)。
[0206]
2.6.2.n-叔丁氧羰基d-甲硫氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-d-met-n-trg ts)的制备：将0.70g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连醇替换为0.76g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基甲硫氨酰胺桥连醇，按照实验步骤2.1.2制备。分离纯化得无色油状物1.03g，收率94.3％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.75(d,j＝7.7hz,2h),7.32(d,j＝7.8hz,2h),6.72(s,1h),5.41(d,j＝8.0hz,1h),4.23(s,1h),4.12(m,2h),3.67(m,2h),3.53(m,6h),3.41(m,2h),2.51(m,2h),2.42(s,3h),2.06(m,1h),2.05(s,3h),1.86(m,1h),1.38(s,9h)。
[0207]
2.6.3.n-叔丁氧羰基d-甲硫氨酰胺桥连溴(n-boc-d-met-n-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.07g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基甲硫氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体733.7mg，收率82.8％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ6.65(s,1h),5.28(s,1h),4.26(s,1h),3.83(t,j＝6.1hz,2h),3.64(m,4h),3.56(t,j＝4.9hz,2h),3.55-3.42(m,4h),2.58-2.54(m,2h),2.12(s,3h),2.08(m,1h),1.92(td,j＝14.3,7.2hz,1h),1.45(s,9h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ171.27,155.48,80.05,71.12,70.47,70.23,69.68,53.45,39.26,30.43,30.12,28.35,15.37,15.26。
[0208]
2.6.4.n-叔丁氧羰基d-甲硫氨酰胺桥连硼卡钠(n-boc-d-met-n-trg bsh)的制
备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为110.5mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基d-甲硫氨酰胺桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色油状物103.4mg，收率73.7％。
[0209]
2.6.5.d-甲硫氨酰胺桥连硼卡钠(d-met-n-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为78.6mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基甲硫氨酰胺桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体50.6mg,收率78.0％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.63(s,1h),8.25(s,2h),3.85-3.67(m,2h),3.57-3.48(m,3h),3.46-3.42(m,3h),3.24-3.05(m,2h),2.51-2.43(m,2h),2.05-1.94(m,3h),1.67-0.45(m,13h)；
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ168.56,70.15,69.83,69.17,52.03,42.02,39.26,31.37,28.63,15.05。所有数据证实该化合物为n-(2-(2-(2-十二硼烷基钠巯基)乙氧基)乙氧基)乙基d-甲硫氨酰胺(d-met-n-bsh)，其结构如下：
[0210][0211][0212]
2.7.苯丙氨酰胺桥连硼卡(phe-n-bsh)的制备
[0213]
经5个步骤合成。
[0214]
2.7.1.n-叔丁氧羰基苯丙氨酰胺桥连醇(n-boc-phe-n-trg oh)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.80g(3.0mmol)n-boc-l-苯丙氨酸，按照实验步骤2.1.1制备。分离纯化，浓缩得目标物1.17g，收率98.4％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.16(m,5h),4.32(s,1h),3.66(m,2h),3.52(m,8h),3.31(m,4h),3.00(m,1h),2.89(m,1h),1.28(s,9h)。
[0215]
2.7.2.n-叔丁氧羰基苯丙氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-phe-n-trg ts)的制备：将0.70g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连醇替换为0.79g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基苯丙氨酰胺桥连醇，按照实验步骤2.1.2制备。分离纯化得无色油状物939.8mg，收率85.4％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.80(d,j＝8.3hz,2h),7.35(d,j＝8.1hz,2h),7.32-7.25(m,2h),7.22(dd,j＝8.0,6.4hz,3h),6.35(s,1h),5.18(s,1h),4.32(d,j＝6.7hz,1h),4.21-4.13(m,2h),3.71-3.66(m,2h),3.57-3.53(m,2h),3.47(m,4h),3.37(m,2h),3.04(m,2h),2.46(s,3h),1.38(s,9h)。
[0216]
2.7.3.n-叔丁氧羰基苯丙氨酰胺桥连溴(n-boc-phe-n-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.10g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基苯丙氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体795.3mg，收率86.8％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.30-7.23(m,2h),7.19(t,j＝7.8hz,3h),6.38(s,1h),5.21(s,1h),4.32(s,1h),3.75(t,j＝6.0hz,2h),3.57(m,2h),3.63
–
3.17(m,8h),3.02(d,j＝5.7hz,2h),1.38(s,9h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ171.55,155.23,136.99,129.11,128.50,126.77,79.87,71.03,70.37,70.18,69.60,53.96,39.15,30.29,30.21,28.27。
[0217]
2.7.4.n-叔丁氧羰基苯丙氨酰胺桥连硼卡钠(n-boc-phe-n-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为114.5mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰
基苯丙氨酰胺桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色油状物125.7mg，收率87.1％。
[0218]
2.7.5.苯丙氨酰胺桥连硼卡钠(phe-n-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为80.8mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基苯丙氨酰胺桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体48.5mg,收率72.6％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.56(s,1h),7.29-7.23(m,5h),4.00(s,1h),3.34-3.20(m,8h),3.18-3.08(m,2h),2.95-3.06(m,2h),1.89(s,3h),1.5-1.20(m,2h),0.86-0.44(m,11h)；
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ165.44,135.10,131.27,129.94,127.44,126.05,123.17,81.71,72.49,72.44,56.43,46.58,41.98,41.42,35.75。所有数据证实该化合物为n-(2-(2-(2-十二硼烷基钠巯基)乙氧基)乙氧基)乙基l-苯丙氨酰胺(phe-n-bsh)，其结构如下：
[0219][0220]
2.8.d-苯丙氨酰胺桥连硼卡(d-phe-n-bsh)的制备
[0221]
经5个步骤合成。
[0222]
2.8.1.n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酰胺桥连醇(n-boc-d-phe-n-trg oh)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.80g(3.0mmol)n-boc-d-苯丙氨酸，按照实验步骤2.1.1制备。分离纯化，浓缩得目标物1.15g，收率98.1％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.18(m,5h),4.33(s,1h),3.67(m,2h),3.54(m,8h),3.32(m,4h),3.03(m,1h),2.87(m,1h),1.29(s,9h)。
[0223]
2.8.2.n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-d-phe-n-trg ts)的制备：将0.70g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连醇替换为0.79g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酰胺桥连醇，按照实验步骤2.1.2制备。分离纯化得无色油状物939.5mg，收率85.3％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.78(d,j＝8.3hz,2h),7.36(d,j＝8.1hz,2h),7.33-7.26(m,2h),7.24(dd,j＝8.0,6.4hz,3h),6.36(s,1h),5.16(s,1h),4.34(d,j＝6.7hz,1h),4.22-4.14(m,2h),3.72-3.67(m,2h),3.56-3.52(m,2h),3.46(m,4h),3.38(m,2h),3.05(m,2h),2.47(s,3h),1.39(s,9h)。
[0224]
2.8.3.n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酰胺桥连溴(n-boc-d-phe-n-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.10g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体796.2mg，收率87.0％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.32-7.24(m,2h),7.18(t,j＝7.8hz,3h),6.39(s,1h),5.22(s,1h),4.33(s,1h),3.76(t,j＝6.0hz,2h),3.58(m,2h),3.64-3.18(m,8h),3.05(d,j＝5.7hz,2h),
[0225]
1.38(s,9h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ171.56,155.25,136.97,129.13,128.52,
126.75,79.86,71.05,70.36,70.17,69.61,53.94,39.16,30.28,30.23,28.29。
[0226]
2.8.4.n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酰胺桥连硼卡钠(n-boc-d-phe-n-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为114.5mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酰胺桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色油状物126.2mg，收率87.5％。
[0227]
2.8.5.d-苯丙氨酰胺桥连硼卡钠(d-phe-n-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为80.8mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基d-苯丙氨酰胺桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体49.4mg,收率73.1％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.58(s,1h),7.27-7.24(m,5h),4.01(s,1h),3.35-3.21(m,8h),3.17-3.06(m,2h),2.96-3.07(m,2h),1.87(s,3h),1.6-1.22(m,2h),0.87-0.45(m,11h)；
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ165.46,135.12,131.28,129.95,127.43,126.06,123.15,81.73,72.46,72.45,56.44,46.57,41.96,41.43,35.76。所有数据证实该化合物为n-(2-(2-(2-十二硼烷基钠巯基)乙氧基)乙氧基)乙基d-苯丙氨酰胺(d-phe-n-bsh)，其结构如下：
[0228][0229]
2.9.色氨酰胺桥连硼卡(trp-n-bsh)的制备
[0230]
经5个步骤合成。
[0231]
2.9.1.n-叔丁氧羰基色氨酰胺桥连醇(n-boc-trp-n-trg oh)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.91g(3.0mmol)n-boc-l-色氨酸，按照实验步骤2.1.1制备。分离纯化，浓缩得目标物1.19g，收率91.1％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.80(s,1h),7.92(t,j＝5.3hz,1h),7.60(d,j＝7.8hz,1h),7.35(d,j＝8.0hz,1h),7.15(s,1h),7.07(t,j＝7.3hz,1h),6.99(t,j＝7.3hz,1h),6.71(d,j＝8.3hz,1h),4.64(s,1h),4.14(d,j＝4.2hz,1h),3.52(m,6h),3.48-3.40(m,2h),3.37(m,2h),3.21(m,2h),3.10(dd,j＝14.5,5.0hz,1h),2.94(dd,j＝14.5,8.7hz,1h),1.34(s,9h)。
[0232]
2.9.2.n-叔丁氧羰基色氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-trp-n-trg ts)的制备：将0.70g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连醇替换为0.87g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基色氨酰胺桥连醇，按照实验步骤2.1.2制备。分离纯化得无色油状物1.11g，收率94.6％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.55(s,1h),7.79(d,j＝8.2hz,2h),7.68(d,j＝7.7hz,1h),7.37(d,j＝8.0hz,1h),7.33(d,j＝8.1hz,2h),7.18(t,j＝7.4hz,1h),7.12(d,j＝7.5hz,1h),7.09(s,1h),6.11(s,1h),5.34(s,1h),4.41(s,1h),4.20-4.07(m,2h),3.76-3.57(m,2h),3.46(t,j＝4.0hz,2h),3.31(m,6h),3.16(m,2h),2.45(s,3h),1.44(s,9h)。
[0233]
2.9.3.n-叔丁氧羰基色氨酰胺桥连溴(n-boc-trp-n-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.18g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基
色氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体832.2mg，收率83.7％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.60(s,1h),7.67(d,j＝7.7hz,1h),7.37(d,j＝8.0hz,1h),7.19(t,j＝7.5hz,1h),7.12(t,j＝7.4hz,1h),7.07(s,1h),6.25(s,1h),5.31(s,1h),4.43(s,1h),3.74(t,j＝6.0hz,2h),3.52(m,2h),3.44(t,j＝6.1hz,2h),3.34(m,6h),3.19(m,2h),1.44(s,9h)；
13
cnmr(101mhz,cdcl3)δ171.57,154.86,136.31,127.56,123.44,122.12,119.77,119.01,111.26,110.56,79.97,71.01,70.32,70.07,69.47,55.33,39.23,30.40,28.81,28.35。
[0234]
2.9.4.n-叔丁氧羰基色氨酰胺桥连硼卡钠(n-boc-trp-n-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为124.3mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基色氨酰胺桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色油状物88.8mg，收率57.6％。
[0235]
2.9.5.色氨酰胺桥连硼卡钠(trp-n-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为86.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基色氨酰胺桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体63.3mg,收率87.6％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.00(s,1h),8.56(s,1h),8.16(s,2h),7.61(s,1h),7.34(s,1h),7.19(s,1h),7.06-6.98(m,2h),4.01-3.91(m,1h),,3.78-3.63(m,2h),3.54-3.47(m,2h),3.37-3.32(m,1h),3.30-3.23(m,2h),3.19-3.05(m,4h),1.75-0.59(m,16h)；
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ168.95,136.65,127.52,125.27,121.66,118.94,118.90,111.97,107.33,70.18,69.89,69.63,69.19,66.46,53.26,41.07,39.28,27.71。所有数据证实该化合物为n-(2-(2-(2-十二硼烷基钠巯基)乙氧基)乙氧基)乙基l-色氨酰胺(trp-n-bsh)，其结构如下：
[0236][0237]
2.10.酪氨酰胺桥连硼卡(tyr-n-bsh)的制备
[0238]
经5个步骤合成。
[0239]
2.10.1.n-叔丁氧羰基酪氨酰胺桥连醇(n-boc-tyr-n-trg oh)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.84g(3.0mmol)n-boc-l-酪氨酸，按照实验步骤2.1.1制备。分离纯化，浓缩得目标物1.14g，收率92.2％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.03(s,1h),8.05(m,1h),7.12(d,j＝7.9hz,2h),6.89(d,j＝7.9hz,2h),6.81(m,1h),5.42(d,j＝7.9hz,1h),5.01(s,2h),4.33(s,1h),3.71(m,2h),3.62-3.43(m,8h),3.38(m,2h),2.97(d,j＝23.6hz,2h),1.39(s,9h)。
[0240]
2.10.2.n-叔丁氧羰基酪氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-tyr-n-trg ts)的制备：将0.70g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连醇替换为0.82g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基酪氨酰胺桥连醇，按照实验步骤2.1.2制备。分离纯化得无色油状物1.03g，收率90.6％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.80(d,j＝7.9hz,2h),7.35(d,j＝7.8hz,2h),7.03(d,j＝7.8hz,
2h),6.73(d,j＝7.9hz,2h),6.33(s,1h),5.27(s,1h),4.27(s,1h),4.17(m,2h),3.68(m,2h),3.55(m,2h),3.42(m,6h),2.96(d,j＝14.7hz,2h),2.45(s,3h),1.42(s,9h)。
[0241]
2.10.3.n-叔丁氧羰基酪氨酰胺桥连溴(n-boc-tyr-n-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.13g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基酪氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体800.3mg，收率84.4％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.02(d,j＝7.7hz,2h),6.75(d,j＝7.6hz,2h),6.54(s,1h),5.36(s,1h),4.29(s,1h),3.79(t,j＝5.9hz,2h),3.62(m,2h),3.55(m,2h),3.52
–
3.43(m,4h),3.38(m,2h),2.95(m,2h),1.42(s,9h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ171.83,155.51,130.64,130.15,127.72,115.77,80.25,71.08,70.29,70.07,69.56,56.10,39.36,38.04,30.32,28.32。
[0242]
2.10.4.n-叔丁氧羰基酪氨酰胺桥连硼卡钠(n-boc-tyr-n-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为118.5mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基酪氨酰胺桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色油状物84.7mg，收率57.1％。
[0243]
2.10.5.酪氨酰胺桥连硼卡钠(tyr-n-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为83.1mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基色氨酰胺桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体53.0mg,收率76.8％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.52(s,1h),8.52(s,1h),8.38-8.13(m,2h),7.0(d,j＝8hz,1h),6.68(d,j＝8hz,1h),4.29-4.06(m,4h),3.95-3.88(m,1h),3.74-3.69(m,1h),3.61-3.57(m,1h),3.39-3.33(m,2h),3.32-3.23(m,2h),2.97-2.84(m,2h),1.47-1.32(m,2h),1.20-0.82(m,11h)；
13
c nmr(101mhz,dmso-d6)δ170.38,159.19,132.95,130.88,129.69,119.19,116.20,78.06,69.93,69.64,68.97,61.53,48.98,44.05,41.49。所有数据证实该化合物为n-(2-(2-(2-十二硼烷基钠巯基)乙氧基)乙氧基)乙基l-酪氨酰胺(tyr-n-bsh)，其结构如下：
[0244][0245]
2.11.多巴酰胺桥连硼卡(dpa-n-bsh)的制备
[0246]
经5个步骤合成。
[0247]
2.11.1.n-叔丁氧羰基多巴酰胺桥连醇(n-boc-dpa-n-trg oh)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.89g(3.0mmol)n-boc-l-多巴，按照实验步骤2.1.1制备。分离纯化，浓缩得目标物1.18g，收率91.7％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.36(s,2h),8.03(m,1h),7.27(m,1h),6.89(d,j＝7.8hz,1h),6.76(m,1h),6.63(d,j＝7.7hz,2h),5.43(d,j＝7.8hz,1h),5.03(s,2h),4.32(s,1h),3.73(m,2h),3.63-3.44(m,8h),3.37(m,2h),2.96(d,j＝23.6hz,2h),1.41(s,9h)。
[0248]
2.11.2.n-叔丁氧羰基多巴酰胺桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-dpa-n-trg ts)的制备：将0.70g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连醇替换为0.86g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基
多巴酰胺桥连醇，按照实验步骤2.1.2制备。分离纯化得无色油状物1.05g，收率90.5％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.36(s,2h),8.03(m,1h),7.83(d,j＝7.9hz,2h),7.46(d,j＝7.8hz,2h),6.92(d,j＝7.6hz,1h),6.81(s,1h),6.73(d,j＝7.8hz,1h),5.26(s,1h),4.25(s,1h),4.18(m,2h),3.69(m,2h),3.56(m,2h),3.43(m,6h),2.95(d,j＝14.7hz,2h),2.46(s,3h),1.43(s,9h)。
[0249]
2.11.3.n-叔丁氧羰基多巴酰胺桥连溴(n-boc-dpa-n-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.16g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基多巴酰胺桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体836.2mg，收率85.3％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.34(s,2h),8.04(m,1h),7.38(m,1h),7.02(d,j＝7.7hz,1h),6.87(s,1h),6.65(d,j＝7.6hz,2h),5.35(s,1h),4.27(s,1h),3.76(t,j＝5.9hz,2h),3.64(m,2h),3.56(m,2h),3.54-3.45(m,4h),3.39(m,2h),2.94(m,2h),1.44(s,9h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ171.83,155.51,144.87,143.78,130.31,122.82,116.43,115.77,80.25,71.08,70.29,70.07,69.56,56.10,39.36,38.04,30.32,28.32。
[0250]
2.11.4.n-叔丁氧羰基多巴酰胺桥连硼卡钠(n-boc-tyr-n-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为122.5mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基多巴酰胺桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色油状物90.5mg，收率59.4％。
[0251]
2.11.5.多巴酰胺桥连硼卡钠(dpa-n-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为85.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基色氨酰胺桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体63.1mg,收率88.5％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.54(s,2h),8.52(m,1h),8.38-8.13(m,2h),6.93(d,j＝8.1hz,1h),6.87(s,1h),6.68(d,j＝8.2hz,1h),4.29-4.07(m,4h),3.96-3.89(m,1h),3.75-3.68(m,1h),3.63-3.58(m,1h),3.37-3.32(m,2h),3.34-3.25(m,2h),2.96-2.83(m,2h),1.48-1.33(m,2h),1.22-0.83(m,11h)；
13
cnmr(101mhz,dmso-d6)δ170.38,145.36,144.63,130.88,123.11,116.19,116.20,78.05,69.94,69.62,68.95,61.54,48.96,44.07,41.46。所有数据证实该化合物为n-(2-(2-(2-十二硼烷基钠巯基)乙氧基)乙氧基)乙基l-多巴酰胺(dpa-n-bsh)，其结构如下：
[0252][0253]
2.12.组氨酰胺桥连硼卡(his-n-bsh)的制备
[0254]
经5个步骤合成。
[0255]
2.12.1.n-叔丁氧羰基组氨酰胺桥连醇(n-boc-his-n-trg oh)的制备：将0.65g(3.0mmol)n-boc-l-缬氨酸替换为0.77g(3.0mmol)n-boc-l-组氨酸，按照实验步骤2.1.1制备。分离纯化，浓缩得目标物1.11g，收率95.8％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ12.32(m,1h),8.67(m,1h),8.03(m,1h),7.68(m,1h),7.41(m,1h),4.85(m,1h),3.68(m,2h),3.53(m,8h),3.32
(m,4h),3.02(m,1h),2.87(m,1h),1.38(s,9h)。
[0256]
2.12.2.n-叔丁氧羰基组氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯(n-boc-his-n-trg ts)的制备：将0.70g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酰胺桥连醇替换为0.77g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基组氨酰胺桥连醇，按照实验步骤2.1.2制备。分离纯化得无色油状物935.7mg，收率86.6％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ12.35(m,1h),8.69(m,1h),8.05(m,1h),7.82(d,j＝8.2hz,2h),7.66(m,1h),7.41(m,1h),7.37(d,j＝8.1hz,2h),5.19(m,1h),4.31(d,j＝6.6hz,1h),4.22-4.15(m,2h),3.73-3.65(m,2h),3.56-3.52(m,2h),3.48(m,4h),3.36(m,2h),3.05(m,2h),2.48(s,3h),1.39(s,9h)。
[0257]
2.12.3.n-叔丁氧羰基组氨酰胺桥连溴(n-boc-his-n-trg br)的制备：将1.01g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连对甲苯磺酸酯替换为1.08g(2.0mmol)n-叔丁氧羰基组氨酰胺桥连对甲苯磺酸酯，按实验步骤1.1.3制备。分离纯化得无色液体781.5mg，收率87.2％。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ12.38(m,1h),8.72(m,1h),8.02(m,1h),7.68(m,1h),7.42(m,1h),5.17(m,1h),4.34(s,1h),3.78(t,j＝6.0hz,2h),3.56(m,2h),3.65-3.18(m,8h),3.04(d,j＝5.7hz,2h),1.39(s,9h)；
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ171.58,155.36,136.42,131.35,118.02,79.84,71.02,70.35,70.16,69.62,53.95,39.12,30.26,30.22,28.28。
[0258]
2.12.4.n-叔丁氧羰基组氨酰胺桥连硼卡钠(n-boc-his-n-trg bsh)的制备：将102.8mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连溴替换为112.0mg(0.25mmol)n-叔丁氧羰基组氨酰胺桥连溴，按实验步骤1.1.4制备。分离纯化得无色油状物126.5mg，收率89.2％。
[0259]
2.12.5.组氨酰胺桥连硼卡钠(his-n-bsh)的制备：将74.3mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基缬氨酸酯桥连硼卡钠替换为80.8mg(0.14mmol)n-叔丁氧羰基组氨酰胺桥连硼卡钠，按照实验步骤1.1.5制备。分离纯化得无色粘稠液体58.0mg,收率88.7％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.56(s,1h),12.12(m,1h),8.86(br,2h),8.63(m,1h),8.03(m,1h),7.62(m,1h),4.03(m,1h),3.36-3.22(m,8h),3.17-3.06(m,2h),2.96-3.07(m,2h),1.87(s,3h),1.45-1.23(m,2h),0.87-0.45(m,11h)；
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ165.44,136.17,131.27,118.02,81.72,72.46,72.45,56.41,46.56,41.95,41.43,35.76。所有数据证实该化合物为n-(2-(2-(2-十二硼烷基钠巯基)乙氧基)乙氧基)乙基l-组氨酰胺(his-n-bsh)，其结构如下：
[0260][0261]
实施例3氨基酸-bsh靶向化合物细胞毒性
[0262]
将含肽牛血清的细胞培养液置37℃培养24h。将传代培养的人正常肝细胞lo2细胞，用组织培养基制成1
×
105个/ml的细胞悬液，将该细胞悬液接种于96孔细胞培养板(100μl/孔)，置37℃二氧化碳培养箱中培养24h。等细胞贴壁生长后，去除上清液，加入对照组(不加药)和试验组(加药)的组织培养基进行孵育培养，其中细胞培养液中药物的浓度为500μmol/l，置37℃二氧化碳培养箱中继续培养。孵育2天后取出。加入mtt液继续培养4h。去
除细胞孵育液，随后加入dmso，震荡10min，最后用酶标仪在波长为570nm下测定其吸光度值，并根据其吸光度按公式计算细胞的相对增殖度(rgr)。细胞的相对增殖度的计算公式为：
[0263][0264]
结果见表1。可以看到，系列氨基酸-bsh靶向化合物与人正常肝细胞lo2细胞孵育2天后，其rgr均接近100％，说明这些化合物在500μmol/l的浓度下，对人正常肝细胞没有毒性或毒性很低。
[0265]
表1.mtt比色法测得的细胞相对增殖度(rgr)
[0266][0267][0268]
实施例4系列氨基酸-bsh靶向化合物的细胞摄硼特征
[0269]
采用icp-ms方法测定系列氨基酸-bsh靶向化合物在人脐静脉内皮细胞(huvec)、人肝癌细胞hepg2、人乳腺癌细胞mda-mb-231、人神经胶质瘤细胞u87的摄硼特征。
[0270]
具体过程：取对数生长期的肿瘤细胞加入rpmi 1640培养液适量(胎牛血清10％，青霉素100u/ml)，调整细胞浓度为1
×
105个/ml，接种于6孔培养板，每孔接种肿瘤细胞悬液100μl。培养24h后，加入配制好的供试药物(对照组不加药物)，令药物终浓度为100μm，放入5％co2培养箱中，37℃培养24h后，用移液枪移除培养皿中的培养基，pbs洗涤(3
×
1ml)，向培养皿中加入0.5ml胰酶，随后置于37℃恒温co2培养箱中培养3min，期间用显微镜下观察细胞是否皱缩变圆，皱缩变圆后迅速加入0.6ml培养基终止消化，并轻轻吹打贴壁的细胞，使细胞全部从培养皿底部脱落，然后将细胞混悬液转移至离心管中，稀释后用血球计数板计数计算出每孔的细胞个数。将上述细胞悬浮液离心，除去上清液，加入pbs洗涤(3
×
1ml)。
向已洗涤的含细胞离心管中加入500μl浓硝酸消解；采用icp-ms法测量细胞中的硼含量，并计算t/n比。t/n比的定义为：肿瘤细胞中的摄硼量/huvec细胞中的载硼量。
[0271]
结果见表2至表4。可以看到，在所考察的三株肿瘤细胞中，所有氨基酸-bsh靶向化合物的载硼量均远大于109个b/细胞，其t/n比均大于3.0，符合作为硼递送剂的前提条件。所有的酯型化合物均表现出优于对应的酰胺型化合物的摄硼特征；在特定的肿瘤细胞中，特定的氨基酸-bsh靶向化合物表现出优于阳性对照硼卡钠(bsh)的摄硼特征。比如在hepg2细胞中，met-o-bsh、d-met-o-bsh、tyr-o-bsh、dpa-o-bsh、his-o-bsh、trp-n-bsh和his-n-bsh的摄硼特征均优于阳性对照药，尤其是met-o-bsh，其t/n值是bsh的4倍；在人乳腺癌细胞mda-mb-231中，leu-o-bsh、d-leu-o-bsh、met-o-bsh、d-met-o-bsh、tyr-o-bsh和dpa-o-bsh的摄硼特征均优于bsh；在人神经胶质瘤细胞u87中，tyr-o-bsh和dpa-o-bsh的摄硼特征均优于bsh，尤其是tyr-o-bsh，其t/n值是bsh的5.1倍。
[0272]
表2系列氨基酸-bsh靶向化合物在人肝癌hepg2细胞中的摄硼特征
[0273][0274][0275]at/n比定义为:人肝癌细胞hepg2的摄硼量/人脐静脉内皮细胞huvec的摄硼量
[0276]
表3系列氨基酸-bsh靶向化合物在人乳腺癌细胞mda-mb-231中的摄硼特征
[0277][0278]at/n比定义为:人乳腺癌细胞mda-mb-231的摄硼量/人脐静脉内皮细胞huvec的摄硼量
[0279]
表4系列氨基酸-bsh靶向化合物在人神经胶质瘤细胞u87中的摄硼特征
[0280][0281][0282]at/n比定义为:人神经胶质瘤细胞u87的摄硼量/人脐静脉内皮细胞huvec的摄硼量
[0283]
实施例5系列氨基酸-bsh靶向化合物的亲油亲水特征
[0284]
实验方法：a)建立各待测样品的检测标准曲线。将系列氨基酸-bsh靶向化合物分别溶解于酶解缓冲液(50mm tris-hcl,1.0m nacl,ph 7.4)，设置5个浓度梯度分别为
0.012725、0.006363、0.003181、0.001591、0.000795μg/ml，以峰面积为纵坐标，药物浓度为横坐标绘制标准曲线，本实验重复3次；b)制备水溶液饱和的正辛醇及正辛醇饱和的水溶液，将正辛醇和水等比例混合后，搅拌24h使两相相互饱和，静置分层后，两相分离，分别保存备用；c)精密称取待测样品10mg，于10ml容量瓶中，加入水溶液饱和的正辛醇溶解样品并稀释至刻度，从中精密吸取8ml至25ml容量瓶中，加入8ml正辛醇饱和的水溶液。将25ml容量瓶振荡3h后，静置分离出水相和油相，经过0.22μm滤膜过滤，每次进样10μl，使用hplc测定峰面积，带入标曲方程，计算各相中待测样品含量。油水分布系数计算公式：
[0285][0286]
实验结果：结果见表5。可以看到，阳性对照药bsh的logp值为-2.36
±
0.03，小于1，显示bsh在水中的溶解度高，被动扩散渗透低，吸收和脑通透性差，具有很高的肾清除。本发明所述化合物除his-o-bsh和his-n-bsh外，其logp值均大于0，显示此类化合物渗透性比bsh好，与代谢酶结合增加，使代谢程度高。
[0287]
表5.系列氨基酸-bsh靶向化合物的亲油亲水系数(logp)
[0288][0289]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种氨基酸-bsh靶向杂合体化合物，其结构如式i所示，其中，x为chme2、ch2chme2、ch(ch3)ch2ch3、ch2ch2sme、bn、ch2(3-indoyl)、ch2[4-(oh)ph]、ch2[3,4-bis(oh)ph]、ch2(4-imidazolyl)中的任一种；*标记的碳的构型可以为r-或s-；y可以为o或nh；b为
10
b或天然硼(
10
b/
11
b约1/4)；snab
12
h
11
的结构如下：2.根据权利要求1所述的氨基酸-bsh靶向杂合体化合物，其特征在于包括以下的具体化合物：
3.一种如权利要求1或2所述的氨基酸-bsh靶向杂合体化合物的制备方法，其特征在于，当y＝o时，包括以下步骤：(1)2-(2-(2-羟乙氧基)乙氧基)乙基活泼酯(trg es)的制备：称取二缩三乙二醇溶于干燥重蒸的二氯甲烷(dcm)中，加入搅拌子，冰浴下加入适量的有机碱，分批加入酰化试剂，室温下搅拌反应约30min，保持室温继续反应12小时，加入适量dcm，分别经水洗、酸洗、干燥后，减压浓缩，合成路线如下：(2)n-叔丁氧羰基氨基酸酯桥连活泼酯(n-boc-aa-o-trg es)的制备：称取n-boc氨基酸溶解于适量dcm中，将反应瓶置于冰浴下平衡5分钟，依次加入缩合剂和4-二甲氨基吡啶(dmap)，维持冰浴搅拌10分钟之后加入trg es，加料完毕后继续在冰浴下反应30分钟，后保持在室温下反应12小时，反应结束后，加入适量dcm，dcm层依次用水、1n hcl洗涤，干燥，浓缩得残留物，经硅胶柱层析纯化，浓缩得目标产物，合成路线如下：(3)n-叔丁氧碳基氨基酸酯桥连溴(n-boc-aa-o-trg-br)的制备：称取化合物n-boc-aa-o-trg es溶于适量丙酮，加入溴化锂，将反应器置于合适温度的油浴中加热反应2～10小时，反应结束，蒸除溶剂，加适量dcm，水洗涤，干燥，柱层析分离纯化，合成步骤如下：(4)n-叔丁氧碳基氨基酸酯桥连硼卡(n-boc-aa-o-trg-bsh)的制备：称取化合物n-boc-aa-o-trg br和硼卡钠(na2sb
12
h
11
)溶于适量干燥乙腈，搅拌下加入无机碱和碘化钾，将反应体系置于油浴上加热回流5～10小时，反应结束后，旋蒸除去溶剂，残留物用快速柱层析分离纯化，
合成路线如下：(5)氨基酸酯桥连硼卡(aa-o-bsh)的制备：称取化合物n-boc-aa-o-trg-bsh溶于干燥dcm中，置于冰浴中冷切5分钟，搅拌下加入酸，随后升至室温继续反应1～5小时，tlc检测反应转化完全(展开剂：dcm/meoh＝1/1)，饱和碳酸氢钠调节反应体系ph至弱碱性，旋蒸除去溶剂，残留物经柱层析分离，冷冻干燥得产物，合成路线如下：4.一种如权利要求1或2所述的氨基酸-bsh靶向杂合体化合物的制备方法，其特征在于，当y＝nh时，包括以下步骤：(1)n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连醇(n-boc-aa-n-trg-oh)的制备：称取n-boc氨基酸溶解于适量dcm中，将反应瓶置于冰浴下平衡5分钟，依次加入缩合剂和有机碱，维持冰浴搅拌10分钟之后加入2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙醇，加料完毕后继续在冰浴下反应30分钟，后保持在室温下反应12小时，反应结束后，加入适量dcm，dcm层依次用水、1n hcl洗涤，干燥，浓缩得残留物，经硅胶柱层析纯化，浓缩得目标产物，合成路线如下：(2)n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连活泼酯(n-boc-aa-n-trg es)的制备：将二缩三乙二醇替换为n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连醇，按照权利3步骤(1)所述方法制备，合成路线如下：(3)n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连溴(n-boc-aa-n-trg-br)的制备：将n-叔丁氧碳基氨基酸酯桥连活泼酯替换为n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连活泼酯，按照权利3步骤(3)所述方法制备，合成路线如下：(4)n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连硼卡(n-boc-aa-n-trg-bsh)的制备：将n-叔丁氧碳基氨基酸酯桥连溴替换为n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连溴，按照权利3步骤(4)所述方法制备，合成路线如下：
(5)氨基酸酰胺桥连硼卡(aa-n-bsh)的制备：将n-叔丁氧碳基氨基酸酯桥连硼卡替换为n-叔丁氧碳基氨基酸酰胺桥连硼卡，按照权利3步骤(5)所述方法制备，合成路线如下：5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，二缩三乙二醇与有机碱的投料摩尔比为1:1.1～1.5；二缩三乙二醇与酰化试剂的投料摩尔比为1:1.1～1.5；所述有机碱为三乙胺、三甲胺、二异丙基乙胺中的任一种；所述酰化试剂为对甲苯磺酰氯、甲磺酰氯、三氟甲磺酰氯中的任一种；步骤(2)中，n-boc氨基酸与缩合剂、dmap、trg es的投料摩尔比分别为1:1.1～1.5、1:0.1～0.5、1:1.1～1.5；所述缩合剂为2-(7-氧化苯骈三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)、氯甲酸乙酯、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(edci)、n,n
’‑
二异丙基碳二亚胺(dic)、六氟磷酸苯骈三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(pybop)中的任一种；步骤(3)中，n-boc-aa-o-trg es与溴化锂的投料摩尔比为1:1.1～1.5；反应温度为40～100℃，优选58℃；步骤(4)中，n-boc-aa-o-trg-br与硼卡钠、无机碱、碘化钾的投料摩尔比分别为1.1～1.5:1、1:2.0～5.0、1:2.0～5.0；所述无机碱为碳酸锂、碳酸铯、碳酸钾，优选碳酸铯；步骤(5)中，n-boc-aa-o-trg-bsh与酸的投料摩尔比为1.0:100～250；所述的酸为三氟醋酸(tfa)、盐酸/dcm溶液中的任一种。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，n-boc氨基酸与缩合剂、有机碱、2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙醇的投料摩尔比为1:1.1～1.5、1:2.0～5.0、1:1.1～1.5；所述缩合剂与权利3步骤(2)相同；所述有机碱为二异丙基乙胺(dipea)、三乙胺、2,2,6,6-四甲基哌啶中的任一种。7.如权利要求1或2所述的氨基酸-bsh靶向杂合体化合物和它们在生理上可接受的盐在制备肿瘤硼中子俘获疗法(bnct)中的硼递送剂中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述肿瘤为脑瘤、头颈瘤、肝癌、乳腺癌、神经胶质瘤、肺癌、结肠癌、宫颈癌或前列腺癌。9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述在生理上可接受的盐为酒石酸盐、硫酸盐、盐酸盐。

技术总结
本发明公开了一种氨基酸-BSH靶向杂合体化合物及其制备方法，以及该靶向杂合体化合物在采用硼中子俘获法治疗癌症过程中，作为制备相关癌症治疗药物中的应用。所述氨基酸-BSH靶向杂合体化合物的结构如式I所示。本发明的氨基酸-BSH靶向杂合体化合物在对应肿瘤中的摄硼量和T/N比优于阳性对照药物硼卡钠；其对细胞的渗透性优于硼卡钠。本发明所述氨基酸-BSH靶向杂合体化合物的制备方法具有反应条件温和、实验步骤简单、收率高、产品纯度高、经济实用等特点。用等特点。


技术研发人员：陈河如 蔡绍晖 杜军 王可 刘志军 曾燕聪 徐俊
受保护的技术使用者：重庆高硼生物科技有限公司
技术研发日：2023.05.10
技术公布日：2023/10/15