一种高效提取槐米中芦丁的方法与流程

1.本发明属于化学成分提取技术领域，具体涉及一种高效提取槐米中芦丁的方法。


背景技术：

2.槐花，豆科植物槐sophora japonica l.的干燥花及花蕾，在夏季花开放或花蕾形成时采收，及时干燥，除去枝、梗及杂质后，习称“槐米”。槐米有凉血止血、清热泻火、润肠通便、止血凉血的功能。
3.其中，槐米中的主要成分芦丁，又名芸香苷、紫槲皮苷，是一类黄酮类化合物，芦丁又称维生素p，具有降低毛细血管通透性、抗氧化、抗炎、抗病毒及抑制醛糖还原酶的作用，还可以用于癌症的辅助治疗；芦丁也是一种天然的抗氧化剂，在食品工业中芦丁可作为抗氧剂和天然食用黄色素，在化妆品行业，芦丁则可以用作抗紫外线原料。对芦丁的市场需求量也日益增大。同时人们也越来越重视具有多种生物活性的芦丁的提取与利用。
4.传统的从槐米中提取芦丁的方法主要有酸碱提法，水提法，超声波辅助水提法及微波法等。其中，酸碱提法是工业中应用最广泛的方法，也是相对较理想的方法，但是通常需要加入硼砂来提高收率。而在国内食品安全中，硼砂是禁止添加的，这也就大大限制了芦丁在食品领域的应用；水提法的杂质较难去除，产品纯度不高；超声波辅助水提法及微波法虽然安全、收率高，提取迅速，但是投资较大且规模小，成分易发生变化。
5.中国发明专利cn202210495968公开了一种芦丁的提取方法及其应用，该发明的芦丁提取步骤包括:富含芦丁的植物原料加入到微沸状态的亚硫酸钠水溶液中，搅拌提取后固液分离并收集得到第一滤液和第一滤渣；将第一滤渣使用碱液淋洗，固液分离后收集得到碱淋洗液和第二滤渣；再将第二滤渣加沸水提取2-3次，趁热过滤并将收集得到的沸水提取液合并；将第一滤液、碱淋洗液和合并后的沸水提取液混合，在60-70℃下保温并加稀酸调节ph为4-5，室温下静置析晶，过滤后取滤渣并水洗至ph为6-7，烘干得芦丁粗品。中国发明专利cn201910510946公开了一种槐米中芦丁的提取方法，该提取工艺将槐米直接加水煎煮提取后，将煎煮液减压浓缩，再用盐酸调ph至4-5，静置取沉淀离心、干燥、粉碎，得到芦丁粗品。上述提取过程需要添加亚硫酸钠、酸碱等化学试剂，容易污染芦丁产品。
6.中国发明专利cn101818184a也公开了一种从槐米中提取芦丁的方法，先将槐米使用芦丁生物转化酶密闭发酵，然后使用甲醇和乙醇的混合溶剂进行搅拌提取，滤液蒸馏、得到芦丁提取物；然后将芦丁使用丙酮、石油醚和正辛醇的混合溶剂进行搅拌、萃取、过滤、蒸馏回收溶剂后得到纯化后的高纯度芦丁。该发明的提取时间为16h，即可完成全部提取和精致工作。但在提取和纯化的过程中，需要使用大量的有机溶剂。
7.因此，为了解决芦丁提取方法存在提取效率低、操作繁琐、需要额外添加化学成分、成本费用高等问题，亟需建立一种快速、高效的槐米提取芦丁方法，以提高芦丁的收率和含量，提高芦丁产品的稳定性，减少化学成分对芦丁产品的污染。


技术实现要素：

8.本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种高效提取槐米中芦丁的方法，使用高浓度的醇类溶剂对槐米进行热提取，得到芦丁粗品，使用低浓度的醇类溶剂对芦丁粗品进行析晶纯化，最终得到高纯度的芦丁产品。本发明的提取方法使得芦丁的提取率高、纯度高，且提取方法对芦丁产品质量稳定，提取过程操作简便，缩短整体提取时间。
9.为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
10.一种高效提取槐米中芦丁的方法，包括步骤：
11.(1)将槐米粉碎，过筛，得到槐米粉末；
12.(2)将槐米粉末与醇类溶剂混合后，加热提取，得到芦丁提取液；
13.(3)将芦丁提取液浓缩、干燥、粉碎，得到芦丁粗品；
14.(4)将芦丁粗品与醇类溶剂混合，加热溶解，得到芦丁溶解液；
15.(5)将芦丁溶解液在常温搅拌析晶，过滤，收集固体干燥，得到芦丁精品。
16.优选地，步骤(1)中，所述过筛的目数为20-200目。
17.进一步优选地，步骤(1)中，所述过筛的目数为40-80目。
18.本发明中，所述槐米在粉碎前需要进行清洗、烘干，减少槐米表面灰尘杂质的影响。
19.优选地，步骤(2)中，所述醇类溶剂选自乙醇、甲醇、正丁醇、正辛醇、异辛醇中的至少一种。
20.进一步优选地，所述醇类溶剂选自乙醇、甲醇中的至少一种。
21.更进一步优选地，所述醇类溶剂为乙醇。
22.优选地，步骤(2)中，所述醇类溶剂的浓度为70-100％，v/v。
23.进一步优选地，所述醇类溶剂的浓度为80-100％，v/v。
24.更进一步优选地，所述醇类溶剂的浓度为90％，v/v。
25.优选地，步骤(2)中，所述槐米粉末与醇类溶剂混合的固液比为1g:4-8ml。
26.进一步优选地，所述槐米粉末与醇类溶剂混合的固液比为1g:5-6ml。
27.优选地，步骤(2)中，所述加热提取的温度为60-90℃，提取次数为2-4次，每次提取时间为1-5h。
28.进一步优选地，所述加热提取的温度为70-85℃，提取次数为2-3次，每次提取时间为2-3h。
29.更进一步优选地，所述加热提取的温度为80℃，提取次数为3次，每次提取时间为2h。
30.本发明中，所述芦丁提取液为经醇类溶剂提取2-4次后的所有提取液的合并混合物。
31.本发明中，所述芦丁提取液需经回收醇类溶剂后，再进行干燥。
32.优选地，步骤(3)中，所述浓缩的温度为60-80℃。
33.进一步优选地，所述浓缩的温度为70℃。
34.优选地，步骤(3)中，所述干燥的温度为60-80℃，干燥的时间4-8h。
35.进一步优选地，所述干燥的温度为75℃，干燥的时间6h。
36.优选地，步骤(3)中，所述粉碎的粒径范围为过60-100目筛。
37.进一步优选地，所述所述粉碎的粒径为80目。
38.优选地，步骤(4)中，所述醇类溶剂选自乙醇、甲醇、正丁醇、正辛醇、异辛醇中的至少一种。
39.进一步优选地，所述醇类溶剂选自乙醇、甲醇中的至少一种。
40.更进一步优选地，所述醇类溶剂为乙醇。
41.优选地，步骤(4)中，所述醇类溶剂的浓度为20-60％，v/v。
42.进一步优选地，所述醇类溶剂的浓度为25-40％，v/v。
43.更进一步优选地，所述醇类溶剂的浓度为30％，v/v。
44.优选地，步骤(4)中，所述芦丁粗品与醇类溶剂混合的固液比为1g:2-7ml。
45.进一步优选地，所述芦丁粗品与醇类溶剂混合的固液比为1g:4-6ml。
46.更进一步优选地，所述芦丁粗品与醇类溶剂混合的固液比为1g:5ml。
47.优选地，步骤(4)中，所述加热溶解的温度为60-90℃。
48.进一步优选地，所述加热溶解的温度为70-85℃。
49.优选地，步骤(5)中，所述芦丁溶解液趁热过滤后，将液体将至常温搅拌析晶，过滤，收集固体。
50.优选地，步骤(5)中，所述干燥的温度为60-80℃，干燥的时间4-8h。
51.本发明还提供上述方法所制备得到的芦丁。
52.本发明还提供上述方法在提取槐米中芦丁中的应用。
53.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
54.本发明的芦丁提取方法操作简单，耗时短，得率高、纯度高；本发明的提取方法重复性高，芦丁的得率和纯度结果稳定；本发明工艺要求的仪器设备简单，便于操作，适合于大规模工厂化生产。
附图说明
55.图1是本发明槐米中芦丁提取方法的流程示意图。
56.图2是本发明实施例2所得芦丁精品的液相色谱图。
57.图3是芦丁对照品的液相色谱图。
具体实施方式
58.以下非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。下述内容仅仅是对本发明要求保护的范围的示例性说明，本领域技术人员可以根据所公开的内容对本发明做出多种改变和修饰，而其也应当属于本发明要求保护的范围之中。
59.当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
60.下面以具体实施例的方式对本发明作进一步的说明。本发明实施例中所使用的各种化学试剂如无特殊说明均通过常规商业途径获得。本发明所述的化学试剂、原料，其不同厂家的产品对效果不具有显著性影响。
61.本发明的实施例按照图1所示的流程示意图进行槐米中芦丁的提取。
62.实施例1
63.(1)将槐米清洗处理干净，粉碎，过筛50目，得到槐米粉末；
64.(2)将槐米粉末100kg加入提取罐，加入5倍90％乙醇500l，80℃提取3次，每次2小时，得到芦丁提取液；
65.(3)合并上述3次提取的芦丁提取液，70℃减压浓缩，分离回收乙醇，将浓缩液于75℃条件下干燥，得到芦丁粗品51.3kg；
66.(4)将芦丁粗品与5倍量即250l的30％乙醇混合，80℃条件下溶解完全，得到芦丁溶解液；
67.(5)将芦丁溶解液趁热过滤，液体搅拌常温下析晶，过滤，收集滤饼；将滤饼于70℃鼓风干燥，得到芦丁精品42.5kg。
68.实施例2
69.(1)将槐米清洗处理干净，粉碎，过筛50目，得到槐米粉末；
70.(2)将槐米粉末250kg加入提取罐，加入5倍90％乙醇1250l，80℃提取3次，每次2小时，得到芦丁提取液；
71.(3)合并上述3次提取的芦丁提取液，70℃减压浓缩，分离回收乙醇，将浓缩液于75℃条件下干燥，得到芦丁粗品125.7kg；
72.(4)将芦丁粗品与5倍量即630l的30％乙醇混合，80℃条件下溶解完全，得到芦丁溶解液；
73.(5)将芦丁溶解液趁热过滤，液体搅拌常温下析晶，过滤，收集滤饼；将滤饼于70℃鼓风干燥，得到芦丁精品108.1kg。
74.实施例3
75.(1)将槐米清洗处理干净，粉碎，过筛50目，得到槐米粉末；
76.(2)将槐米粉末500kg加入提取罐，加入5倍90％乙醇2500l，80℃提取3次，每次2小时，得到芦丁提取液；
77.(3)合并上述3次提取的芦丁提取液，70℃减压浓缩，分离回收乙醇，将浓缩液于75℃条件下干燥，得到芦丁粗品251.3kg；
78.(4)将芦丁粗品与5倍量即1260l的30％乙醇混合，80℃条件下溶解完全，得到芦丁溶解液；
79.(5)将芦丁溶解液趁热过滤，液体搅拌常温下析晶，过滤，收集滤饼；将滤饼于70℃鼓风干燥，得到芦丁精品215.2kg。
80.实施例4
81.(1)将槐米清洗处理干净，粉碎，过筛50目，得到槐米粉末；
82.(2)将槐米粉末250kg加入提取罐，加入5倍80％甲醇2500l，80℃提取3次，每次2小时，得到芦丁提取液；
83.(3)合并上述3次提取的芦丁提取液80℃加热蒸馏，分离回收甲醇，将浓缩液于75℃条件下干燥，得到芦丁粗品112.5kg；
84.(4)将芦丁粗品与5倍量即562.5l的30％甲醇混合，80℃条件下溶解完全，得到芦丁溶解液；
85.(5)将芦丁溶解液趁热过滤，液体搅拌常温下析晶，过滤，收集滤饼；将滤饼于70℃鼓风干燥，得到芦丁精品93.2kg。
86.实施例5
87.(1)将槐米清洗处理干净，粉碎，过筛50目，得到槐米粉末；
88.(2)将槐米粉末250kg加入提取罐，加入5倍70％乙醇2500l，60℃提取3次，每次2小时，得到芦丁提取液；
89.(3)合并上述3次提取的芦丁提取液，70℃减压浓缩，分离回收乙醇，将浓缩液于75℃条件下干燥，得到芦丁粗品107.5kg；
90.(4)将芦丁粗品与5倍量即540l的20％乙醇混合，80℃条件下溶解完全，得到芦丁溶解液；
91.(5)将芦丁溶解液趁热过滤，液体搅拌常温下析晶，过滤，收集滤饼；将滤饼于70℃鼓风干燥，得到芦丁精品97.5kg。
92.实施例6
93.(1)将槐米清洗处理干净，粉碎，过筛50目，得到槐米粉末；
94.(2)将槐米粉末250kg加入提取罐，加入8倍90％乙醇500l，90℃提取3次，每次3小时，得到芦丁提取液；
95.(3)合并上述3次提取的芦丁提取液，70℃减压浓缩，分离回收乙醇，将浓缩液于80℃条件下干燥，得到芦丁粗品125.2kg；
96.(4)将芦丁粗品与2倍量即250.4l的50％乙醇混合，60℃条件下溶解完全，得到芦丁溶解液；
97.(5)将芦丁溶解液趁热过滤，液体搅拌常温下析晶，过滤，收集滤饼；将滤饼于70℃鼓风干燥，得到芦丁精品101.2kg。
98.对比例1
99.与实施例1不同的是，提取溶剂为水，用碳酸氢钠调节ph至10。其余步骤和参数均与实施例1相同，具体为：
100.(1)将槐米清洗处理干净，粉碎，过筛50目，得到槐米粉末；
101.(2)将槐米粉末100kg加入提取罐，加入5倍量的水500l，用碳酸氢钠调节ph至10，80℃提取3次，每次2小时，得到芦丁提取液；
102.(3)合并上述3次提取的芦丁提取液，70℃减压浓缩，分离回收乙醇，将浓缩液于75℃条件下干燥，得到芦丁粗品42.1kg；
103.(4)将芦丁粗品与5倍量即210l的30％乙醇混合，80℃条件下溶解完全，得到芦丁溶解液；
104.(5)将芦丁溶解液趁热过滤，液体搅拌常温下析晶，过滤，收集滤饼；将滤饼于70℃鼓风干燥，得到芦丁精品34.2kg。
105.对比例2
106.与实施例1不同的是，步骤(2)中，所用乙醇的浓度为60％(v/v)，其余步骤和参数均与实施例1相同。
107.最终，100kg的槐米粉末得到37.1kg的芦丁粗品，芦丁粗品经过溶解重结晶，得到30.2kg的芦丁精品。
108.对比例3
109.与实施例1不同的是，步骤(2)中，所述的提取温度为50℃。其余步骤和参数均与实施例1相同。
110.最终，100kg的槐米粉末得到34.1kg的芦丁粗品，芦丁粗品经过溶解重结晶，得到29.5kg的芦丁精品。
111.对比例4
112.与实施例1不同的是，步骤(4)中用于溶解芦丁粗品的有机溶剂替换为石油醚，其余步骤和参数均与实施例1相同。
113.最终100kg的槐米粉末得到10.2kg的芦丁精品。
114.对比例5
115.与实施例1不同的是，步骤(4)中，乙醇的浓度替换为10％(v/v)。其余步骤和参数均与实施例1相同。
116.最终100kg的槐米粉末得到20.2kg的芦丁精品。
117.对比例6
118.与实施例1不同的是，步骤(1)中，槐米粉碎后，未进行过筛，直接进行后续的提取和重结晶步骤。其余步骤和参数均与实施例1相同。
119.最终，100kg的槐米粉末得到40.2kg的芦丁粗品，芦丁粗品经过溶解重结晶，得到37.2kg的芦丁精品。
120.对比例7
121.与实施例1不同的是，步骤(4)-(5)的提纯方法不同，未进行加热和重结晶步骤。其余步骤和参数均与实施例1相同。
122.步骤(4)-(5)具体为:将步骤(3)得到的芦丁粗品，与5倍量的丙酮混合均匀，充分搅拌进行芦丁的提纯萃取，过滤后收集滤液，减压蒸馏回收溶剂后，干燥、得到纯化后的芦丁精品20.2kg。
123.试验1芦丁含量和收率测定
124.1、依据2020年版《中华人民共和国药典》一部药材和饮片中的槐花中含量测定方法，进行芦丁含量的检测。
125.依据高效液相色谱法(通则0512)进行芦丁含量的测定。
126.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:1％冰醋酸溶液(32:68)为流动相；检测波长为257nm。理论板数按芦丁峰计算应不低于2000。
127.对照品溶液的制备：取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
128.供试品溶液的制备：取以上实施例和对比例的芦丁精品各2份(精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率25khz)15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得精品含量。
129.对实施例2的芦丁精品和本试验所用的芦丁对照品进行表征分析，液相色谱图分别见图2-图3，图2为本发明实施例2所得芦丁精品的液相色谱图；图3是芦丁对照品的液相色谱图。
130.2、芦丁收率的检测方法：
131.芦丁收率(％)＝芦丁精品重量(kg)/(槐米重量
×
0.45)；所述0.45指理论上槐米中芦丁含量(纯度)。
132.实施例1-6和对比例1-7的芦丁含量和收率检测结果见表1。
133.表1
134.[0135][0136]
依据对各实施例和对比例的芦丁样品进行检测，平行测2次，检测结果显示实施例的芦丁的含量不仅高，且收率高，本发明的提取方法所得芦丁的稳定性高，芦丁提取方法的重复性好。
[0137]
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

技术特征：
1.一种高效提取槐米中芦丁的方法，其特征在于，包括步骤:(1)将槐米粉碎，过筛，得到槐米粉末；(2)将槐米粉末与醇类溶剂混合后，加热提取，得到芦丁提取液；所述醇类溶剂的浓度为80-90％；所述槐米粉末与醇类溶剂混合的固液比为1:4-8，g:ml；(3)将芦丁提取液浓缩、干燥、粉碎，得到芦丁粗品；(4)将芦丁粗品与醇类溶剂混合，加热溶解，得到芦丁溶解液；所述醇类溶剂的浓度为20-60％，v/v；(5)将芦丁溶解液在常温搅拌析晶，过滤，收集固体干燥，得到芦丁精品。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述过筛的目数为20-200目。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述醇类溶剂选自乙醇、甲醇、正丁醇、正辛醇、异辛醇中的至少一种。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述加热提取的温度为60-90℃，提取次数为2-4次，每次提取时间为1-5h。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述浓缩的温度为60-80℃；所述干燥的温度为60-80℃，干燥的时间4-8h。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述醇类溶剂选自乙醇、甲醇、正丁醇、正辛醇、异辛醇中的至少一种。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述芦丁粗品与醇类溶剂混合的固液比为1:2-7，g:ml。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述加热溶解的温度为60-90℃；步骤(5)中，所述干燥的温度为60-80℃，干燥的时间4-8h。9.权利要求1-8任一项所述方法所制备得到的芦丁。10.权利要求1-8任一项所述方法在提取槐米中芦丁中的应用。

技术总结
本发明提供了一种高效提取槐米中芦丁的方法，涉及化学成分提取技术领域。包括步骤：将槐米粉碎，过筛，得到槐米粉末；取槐米粉末与醇类溶剂混合，加热提取，得到芦丁提取液；将得到的提取液进行合并，浓缩和干燥，得到芦丁粗品；芦丁粗品与低浓度的醇类溶剂混合，加热溶解，常温搅拌析晶，过滤，干燥，即得到芦丁精品。本发明的提取方法使得芦丁的提取率高、纯度高，且提取方法对芦丁产品质量稳定，重复性高，提取过程操作简便，缩短整体提取时间。缩短整体提取时间。缩短整体提取时间。


技术研发人员：彭学东 张梅 赵金召
受保护的技术使用者：威胜生物医药（苏州）股份有限公司
技术研发日：2023.06.26
技术公布日：2023/9/25