雌激素受体降解剂及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及一类作为雌激素受体降解剂的化合物或其药学上可接受的盐，以及作为选择性雌激素受体降解剂(serd)在预防或治疗相关性疾病中的用途。


背景技术：

2.乳腺癌常被称为“粉红杀手”，其发病率位居女性恶性肿瘤的首位。全球每年新发乳腺癌226万，约占所有新确诊癌症人数的11.7％，占女性新确诊癌症人数的24.5％。同时，有超过68万人死于乳腺癌，约占所有癌症死亡人数的6.9％，占全球女性癌症死亡人数的15.5％，也是全球女性死亡人数最多的癌症。
3.雌激素(e2)及雌激素α受体(erα)是乳腺癌发生发展的重要驱动因子。在乳腺癌患者中有超过2/3的患者表达雌激素受体(estrogen receptor,er)转录因子，并且在大多数er阳性患者中，即使经过早期的内分泌治疗后进展的肿瘤中，er仍然是一个关键的驱动因子，因此er是乳腺癌治疗的一个主要靶点(pharmacology&therapeutics 186(2018)1-24)。在雌激素受体阳性乳腺癌患者的治疗中，内分泌治疗占有重要地位。内分泌治疗主要分三类，第一类是芳香化酶抑制剂(aromatase inhibitor,ai)，能够抑制雄激素转化为雌激素，降低体内雌激素的水平；第二类是选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptormodulator,serm)，能够拮抗雌激素受体的活性；第三类是选择性雌激素受体降解剂(selective estrogen receptor degrader,serd)，为一类结合到雌激素受体上且导致雌激素受体降解的小分子，不仅可以拮抗雌激素受体的活性，还能够促进受体的降解。虽然内分泌治疗是雌激素受体阳性乳腺癌的首选治疗，但约有30％接受辅助治疗的病人会发生复发，而几乎所有的转移性乳腺癌病人都会产生耐药而发生进展。
4.研究显示，serd在治疗对他莫昔芬和/或芳香酶抑制药物耐受的癌症中特别有效(mcdonnell等人，j.med.chem.2015,58:4883-4887)。目前，氟维司群为唯一获批上市用于治疗雌激素受体阳性乳腺癌的serd药物。然而，氟维司群成药特性差，体内代谢过快，尽管体外研究中可以完全降解雌激素受体，但是在体内无法充分发挥降解雌激素受体的作用。同时，氟维司群口服生物利用度低，临床使用不便。因此，开发一种疗效好、生物利用度高、副作用小、方便口服给药的用于治疗乳腺癌和其它雌激素受体相关的疾病的serd药物是非常重要的。


技术实现要素：

5.在一个方面中，本发明提供了一种式(i)所示化合物或其药学上可接受的盐，
[0006][0007]
其中，
[0008]
x独立选自-o-、-so-或-so
2-；
[0009]
m和n独立地选自0，1，2，3或4；
[0010]
r1独立选自氢、卤素或-ch2oh；
[0011]
r2、r3相同或不同，各自独立地选自氢、卤素或c
1-6
烷基；
[0012]
r4独立地选自氢、卤素、取代或未被取代的c
1-10
直链或支链的烷基。
[0013]
在式(i)化合物的一个实施方案中，r1选自卤素或-ch2oh；优选的，r1为f或-ch2oh。
[0014]
在式(i)化合物的一个实施方案中，r2、r3各自独立地选自卤素或c
1-4
烷基；优选的，r2、r3各自独立选自f、cl、br、i、甲基、乙基、异丙基、丁基、异丁基或仲丁基；更优选的，r2和r3均为f。
[0015]
在式(i)化合物的一个实施方案中，r4独立选自被卤素取代的c
1-10
直链或支链的烷基；优选的，r4独立选自被卤素取代的c
1-6
直链或支链的烷基。进一步地，r4选自-cf2cf3、-cf2chf2、-cf2ch2f、-cf2ch3、-chfcf3、-chfchf2、-chfch2f、-chfch3、-ch2cf3、-ch2chf2、-ch2ch2f、-ccl2ccl3、-cbr2cbr3或-ci2ci3；更优选的，r4为-cf2cf3。
[0016]
在式(i)化合物的一个实施方案中，m和n各自独立地选自2或3。
[0017]
在式(i)化合物的一个实施方案中，x选自-so-或-so
2-；优选为-so
2-。
[0018]
在式(i)化合物的一个实施方案中，
[0019]
x独立选自-o-、-so-或-so
2-；
[0020]
m和n各自独立地选自0，1，2，3或4；
[0021]
r1独立选自卤素或-ch2oh；r2、r3相同或不同，各自独立地选自卤素；
[0022]
r4独立选自被卤素取代的c
1-10
直链或支链的烷基；
[0023]
所述卤素优选为f。
[0024]
在式(i)化合物的一个实施方案中，
[0025]
x独立地选自-so-或-so
2-；
[0026]
m和n各自独立地选自2或3；
[0027]
r1独立选自氢、卤素或-ch2oh；
[0028]
r2、r3相同或不同，各自独立地选自氢、卤素或c
1-6
烷基；
[0029]
r4独立地选自氢、卤素、取代或未被取代的c
1-10
直链或支链的烷基。
[0030]
在式(i)化合物的一个实施方案中，
[0031]
x独立地选自-so-或-so
2-；
[0032]
m和n各自独立地选自2或3；
[0033]
r1独立选自卤素或-ch2oh；r2、r3相同或不同，各自独立地选自卤素；
[0034]
r4独立选自被卤素取代的c
1-10
直链或支链的烷基；
[0035]
所述卤素优选为f。
[0036]
在式(i)化合物的一个实施方案中，
[0037]
x独立选自-o-、-so-或-so
2-；
[0038]
m和n各自独立地选自2或3；
[0039]
r1独立选自f、cl、br、i或-ch2oh；
[0040]
r2独立选自f、cl、br、i、甲基、乙基、异丙基、丁基、异丁基或仲丁基；
[0041]
r3独立选自f、cl、br、i、甲基、乙基、异丙基、丁基、异丁基或仲丁基；
[0042]
r4独立选自-cf2cf3、-cf2chf2、-cf2ch2f、-cf2ch3、-chfcf3、-chfchf2、-chfch2f、-chfch3、-ch2cf3、-ch2chf2、-ch2ch2f、-ccl2ccl3、-cbr2cbr3、-ci2ci3。
[0043]
在式(i)化合物的一个实施方案中，
[0044]
x独立选自-o-、-so-或-so
2-；m和n各自独立地选自0，1，2，3或4；
[0045]
r1独立地选卤素或-ch2oh，优选为f或-ch2oh；
[0046]
r2和r3均为f；r4为-cf2cf3。
[0047]
在式(i)化合物的一个实施方案中，
[0048]
x独立地选自-so-或-so
2-；m和n各自独立地选自2或3；
[0049]
r1独立地选卤素或-ch2oh，优选为f或-ch2oh；r2、r3均为f；
[0050]
r4独立地选自被卤素取代的甲基、乙基或丙基，优选为cf2cf3。
[0051]
在一些实施方案中，所述式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，选自以下化合物或其药学上可接受的盐：
[0052][0053]
在一个方面中，本发明提供了一种药物组合物，包括上述任一所述化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。所述载体，包括本领域中常规的辅料成分，例如填充剂、粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、调味剂、抗氧化剂和润湿剂等。
[0054]
所述药物组合物可以制备成药学上可接受的各种剂型，如片剂、胶囊剂、口服液剂、混悬液、颗粒剂、粉剂、微粒剂、丸剂、微型片剂、速溶膜剂、鼻喷雾剂、透皮贴剂、注射剂或各种缓控释制剂等。所述药物组合物可以经口服、经粘膜、经直肠或肠胃外(包括血管内、静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内和胸骨内)给药。给药剂量可根据患者的年龄、性别和疾病类型进行适当调整。
[0055]
对于口服给药，所述药物组合物可呈例如片剂、胶囊、液体胶囊、悬浮液或液体形式。所述药物组合物优选以含有特定量活性成分的剂量单位形式制得。例如，所述药物组合物可以包含约0.1至1000mg，优选约0.25至250mg，且更优选约0.5至100mg范围内的量的活性成分的片剂或胶囊提供。用于人类或其它哺乳动物的适合日剂量可根据患者的病况及其它因素而广泛变化，但可使用常规方法确定。
[0056]
在一个方面中，本发明提供了上述任一化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备预防或治疗与雌激素受体相关疾病药物中的应用。
[0057]
进一步的，本发明提供了上述任一化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物作为在制备预防或治疗肿瘤疾病药物中的应用；所述肿瘤优选为乳腺癌。
[0058]
更进一步的，本发明提供了上述任一化合物或其药学上可接受的盐，或其药物组合物作为选择性雌激素受体降解剂对erα具有较好的降解活性，能够很好的抑制乳腺癌细胞的增殖。
[0059]
定义和说明
[0060]
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
[0061]
这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
[0062]
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐、有机酸盐，还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
[0063]
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，盐的制备方法为：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
[0064]
本发明的某些化合物可以具有不对称碳原子(光学中心)或双键。外消旋体、非对映异构体、几何异构体和单个的异构体都包括在本发明的范围之内。
[0065]
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(r)-和(s)-对映体、非对映异构体、(d)-异构体、(l)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
[0066]
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(r)-和(s)-异构体以及d和l异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如
羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
[0067]
术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体，包括但不限于：粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂、润湿剂、分散剂、增溶剂、助悬剂等。
[0068]
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
[0069]
本发明意欲包括存在于本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素包括原子数相同但质量数不同的那些原子。作为一般实例且非限制性地，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括
13
c和
14
c。本发明的同位素标记化合物一般可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于本文所述的方法，使用适当同位素标记试剂代替另外使用的非标记试剂来制备。
[0070]
术语“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。例如，“任选地被一个或多个氘原子取代”是指所述基团可以是未被氘原子取代的情况、或者被一个或多个氘原子取代的情况，即包括了基团未被氘代、部分氘代和/或全部氘代的情况。
[0071]
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即＝o)时，意味着两个氢原子被取代。酮取代不会发生在芳香基上。
[0072]
除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基,可以是单取代(如-ch2f)或多取代的(如-cf3)，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。例如c
1-c6表示1至6个碳，c
1-10
选自c1、c2、c3、c4、c5和c6。
[0073]
除非另有规定，术语“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。术语“卤代烷基”意在包括单卤代烷基和多卤代直链或支链的烷基。例如，术语“卤代(c
1-c6)烷基”意在包括但不仅限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。除非另有规定，卤代烷基的实例包括但不仅限于：5，5，5-三氟戊基、4，4-二氟-5，5，5-三氟戊基。
[0074]
化合物经手工或者软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
具体实施方式
[0075]
下面结合具体实施例和试验例，进一步阐述本发明，但不以任何形式限制本发明的范围。
[0076]
实施例1：化合物a的合成
[0077][0078]
步骤1：化合物2的合成
[0079][0080]
将化合物1(6.0g,28.47mmol,1.0eq)、5,5-二氟-1,3,2-二氧乙基2,2-二氧化(4.9g,28.47mmol,1.0eq)和k2co3(7.8g,56.94mmol,2.0eq)在acn(100ml)中在80℃下搅拌6h。冷却到室温并过滤。滤液中加入tsoh(9.8g,56.94mmol,2.0eq)和水(100ml)。混合物在80℃下搅拌过夜。冷却至室温，用na2co3溶液调节ph～9，乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，取有机相，然后用无水na2so4进行干燥，过滤浓缩得到中间体2(7.7g，黄色油状)。
[0081]
步骤2：化合物3的合成
[0082][0083]
将中间体2(3.8g,14.16mmol,1.0eq)与4-溴-2,6-二氟苯甲醛(2.5g,14.16mmol,1.0eq)在甲苯(50ml)和acoh(6ml)中在90℃下搅拌4h。将混合物浓缩，用柱层析(ea/pe＝0-20％)对残留物进行纯化，得到中间体3(4.5g,黄色固体)，产率为67％。1h nmr(400mhz,dmso)δ10.60(s,1h),7.41(d,j＝8.6hz,3h),7.19(d,j＝8.0hz,1h),7.04-6.93(m,2h),5.30(t,j＝6.1hz,1h),5.21(s,1h),3.69-3.55(m,1h),3.50-3.36(m,2h),3.17(q,j＝15.3hz,1h),2.89(dd,j＝4.2,15.3hz,1h),2.66-2.56(m,2h),1.08(d,j＝6.6hz,3h)；ms m/z(esi)：471.1[m+1]。
[0084]
步骤3：化合物4的合成
[0085][0086]
将中间体3(5.0g,10.61mmol,1.0eq)，1-叔丁氧羰基-3-胺基环丁胺(2.2g,12.73mmol,1.2eq)，cs2co3(10.3g,31.83mmol,3.0eq)，pd2(dba)3(972mg,1.06mmol,0.1eq)和xantphos(1.2g,2.12mmol,0.2eq)溶解于二氧六环(50ml)中，110℃，n2保护下搅拌2h。将混合物浓缩，经过柱层析(ea/pe＝0～25％)纯化得中间体4(5.4g，黄色固体)，产率为90％。
[0087]
步骤4：化合物5的合成
[0088][0089]
向中间体4(5.4g，19.59mmol，1.0eq)的二氧六环溶液(60ml)中加入0℃的h2so4(9.3g，95.9mmol，10eq)，在室温下搅拌混合物1h。向混合物中加入nahco3水溶液(1.0m)至ph～9，用乙酸乙酯萃取，用食盐水洗涤，在na2so4上干燥并浓缩，得到中间体5(4.4g，黄色固体)。
[0090]
步骤5：化合物6的合成
[0091][0092]
将中间体5(3.0g，6.49mmol，1.0eq)、(2-溴乙基-4,4,5,5,5-五氟戊基)砜(1.9g，6.49mmol，1.0eq)和k2co3(1.8g，12.98mmol，2.0eq)的acn(40ml)混合液在室温下搅拌过夜。过滤，减压浓缩。通过快速柱层析(ea/pe＝0-9％)对所得残留物进行纯化，得到中间体6(1.1g，黄色固体)，产率为25％。
[0093]
步骤6：化合物7的合成
[0094][0095]
向中间体6(900mg，1.32mmol，1.0eq)和咪唑(269mg，3.96mmol，3.0eq)的thf(20ml)溶液中，加入tbscl(398mg，2.64mmol，2.0eq)。在室温下搅拌混合物过夜。浓缩混合物，通过柱层析(ea/pe＝0-50％)对残留物进行纯化，得到中间体7(600mg，黄色固体)，产率为57％。
[0096]
步骤7：化合物8的合成
[0097][0098]
向中间体7(600mg,0.75mmol,1.0eq)的ea/acoh(5ml/1ml)溶液中，加入h2o2(255mg,7.55mmol,10.0eq)。在室温下搅拌混合物7h。加入nahco3水溶液并加入ea(50ml
×
3)，用na2so4干燥有机层，过滤并浓缩，通过柱层析(meoh/dcm＝0-5％)纯化残留物，得到中间体8(270mg，黄色固体)，产率为44％。
[0099]
步骤8：化合物a的合成
[0100][0101]
向中间体8(270mg，0.33mmol，1.0eq)的thf(10ml)溶液中加入tbaf(173mg，0.66mmol，2.0eq)。在室温下搅拌混合物2h。加入乙酸乙酯并用nh4cl/nacl(1/1，30ml
×
3)清洗，用na2so4干燥有机层，过滤并浓缩，通过柱层析(meoh/dcm＝0-5％)纯化残留物，得到化合物a(160mg，黄色固体)，产率为69％。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.51(s,1h),7.37(d,j＝7.6hz,1h),7.18(d,j＝7.6hz,1h),7.00-6.91(m,2h),6.71(d,j＝6.8hz,1h),6.10(d,j＝12.4hz,2h),5.25-5.22(m,1h),5.05(s,1h),3.97-3.95(m,1h),3.67-3.63(m,3h),3.45-3.35(m,2h),3.14-3.06(m,1h),2.89-2.60(m,11h),2.49-2.32(m,2h),1.95-1.87(m,2h),1.06(d,j＝6.4hz,3h).ms m/z(esi)：699.1[m+1]。
[0102]
实施例2：化合物b的合成
[0103][0104]
采用实施例1类似的方式制备化合物b。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.57(s,1h),7.38(d,j＝7.6hz,1h),7.19(d,j＝8.0hz,1h),7.01-6.92(m,2h),6.73(d,j＝6.8hz,1h),6.11(d,j＝12.4hz,2h),5.11(s,1h),3.97-3.94(m,1h),3.68-3.65(m,2h),3.44-3.37(m,2h),3.95-2.55(m,11h),2.49-2.32(m,2h),1.95-1.89(m,2h),1.11(d,j＝6.4hz,3h).ms m/z(esi)：687.2[m+1]。
[0105]
实施例3：化合物c的合成
[0106][0107]
采用实施例1类似的方式制备化合物c。1h nmr:(400mhz,dmso-d6)δ10.57(br s,1h),7.38(d,j＝7.6hz,1h),7.19(d,j＝7.9hz,1h),7.04-6.92(m,2h),6.77-6.68(m,1h),6.18-6.07(m,2h),5.11(s,1h),4.00-3.89(m,1h),3.69-3.61(m,2h),3.50-3.38(m,3h),3.00-2.71(m,8h),2.69-2.64(m,1h),2.59-2.54(m,1h),2.46-2.42(m,1h),2.43-2.25(m,1h),1.97-1.85(m,2h),1.72-1.59(m,2h),1.11(d,j＝6.6hz,3h).ms m/z(esi)：701.2[m+1]。
[0108]
实施例4：化合物d的合成
[0109][0110]
步骤1：化合物10的合成
[0111][0112]
向化合物9(20.0g，112mmol，1.0eq)的dcm(200ml)溶液中加入tea(17.0g，168mmol，23.4ml，1.5eq)。加入toscl(25.6g，134mmol，1.2eq)。将混合物在25℃下搅拌12h。tlc显示化合物9反应完全。加入h2o(200ml)淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(150ml*3)萃取。用水溶液清洗合并的有机层。用饱和食盐水(100ml)清洗有机相，用na2so4干燥，过滤并减压浓缩。通过柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/1～20/1)对残留物进行纯化，得到中间体10(31.0g，无色油状)。
[0113]
步骤2：化合物11的合成
[0114][0115]
向化合物10(14.5g，43.6mmol，1.0eq)的丙酮(150ml)溶液中加入硫代乙酸钾(10.5g，92.5mmol，2.12eq)。将混合物在60℃下搅拌10h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝20:1)显示化合物10被完全消耗。加入h2o(150ml)淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(100ml*3)萃取。用水溶液清洗合并的有机层，然后用饱和食盐水(100ml)清洗有机相，用na2so4干燥，过滤并减压浓缩。通过柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/1～20/1)对残留物进行纯化得中间体11(4.20g，黄色油状)。
[0116]
步骤3：化合物12的合成
[0117][0118]
在0℃，氮气保护下，向1-溴-3-氯丙烷(4.20g，26.6mmol，2.62ml，1.5eq)的meoh(8.00ml)混合液中加入naome(1.44g，26.6mmol，1.5eq)。将混合物在20℃下搅拌30min。在氮气下加入化合物11(4.20g，17.7mmol，1.0eq)。将混合物在20℃下搅拌2h。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝20:1)显示化合物11被完全消耗。加入h2o(10ml)淬灭反应混合物，然后用dcm(10ml*3)萃取。用水溶液清洗合并有机层，然后用饱和食盐水(100ml)清洗有机相，用na2so4干燥，过滤并减压浓缩，通过柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/1～20/1)对残留物进行纯化得化合物12(1.50g，黄色油状)。
[0119]
步骤4：化合物13的合成
[0120]
3.58(m,3h),3.47-3.36(m,2h),3.14-3.02(m,1h),2.89-2.57(m,8h),2.41-2.27(m,2h),1.90(q,j＝7.7hz,2h),1.70-1.58(m,2h),1.54-1.47(m,1h),1.31-1.22(m,2h),1.06(d,j＝6.6hz,3h).ms m/z(esi)：713.3[m+1]。
[0128]
实施例6：化合物f的合成
[0129][0130]
采用实施例4类似的方式制备化合物f。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.52(s,1h),7.37(d,j＝7.5hz,1h),7.18(d,j＝7.9hz,1h),7.03-6.88(m,2h),6.70(br d,j＝6.6hz,1h),6.17-6.03(m,2h),5.25(br s,1h),5.11-5.01(m,1h),4.31-4.03(m,1h),3.99-3.88(m,1h),3.74-3.58(m,3h),3.47-3.36(m,2h),3.28-3.20(m,2h),3.16-2.99(m,3h),2.87-2.71(m,3h),2.68-2.53(m,2h),2.49-2.32(m,3h),1.94(qd,j＝8.1,15.8hz,2h),1.73-1.63(m,2h),1.12-1.01(m,3h).ms m/z(esi)：729.2[m+1]。
[0131]
实施例7：化合物g的合成
[0132][0133]
步骤1：化合物14的合成
[0134][0135]
在0℃下向化合物9(3.0g，16.8mmol，1.0eq)的thf溶液(90ml)中逐滴加入nah(2.02g，50.5mmol，60.0％，3.0eq)。加入后，在该温度下搅拌混合物，然后加入化合物苄基2-溴乙基醚(3.62g，16.8mmol，1.0eq)的thf(10ml)溶液在0-5℃下逐滴加入12h，tlc检测反应完全，用水淬灭反应。用乙酸乙酯(100mlx 3)提取水相。残留物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/1～10/1)纯化得到化合物14(1.10g，无色油状)。
[0136]
步骤2：化合物15的合成
[0137][0138]
在25℃氩气保护下，向化合物14(500mg，1.60mmol，1.0eq)的thf(10ml)溶液中加入pd(oh)2(100mg，142umol，20.0％纯度)。用h2对混悬液脱气3次。在50℃h2(50psi)下搅拌混合物4h。tlc显示起始物料完全消耗。过滤反应混合物并浓缩。残留物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100/1～10/1)纯化，得到化合物15(200mg，黄色油状)。
[0139]
步骤3：化合物16的合成
[0140][0141]
在25℃下向化合物15(350mg，1.58mmol，1.0eq)的dcm(10ml)溶液中逐滴加入tea(239mg，2.36mmol，1.5eq)和toscl(600mg，3.15mmol，2.0eq)。在40℃下搅拌混合物12h。tlc显示起始物料完全消耗。用h2o(10ml)稀释反应混合物，并用dcm(10ml x 3)萃取。用水溶液清洗合并的有机层。nacl(10mlx 3)，用na2so4干燥，过滤并减压浓缩。残留物经薄层层析(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化，得到化合物16(180mg，黄色油状)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.72(d,j＝8.38hz,2h)7.27(d,j＝8.13hz,2h)4.07-4.11(m,2h)3.53-3.58(m,2h)3.39(t,j＝5.94hz,2h)2.37(s,3h)1.92-2.06(m,3h)1.66-1.75(m,2h)。
[0142]
步骤4：化合物g的合成
[0143][0144]
在25℃下向化合物16(175mg，465umol，1.0eq)的acn(5ml)溶液中加入k2co3(193mg，1.40mmol，3.0eq)和中间体5(215mg，465umol，1.0eq)。在40℃下搅拌混合物15h。lcms显示起始物料完全消耗。用h2o(10ml)稀释反应混合物，并用溶剂(10ml x 3)萃取。用水溶液清洗合并的有机层。用饱和食盐水(10ml x 3)洗涤有机相，用na2so4干燥，过滤并减压浓缩。通过柱层析(meoh/dcm＝0-5％)纯化残留物，得到化合物g(82mg，白色固体)，收率为26.5％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.52(s,1h)7.38(d,j＝7.70hz,1h)7.18(d,j＝7.82hz,1h)6.91-7.01(m,2h)6.69(d,j＝6.60hz,1h)6.09(d,j＝12.10hz,2h)5.24(t,j＝6.05hz,1h)3.88-3.97(m,1h)5.05(s,1h)3.63(br t,j＝6.60hz,2h)3.43(br t,j＝
[0145]
6.17hz,4h)3.36(t,j＝5.69hz,3h)3.01-3.16(m,1h)2.77-2.86(m,3h)2.62(br d,j＝14.55hz,1h)2.55(br t,j＝5.75hz,3h)2.14-2.31(m,2h)1.68-1.77(m,2h)1.07(d,j＝6.60hz,3h).ms m/z(esi)：667.2[m+1]。
[0146]
试验例1.化合物对erα蛋白的降解作用
[0147]
1、试验目的
[0148]
本试验的目的是测定本发明化合物对erα蛋白的降解作用，根据dc
50
和最大降解效率e
max
评价化合物的体外降解活性。
[0149]
2、试验方法
[0150]
mcf-7细胞(atcc，htb-22)采用含10％fbs(excell bio，fsp500)、1％p/s(hyclone，sv30010)、1％glutamax(invitrogen，25030-061)的88％rpmi 1640(invitrogen，22400-089)培养基进行培养。实验第一天，离心、消化、收集细胞后，调整细胞悬液浓度至8.75
×
104个/ml，384孔板(greiner，781090)内每孔加入40μl悬液，置于37℃、5％co2培养箱中过夜。第二天，化合物用100％dmso配制成10mm储备液，并用1640完全培养基稀释至2.5μm(5x)，随后进行4倍浓度梯度稀释，共10个浓度点。以1μm氟维司群作为low control(lc)，0.5％dmso作为high control(hc)。于384孔板内每孔加入10μl对应化合物，37℃、5％co2培养箱中孵育24小时。第三天，384孔板每孔加入50μl 8％多聚甲醛(em sciences，15710-s)，室温固定40分钟；每孔加入100μl pbs洗涤2遍，随后每孔加入50μl 0.1％triton x-100(sigma，t9284)，室温放置15分钟；pbs洗涤培养板5遍，随后每孔加入50μl含0.1％tween 20(sigma，p1379)的封闭液，室温放置1小时；吸弃培养板内原有液体，将一抗(estrogen receptorα(d8h8)rabbit mab，cell signal，8644s)以1：1000进行稀释，每孔加入25μl，于4℃孵育过夜。第四天，培养板先洗涤5遍，随后将二抗(irdye 800cw goat anti-rabbit，licor，926-32211，1：1000)与draq5(cell signal，4084l，1：2000)用封闭液进行稀释，每孔加入25μl后室温孵育1小时；再将板洗5遍，于odyssey成像系统中分别读取800nm、700nm处信号值。抑制率通过ratio(800nm/700nm)进行计算，即％inhibition＝(assay well-average_hc)/(average_lc-average_hc)*100％，prism 5中采用“log(inhibitor)vs.response
‑‑
variable slope”拟合剂量-效应曲线，计算dc
50
；化合物最大降解率e
max
为500nm处理后细胞剩余erα的水平与500nm氟维司群处理后erα水平的百分比。
[0151]
3、测试结果
[0152]
本公开化合物对erα的降解活性通过in-cell-western试验进行测定，测得的dc
50
及e
max
见表1。
[0153]
表1本发明化合物对erα的降解作用
[0154]
化合物dc
50
(nm)e
max
降解(％)a0.4668.7b0.7565.8c1.6582.4d10.4093.7e1.2254.1f1.6585.9g3.9542.9
[0155]
结论：本发明公开的化合物a、b、c、d、f对erα具有较好的降解活性。
[0156]
试验例2.化合物对mcf-7细胞增殖的抑制作用
[0157]
1、实验目的
[0158]
本实验的目的是测定本发明化合物对mcf-7细胞体外增殖的抑制作用，根据ic
50
评价化合物的活性。
[0159]
2、实验方法
[0160]
mcf-7细胞(atcc，htb-22)采用含10％胎牛血清(hyclone，sv30087.03)、1％ps(青霉素-链霉素双抗，gibco，15070063)和1％glutamax(gibco，35050061)1640培养基(gibco，22400089)进行培养。实验第一天，离心、消化、收集细胞后，用完全培养基调整细胞浓度，以600个/孔细胞密度接种于384孔板(greiner-781091)内，每孔40μl细胞悬液，将培养板置于37℃、5％co2培养箱中过夜。第二天，化合物用100％dmso配制成10mm储备液，并用1640培养基进一步稀释至5μm(10x)，随后进行4倍浓度梯度稀释，共8个浓度点。以2μm氟维司群作为low control(lc)，0.5％dmso作为high control(hc)。于384孔板内每孔加入10μl对应化合物，37℃、5％co2培养箱中培养6天。第八天，培养板内每孔加入25μlcelltiter-glo(promega，g7573)，400转/分的转速在室温下孵育10分钟后，envision(perkinelmer)中读取发光信号。抑制率通过以下公式进行计算，即％inhibition＝(assay well-average_hc)/(average_lc-average_hc)*100％，采用prism 5“log(inhibitor)vs.response
‑‑
variable slope”拟合剂量-效应曲线，计算ic
50
。
[0161]
3、测定结果
[0162]
本公开化合物对mcf-7细胞的增殖抑制作用通过celltiter-glo检测活细胞内atp含量进行测定，测得的ic
50
见表2。
[0163]
表2本发明化合物对mcf-7细胞增殖的抑制作用
[0164]
化合物ic
50
(nm)a1.59b4.94c2.73d9.70e0.89f1.20g1.61
[0165]
结论：本发明公开的化合物对mcf-7细胞的增殖具有明显的抑制作用。
[0166]
试验例3.本发明化合物在体外肝微粒体中的代谢稳定性评价
[0167]
1、实验材料及试剂
[0168]
人肝微粒体、大鼠肝微粒体、nadph、阳性对照化合物氟维司群、甲醇、磷酸盐缓冲液、氯化镁溶液、乙腈、甲苯磺丁脲。
[0169]
2、溶液配置
[0170]
1)供试品工作液配置：将供试品用甲醇稀释至100μm；
[0171]
2)肝微粒体工作液配置：将肝微粒体用100mm磷酸盐缓冲液稀释至0.56mg/ml；
[0172]
3)还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadph)工作液配置：称取适量nadph用磷酸盐缓冲液稀释至20mm，再加入等体积的60mm的mgcl2溶液；
[0173]
4)终止液配置：用乙腈将甲苯磺丁脲稀释至20ng/ml，作为含内标的终止液。
[0174]
3、实验方法
[0175]
1)准备孵育抗吸附ep管，标记种属、供试品、对照品(睾酮、右美沙芬)、时间点(0、5、10、20、30、60min)、blank60、ncf60等；
[0176]
2)各管中加入2μl的供试品或对照品工作液和178μl肝微粒体工作液，blank管中加入2μl乙腈代替供试品，放入37℃水浴锅中预孵育约10min，每样本平行3份；
[0177]
3)预孵育结束后，除0min及ncf60外，每管中加入20μlnadph工作液启动反应，ncf60管中加入20μl磷酸盐缓冲液(含30mm的mgcl2)，孵育体系中供试品或对照品终浓度为1μm、肝微粒体终浓度为0.5mg/ml，nadph终浓度为1mm，mgcl2终浓度为3mm；
[0178]
4)0min样品先加入600μl终止液后再加nadph工作液，各样品孵育相应时间后加入600μl终止液终止反应；
[0179]
5)各样品终止反应后涡旋30s，然后13500rpm离心10min，取100μl上清液于ep管中加入100μl milli-q水涡旋混匀后，采用lc-ms/ms方法进行分析；
[0180]
6)相同条件下用睾酮和右美沙芬为阳性对照品，以检测体系的稳定性和可靠性。
[0181]
4、数据分析
[0182]
测试60min后供试品的剩余百分比，试验结果见表3。
[0183]
表3本发明化合物及对照化合物在大鼠、人肝微粒体中的代谢稳定性评价
[0184][0185]
结论：本发明公开的化合物a-g在体外大鼠和人肝微粒体的稳定性明显优于氟维司群。

技术特征：
1.式(i)所示化合物或其药学上可接受的盐，其中，x独立地选自-o-、-so-或-so
2-；m和n各自独立地选自0，1，2，3或4；r1独立地选自氢、卤素或-ch2oh；r2、r3相同或不同，各自独立地选自氢、卤素或c
1-6
烷基；r4独立地选自氢、卤素、取代或未被取代的c
1-10
直链或支链的烷基。2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，r1选自卤素或-ch2oh；优选的，r1为f或-ch2oh。3.根据权利要求1或2任一所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，r2、r3各自独立地选自卤素或c
1-4
烷基；优选的，r2、r3各自独立选自f、cl、br、i、甲基、乙基、异丙基、丁基、异丁基或仲丁基；更优选的，r2和r3均为f。4.根据权利要求1至3任一所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，r4独立选自被卤素取代的c
1-10
直链或支链的烷基；优选的，r4独立选自被卤素取代的c
1-6
直链或支链的烷基。5.根据权利要求1至4任一所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，r4选自-cf2cf3、-cf2chf2、-cf2ch2f、-cf2ch3、-chfcf3、-chfchf2、-chfch2f、-chfch3、-ch2cf3、-ch2chf2、-ch2ch2f、-ccl2ccl3、-cbr2cbr3或-ci2ci3；优选的，r4为-cf2cf3。6.根据权利要求1至5任一所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，m和n各自独立地选自2或3。7.根据权利要求1至6任一所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，x独立地选自-so-或-so
2-；m和n各自独立地选自2或3；r1独立地选卤素或-ch2oh，优选为f或-ch2oh；r2、r3均为f；r4独立地选自被卤素取代的甲基、乙基或丙基，优选为cf2cf3。8.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其选自以下化合物或其药学上可接受的盐：
9.一种药物组合物，包含权利要求1至8任一所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。10.权利要求1至8任一所述的化合物或其药学上可接受的盐，或权利要求9所述的药物组合物在制备预防或治疗与雌激素受体相关疾病药物中的应用；优选所述疾病为乳腺癌。

技术总结
本发明公开了一类作为雌激素受体降解剂的化合物或其药学上可接受的盐及其用途。所述化合物可用于治疗与雌激素受体相关的疾病，尤其是可以用于治疗乳腺癌，能够有效地抑制乳腺癌细胞的增殖。癌细胞的增殖。


技术研发人员：张睿 田京伟 马明旭 叶亮 王洪波 于鹏飞 代玉森
受保护的技术使用者：烟台创和生物科技有限公司
技术研发日：2023.03.23
技术公布日：2023/9/26