快速定量检测芬太尼的试剂、试纸条及方法

1.本发明涉及毒品检测技术领域，特别是涉及一种快速定量检测芬太尼的试剂、试纸条及方法。


背景技术：

2.针对芬太尼的检测和分析，在已报道的方法中大多采用的是大型仪器。目前可用的芬太尼检测技术，包括气相色谱/质谱法(gc/ms)、液相色谱/质谱法(lc/ms)、表面增强拉曼光谱检测法、离子迁移率光谱检测法、免疫分析法、电化学方法等。这些仪器虽然可以达到准确的芬太尼检测，但是大多存在设备体积庞大、分析成本高、操作复杂、检测时间长等问题，尤其不能应用于现场检测，这就十分影响现场的芬太尼检测进度。这些缺点使得越来越多的研究者致力于开发一种便携式和低成本的检测方法，以实现具有高选择性的在现场快速检测芬太尼。
3.

技术实现要素：

4.针对上述问题，本发明提供了一种快速定量检测芬太尼的试剂、试纸条及方法，能够通过视觉比色法，快速明显的辨别出是否含有芬太尼以及确定芬太尼的浓度，具有操作简单、成本低廉、便于携带等优点，解决了目前国内对于现场快速检测芬太尼的一大难题。
5.本发明的技术方案如下：
6.一种快速定量检测芬太尼的试剂，该试剂主要由至少一种化学染料、至少一种表面活性剂和至少一种溶剂组成；其中，至少一种所述化学染料包括孟加拉玫瑰红(rosebengal，rb)染料；至少一种所述表面活性剂包括阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和非离子型表面活性剂中的至少一种。
7.在进一步的技术方案中，至少一种所述表面活性剂中至少包括非离子型表面活性剂，该非离子型表面活性剂为pluronic*f-127非离子型表面活性剂。
8.在进一步的技术方案中，至少一种所述溶剂包括用于与孟加拉玫瑰红染料配制孟加拉玫瑰红溶液的酸性溶剂，和用于与pluronic*f-127非离子型表面活性剂配制pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液的纯水。
9.在进一步的技术方案中，所述孟加拉玫瑰红溶液和pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液的体积比为1：1。
10.在进一步的技术方案中，所述孟加拉玫瑰红溶液的浓度为0.06mm-0.2mm，所述pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液的浓度为0.1mm-5mm。
11.在进一步的技术方案中，所述酸性溶剂的ph范围为3.0-5.0，可以为孟加拉玫瑰红染料提供良好的酸性反应环境，使得其可以在酸性条件下与芬太尼具有良好的反应能力。
12.上述技术方案的工作原理如下：
13.表面活性剂与孟加拉玫瑰红染料相互作用可形成络合物，使染料本身的性质发生
变化。pluronic*f-127非离子型表面活性剂是一种三嵌段共聚物，与孟加拉玫瑰红染料作用，会与其作为卤素键受体的碘位点结合，使溶液体系的吸光度下降，引入芬太尼时，芬太尼与pluronic*f-127非离子型表面活性剂形成竞争关系，大部分的pluronic*f-127非离子型表面活性剂与孟加拉玫瑰红染料结合的位点被芬太尼所替代，使得pluronic*f-127非离子型表面活性剂对孟加拉玫瑰红染料的吸光度抑制减弱，吸光度上升，同时由于芬太尼与孟加拉玫瑰红染料的协同作用，使得溶液颜色发生了由淡红色到紫色的明显变化，达到了检测芬太尼的目的。
14.此外，本发明对于孟加拉玫瑰红溶液和pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液的浓度设定进行了创造性的考量，由于孟加拉玫瑰红溶液与pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液的浓度依赖于芬太尼的浓度，本发明将孟加拉玫瑰红溶液浓度设定为0.06mm-0.2mm，pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液的浓度设定为0.1mm-5mm，可以达到更好且有效的芬太尼检测。在pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液浓度一定的情况下，若孟加拉玫瑰红溶液浓度低于0.06mm(或高于0.2mm)，则加入pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液后，溶液体系吸光度再次下降(或几乎不下降)，检测芬太尼时，溶液体系吸光度达不到明显的上升，也达不到明显的变色效果；同理，在孟加拉玫瑰红溶液浓度一定时，若pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液的浓度低于0.1mm，则加入孟加拉玫瑰红溶液后，溶液体系不会发生明显的吸光度下降，检测芬太尼时，达不到明显的效果，而pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液浓度高于5mm时，溶液体系的吸光度下降到一定程度后不会再发生明显的下降，为了避免原料的浪费，选择5mm以内的pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液浓度。
15.另外，采用本发明的试剂对芬太尼进行检测时，配制芬太尼标准溶液的溶剂为甲醇，为降低甲醇溶剂的影响，将其用纯水稀释为多份且浓度不同的芬太尼水溶液(例如5mg/l、10mg/l、20mg/l、50mg/l、100mg/l、200mg/l等)，便于后续检测。
16.检测时，将配制好的芬太尼检测试剂与不同浓度的芬太尼水溶液按体积比1:1混合，用紫外-可见光分光光度计测定吸光度值并获得相应的标准曲线，具体的，芬太尼检测试剂和芬太尼水溶液体积各为0.5ml，芬太尼检测试剂中包括孟加拉玫瑰红溶液和pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液各0.25ml。
17.本发明还提供了一种可快速定量检测芬太尼的试纸条，其技术方案如下：
18.一种快速定量检测芬太尼的试纸条，包括底板、负载在底板上的样品垫和浸透在样品垫上的孟加拉玫瑰红溶液；
19.所述底板为0.5mm厚的abs白板，裁剪规格为7cm
×
0.8cm；
20.所述底板通过结合胶与样品垫粘合，结合胶可选用宽度为1cm的双面胶，贴于底板一端；
21.所述样品垫包括但不限于滤纸、a4白纸、医用棉花、双层医用脱脂纱布中的至少一种。
22.在本发明的芬太尼检测试纸条制备方法中，由于需要达到便携式的要求，故需要将显色剂(孟加拉玫瑰红溶液)负载于便携式的试纸条上。选择0.5mm厚的abs塑料白板，裁剪为7cm
×
20cm的大小，作为试纸条底板；将宽度为1cm的双面胶贴于abs白板长边，作为承接底板与样品垫的结合胶；然后将贴有双面胶的abs白板裁剪成7cm
×
0.8cm规格的试纸条；
样品垫选择用医用脱脂纱布，将双层医用脱脂纱布贴在双面胶上，按试纸条边缘裁剪整齐，得到空白试纸条。
23.在进一步的技术方案中，所述孟加拉玫瑰红溶液的浓度为0.1mm-0.2mm，体积为20ml，由于乙醇易挥发，故选择无水乙醇作为所述孟加拉玫瑰红溶液的溶剂，配制20ml0.1mm的孟加拉玫瑰红溶液，便于对所述空白试纸条进行合适的染色深度。
24.本发明还提供了依据上述试纸条进行快速定量检测芬太尼的方法，其技术方案如下：
25.一种快速定量检测芬太尼的方法，包括以下步骤：
26.s1、取底板和样品垫通过双面胶粘合制备空白试纸条；
27.s2、将制备好的空白试纸条浸入配制好的孟加拉玫瑰红溶液中，停留3s取出，然后在60℃的鼓风干燥箱中烘5min，得到芬太尼检测试纸条；
28.s3、用纯水稀释芬太尼标准溶液成多份且不同浓度的芬太尼水溶液；
29.s4、取上述配制好的芬太尼标准溶液，为了使整个显色过程操作简单、显色稳定，检测时的每份芬太尼标准溶液体积均为1ml，空白组为1ml的纯水；将制备好的芬太尼检测试纸条浸入上述不同浓度的芬太尼标准溶液中，轻微搅动5s，甩去多余的溶液，静置2min后，即可得到显色不同的试纸条，采用图片的方式记录颜色，并通过移动终端提取图片中不同浓度下对应的试纸条的rgb值，形成标准比色卡的形式；
30.s5、将芬太尼检测试纸条浸于待测液体中，并通过将芬太尼检测试纸条显示的颜色与比色卡进行对比，完成芬太尼快速定量检测。
31.在进一步的技术方案中，对于尿液中芬太尼的萃取，所选用的萃取剂为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、环己烷、石油醚、甲苯、正丁醇或乙腈，其中，选择二氯甲烷作为萃取剂的萃取效果最佳。
32.本发明的有益效果是：
33.1、本发明的芬太尼检测试剂具有良好的选择性，可以实现对芬太尼精准的检测，灵敏度高，检测限低至0.2mg/l，反应变色快速明显，可由红色变为紫色，可以进行批量快速筛查粉末或水样是否含有芬太尼物质，现场检测可以大幅度节约检测时间，同时，该试剂无毒无害，具有环境友好的优点；
34.2、本发明的芬太尼检测试纸条，抗干扰能力强，具有与芬太尼特定的显色反应，发生可观的红色至紫色的颜色变化，对于现场快速定量检测是否含有芬太尼有重要意义，同时，该芬太尼检测试纸条制作成本低、操作简单、便于携带、绿色环保，可实现政府、普通企业和机构的检测需求，另外，所述芬太尼检测试纸条现测现用，不需要复杂的前处理步骤，可实现现场快速定量的芬太尼检测。
附图说明
35.图1是本发明实施例1中孟加拉玫瑰红溶液与油酸钠溶液反应的吸光度变化值曲线图；
36.图2是本发明实施例1中孟加拉玫瑰红溶液与聚醚p123溶液反应的吸光度变化值曲线图；
37.图3是本发明实施例1中孟加拉玫瑰红溶液与十二烷基硫酸钠溶液反应的吸光度
变化值曲线图；
38.图4是本发明实施例1中孟加拉玫瑰红溶液与癸烷基硫酸钠溶液反应的吸光度变化值曲线图；
39.图5是本发明实施例1中孟加拉玫瑰红溶液与pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液反应的吸光度变化值曲线图；
40.图6是本发明实施例1中孟加拉玫瑰红溶液与不同表面活性剂反应的吸光度变化值柱状图；
41.图7是本发明实施例2中不同ph条件下，紫外吸收峰下吸光度变化值的散点图；
42.图8是本发明实施例2中不同孟加拉玫瑰红溶液浓度条件下，紫外吸收峰下吸光度变化值的柱状图；
43.图9是本发明实施例2中孟加拉玫瑰红和pluronic*f-127非离子型表面活性剂混合溶液的反应动力学，以549nm处的吸光度差值δa-反应时间作图；
44.图10是本发明实施例2中不同芬太尼浓度下的反应动力学，以549nm处的吸光度差值δa-反应时间作图；
45.图11是本发明实施例3中不同芬太尼浓度下的紫外吸收光谱图；
46.图12是本发明实施例3中不同芬太尼浓度下，紫外吸收峰下吸光度变化值的拟合曲线图；
47.图13是本发明实施例3中不同芬太尼浓度下的颜色反应图；
48.图14是本发明实施例4中含不同芬太尼浓度的纯水环境的紫外吸收光谱图；
49.图15是本发明实施例4中含不同芬太尼浓度的纯水环境，紫外吸收峰下吸光度变化值的拟合曲线图；
50.图16是本发明实施例4中不同芬太尼浓度下的颜色反应图；
51.图17是本发明实施例4中含不同芬太尼浓度的纯水和人体尿液，紫外吸收峰下吸光度变化值的柱状图；
52.图18是本发明实施例4中含不同芬太尼浓度的纯水和人体尿液的颜色反应对比图；
53.图19是本发明实施例5中制作的芬太尼检测试纸条；
54.图20是本发明实施例5中制作的芬太尼检测标准比色卡；
55.图21是采用本发明实施例5中所述试纸条快速定量检测芬太尼的过程图。
具体实施方式
56.下面结合附图对本发明的实施例作进一步说明。
57.实施例1：
58.一种用于快速定量检测芬太尼的试剂，其配制过程如下：
59.(1)芬太尼检测试剂的配制：孟加拉玫瑰红溶液浓度范围0.06mm-0.2mm，以0.1mm为例，酸性溶液的ph范围为3.0-5.0，以4.0为例，称量0.0041g孟加拉玫瑰红粉末，配制初始浓度为0.2mm，体积为20ml的孟加拉玫瑰红溶液作为显色剂；配制初始不同浓度的不同种类的表面活性剂，如10mm10ml的pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液、0.1mm10ml的聚醚p123溶液、10mm10ml的十二烷基硫酸钠溶液、0.5mm10ml的油酸钠溶液、20mm10ml的癸烷基
硫酸钠溶液，上述表面活性剂的溶剂均为纯水。
60.(2)表面活性剂的选择：取步骤(1)中0.5ml孟加拉玫瑰红溶液与不同种类的表面活性剂分别在不同浓度下按体积比1:1混合，得到的反应液用紫外-可见光分光光度计测量400nm-700nm范围内的吸光度，并记录空白组和实验组紫外数据。认为表面活性剂的加入可以引起孟加拉玫瑰红溶液本身的吸光度下降的最多的为最佳的表面活性剂，由于孟加拉玫瑰红溶液本身的紫外吸收峰在549nm处，故以549nm处的实验组减去空白组的吸光度差值δa与表面活性剂种类作图，得到最佳表面活性剂的种类及浓度。
61.本实施例中，孟加拉玫瑰红溶液与不同表面活性剂反应的吸光度变化值曲线图及柱状图如图1-图6所示。
62.实施例2：
63.本实施例对上述检测试剂的配制及应用条件进行优化，具体如下：
64.一、优化ph
65.(1)配制不同浓度的芬太尼水溶液：取1ml1mg/ml的芬太尼标准品溶液，芬太尼标准溶液的溶剂为甲醇，为降低甲醇溶剂的影响，将其用纯水稀释为多份且不同浓度的芬太尼水溶液，以浓度20mg/l的芬太尼水溶液为例进行实验。
66.(2)芬太尼检测试剂的配制：称取11组0.0041g的孟加拉玫瑰红粉末，分别溶于10mlph不同的br缓冲液(ph为3、3.3、3.5、3.7、3.9、4、4.2、4.4、4.6、4.8、5)，配制11组ph不同的0.4mm10ml的孟加拉玫瑰红溶液；称取0.0065gpluronic*f-127非离子型表面活性剂粉末，溶于10ml的纯水，配制4mm10ml的pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液，孟加拉玫瑰红溶液和pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液按体积比1:1反应，总体积为0.5ml。
67.(3)将上述步骤(2)不同ph的芬太尼检测试剂按体积比1:1，与20mg/l0.5ml芬太尼溶液反应，体系总体积为1ml。5min后，对得到的反应液用紫外-可见光分光光度计测量400nm-700nm范围内的吸光度，并记录空白组和实验组紫外数据。以549nm处的吸光度差值δa-ph作图，得到最佳反应ph值为4.2。
68.在本实施例中，不同ph条件下，紫外吸收峰下吸光度变化值的散点图如图7所示。
69.二、优化孟加拉玫瑰红溶液浓度
70.(1)配制不同浓度的芬太尼水溶液：芬太尼标准溶液的溶剂为甲醇，为降低甲醇溶剂的影响，将其用纯水稀释至浓度为20mg/l的芬太尼水溶液。
71.(2)芬太尼检测试剂的配制：称取11组不同质量的孟加拉玫瑰红粉末，分别溶于10mlph＝4.2的br缓冲液中，配制11组不同浓度(0.04mm、0.12mm、0.2mm、0.24mm、0.32mm、0.4mm、0.48mm、0.56mm、0.64mm、0.72mm、0.8mm)的孟加拉玫瑰红溶液；称取0.0065gpluronic*f-127非离子型表面活性剂粉末，溶于10ml的纯水，配制4mm10ml的pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液，孟加拉玫瑰红溶液和pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液按体积比1:1反应，总体积为0.5ml。
72.(3)将上述步骤(2)不同浓度的芬太尼检测试剂按体积比1:1，与20mg/l0.5ml芬太尼溶液反应，体系总体积为1ml。5min后，对得到的反应液用紫外-可见光分光光度计测量400nm-700nm范围内的吸光度，并记录空白组和实验组紫外数据。不同孟加拉玫瑰红溶液浓度条件下，紫外吸收峰下吸光度变化值的柱状图如图8所示。以549nm处的吸光度差值δa-孟加拉玫瑰红溶液浓度作图，如图9所示，得到孟加拉玫瑰红溶液最终反应后的最佳浓度值
为0.14mm，对应的初始浓度为0.56mm。
73.三、优化反应时间
74.(1)配制不同浓度的芬太尼水溶液：芬太尼标准溶液的溶剂为甲醇，为降低甲醇溶剂的影响，将其用纯水稀释至浓度为2mg/l、20mg/l、40mg/l的芬太尼水溶液。
75.(2)芬太尼检测试剂的配制：称取0.0057g的孟加拉玫瑰红粉末，溶于10ml ph＝4.2的br缓冲液中，配制0.56mm10ml的孟加拉玫瑰红溶液；称取0.0065gpluronic*f-127非离子型表面活性剂粉末，溶于10ml的纯水，配制4mm10ml的pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液。
76.(3)测定孟加拉玫瑰红与pluronic*f-127非离子型表面活性剂混合溶液的吸光度随时间的变化：取上述步骤(2)中孟加拉玫瑰红溶液0.5ml，pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液0.5ml于规格为1.2ml的比色皿中，放置紫外仪器的凹槽中，用紫外-可见光分光光度计测动力学过程，测定吸光度为549nm下的吸光度，测定时长为10min，间隔1min，发现孟加拉玫瑰红与pluronic*f-127非离子型表面活性剂混合溶液随时间延长，吸光度下降。
77.(4)进一步测定加入不同芬太尼浓度下，溶液体系吸光度随时间的变化：取上述步骤(2)中孟加拉玫瑰红溶液0.25ml，pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液0.25ml于规格为1.2ml的比色皿中，放置紫外仪器的凹槽中，分别再向比色皿中加入0.5ml，浓度为2mg/l、20mg/l、40mg/l的芬太尼溶液(芬太尼溶液最终浓度分别为1mg/l、10mg/l、20mg/l)，用紫外仪测动力学过程，测定吸光度为549nm下的吸光度，测定时长为10min，间隔1min，在不同芬太尼浓度下的反应动力学，以549nm处的吸光度差值δa-反应时间作图，如图10所示，发现随着时间的延长，加入ftn后的溶液吸光度在逐渐升高，至7min时趋于稳定，故检测芬太尼的最佳反应时间为7min。
78.实施例3：
79.本实施例测定了上述检测试剂的检测范围及检出限，具体过程如下：
80.(1)配制不同浓度的芬太尼水溶液：芬太尼标准溶液的溶剂为甲醇，为降低甲醇溶剂的影响，将其用纯水稀释至浓度为0mg/l、0.1mg/l、0.2mg/l、0.6mg/l、1mg/l、1.4mg/l、2mg/l、4mg/l、8mg/l、12mg/l、16mg/l、20mg/l的芬太尼水溶液。
81.(2)芬太尼检测试剂的配制：同实施例2中的优化反应时间步骤(2)。
82.(3)将步骤(2)中孟加拉玫瑰红溶液与pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液按体积比1:1反应，总体积为0.5ml，再加入0.5ml步骤(1)中得到的不同浓度下的芬太尼溶液，总体积为1ml。将得到的反应液用紫外可见分光光度计测量400nm-700nm范围内的吸光度，记录549nm波长下的空白组与实验组的吸光度，得到不同芬太尼浓度下的紫外吸收光谱图如图11所示，并拟合吸光度与芬太尼浓度的标准曲线，得到纵坐标为549nm下吸光度差值δa，横坐标为芬太尼浓度的线性关系图，具体如图12所示，芬太尼浓度与δa的线性关系式为a＝0.008192797*c+0.008106484，所述线性关系式的相关系数的平方r2为0.99864.该试剂可以检测到芬太尼浓度的范围为0.5-10mg/l，检出限为0.2mg/l。
83.(4)同时也发现，随着检测芬太尼浓度的增加，溶液颜色发生了由红到紫的可观变化，可以实现现场快速检测芬太尼，不同芬太尼浓度下的颜色反应图如图13所示。
84.实施例4：
85.本实施例利用上述检测试剂检测实际样品中芬太尼含量，包括以下步骤：
86.一、用于检测纯水中芬太尼的含量
87.(1)配制不同浓度的芬太尼水溶液：芬太尼标准溶液的溶剂为甲醇，为降低甲醇溶剂的影响，将其用纯水稀释至浓度为0mg/l、0.1mg/l、0.4mg/l、0.7mg/l、1mg/l、2mg/l、4mg/l、6mg/l、8mg/l、10mg/l、15mg/l、20mg/l的芬太尼水溶液。
88.(2)芬太尼检测试剂的配制：同实施例2中的优化反应时间步骤(2)。
89.(3)对纯水中的芬太尼进行萃取：取0.5ml步骤(1)中不同浓度的芬太尼溶液于2ml规格的离心管中，加入0.5ml二氯甲烷，用超声波清洗机对离心管中溶液超声5min，再用离心机在5000rad的转速下离心1min，保证二氯甲烷对水样中芬太尼的充分萃取。溶液静置分层后，取下层0.5ml溶液至不同的5ml玻璃瓶中，在磁力搅拌器上加热至40℃烘干，得到萃取后的芬太尼粉末。
90.(4)向步骤(3)玻璃瓶中加入步骤(2)中孟加拉玫瑰红溶液与pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液，二者体积比1:1，总体积为2ml。将得到的反应液用紫外可见分光光度计测量400nm-700nm范围内的吸光度，记录549nm波长下的空白组与实验组的吸光度，含不同芬太尼浓度的纯水环境的紫外吸收光谱图如图14所示，并拟合吸光度与芬太尼浓度对数的线性相关曲线，如图15所示，得到纵坐标为549nm下吸光度差值δa，横坐标为芬太尼浓度对数的线性关系图，芬太尼浓度与δa的线性关系式为a＝0.04271c+0.01806，所述线性关系式的相关系数的平方r2为0.96653.该试剂可以检测到芬太尼浓度的范围为0.4-20mg/l，检出限为0.0365mg/l。
91.(5)同时也发现，随着检测芬太尼浓度的增加，溶液颜色发生了由红到紫的可观变化，可以实现现场快速检测芬太尼，不同芬太尼浓度下的颜色反应图如图16所示。
92.二、用于检测人体尿液中芬太尼的含量
93.(1)模拟含不同浓度芬太尼的尿液环境：为验证二氯甲烷对芬太尼的萃取效果，模拟人体尿液中含芬太尼的环境，选取部分芬太尼浓度进行模拟，然后与上述步骤的实验结果进行对照。芬太尼标准溶液的溶剂为甲醇，为降低甲醇溶剂的影响，将其用纯水稀释至浓度为0mg/l、2mg/l、10mg/l、20mg/l、40mg/l的芬太尼水溶液。再将不同浓度的芬太尼水溶液与人体尿液按体积比1:1混合，得到总体积为0.5ml的含不同芬太尼浓度(0mg/l、1mg/l、5mg/l、10mg/l、20mg/l)的尿液。
94.(2)芬太尼检测试剂的配制：同实施例2中的优化反应时间步骤(2)。
95.(3)对纯水中的芬太尼进行萃取：取0.5ml步骤(1)中含不同浓度芬太尼的尿液于2ml规格的离心管中，加入0.5ml二氯甲烷，用超声波清洗机对离心管中溶液超声5min，再用离心机在5000rpm的转速下离心1min，保证二氯甲烷对尿液中芬太尼的充分萃取。溶液静置分层后，取下层0.5ml溶液至不同的5ml玻璃瓶中，在磁力搅拌器上加热至40℃烘干，得到萃取后的芬太尼粉末。
96.(4)向步骤(3)玻璃瓶中加入步骤(2)中孟加拉玫瑰红溶液与pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液，二者体积比1:1，总体积为2ml。将得到的反应液用紫外可见分光光度计测量400nm-700nm范围内的吸光度，记录549nm波长下的空白组与实验组的吸光度，如图17所示，得到纵坐标为549nm下的吸光度(包括实施例4中步骤(4)纯水中检测芬太尼的吸光度以及本实施例中尿液中检测芬太尼的吸光度)，横坐标为芬太尼浓度的柱状图。在每一种芬太尼浓度下，将含同浓度芬太尼的尿液与纯水作对比，发现尿液中芬太尼的萃取效果与
纯水中芬太尼的萃取效果基本相同，说明萃取过程中，并没有将尿液中影响孟加拉玫瑰红溶液颜色变化的物质萃取，而是只萃取了芬太尼，由此可以通过颜色对比，证明尿液中含有芬太尼，含不同芬太尼浓度的纯水和人体尿液的颜色反应对比图如图18所示。
97.上述实施例中，对尿液中芬太尼的萃取剂还可以选用三氯甲烷、四氯化碳、环己烷、石油醚、甲苯、正丁醇或乙腈。
98.实施例5：
99.一种用于快速定量检测芬太尼试纸条的制备方法，包括以下步骤：
100.(1)配制不同浓度的芬太尼水溶液：由于芬太尼标准溶液的溶剂为甲醇，为降低甲醇溶剂的影响，将其用纯水稀释至浓度为0mg/l、2mg/l、5mg/l、10mg/l、20mg/l、50mg/l、100mg/l的芬太尼水溶液。
101.(2)显色剂的配制：显色剂为孟加拉玫瑰红溶液，由于乙醇易挥发，选择无水乙醇作为所述显色剂的溶剂，配制0.1mm20ml孟加拉玫瑰红溶液，便于对空白试纸条进行合适的染色深度。
102.(3)芬太尼检测试纸条的制作：将宽度为1cm的双面胶沿abs塑料白板长边，贴于7cm
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20cm的abs塑料白板上，将白板裁剪为7cm
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0.8cm的试纸条规格，将双层医用脱脂纱布通过双面胶粘贴于abs塑料白板上，并沿白板边缘将医用脱脂纱布裁剪整齐，制成空白试纸条。将空白试纸条浸泡于步骤(2)所述的显色剂，完全浸润后停留3s取出，放入60℃鼓风干燥箱中烘干，得到芬太尼检测试纸条，如图19所示。
103.(4)将步骤(3)得到的芬太尼检测试纸条分别浸入1ml步骤(1)所述的芬太尼溶液中，搅拌5s，取出甩掉多余的液体，静置2min后，对试纸条进行拍照，通过移动终端提取图片中不同芬太尼浓度下试纸条的颜色，制作成芬太尼标准比色卡，统一标准，如图20所示。
104.(5)芬太尼标准比色卡的制作，便于后续芬太尼检测试纸条应用于实际现场对环境水样进行检测时的颜色比对，从而快速确定环境水样所含芬太尼的含量。该试纸条的制作原料无毒、成本低，试纸条便于携带，无需专门的操作人员即可完成快速检测。
105.采用上述试纸条及检测方法进行芬太尼快速定量检测的的过程如图21所示。
106.实施例6
107.本实施例的方案包含实施例1-实施例5中任意两个及两个以上实施例的结合。
108.以上所述实施例仅表达了本发明的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种快速定量检测芬太尼的试剂，其特征在于，该试剂主要由至少一种化学染料、至少一种表面活性剂和至少一种溶剂组成；其中，至少一种所述化学染料包括孟加拉玫瑰红染料；至少一种所述表面活性剂包括阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和非离子型表面活性剂中的至少一种。2.根据权利要求1所述的快速定量检测芬太尼的试剂，其特征在于，至少一种所述表面活性剂中至少包括非离子型表面活性剂，该非离子型表面活性剂为pluronic*f-127非离子型表面活性剂。3.根据权利要求2所述的快速定量检测芬太尼的试剂，其特征在于，至少一种所述溶剂包括用于与孟加拉玫瑰红染料配制孟加拉玫瑰红溶液的酸性溶剂，和用于与pluronic*f-127非离子型表面活性剂配制pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液的纯水。4.根据权利要求3所述的快速定量检测芬太尼的试剂，其特征在于，所述孟加拉玫瑰红溶液和pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液的体积比为1：1。5.根据权利要求3所述的快速定量检测芬太尼的试剂，其特征在于，所述孟加拉玫瑰红溶液的浓度为0.06mm-0.2mm，所述pluronic*f-127非离子型表面活性剂溶液的浓度为0.1mm-5mm。6.根据权利要求3所述的快速定量检测芬太尼的试剂，其特征在于，所述酸性溶剂的ph范围为3.0-5.0。7.一种快速定量检测芬太尼的试纸条，其特征在于，包括底板、负载在底板上的样品垫和浸透在样品垫上的孟加拉玫瑰红溶液；所述底板为0.5mm厚的abs白板，裁剪规格为7cm
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0.8cm；所述底板通过结合胶与样品垫粘合，结合胶可选用宽度为1cm的双面胶，贴于底板一端；所述样品垫包括但不限于滤纸、a4白纸、医用棉花、双层医用脱脂纱布中的至少一种。8.根据权利要求7所述的快速定量检测芬太尼的试纸条，其特征在于，所述孟加拉玫瑰红溶液的溶剂为无水乙醇，所述孟加拉玫瑰红溶液的浓度为0.1mm-0.2mm，体积为20ml。9.一种快速定量检测芬太尼的方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、按照权利要求7所述的底板和样品垫制备空白试纸条；s2、将制备好的空白试纸条浸入权利要求8所述的孟加拉玫瑰红溶液中，停留3s取出，然后在60℃的鼓风干燥箱中烘5min，得到芬太尼检测试纸条；s3、用纯水稀释芬太尼标准溶液成多份且不同浓度的芬太尼水溶液；s4、将制备好的芬太尼检测试纸条浸于上述不同浓度的芬太尼水溶液中，对比颜色变化，建立比色卡；s5、将芬太尼检测试纸条浸于待测液体中，并通过将芬太尼检测试纸条显示的颜色与比色卡进行对比，完成芬太尼快速定量检测。10.根据权利要求9所述的快速定量检测芬太尼的方法，其特征在于，当待测液体为尿液时，对于尿液中芬太尼的萃取，所选用的萃取剂为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、环己烷、石油醚、甲苯、正丁醇或乙腈。

技术总结
本发明公开了一种快速定量检测芬太尼的试剂、试纸条及方法，该试剂包括孟加拉玫瑰红溶液和Pluronic*F-127非离子型表面活性剂溶液，二者反应体积比为1:1。表面活性剂的加入使得孟加拉玫瑰红溶液的吸光度降低，芬太尼的加入和Pluronic*F-127非离子型表面活性剂形成竞争关系，使得溶液体系的吸光度上升并发生可视的颜色变化，达到准确灵敏的检测效果。本发明的试纸条具有制作成本低、携带方便、操作简单、检测时间快等优点，可实现现场对芬太尼的快速定量检测。快速定量检测。快速定量检测。


技术研发人员：崔云怡 于海利 何毅 林颖 李子沂 陈皖新 叶文友 唐健 吴金祥
受保护的技术使用者：西南科技大学
技术研发日：2023.05.06
技术公布日：2023/9/23