用于针对病毒感染的粘膜保护的鼻内抗病毒疗法的制作方法

inhibitors》(2020年10月23日)science；370(6515)：426-431，该文献在此引入作为参考。在一些实施例中，这种小蛋白可以具有4090个氨基酸残基。
9.本发明中使用的抗原结合物可以被设计为源自任何物种并通过重组遗传工程产生的抗体的变体或衍生物。本发明中使用的抗原结合物可以以任何合适的方式产生，例如直接来自动物(如从血清获得的多克隆抗体)、b细胞或杂交瘤；或者通过重组遗传技术产生，从而可以从酵母、细菌或其他类型的细胞中产生。
10.抗原结合物可以是任意前述物质的修饰形式(例如，通过聚乙二醇或其他合适的聚合物或人源化vhh的共价交联进行修饰)。抗原结合物可以是双特异性的、多特异性的、二价的或多价的。本发明中使用的抗原结合物可以用作单一类型的抗原结合物(例如单一单克隆抗体)或多种类型(两种或多种)的抗原结合物。如何使用多种类型的抗原结合物的例子包括制备不同抗原结合物的混合物或使用多克隆抗体。
11.鼻内抗病毒组合物可具有任意适宜浓度的抗原结合物。在一些实施例中，抗病毒组合物中的抗原结合物的浓度为1-80mg/ml；在某些情况下，3-40mg/ml。在使用多种类型的抗原结合物(如其混合物或多克隆抗体)的情况下，浓度是指所有不同抗原结合物的总浓度。
12.本发明中使用的抗原结合物可对靶抗原具有高的结合亲和力。一种评估结合效力的常规方法是通过测量kd，即抗原结合物与其抗原之间的平衡解离常数。kd是抗原结合物的解离速度(k
off
)相对于抗原结合物的结合速度(k
on
)的比值，其中k
off
表示抗原结合物与其抗原的解离速度，k
on
表示抗原结合物与其抗原的结合速度，kd值越低表明对靶抗原的亲和力较高。在一些实施例中，抗原结合物的kd小于10-5
；在某些情况下，少于10-7
；在某些情况下，小于10-9
。为了标准化，kd在37℃、ph 7.0和摩尔离子强度0.16时被测量。
13.在抗原结合物是多价、混合物或多克隆的情况下，或者在累积结合强度是有用信息的情况下，该累积结合强度可通过亲和力来测量。在一些实施例中，用硫氰酸盐作为离液剂，抗原结合物的亲和力指数至少为50％；并且在一些情况下，至少为70％(以百分比测量)。测量亲和力指数的技术在pj
·
klasse，《how to assess the binding strength of antibodies elicited by vaccination against hiv and other viruses》(2016)expert rev vaccines，15(3)：295-311以及alexander等，《what do chaotrope-basedavidityassays forantibodies to hiv-1envelope glycoproteins measure？》(2015)jvirol.89(11)：5981-5995中被描述.在此引入这些文章作为参考。为了标准化，测量亲和力指数将在37℃、ph7.0和摩尔离子强度0.16时被测量。
14.病毒抗原，抗原结合物可以靶向任何可通过鼻吸入被传播的病毒，包括冠状病毒、流感病毒和鼻病毒。通过与病毒结合，抗原结合物可以中和病毒(例如，通过阻断病毒进入宿主细胞)。在一些实施例中，靶向病毒是冠状病毒。可被靶向的特定冠状病毒包括被鉴定为mers-cov、sars-cov和新型冠状病毒的冠状病毒。这些冠状病毒有三种可被抗原结合物靶向的相关蛋白，即：锚定在病毒包膜中的膜蛋白(m)、包膜蛋白(e)和刺突蛋白(s)。在一些实施例中，目标抗原是冠状病毒颗粒的刺突蛋白。
15.更具体地，靶抗原可以是刺突蛋白的s1亚单位或s2亚单位，它们在入侵宿主细胞中起关键作用。更具体地，靶抗原可以是刺突蛋白s1亚单位的受体结合结构域(rbd)。rbd是识别并结合宿主血管紧张素转换酶2(ace2)的区域。rbd区域由s1亚单位的319-541号残基
组成。关于潜在靶抗原的更多信息在黄等人，《structural and functional properties of sars-cov-2spike protein：potential antivirus drug development for covid-19》(2020年8月3日)中国药理学报，41：1141
–
1149；以及sternberga等人，《structural features ofcoronavirus sars-cov-2spike protein:targets for vaccination》(2020年9月15日)life sci，257：118056中被描述。在此引入这些文章作为参考。
16.在一些实施例中，靶病毒是鼻病毒。鼻病毒靶抗原包括其外壳蛋白：vp1、vp2、vp3和vp4。在一些实施例中，目标病毒是甲型流感病毒。甲型流感病毒的靶抗原包括其病毒包膜蛋白、血凝素(h)和神经氨酸酶(n)。
17.药物悬浮剂：该鼻内抗病毒组合物还包含药物悬浮剂材料，以赋予该组合物物理性质(例如粘度、流动性、均一性)，从而有效应用于鼻腔并沉积在鼻或鼻咽粘膜上。药物悬浮剂包含一种或多种悬浮剂。可被使用的悬浮剂包括微晶纤维素(mcc)、羧甲基纤维素钠(na
·
cmc)和聚乙烯吡咯烷酮(pvp)。
18.任意适量的药物悬浮剂都可以被使用去获得鼻喷雾剂组合物的所需性质。在一些实施例中，鼻内抗病毒组合物包含浓度为0.25-5w/v％的药物悬浮剂；并且在一些情况下，为0.5-4w/v％。在药物悬浮剂包含多种(两种或更多)不同悬浮剂的情况下，该浓度是指所有悬浮剂的总量。
19.在一些实施例中，每100ml组合物包含0.05-0.75g na
·
cmc，在某些情况下每100毫升组合物包含0.05-0.45gna
·
cmc。在一些实施例中，以质量分数(wt％)表示，组合物包含0.04-0.70wt％的na
·
cmc，在一些情况下，为0.04-0.40wt％。在一些实施例中，组合物包含的mcc的量是na
·
cmc重量的4-12倍，在某些情况下，甚至高达6-10倍。
20.无渗透促进剂：如下所述，希望鼻内组合物仅具有局部作用而避免被全身吸收。不使用渗透促进剂可有效防止或减少不必要的系统吸收。因此，在一些实施例中，抗病毒组合物可以省略任意常规的渗透促进剂(也称为吸收或渗透促进剂)，例如油酸和其他脂质、环糊精、壳聚糖、胆汁盐、脂肪酸和衍生物(例如棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油醇、油酸、癸酸、dha、epa等)、磷脂(例如二棕榈酰磷脂酰胆碱、大豆卵磷脂、磷脂酰胆碱等)、螯合剂(例如乙二胺四乙酸(edta)、柠檬酸、柠檬酸钠、水杨酸钠等)和二醇(例如n-甘氨呋喃醇、n-乙二醇、丙二醇、肉豆蔻酸异丙酯等)。
21.防腐剂或其他性质：实验表明，防腐剂对于维持组合物的稳定性可能是重要的。因此，在一些实施例中，组合物进一步包含防腐剂，例如苯扎氯铵、山梨酸钾、苯乙醇(也称为2-苯乙醇)、2-苯氧基乙醇或叠氮化钠。
22.配制抗病毒组合物以避免或减少对鼻腔通道的刺激，这可通过使组合物的渗透压(osmolarity)接近等渗(290mosm/l)来实现。在一些实施例中，渗透压在260-325mosm的范围内，可加入氯化钠调节组合物到所需的渗透压。在一些实施例中，抗病毒组合物的粘度为15-120厘泊(cps)；在某些情况下，为20-90cps。
23.鼻内给药装置：另一方面，本发明是鼻内抗病毒产品，其可以是一次性使用或多次使用的产品。本文所述的鼻内抗病毒组合物包含在鼻内给药装置中。可使用的鼻内给药装置包括鼻喷雾器、移液管、挤压瓶或喷射管。在一些实施例中，产品是可多次使用的产品，并且鼻内给药装置包含3-20ml的抗病毒组合物。在一些实施例中，产品是一次性产品，并且鼻内给药装置包含不到1.5ml的抗病毒组合物。
24.如下所述，希望鼻内组合物仅在鼻腔或鼻咽中具有局部作用，而避免沉积到肺或中央气道(气管和主干支气管)中。因此，在一些实施例中，鼻内给药装置没有任何推进剂，并且没有被加压。本发明的局部鼻内组合物被设计成在鼻通道内形成粘性层，该粘性层捕获病毒并防止其进一步进入气道。因此，将沉积限制在鼻道可有助于避免产品浪费和出现副作用。这可通过液滴其液滴粒径能够沉积在鼻腔通道内但不会进入肺部来实现。如果液滴太小(例如《10μm)，它们可能会通过鼻腔并沉积在肺部。在一些实施例中，本发明不是用于将药物输送到肺部的吸入喷雾装置。在一些实施例中，鼻内给药装置释放液体颗粒，其中粒径分布小于20％的颗粒的直径《10μm。关于鼻腔局部给药的更多细节在frank等人的《effects of anatomy and particle size onnasal sprays andnebulizers》(2011)耳鼻喉科头颈外科146(2)：313
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319中描述。
25.通过鼻内给药装置的单次给药，可以释放适量的抗原结合物。在一些实施例中，鼻内给药装置每次给药释放30-175μl体积的抗病毒组合物。在一些实施例中，鼻内给药装置每次给药释放0.25
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4mg抗原结合物。在使用多种(两种或多种)类型的抗原结合物(如其混合物或多克隆抗体)的情况下，适量是指所有不同抗原结合物的总量。
26.保护方法：另一方面，本发明是一种防止病毒感染的方法。该方法包括上文所述的鼻内给药装置。在一些情况下，组合物被释放(例如通过喷雾或滴液)到一个或两个鼻孔中，使得组合物沉积在鼻腔或鼻咽的粘膜上。可能希望仅在鼻腔或鼻咽中具有局部作用。因此，在一些实施例中，组合物直接仅沉积在鼻腔或鼻咽的粘膜上，尽量避免被全身吸收进入血液循环。因此，在一些实施例中，组合物不被吸收到血液循环中，此外，避免进入肺部或中央气道(气管和主支气管)。因此，在一些实施例中，组合物不是通过给药装置直接沉积到肺或中央气道中。
27.鼻内给药动作(例如喷雾或液滴)可以释放任何治疗有效量的抗原结合物。在一些实施例中，对于每次给药，释放到鼻腔中的抗原结合物的量为0.25
–
4mg。在使用多种类型的抗原结合物(如其混合物或多克隆抗体)的情况下，该量是指所有不同抗原结合物的总量，可能需要多次给药以达到抗原结合物的全部治疗有效量。
28.制备方法：另一方面，本发明是制备局部鼻内抗病毒组合物的方法。该方法包括制备抗原结合剂。抗原结合物可以以任何合适的方式生产，例如本文所述的技术。抗原结合剂制剂可以是液体或固体形式。以液体形式，可以使用任何合适浓度的抗原结合物。例如，抗原结合剂制剂可以是含有浓度为5-150mg/ml的抗原结合剂的液体。
29.与抗原结合剂制剂分开，制备抗原结合剂的药物载体。通过制备含有药物混悬剂的均质水性混合物来制备药物载体。这种均质水性混合物可以通过将药物悬浮剂加入水或其它水溶液中来制备。混合物可以通过任何合适的搅拌技术如摇动均化。
30.在一些实施例中，药物悬浮剂是微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的组合，可以使用其任意合适的量。在一些实施例中，在制造过程中，所使用的微晶纤维素的量相对于羧甲基纤维素钠的量(按重量计)在20:1
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3:1的范围内(mcc:na
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cmc)，在一些情况下，在15:1
–
5:1的范围内，并且在一些情况下，在12:1
–
7:1范围内。例如，该生产方法可以使用比羧甲基纤维素钠的量(按重量计)多9倍的微晶纤维素。
31.在一些实施例中，在生产过程中，药物悬浮剂是粉末(固体)形式，用于制备水性混合物。在某些情况下，药物悬浮剂是两种或多种不同悬浮剂的粉末混合物。在某些情况下，
药物悬浮剂是微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的粉末混合物，任意比例的两种悬浮剂均可被使用。在某些情况下，粉末混合物由以下比例的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠组成(相对的粉末混合物的总重量为100％)：4-20wt％的羧甲基纤维素钠和75-95wt％的微晶纤维素。
32.在制造过程中使用的药物悬液材料可以通过其粘度来表征。在一些实施例中，药物悬浮剂的粘度为20-200cps(当通过在均化器中与浓度为1.2w/v％的水混合30秒活化时测试)，在某些情况下，为30-115cps范围内。在药物悬浮剂包含多种(两种或多种)不同悬浮剂的混合物的情况下，该粘度指的是聚集混合物。
33.药物载体可与抗原结合剂制剂分离并被加热灭菌。这种加热灭菌可以以任何合适的方式进行。例如，药物载体可以在至少115℃的温度下被高压灭菌至少20分钟。然后将药物载体冷却至合适的温度(例如室温)。冷却后，将抗原结合剂加入到药物载体中，制成生物活性混合物。通过任何合适的搅拌技术(例如摇动等)使生物活性混合物变得均质。).
34.加入固体形式的氯化钠(与盐水相反)来制备抗病毒组合物。例如，固体氯化钠可以是粉末、颗粒、微粒或其他容易分配的形式。在制造过程中，将氯化钠加入制成的生物活性混合物，其中可以加入任意适量的氯化钠以减少鼻腔中潜在的刺激。例如，加入的氯化钠可导致局部抗病毒组合物含有0.9w/v％氯化钠，用于与鼻腔等渗。在一些实施例中，加入氯化钠的药物载体具有小于0.5w/v％的氯化钠浓度。在一些实施例中，在药物悬液、抗原结合剂或两者之后的任何时间点加入氯化钠。
35.除非上下文另有明确规定，否则本文中的“或”都旨在包括和等同于表述“和/或”。同样地，例如，表述“a或b”意味着a或b，或者a和b两者。类似地，例如，表述“a、b或c”意味着a、b或c，或者它们的任意组合。
附图说明
36.图1展示了使用者将抗病毒组合物喷入她的鼻子。
37.图2展示了鼻腔的矢状截面。
具体实施方式
38.为了有助于理解本发明，进行下列的实验。在进行实验时，以使用抗s1亚单位lgy抗体制备鼻喷雾剂组合物。多克隆igy抗体可以从抗原免疫的产蛋的蛋鸡中获得。收集鸡蛋，从蛋黄中提取igy抗体。这一过程在文献中有所描述，如amro等人的《production andpurification ofigy antibodies from chicken egg yolk”》(2018)《遗传工程与生物技术杂志》，16(1)：99-103。在此引入这篇文章作为参考。
39.在这项工作中，用新型冠状病毒刺突蛋白免疫产蛋母鸡以诱导产生igy抗体。收集鸡蛋，从蛋黄中提取抗s1亚单位igy抗体。在不同浓度的igy抗体下制备了三种不同的制剂：5mg/ml、10mg/ml和20mg/ml。下面描述的是制备10mg/ml制剂的方法。
40.制备无菌抗体：以40mg/ml的目标储备浓度制备抗s1亚单位lgy抗体，将其稀释至24.7％(v/v)，密度为1.066g/ml。将266g批次的稀释抗体通过无菌注射器过滤器(其为0.2m醋酸纤维素膜)过滤到配衡烧杯中。
41.制备药物载体：在顶部入口设置混合器，混合轴和叶轮位于烧杯的中心，靠近烧杯的底部，但不接触。将无菌水(usp)加入烧杯中。混合器从速度为0开始启动，缓慢增加速度
以搅拌水形成涡流，而不将空气吸入液体中。目标混合器速度为2,000rpm，但根据需要进行调整。
42.在持续搅拌的同时，将20g vivapur mcg 591p(2％w/v)加入烧杯中，并混合约10分钟，直到形成水悬浮液。vivapur mcg 591p是微晶纤维素(86.2-91.7wt％)和羧甲基纤维素钠(8.3-13.8wt％)的粉末混合物。在最初的“塔顶”混合(“overhead”mixing)后，悬浮液在约5,000rpm的搅拌速度下均化约30分钟，直到悬浮液变成均匀的凝胶。然后用铝箔覆盖烧杯，并放入温度约为120℃的高压釜中约30分钟，以对凝胶进行灭菌。
43.在持续搅拌的同时，将20gmcg 591p(2％w/v)加入烧杯中，并混合约10分钟，直到形成水悬浮液。mcg 591p是微晶纤维素(86.2-91.7wt％)和羧甲基纤维素钠(8.3-13.8wt％)的粉末混合物。在最初的“塔顶”混合后，悬浮液在约5,000rpm的搅拌速度下均化约30分钟，直到悬浮液变成均匀的凝胶。然后用铝箔覆盖烧杯，并放入温度约为120℃的高压釜中约30分钟，以对凝胶进行灭菌。
44.高压灭菌后，继续用搅拌器搅拌，同时让凝胶冷却至室温(约25℃)，继续以500rpm搅拌约10分钟，同时加入更多无菌水以使凝胶组合物达到所需的成分浓度。
45.加入抗体：在以700rpm继续搅拌约10分钟的同时，向凝胶中加入无菌lgy抗体制剂(如上所述)，然后在继续混合约5分钟的同时，加入9g粒状氯化钠(usp，固体形式)，使凝胶成为0.9％w/v等渗盐水。
46.这产生了在0.9％盐水中具有10mg/ml浓度的igy抗体的无菌凝胶组合物，其中微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的总量为2w/v％，将凝胶组合物分装到3ml的鼻喷雾剂瓶中，其中每瓶含有1.5ml凝胶组合物。
47.其他配方：通过将40mg/ml储备液分别稀释至约12.5％(w/v)和约50％(w/v)，制备了5mg/ml和20mg/ml igy抗体的类似组合物。
48.制图：图1展示了一个如何使用本发明的例子，一个手持鼻喷雾器10的使用者12，该鼻喷雾器包含本发明的抗病毒组合物。她正在往鼻子里喷抗病毒组合物。图2描述了如何将鼻喷雾液滴沉积在鼻腔中的例子，这里显示的是鼻子16和鼻腔的矢状截面，其具有前庭14、心房22、内鼻甲18和鼻咽20。鼻腔喷雾液滴可能仅沉积鼻腔，而不会进一步向下进入肺部。
49.实验测试
50.本发明的局部鼻内组合物被设计成在鼻通道内形成粘性层，该粘性层捕获病毒并防止其进一步进入气道。为了实现这一点，组合物必须耐受由鼻喷雾泵的喷嘴产生的高剪切力。剪切力可能是有问题的，因为它们降低了喷雾液体的期望粘度。对于实验测试，本发明重点研究了微晶纤维素(mcc)和羧甲基纤维素钠(na
·
cmc)的混合物作为药物悬浮剂的用途。mcc和na
·
cmc含量不同的产品有不同的等级。实验旨在找到最适合鼻腔喷雾大生物分子(如抗体)的混合物。
51.制备药物载体
52.本发明进行了初步研究以选择悬浮剂，用于制备合适的药物载体作为igy抗体的载体。因为组合物的目的是用抗体捕获病毒，从而防止病毒进入粘膜细胞，所以组合物的粘性对治疗效果很重要，延长在鼻腔中的停留时间将提高治疗效果。
53.为了实现这一点，使用mcc和na
·
cmc的混合物来产生悬浮液。下表1给出了测试的不同混合选项。粘度测试在旋转粘度计上进行。对于初始设置，粘度计在室温下在普通水中测试，得到以下结果：在200rpm速度下粘度为11.72cps，扭矩62.4％，精度0.30cps。测试了下列商品在水中浓度为1.5w/v％时的粘度。粘度结果如下：
54.表1：材料和粘度测试
[0055][0056][0057]
在评估结果后，根据粘度结果发现vivapur mcg 591p是最合适的。此外，目测表明vivapur在未受干扰时表现得像凝胶，而在摇动时转变成粘性液体。
[0058]
因为igy抗体是水状稀水溶液的形式，所以必须将其加入成比例的较稠液体中以获得1.5wt％的药物载体。因此，在浓度大于1.5wt％的纯化水中制备vivapur悬浮液：将适当量的igy抗体移液到25ml容量瓶中，并用更稠的vivapur悬浮液稀释至刻度，由此，最终混合物在每个抗体浓度下含有1.5wt％的vivapur。下表2显示了每种强度所用的比例：
[0059][0060]
表2：vivapur相对于igy的比例
[0061][0062]
本发明对样品进行了高效液相色谱(hplc)以进行质量控制测试(详见下文)。下表3显示了用于每种抗体强度的比例，以及每种样品的回收量。这些hplc回收结果证实，将igy抗体添加到成比例变稠的vivapur悬浮液中的技术产生了可接受的制剂。
[0063]
表3：通过hplc的igy回收率
[0064][0065]
然后，本发明试图使药物载体等渗，使产品等渗可以通过避免诱导渗透流来减少
对鼻粘膜的刺激。为了产生等渗悬浮液，向匀化的vivapur悬浮液中加入氯化钠。0.9％氯化钠是医疗应用中常用的液体溶液。为了模拟这种情况，本发明用0.9％氯化钠制备了vivapur混悬液(不含igy)，并研究了该混合物的渗透压。下表4显示了所得混合物的渗透压(目标渗透压为290mosm)。这些结果表明，在0.9％氯化钠中的1.5wt％vivapur悬浮液产生了所需的渗透压。
[0066]
表4：含0.9％氯化钠(不含igy)的悬浮液的重量克分子渗透压
[0067] 渗透压(mosm)试验1285试验2287试验3289平均287
[0068]
然后，本发明研究了单独的igy抗体(不含生理盐水)如何影响溶液的渗透压。测试结果如下表5所示。这些结果表明，不同浓度的igy抗体对总渗透压只有极小的影响。
[0069]
本发明认为，这种最小量的溶液渗透压是由醋酸钠盐溶液中提供的igy抗体原液引起的(作为供应商(supplier)进行的蛋白质重构过程的一部分)。因此，本发明决定可以使用0.9％的氯化钠来制备该制剂，而不需要根据igy抗体的量来调节氯化钠浓度，也就是说，不同强度的抗体产物可以使用相同的氯化钠添加技术来制备。
[0070]
表5：不含氯化钠的渗透压(mosm)
[0071] 5mg/ml10mg/ml20mg/ml试验16917试验25916试验35917平均5917
[0072]
接下来，本发明对配方进行视觉观察。通过将液体混合物滴在载玻片上并进行视觉观察来完成的。尽管粘度计、hplc和渗透压的结果令人满意，但本发明的视觉观察表明需要更高的粘度。因此，本发明决定将vivapur的浓度从1.5wt％提高到2.0wt％。使用20mg/ml浓度的igy抗体作为例子，下表6对比了1.5％配方与2.0％配方。根据40mg/ml的假定储备浓度和1.066g/ml的密度计算igy。适量是指100g最终悬浮液。
[0073]
表6：增加的vivapur量
[0074]
原料配方#1(1.5％)配方#2(2.0％)vivapurmcg591p1.5g2.0gigy蛋白53.3g53.3g氯化钠0.9g0.9g纯净水35.0g35.0g纯净水适量适量
[0075]
对上述配方#2进行了渗透压测试，以观察增加vivapur的浓度如何影响渗透压。下表7显示了结果。如这里所见，与单独的0.9％氯化钠溶液预期的约290mosm相比，渗透压略有增加。这是因为在醋酸钠溶液中存在有igy蛋白原液，这稍微增加了渗透压。渗透压的轻
微增加是可以接受的。本发明还测量了密度，以便在生产过程结束时调整纯净水的添加量。测得配方#2的密度为1.077g/ml，酸度ph 6.75。
[0076]
表7：渗透压检测
[0077]
试验渗透压(mosm)试验1308试验2309试验3313平均310
[0078]
均质化的优点。最初，vivapur和纯净水仅用顶部混合器混合。尽管这获得了可接受的结果，但本发明发现在高剪切力下均化悬浮液使其更稠，而无需添加额外的vivapur。下表8展示了配方#1-配方#3。配方#3的粘度和胶凝性能最好。根据40mg/ml的假定储备浓度和1.066g/ml的密度计算igy。对于配方#1和配方#2，适量是指100g最终悬浮液。对于配方#3，适量是指107.7g最终悬浮液。数量以克(g)为单位表示。
[0079]
表8：均质化的影响
[0080]
原材料配方#1配方#2配方#3vivapurmcg591p1.52.02.0igy蛋白53.353.353.3氯化钠0.90.90.9净水35.035.040.0净水适量适量适量均化作用xx√
[0081]
表9-表12分别显示了对照(无igy)、5mg/ml、10mg/ml和20mg/ml浓度的最终配方。表13总结了现行良好生产规范(cgmp)生产工艺。
[0082]
表9：最终配方，安慰剂对照
[0083][0084]
表10：最终配方，5mg/ml igy
[0085][0086]
表11：最终配方，10mg/ml igy
[0087][0088][0089]
表12：最终配方，20mg/ml igy
[0090][0091]
表13：cgmp生产工艺总结
[0092][0093][0094]
技术观察：向混合物中加入氯化钠以使悬浮液等渗。等渗液体将避免或减少对鼻腔通道的刺激。在向混合物中加入氯化钠颗粒时，观察到在高温高压灭菌后加入氯化钠是重要的。当最初将氯化钠加入到药物载体中，然后在高温下高压灭菌时，这导致vivapur混合物从混合物中沉淀出来，这是不理想的效果。因此，在igy或vivapur之后向液体组合物中加入固体形式(例如粉末或颗粒)的氯化钠对于制备可使用的产品可能是至关重要的，这与将igy或vivapur加入到已经制备好的氯化钠盐水溶液中相反。
[0095]
此外，在添加igy抗体之前对药物载体进行高温高压灭菌避免了导致抗体变性或降解的可能。因此，在加入氯化钠之前对药物载体进行高压灭菌，并与抗体制剂的灭菌分开。
[0096]
在向药物载体中加入igy抗体时，观察到应该缓慢混合。否则，会产生泡沫状的液体，而不是凝胶。本发明认为这是因为igy抗体是一种基于鸡蛋的蛋白质。此外，为了储存，
冷冻组合物可能是不希望的，因为vivapur赋形剂可能在解冻期间从混合物中分离出来。
[0097]
稳定性试验以下稳定性试验是在冷藏(2-4℃)和室温下进行的，稳定性试验的持续时间为三个月，在某些批次中长达六个月。
[0098]
ph稳定性：igy原液的ph值接近生理ph值。然而，由于悬浮液配方不含任何缓冲剂，ph值有可能发生不理想的变化。因此，本发明测试了ph值的稳定性，结果如表14和15所示。这些结果表明悬浮液的ph值在两种温度条件下都是稳定的。
[0099]
表14：冷藏下ph稳定性
[0100][0101]
表15：室温下ph稳定性
[0102]
批次初始两周一个月两个月三个月#1-控制组(0)5.65.65.65.65.7#2-5mg/ml6.56.56.56.56.5#3-10mg/ml6.76.76.66.76.7#4-20mg/ml6.86.86.86.86.7
[0103]
渗透压稳定性：配方设计的目标之一是等渗性，以避免或减少对鼻腔通道的刺激。在悬浮液中，有两个因素影响渗透压：氯化钠浓度和igy原液浓度。因为igy原液含有少量乙酸钠，可能会潜在地影响所需的等渗渗透压。因此，本发明测试了渗透压的稳定性，结果如表16和17所示。这些结果表明，悬浮液的渗透压在两种温度条件下都是稳定的。
[0104]
表16：冷藏下渗透压稳定性(mosm)
[0105][0106]
表17：室温下渗透压稳定性(mosm)
[0107][0108]
[0109]
对于#2，渗透压的差异是由混合问题测量不准确引起的。
[0110]
粘度稳定性：已知鼻喷雾剂组合物的粘度会随时间而变化。如上所述，具有足够的粘度是局部鼻用组合物的一个重要因素。因此，本发明测试了粘度的稳定性，结果如表18和19所示。这里的粘度是以厘泊(cps)来衡量的。这些结果表明，悬浮液的粘度在两种温度条件下都是稳定的。
[0111]
表18：冷藏下粘度稳定性(cps)
[0112]
批次初始两周一个月两个月三个月#1-控制组(0)4845484850#2-5mg/ml5263595257#3-10mg/ml5156555760#4-20mg/ml4751545352
[0113]
表19：室温下粘度稳定性(cps)
[0114]
批次初始两周一个月两个月三个月#1-控制组(0)4843505151#2-5mg/ml5257575456#3-10mg/ml516353*61#4-20mg/ml4751535352
[0115]
*未执行。
[0116]
igy稳定性：作为一种生物制品，igy抗体容易被各种因素降解。因此，本发明设计了hplc方案来检测完整的igy用于质量控制目的。在设计hplc方案时，本发明观察到将流速从0.5ml/min减慢到0.4ml/min可提高定量分析的峰间分离度。该hplc方案能够准确定量回收的完整igy的量。表20和表21显示了回收的igy量。
[0117]
表20：冷藏下lgy稳定性(hplc回收率％)
[0118][0119]
表21：室温下lgy稳定性(hplc回收率％)
[0120]
批次初始两周一个月两个月三个月#1-控制组(0)不适用不适用不适用不适用不适用#2-5mg/ml96％100％99％97％103％#3-10mg/ml97％100％99％96％104％#4-20mg/ml96％99％97％100％99％
[0121]
视觉观察：本发明还在三个月的测试期间对批次进行了目测检查。在三个月的时间里，冷藏批次没有出现异常情况。然而，室温批次中存在不规则现象。在一些样品中，颜色变为浅黄色，出现深色异物，或有强烈的硫酸气味。这发生在3个月的时间点和之后的5mg/ml批次中；在一个月的时间点及之后的10mg/ml批次中；并且在一个月的时间点以20mg/ml
的批次给药。

技术特征：
1.一种制备局部鼻内抗病毒组合物的方法，其特征在于，包括：具有抗原结合剂的制剂；制备包含药物悬浮剂的药物载体；加热灭菌所述药物载体；冷却所述药物载体；向所述药物载体中加入所述抗原结合剂以制备生物活性混合物；向所述生物活性混合物中加入固体氯化钠。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗原结合剂制剂是含有浓度5-150mg/ml的所述抗原结合剂的液体。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述药物载体包括含有所述药物悬浮剂的均质水性混合物。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述均质水性混合物通过将所述药物悬浮剂添加到水或水溶液中来制备。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述药物悬浮剂包含微晶纤维素和羧甲基纤维素钠。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，将所述药物悬浮剂作为基本上由所述微晶纤维素和所述羧甲基纤维素钠组成的粉末混合物加入到水或水溶液中。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述药物悬浮剂是包含微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的粉末混合物。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述粉末混合物是4-20wt％的所述羧甲基纤维素钠和75-95wt％的所述微晶纤维素。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，按重量计，所述混合物中所述微晶纤维素的量相对于所述羧甲基纤维素钠的量在20:1
–
3:1(mcc:na
·
cmc)的范围内。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述抗病毒组合物包含0.04-0.70wt％的na
·
cmc。11.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述粉末混合物的粘度为20-200厘泊。12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗原结合物是多克隆igy抗体。13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗原结合物靶向冠状病毒刺突蛋白。14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述抗原结合物靶向所述冠状病毒刺突蛋白的s1亚单位。15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述冠状病毒是新型冠状病毒。16.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗病毒组合物的粘度为15-120厘泊。17.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗病毒组合物的渗透压在260-325mosm范围内。18.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括添加防腐剂。19.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在制备所述生物活性混合物之后添加所述氯化钠。20.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在添加所述药物悬浮剂后的某个时间进行添加所述氯化钠。

技术总结
本发明涉及一种用于预防病毒感染的局部鼻内抗病毒组合物。该组合物包含抗原结合剂和药物悬浮剂材料，为有效地释放到鼻腔中。可用于药物悬浮剂的材料包括微晶纤维素或羧甲基纤维素钠(Na


技术研发人员：B
受保护的技术使用者：B
技术研发日：2021.10.24
技术公布日：2023/9/26