一种全面激活血小板基础凝集功能的激活剂配方及其制备方法与流程

1.本发明属于医用材料技术领域，涉及一种全面激活血小板基础凝集功能的激活剂配方及其制备方法。


背景技术：

2.血小板在维持正常止血中起着关键的作用。当暴露于受损的血管时，血小板将粘附在暴露的内皮下基质上，随后，在损伤的部位释放或产生的各种因子(如凝血酶、adp、胶原等)激活血小板。血小板激活后，血小板上的糖蛋白gpiib/iiia受体发生构象改变，使得其与多价纤维蛋白原结合，导致邻近的血小板补充到损伤部位并凝集形成止血塞或血栓。
3.体外血小板凝集依赖于血小板受到激活剂的激活作用而激活。其中，体外激活常用激活剂包括凝血酶受体激活剂(凝血酶受体激活肽1和凝血酶受体激活肽4)、肾上腺素、胶原、花生四烯酸(aa)、二磷酸腺苷(adp)、瑞斯托霉素等。
4.目前市场上绝大多数血小板凝集检测方法均是采用单一激活剂进行激活检测，从而检测出单一激活剂激活作用途径下的血小板凝集功能。例如：激活剂adp通过p2y12受体途径激活血小板，从而可以用于评估患者服用p2y12受体抑制剂类药物(如氯吡格雷、替格瑞洛)后的药效。例如：激活剂aa通过环氧酶-1途径激活血小板，从而可以用于评估患者服用环氧酶-1抑制剂类药物(如阿司匹林)后的药效。除了单独激活作用所报告出的结果以外，有些检测方式还会报告相对应的血小板抑制率。抑制率的报告对于医生和患者直接了解血小板相应激活途径下的凝集水平在血小板基础凝集水平中所占的比例提供了最直观的报告形式。
5.如果想要评价患者血小板的基础凝集功能，则需要采集患者服用影响血小板凝集功能药物前的血小板凝集水平，或者使用能够激活血小板最大凝集功能的激活剂进行激活并采集血小板的凝集水平。
6.目前市面上只有我公司的飞特凝@p2y12受体血小板凝集检测试剂卡(比浊法)和verifynow@p2y12受体相关血小板凝集功能检测试剂盒(比浊法)(目前没有在国内延续注册)，通过设置血小板的基础凝集功能采集通道来报告抑制率。
7.本发明是一种更加通用、更加可靠的可以激活血小板表现出血小板基础凝集水平的激活剂配方及制备方法。


技术实现要素：

8.本发明的目的在于提供一种全面激活血小板基础凝集功能的激活剂配方及其制备方法。
9.为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
10.一方面，本发明提供一种全面激活血小板基础凝集功能的激活剂配方，其主要激活剂成分包含凝血酶受体激活剂(par1和par4)、胶原、肾上腺素、adp、aa和瑞斯托霉素等，
并由其中的一种、几种及以上所有激活剂共同搭配的复合形式在内的不同激活剂组合形式。激活剂的含量以及组合形式可以满足在不同的反应时间内评估血小板的最大凝集功能。
11.另一方面，本发明所述的激活剂配方的形式为液体或冻干品，其中冻干品为冻干饼、球、粉等。激活剂可以为液体形式或者冻干形式进行使用。其中液体形式溶液可以为超纯水、生理盐水、缓冲液等基础液。其中可以添加防腐剂、蛋白保护剂、表面活性剂、增黏剂等添加剂。冻干形式溶液可以为超纯水、生理盐水、缓冲液等基础液。其中可以添加防腐剂、蛋白保护剂、表面活性剂、增黏剂、填充剂等添加剂。冻干品的制备由激活剂、液体基质和辅料等成分组合而成。
12.优选的，所述激活剂浓度依据下表中所示进行选择及组合：
13.激活剂名称激活剂浓度凝血酶受体i(par1)激活剂1～10μm凝血酶受体iv(par4)激活剂1～100μm胶原1～50μg/ml肾上腺素0.5～10μmadp0.5～20μmaa0.5～2mm瑞斯托霉素0.5～1.5mg/ml
14.优选的，所述冻干品的辅料包含防腐剂、蛋白保护剂、表面活性剂、增黏剂、填充剂等添加剂成分。成分及浓度可以参考但不局限于下表：
15.名称含量微晶纤维素0～5％蔗糖0～10％乳糖0～5％peg80000～5％peg200000～5％吐温800～0.5％bsa0～3％叠氮钠0～0.5％
16.优选的，所述激活剂配方的分散基质为生理盐水、pbs、tris、硼酸、碳酸、mes、hepes等缓冲液中的一种或者混合。其中，可以添加防腐剂、蛋白保护剂、表面活性剂、增黏剂等一种或几种添加剂。
17.优选的，本配方可加入到浓缩血小板、含血小板血浆和全血等待测样本中进行使用，或者将样本引入到含有激活剂的装置中进行使用。
18.优选的，本配方配合本公司的血小板功能检测产品飞特凝@系列产品和西芬斯@血栓弹力图系列产品等相关产品进行使用。
附图说明
19.图1为飞特凝@试剂卡示意图。所述激活剂可预置在检测通道(1、2、3、4)中，待样本
进入后，激活剂与样本混合后发挥激活作用。
20.图2为不同激活剂配方激活时间效果示意图。不同激活剂配方，由于激活速度的不同，可以在不同测试时长下达到最大的基础聚集率程度。
21.图3为不同激活剂配方激活聚集率效果示意图。不同激活剂配方，由于激活程度的不同，可以在相同测试时长下达到不同的基础聚集率程度。
具体实施方式
22.下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
23.实施例1
24.本配方由凝血酶受体激活剂par1激活肽和par4激活肽为主要成分组成。其中：par1母液浓度为1mm；par4母液浓度为1mm。分散基质为0.01m pbs(ph＝7.4，添加0.5％bsa、0.5％pvp、0.5％吐温20和0.1％叠氮钠作为保护剂和稳定剂)。激活实验中，将100μl的激活剂加入到1.9ml的新鲜枸橼酸钠抗凝全血中，利用本公司的飞特凝检测平台进行检测。检测结果表明可在1.5～2分钟达到最大聚集率。
25.实施例2
26.本配方由凝血酶受体激活剂par1激活肽和par4激活肽、肾上腺素、胶原为主要成分组成。其中：par1激活肽母液浓度为1mm；par4激活肽母液浓度为1mm；肾上腺素母液浓度为0.1mm；胶原母液浓度为0.5mg/ml。分散基质为0.05m tris(ph＝7.5，添加5％蔗糖、0.5％酪蛋白钠、1％peg20000、0.5％曲拉通和0.2％叠氮钠作为保护剂和稳定剂)。激活实验中，将四种激活剂母液混合后，取1μl加入到1.0ml的新鲜枸橼酸钠抗凝全血中，利用本公司的飞特凝检测平台进行检测。检测结果表明可在10～20分钟达到最大聚集率。
27.实施例3
28.本配方由凝血酶受体激活剂par1激活肽和par4激活肽、adp、aa、肾上腺素为主要成分组成。其中：par1激活肽母液浓度为1mm；par4激活肽母液浓度为1mm；aa母液浓度为5mm；adp母液浓度为0.5mm；肾上腺素母液浓度为1mm。分散基质为生理盐水。辅料成分如下表所示：
29.名称含量微晶纤维素1.50％蔗糖5.00％乳糖1.00％peg80002％peg200001％吐温800.50％bsa1％叠氮钠0.10％
30.各取100μl激活剂母液加入到混匀好的5ml的辅料中，涡旋混匀后，用分液器以10μl每滴的体积，将激活剂复合溶液匀速滴入到液氮中。待液滴冻实后，在低温条件下将冷冻球转移到1.5ml离心管中，并进行冷冻干燥。预冷时间30分钟，冻干时间48小时，然后以2℃
每分钟的升温速度升温至24℃，冻干结束。冷冻球在冻干结束后呈现为球状或者近似球状的冻干球。
31.激活实验中，取3粒冻干球，加入到0.1ml的新鲜枸橼酸钠抗凝全血中，利用本公司的飞特凝检测平台进行检测。检测结果表明可在5分钟达到最大聚集率。取1粒冻干球，加入到0.1ml的新鲜枸橼酸钠抗凝全血中，利用本公司的飞特凝检测平台进行检测。检测结果表明可在5分钟达到最大聚集率的45％。
32.申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的制备工艺及使用方法，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

技术特征：
1.本发明所述激活剂配方中的主要激活剂成分包含凝血酶受体(par1和par4)激活剂、胶原、肾上腺素、adp、aa和瑞斯托霉素，并由其中的任意一种及以上的组合并包含所有激活剂共同搭配的复合形式在内的不同激活剂组合形式。2.根据权利要求1所述，其特征在于：激活剂配方由其中任意一种激活剂形成。3.根据权利要求1所述，其特征在于：激活配方包含由凝血酶受体激活剂与其它几种中任意一种组合而成的二元复合激活剂形式，或者权利要求1中所述激活剂中的任意2种。4.根据权利要求1所述，其特征在于：激活配方包含由凝血酶受体激活剂与胶原及权利要求1所述中其它任意一种组合而成的三元复合激活剂形式或者权利要求1中所述激活剂中的任意3种。5.根据权利要求1所述，其特征在于：激活配方包含由凝血酶受体激活剂、胶原、肾上腺素及权利要求1所述中任其它任意一种组合而成的四元复合激活剂形式或者权利要求1中所述激活剂中的任意4种。6.根据权利要求1所述，其特征在于：激活配方包含由凝血酶受体激活剂、胶原、肾上腺素、adp及权利要求1所述中任其它任意一种组合而成的五元复合激活剂形式或者权利要求1中所述激活剂中的任意5种。7.根据权利要求1所述，其特征在于：激活配方包含由凝血酶受体激活剂、胶原、肾上腺素、adp、aa及权利要求1所述中任其它任意一种组合而成的六元复合激活剂形式或者权利要求1中所述激活剂中的任意6种。8.根据权利要求1～7所述，其特征在于：所述任意激活剂组合的表观形态为液体或者冻干品；其中，冻干品为冻干饼、冻干球、冻干粉等形态；其中，基础液为超纯水、生理盐水、缓冲液等基础液；其中，添加剂成份包括：防腐剂、蛋白保护剂、表面活性剂、增黏剂、填充剂等添加剂。9.根据权利要求1～8所述，该激活剂配方可搭配本公司血小板功能检测产品进行使用也可用于其它市面相关产品的使用及相关新产品的应用。10.根据权利要求1～9所述，所述激活剂配方适用于浓缩血小板、含血小板血浆和全血样本。

技术总结
本发明提供一种全面激活血小板基础凝集功能的激活剂配方及其制备方法,所述激活剂配方可以配合本公司的飞特凝系列产品作为血小板凝集功能的基线通道的激活剂进行使用，也可以用于其它血小板功能检测试剂中最大血小板凝集水平的产生，并可由此计算特定血小板激活剂途径下的血小板抑制率。剂途径下的血小板抑制率。剂途径下的血小板抑制率。


技术研发人员：聂延召 李奎 胡飞 邱笑违
受保护的技术使用者：北京乐普诊断科技股份有限公司
技术研发日：2022.12.22
技术公布日：2023/9/23