一种Mxene@BSA-ISO纳米材料及其制备方法和应用

一种mxene@bsa-iso纳米材料及其制备方法和应用
技术领域
1.本发明属于医药技术领域，分类号为a61k47/62，具体的，涉及一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法和应用。


背景技术：

2.缺血性脑卒中已经成为我国国民致死的一大病因，脑卒中具有发病率高、高致死率、高致残率等特点。目前，脑卒中临床上最佳治疗方案是静脉注射抗血栓药物溶栓治疗，但其窗口时间极短，并且还会发生再灌注损伤等风险。
3.缺血性脑卒中患者脑病灶部位会产生大量的活性氧自由基，而且其病灶部位往往存在血脑屏障，该血脑屏障会阻断大部分药物进入脑补发挥治疗作用，传统的静脉注射药物或者口服药物等方式不能够清除病灶产生的自由基，并且也很难透过血脑屏障发挥治疗作用，因此，科学家们发明纳米载药系统去解决该问题，但是纳米载药系统中所制备的纳米粒子价格昂贵，成本较高，且制备工艺复杂，难以大规模工业化生产。
4.中国专利cn101961314b公开了一种蛋白质药物的纳米乳载药系统及其制备方法，其主要是通过蛋白质药物、溶剂、表面活性剂、助表面活性剂、油相、稳定剂、水性合成的纳米乳载药系统，虽然负载率高，制备方法简单，但其并不能够清除病灶产生的自由基。
5.中国专利cn112675150b公开了一种基于锑烯的肿瘤靶向载药纳米粒子的制备方法，主要是采用壳聚糖和阿霉素包覆amnps纳米粒子后，再进一步透明质酸包覆，其制备工艺复杂，难以大规模工业化生产。


技术实现要素：

6.为了解决上述问题，本发明的第一个方面提供了一种mxene@bsa-iso纳米材料，包括二维纳米材料和连接在二维纳米材料上的复合纳米粒子，所述复合纳米粒子由亲水性聚合物和疏水性药物通过自组装形成。
7.优选的，所述二维纳米材料为v4c3t
x
，所述亲水性聚合物为牛血清白蛋白，所述疏水性药物为治疗脑梗塞的药物。
8.本发明第二方面提供了一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，包括步骤如下：(1)bsa-iso纳米粒的制备；将牛血清白蛋白进行活化后，再在一定温度和ph下反应，之后进行超滤洗涤得到复合纳米粒子，在一定ph值下，将复合纳米粒子和一定浓度的疏水性药物溶液进行反应得到bsa-iso纳米粒；(2)mxene@bsa-iso纳米材料的制备；将v4c3t
x
上的羧基活化后，与bsa-iso纳米粒反应10-15h，超滤洗涤后即得mxene@bsa-iso纳米材料。
9.进一步优选的，所述步骤(1)中的ph值为4.25-4.8。
10.优选的，所述牛血清白蛋白的活化时间为1-4h。
11.进一步优选的，所述牛血清白蛋白的活化时间为1-3h。
12.进一步优选的，所述牛血清白蛋白的活化时间为2h。
13.优选的，所述牛血清白蛋白的活化温度为80-100℃。
14.进一步优选的，所述牛血清白蛋白的活化温度为85-95℃。
15.进一步优选的，所述牛血清白蛋白的活化温度为90℃。
16.优选的，所述复合纳米粒子和疏水性药物的反应时间为2-5h。
17.进一步优选的，所述复合纳米粒子和疏水性药物的反应时间为3-5h。
18.进一步优选的，所述复合纳米粒子和疏水性药物的反应时间为4h。
19.优选的，所述疏水性药物溶液的浓度为3-6mg/ml。
20.进一步优选的，所述疏水性药物溶液的浓度为3-5mg/ml。
21.进一步优选的，所述疏水性药物溶液的浓度为4mg/ml。
22.优选的，所述疏水性药物溶液由极性溶剂配制而成。
23.优选的，所述极性溶剂包括二甲基亚砜、水、丙酮、乙醚、乙酸、异丙醇、甲醇中的至少一种。
24.进一步优选的，所述极性溶剂为二甲基亚砜。
25.本发明第三方面提供了一种mxene@bsa-iso纳米材料在治疗脑梗塞的药物上的应用。
26.本发明通过活化bsa破坏蛋白质的二硫键，加入疏水性药物后再通过bsa分子自组装再重新形成二硫键进而得到bsa-iso纳米粒；其中bsa的活化时间和温度均会影响二硫键的形成，时间过短会导致二硫键未完全形成，进而使得iso药物的包覆率和载药率都下降，此外，限定iso溶液的浓度为3-5mg/ml，避免了浓度过低导致纳米粒的包覆率和载药率下降的问题，bsa-iso纳米粒的反应时间较短，会使得纳米粒的粒径较小，载药率会相应下降，而反应时间过长，纳米粒的粒径过大可能会导致药物释放的时间延长，难以及时有效的作用于病灶。
27.此外，本发明通过限定缓冲溶液mes的ph值，使其ph值接近于bsa的等电点，该操作能够进一步的提高bsa-iso纳米粒的稳定性。
28.在上述基础上，本发明选用二甲基亚砜作为疏水性药物溶液的溶剂，避免由于溶剂极性过强而导致bsa聚合速度太快，难以完全包覆iso，降低了纳米粒的包封率。
29.有益效果：
30.(1)本发明所制备的mxene@bsa-iso纳米载药体系生产成本低，实用性更好，操作简便，而现有技术中的纳米载药体系往往操作复杂，通常要包覆一些纳米粒子，会使得成本高，无法大批量生产。
31.(2)本发明利用bsa包封疏水药物异槲皮苷，再利用共价反应将bsa-iso装载于mxene上得到的mxene@bsa-iso纳米材料，其中mxene能够发挥模拟酶活性，同时积极清除病灶部位ros，减轻炎症后再发挥药物作用，解决了传统的静脉注射药物或者口服药物等方式不能够清除病灶产生的自由基，并且也很难透过血脑屏障发挥治疗作用的问题。
32.(3)本发明所制备的mxene@bsa-iso纳米材料的平均粒径约为200nm，均一性、稳定性佳，并且包封率高达84.97％，载药率高达7.83％，其体外释放率在24h内由23.64％增加至80.95％，体内实验中作用效果优异，具有广泛的应用前景。
附图说明
33.图1(左)为实施例1中的mxene的粒径分布图(黑线)和mxene@bsa-iso纳米材料(红
线)的粒径分布图。
34.图2为实施例1中bsa-iso纳米粒(红线)、异槲皮苷溶液(黑线)、mxene@bsa-iso纳米粒子纳米材料(蓝线)的紫外可见吸收光谱图
35.图3为实施例1中活化后的bsa溶液(黑线)、异槲皮苷溶液(红线)、bsa-iso纳米粒(蓝线)、mxene@bsa-iso(绿线)纳米粒子纳米材料的红外光谱图。
36.图4为实施例1中的mxene的tem图。
37.图5为实施例1中的bsa-iso纳米粒的tem图。
38.图6为实施例1中的mxene@bsa-iso纳米材料的tem图。
39.图7为异槲皮苷的标准曲线。
40.图8为实施例1中mxene@bsa-iso纳米材料的载药率和包封率，其中le表示载药率，ee表示包封率。
41.图9为测量实施例1中的mxene@bsa-iso纳米材料的稳定性曲线图。
42.图10为实施例1中的mxene@bsa-iso纳米材料进行体外药物释放实验得到的标准曲线。
具体实施方式
43.以下实施例所用的实验材料分别有牛血清白蛋白(购自sigma，货号为v900933-100g)，脂肪酸甲酯磺酸盐(购自vetec/sigma，货号为m3671-250g)，氢氧化钠(购自阿拉丁，货号为s11501-500g)，二硫代苏糖醇(购自阿拉丁，货号为d265376-5g)，十二烷基硫酸钠(购自阿拉丁，货号为s348686-500g)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(edc)(购自阿拉丁，货号为e106172-500g)，n-羟基丁二酰亚胺(nhs)(购自阿拉丁、货号为h109330-25g)，异槲皮苷(购自mce，货号为hy-n0768/cs-0009793)。
44.实施例1
45.一种mxene@bsa-iso纳米材料，包括二维纳米材料和连接在二维纳米材料上的复合纳米粒子，所述复合纳米粒子由亲水性聚合物和疏水性药物通过自组装形成。
46.所述二维纳米材料为v4c3t
x
(mxene)，所述亲水性聚合物为牛血清白蛋白(bsa)，所述疏水性药物为异槲皮苷(iso)。
47.本实施例还提供了一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，包括步骤如下：
48.0.1mol/l的脂肪酸甲酯磺酸盐(mes)缓冲溶液的配制步骤如下：将0.97gmes溶于50ml超纯水中，用0.1mol/l naoh调节到ph为4.7。
49.iso溶液的配制：使用二甲基亚砜(dmso)来配制成4mg/ml的iso溶液。
50.(1)bsa-iso纳米粒的制备；
51.称取120mg牛血清白蛋白(bsa)，60mg十二烷基硫酸钠(sds)，4.4mg二硫代苏糖醇(dtt)，加于5ml样品瓶中，加入3ml超纯水，溶解后在90℃的条件下进行油浴，搅拌速度为180r/min，反应2h得到活化后的bsa。
52.取25ul、50ul、100ul活化后的bsa溶液(40mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入975ul mes，在37℃，800r/min条件下合成4h，再用100kd的超滤管进行超滤，超滤后在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到复合纳米粒子。
53.取25ul复合纳米粒子(40mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入950ulmes溶液，在震荡条件下加入25u l iso溶液(4mg/ml)，最后在37℃，800r/min条件下振荡合成4h，再用100kd的超滤管进行超滤，在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到bsa-iso纳米粒。
54.(2)mxene@bsa-iso纳米材料的制备；
55.取体积为1ml，浓度为1mg/ml的v4c3t
x
加入反应瓶中,然后按照质量比1:1加入edc，25℃磁力搅拌12h，然后加入nhs(edc：nhs＝1：1)，反应12h，最后加入bsa-iso纳米粒(其中bsa浓度为1mg/ml，iso溶液浓度为200μg/ml)，反应12h，合成的mxene@bsa-iso纳米材料用100kd的超滤管进行超滤，在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，备用。
56.实施例2
57.一种mxene@bsa-iso纳米材料，包括二维纳米材料和连接在二维纳米材料上的复合纳米粒子，所述复合纳米粒子由亲水性聚合物和疏水性药物通过自组装形成。
58.所述二维纳米材料为v4c3t
x
(mxene)，所述亲水性聚合物为牛血清白蛋白(bsa)，所述疏水性药物为异槲皮苷(iso)。
59.本实施例还提供了一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，包括步骤如下：
60.0.1mol/l的脂肪酸甲酯磺酸盐(mes)缓冲溶液的配制步骤如下：将0.97gmes溶于50ml超纯水中，用0.1mol/l naoh调节到ph为4.7。
61.iso溶液的配制：使用二甲基亚砜(dmso)来配制成4.5mg/ml的iso溶液。
62.(1)bsa-iso纳米粒的制备；
63.称取120mg牛血清白蛋白(bsa)，60mg十二烷基硫酸钠(sds)，4.4mg二硫代苏糖醇(dtt)，加于5ml样品瓶中，加入3ml超纯水，溶解后在95℃的条件下进行油浴，搅拌速度为180r/min，反应1h得到活化后的bsa。
64.取25ul、50ul、100ul活化后的bsa溶液(40mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入975ul mes，在37℃，800r/min条件下合成4h，再用100kd的超滤管进行超滤，超滤后在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到复合纳米粒子。
65.取25ul复合纳米粒子(45mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入950ulmes溶液，在震荡条件下加入25ul iso溶液(4.5mg/ml)，最后在37℃，800r/min条件下振荡合成3h，再用100kd的超滤管进行超滤，在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到bsa-iso纳米粒。
66.其余同实施例1。
67.实施例3
68.一种mxene@bsa-iso纳米材料，包括二维纳米材料和连接在二维纳米材料上的复合纳米粒子，所述复合纳米粒子由亲水性聚合物和疏水性药物通过自组装形成。
69.所述二维纳米材料为v4c3t
x
(mxene)，所述亲水性聚合物为牛血清白蛋白(bsa)，所述疏水性药物为异槲皮苷(iso)。
70.本实施例还提供了一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，包括步骤如下：
71.0.1mol/l的脂肪酸甲酯磺酸盐(mes)缓冲溶液的配制步骤如下：将0.97gmes溶于
50ml超纯水中，用0.1mol/l naoh调节到ph为4.7。
72.iso溶液的配制：使用二甲基亚砜(dmso)来配制成3.5mg/ml的iso溶液。
73.(1)bsa-iso纳米粒的制备；
74.称取120mg牛血清白蛋白(bsa)，60mg十二烷基硫酸钠(sds)，4.4mg二硫代苏糖醇(dtt)，加于5ml样品瓶中，加入3ml超纯水，溶解后在85℃的条件下进行油浴，搅拌速度为180r/min，反应3h得到活化后的bsa。
75.取25ul、50ul、100ul活化后的bsa溶液(40mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入975ul mes，在37℃，800r/min条件下合成4h，再用100kd的超滤管进行超滤，超滤后在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到复合纳米粒子。
76.取25ul复合纳米粒子(40mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入950ulmes溶液，在震荡条件下加入25ul iso溶液(3.5mg/ml)，最后在37℃，800r/min条件下振荡合成5h，再用100kd的超滤管进行超滤，在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到bsa-iso纳米粒。
77.(2)mxene@bsa-iso纳米材料的制备；
78.取体积为1ml，浓度为1mg/ml的v4c3t
x
加入反应瓶中,然后按照质量比1:1加入edc，25℃磁力搅拌12h，然后加入nhs(edc：nhs＝1：1)，反应12h，最后加入bsa-iso纳米粒(其中bsa浓度为1mg/ml，iso溶液浓度为200μg/ml)，反应12h，合成的mxene@bsa-iso纳米材料用100kd的超滤管进行超滤，在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，备用。
79.其余同实施例1。
80.对比例1
81.一种mxene@bsa-iso纳米材料，包括二维纳米材料和连接在二维纳米材料上的复合纳米粒子，所述复合纳米粒子由亲水性聚合物和疏水性药物通过自组装形成。
82.所述二维纳米材料为v4c3t
x
(mxene)，所述亲水性聚合物为牛血清白蛋白(bsa)，所述疏水性药物为异槲皮苷(iso)。
83.iso溶液的配制：使用二甲基亚砜(dmso)来配制成4mg/ml的iso溶液。
84.本实施例还提供了一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，包括步骤如下：
85.0.1mol/l的脂肪酸甲酯磺酸盐(mes)缓冲溶液的配制步骤如下：将0.97gmes溶于50ml超纯水中，用0.1mol/l naoh调节到ph为4.7。
86.(1)bsa-iso纳米粒的制备；
87.称取120mg牛血清白蛋白(bsa)，60mg十二烷基硫酸钠(sds)，4.4mg二硫代苏糖醇(dtt)，加于5ml样品瓶中，加入3ml超纯水，溶解后在100℃的条件下进行油浴，搅拌速度为180r/min，反应0.5h得到活化后的bsa。
88.取25ul、50ul、100ul活化后的bsa溶液(40mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入975ul mes，在37℃，800r/min条件下合成4h，再用100kd的超滤管进行超滤，超滤后在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到复合纳米粒子。
89.取25ul复合纳米粒子(40mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入950ulmes溶液，在震
荡条件下加入25ul iso溶液(4mg/ml)，最后在37℃，800r/min条件下振荡合成4h，再用100kd的超滤管进行超滤，在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到bsa-iso纳米粒。
90.其余同实施例1。
91.对比例2
92.一种mxene@bsa-iso纳米材料，包括二维纳米材料和连接在二维纳米材料上的复合纳米粒子，所述复合纳米粒子由亲水性聚合物和疏水性药物通过自组装形成。
93.所述二维纳米材料为v4c3t
x
(mxene)，所述亲水性聚合物为牛血清白蛋白(bsa)，所述疏水性药物为异槲皮苷(iso)。
94.本实施例还提供了一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，包括步骤如下：
95.0.1mol/l的脂肪酸甲酯磺酸盐(mes)缓冲溶液的配制步骤如下：将0.97gmes溶于50ml超纯水中，用0.1mol/l naoh调节到ph为4.7。
96.iso溶液的配制：使用二甲基亚砜(dmso)来配制成4mg/ml的iso溶液。
97.(1)bsa-iso纳米粒的制备；
98.称取120mg牛血清白蛋白(bsa)，60mg十二烷基硫酸钠(sds)，4.4mg二硫代苏糖醇(dtt)，加于5ml样品瓶中，加入3ml超纯水，溶解后在70℃的条件下进行油浴，搅拌速度为180r/min，反应5h得到活化后的bsa。
99.取25ul、50ul、100ul活化后的bsa溶液(40mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入975ul mes，在37℃，800r/min条件下合成4h，再用100kd的超滤管进行超滤，超滤后在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到复合纳米粒子。
100.取25ul复合纳米粒子(40mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入950ulmes溶液，在震荡条件下加入25ul iso溶液(4mg/ml)，最后在37℃，800r/min条件下振荡合成4h，再用100kd的超滤管进行超滤，在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到bsa-iso纳米粒。
101.其余同实施例1。
102.对比例3
103.一种mxene@bsa-iso纳米材料，包括二维纳米材料和连接在二维纳米材料上的复合纳米粒子，所述复合纳米粒子由亲水性聚合物和疏水性药物通过自组装形成。
104.所述二维纳米材料为v4c3t
x
(mxene)，所述亲水性聚合物为牛血清白蛋白(bsa)，所述疏水性药物为异槲皮苷(iso)。
105.iso溶液的配制：使用二甲基亚砜(dmso)来配制成4mg/ml的iso溶液。本实施例还提供了一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，包括步骤如下：
106.0.1mol/l的脂肪酸甲酯磺酸盐(mes)缓冲溶液的配制步骤如下：将0.97gmes溶于50ml超纯水中，用0.1mol/l naoh调节到ph为4.25-4.8。
107.(1)bsa-iso纳米粒的制备；
108.称取120mg牛血清白蛋白(bsa)，60mg十二烷基硫酸钠(sds)，4.4mg二硫代苏糖醇(dtt)，加于5ml样品瓶中，加入3ml超纯水，溶解后在90℃的条件下进行油浴，搅拌速度为180r/min，反应2h得到活化后的bsa。
109.取25u l、50u l、100u l活化后的bsa溶液(40mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入975ul mes，在37℃，800r/min条件下合成4h，再用100kd的超滤管进行超滤，超滤后在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到复合纳米粒子。
110.取25ul复合纳米粒子(40mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入950ul mes溶液，在震荡条件下加入25uliso溶液(4mg/ml)，最后在37℃，800r/min条件下振荡合成1h，再用100kd的超滤管进行超滤，在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到bsa-iso纳米粒。
111.其余同实施例1。
112.对比例4
113.一种mxene@bsa-iso纳米材料，包括二维纳米材料和连接在二维纳米材料上的复合纳米粒子，所述复合纳米粒子由亲水性聚合物和疏水性药物通过自组装形成。
114.所述二维纳米材料为v4c3t
x
(mxene)，所述亲水性聚合物为牛血清白蛋白(bsa)，所述疏水性药物为异槲皮苷(iso)。
115.本实施例还提供了一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，包括步骤如下：
116.0.1mol/l的脂肪酸甲酯磺酸盐(mes)缓冲溶液的配制步骤如下：将0.97gmes溶于50ml超纯水中，用0.1mol/l naoh调节到ph为4.7。
117.iso溶液的配制：使用质量比为1:1的二甲基亚砜和乙醇来配制成4mg/ml的iso溶液。
118.(1)bsa-iso纳米粒的制备；
119.称取120mg牛血清白蛋白(bsa)，60mg十二烷基硫酸钠(sds)，4.4mg二硫代苏糖醇(dtt)，加于5ml样品瓶中，加入3ml超纯水，溶解后在90℃的条件下进行油浴，搅拌速度为180r/min，反应2h得到活化后的bsa。
120.取25ul、50ul、100ul活化后的bsa溶液(40mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入975ul mes，在37℃，800r/min条件下合成4h，再用100kd的超滤管进行超滤，超滤后在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到复合纳米粒子。
121.取25ul复合纳米粒子(40mg/ml)，加入到24孔板中，然后加入950ulmes溶液，在震荡条件下加入25ul iso溶液(4mg/ml)，最后在37℃，800r/min条件下振荡合成4h，再用100kd的超滤管进行超滤，在离心转速为4000r/min的条件下，用去离子水洗涤10min，洗涤两到三次，最后4℃保存，得到bsa-iso纳米粒。
122.其余同实施例1。
123.性能评价
124.1.包封率和负载率的测试：
125.(1)标准曲线的制备：称取5mg的异槲皮苷标准物质于烧杯中，再加入适量的超纯水溶解，然后转移至5ml的容量瓶中，定容配成1mg/ml的异槲皮苷溶液，稀释成25、12.5、6.25、3.125、1.5625ug/ml的标准溶液，用uv-2600i紫外分光光度计测定在250nm处的吸光度，以异槲皮苷浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，所得到的标准曲线为y＝0.042x+0.0657，r2＝0.9994。
126.(2)将实施例和对比例合成的mxene@bsa-iso纳米材料用100kd的超滤管进行超滤后的超滤管下面和超滤管上面的滤液收集起来，计算两者的体积差，之后将下面的溶液进行适当的稀释，用uv-2600i测试溶液的吸光度，代入标准曲线计算下面溶液中的药物质量，用总投加的质量减去溶液中的药物质量得负载的药物质量，根据以下公式计算包封率和负载率：
127.包封率＝负载的iso质量/iso的理论总投加质量
128.负载率＝负载的iso质量/bsa、mxene和负载的iso的质量之和
129.测试结果如表1。
130.2.材料表征。
131.(1)粒径和电位测试；
132.用超纯水将mxene、mxene@bsa-iso纳米材料进行稀释(稀释10倍)，然后用zetasizer nano zs90粒径仪中的粒径和电位模式测试粒径和电位，如图3所示，mxene的平均粒径为200nm，mxene@bsa-iso纳米材料的平均粒径为200nm。(2)透射电子显微镜(tem，型号为thermoscientific talos l120c)：将用超纯水稀释10倍后的70ul mxene@bsa-iso纳米材料粒滴加在特制铜网上，3min后，用滤纸除去多余的液体，然后滴加70ul 2％的醋酸铀进行负染，3min后用滤纸去除多余的液体，自然晾干，用tem电镜观察mxene、bsa-iso纳米粒、mxene@bsa-iso纳米材料的形貌，如图4-6所示。
133.(3)稳定性测试；
134.为了评估mxene@bsa-iso纳米材料的稳定性，将mxene@bsa-iso纳米材料和pbs溶液按照1:1的比例混合，然后在室温下分别静置12、24、36、48h，用zetasizer nano zs90粒径仪分别测试不同时间下mxene@bsa-iso纳米材料的平均粒径来评估样品粒径稳定性，如图7所示，随着静置时间的延长，纳米粒的平均粒径有一定的降低，但趋于稳定，证明mxene@bsa-iso纳米材料的稳定性较好。
135.(4)样品释放率测试；
136.为了评估mxene@bsa-iso纳米材料的药物释放行为，实施体外药物释放实验。具体步骤为，将2ml载药体系密封于透析袋中，分别置于装有10ml ph分别为7.4pbs缓冲液的样品瓶中，并在37℃，150r/min下连续摇动，每隔2小时(当时间超过10h之后，时间点变为每隔5小时)取2ml溶液离心，随后在离心产物中补充2ml相应ph为7.4的pbs缓冲溶液，再用uv-2600i紫外分光光度计测定上清液中在250nm处的吸光度，根据计算不同时间的释放量绘制标准曲线，由图8所示，在2-24h的时间范围内，mxene@bsa-iso纳米材料的药物释放率由23.64％增加至80.95％。
137.(5)紫外可见光吸收光谱测试：使用uv-2600i紫外分光光度计测定iso溶液、bsa-iso纳米粒、mxene@bsa-iso纳米材料的紫外可见光吸收光谱。
138.(6)红外光谱测试：使用傅里叶变换显微红外光谱仪(型号为美国thermo scientific nicolet in10)进行红外光谱测试。
139.表1
140.实施例包封率(％)载药率(％)实施例184.977.83实施例283.707.52
实施例384.007.55对比例172.566.18对比例273.226.22对比例370.206.54对比例469.545.96
141.与实施例1相比，对比例1和对比例2改变了bsa的活化时间和温度，均会导致bsa的二硫键未完全形成mxene@bsa-iso纳米材料的包封率和载药率均下降，对比例3中降低了复合纳米粒子和iso溶液的反应时间，使得bsa-iso纳米粒的粒径较小，会导致包封率和载药率下降，对比例4中将iso溶液的溶剂改为乙醇和dmso，但乙醇的极性明显强于二甲基亚砜，会导致bsa的自组装太快，难以包覆iso，降低了纳米材料的包封率。

技术特征：
1.一种mxene@bsa-iso纳米材料，其特征在于，包括二维纳米材料和连接在二维纳米材料上的复合纳米粒子，所述复合纳米粒子由亲水性聚合物和疏水性药物通过自组装形成。2.根据权利要求1所述的一种mxene@bsa-iso纳米材料，其特征在于，所述二维纳米材料为v4c3t
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，所述亲水性聚合物为牛血清白蛋白，所述疏水性药物为治疗脑梗塞的药物。3.根据权利要求2所述的一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：(1)bsa-iso纳米粒的制备；将牛血清白蛋白进行活化后，再在一定温度和ph下反应，之后进行超滤洗涤得到复合纳米粒子，在一定ph值下，将复合纳米粒子和一定浓度的疏水性药物溶液进行反应得到bsa-iso纳米粒；(2)mxene@bsa-iso纳米材料的制备；将v4c3tx上的羧基活化后，与bsa-iso纳米粒反应10-15h，超滤洗涤后即得mxene@bsa-iso纳米材料。4.根据权利要求3所述的一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，其特征在于，所述牛血清白蛋白的活化时间为1-4h。5.根据权利要求4所述的一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，其特征在于，所述牛血清白蛋白的活化温度为80-100℃。6.根据权利要求3所述的一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，其特征在于，所述复合纳米粒子和疏水性药物的反应时间为2-5h。7.根据权利要求3所述的一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，其特征在于，所述疏水性药物溶液的浓度为3-6ml。8.根据权利要求6所述的一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，其特征在于，所述疏水性药物溶液由极性溶剂配制而成。9.根据权利要求8所述的一种mxene@bsa-iso纳米材料的制备方法，其特征在于，所述极性溶剂包括二甲基亚砜、水、丙酮、乙醚、乙酸、异丙醇、甲醇中的至少一种。10.一种根据1-9任一项所述的mxene@bsa-iso纳米材料在治疗脑梗塞的药物上的应用。

技术总结
本发明公开了一种Mxene@BSA-ISO纳米材料及其制备方法和应用，所述纳米粒包括二维纳米材料和连接在二维纳米材料上的复合纳米粒子，所述复合纳米粒子由亲水性聚合物和疏水性药物通过自组装形成；本发明所制备的Mxene@BSA-ISO纳米材料包封率高达84.97％，载药率高达7.83％，且生产成本低，实用性更好，操作简便，能够大批量生产。能够大批量生产。


技术研发人员：陈淼
受保护的技术使用者：海南医学院第一附属医院
技术研发日：2023.06.25
技术公布日：2023/9/25