用于检测谷胱甘肽的荧光探针及其制备与应用

1.本发明属于谷胱甘肽检测领域。更具体地说，本发明涉及一种用于检测谷胱甘肽的荧光探针及其制备与应用。


背景技术：

2.谷胱甘肽(gsh)，化学名称是n-(n-l-γ-谷氨酰基-l-半胱氨酰基)甘氨酸，是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，是细胞中最丰富的非蛋白硫醇
98.。谷胱甘肽存在于几乎身体每一个细胞，90％以上的谷胱甘肽以还原态(gsh)存在，不到10％的谷胱甘肽以二硫化物态(即氧化型谷胱甘肽gssg)存在。gsh在机体中参与多种生理活动，维持细胞生物功能，与氧化型谷胱甘肽(gssg)形成细胞内重要的氧化还原对，保持gsh/gssg比例可以维持细胞内氧化还原平衡。谷胱甘肽也在植物中普遍存在，是植物中丰富且不可或缺的硫醇，其参与各种生物过程，如清除活性氧、氧化还原信号、硫的储存和运输、有害物质的解毒以及一些化合物的代谢等。因此，检测机体与食用植物中gsh的浓度水平至关重要。
3.目前，对于gsh可通过gsh试剂盒、色谱法、光谱法、电化学检测等方法检测。光谱法近年来发展迅速，分为紫外-可见吸收光谱法和荧光光谱法，荧光光谱法利用材料的荧光性质来实现对gsh的检测，在对gsh高选择性检测和高灵敏度检测上有着很大的进步空间和潜力。
4.shu课题组设计了一种可逆荧光探针(gep)，其基于细胞内gsh对gep的亲核添加和解离来检测gsh。该探针显示出对gsh的快速响应时间和20倍的荧光变化，且能对线粒体表现出优异的靶向性，可以监测线粒体中的gsh。wang课题组设计了一种zns亮子点的关断荧光传感器。co
2+
可以猝灭zns亮子点的荧光，而gsh可以对zns的荧光进一步猝灭，所以可以间接检测gsh。其检测浓度范围在1～300μm，检出限可达0.48μm。yue课题组合成了具有h2dtba配体水稳定性的纺锤形锌金属-有机骨架材料(zn-dtba)，可用于同时检测谷胱甘肽和半胱氨酸。半胱氨酸可以与h2dtba配体中的二硫键反应，从而破坏zn-dtba的晶体结构并猝灭其荧光。而gsh可以与配体和金属节点直接的连接处相互作用，导致zn-dtba结构崩溃，释放出zn
2+
离子和配体。因此该传感器可以同时检测半胱氨酸和谷胱甘肽，且具有不同的荧光响应，不会影响到传感器对其中一种分析物的选择性。但很多荧光检测方法无法同时兼顾选择性和灵敏度两个方面，或具有良好的选择性但灵敏度有待提升，或具有良好的灵敏度但选择性有待提升。所以构建一种同时具有高灵敏度和高选择性的荧光传感器十分有必要。


技术实现要素：

5.本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
6.本发明的一个目的是提供一种用于检测谷胱甘肽的荧光探针，其能够在复杂的样品环境中检测gsh，并对谷胱甘肽具有高灵敏性和高选择性。
7.为了实现本发明的这些目的和其它优点，提供了一种用于检测谷胱甘肽的荧光探
针的制备方法，往反应容器中加入pcn-224、zncl2和dmf，充分溶解得到混合液，混合液转移至水热反应釜，在100-150℃下加热10-20h，得到所述荧光探针pcn-224(zn)。
8.优选的是，pcn-224的制备方法为：将0.1-0.5mmol的tcpp(中-四(4-羧基苯基)卟吩)、1-5mmol的zrocl2·
8h2o和200-250mmol的ba(苯甲酸)加入到10mldmf(n,n-二甲基甲酰胺)中，超声波充分溶解1-10min，转移至以聚四氟乙烯作为内衬的水热反应釜中，放入烘箱，在100-150℃下加热12-24h，得到深紫色混合物，混合物用dmf洗涤2-3次，干燥，得到紫色固体pcn-224。
9.优选的是，pcn-224在混合液中的浓度为1.5-3.5mg/ml，zncl2在混合液中的浓度为0.04-0.44mm。
10.优选的是，利用超声波充分溶解1-10min。
11.用于检测谷胱甘肽的荧光探针，由上述的用于检测谷胱甘肽的荧光探针的制备方法制得。
12.用于检测谷胱甘肽的荧光探针在谷胱甘肽检测中的应用。
13.本发明至少包括以下有益效果：
14.第一、本发明将zn
2+
掺杂入pcn-224的tcpp配体，合成了荧光探针pcn-224(zn)。zn
2+
改变了tcpp中n-n环的结构致使pcn-224荧光猝灭，而gsh富含巯基，可以与zn
2+
反应将zn
2+
从pcn-224中剥离，使pcn-224(zn)变为pcn-224达到荧光恢复的效果，从而实现对gsh的检测。
15.第二、本发明通过锌离子修饰卟啉基金属-有机框架构建的荧光探针pcn-224(zn)对谷胱甘肽的检测具有高灵敏度和高选择性。本发明在gsh为0.01μm～6.00μm线性关系范围内可实现对gsh的高灵敏度检测，最低检出限(lod)低至1.5nm。
16.本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
17.图1为本发明的pcn-224(zn)合成步骤图；
18.图2为本发明的pcn-224(zn)的合成条件优化结果；其中(a)为zncl2浓度优化；(b)为pcn-224浓度优化；
19.图3为本发明pcn-224(zn)与pcn-224表征结果；其中，(a)为荧光图谱；(b)为紫外-可见吸收图谱；(c)为日光灯与紫外灯箱下的照片；
20.图4为pcn-224(zn)在hepes、pbs、tris-hcl、h2o中与gsh反应的荧光强度柱状图；
21.图5为pcn-224(zn)的xps图谱；
22.图6为pcn-224(zn)的tem图和粒径统计柱状图；其中，(a)为tem图；(b)为粒径统计柱状图；
23.图7为pcn-224与pcn-224(zn)的xrd图谱；
24.图8为tcpp、pcn-224与pcn-224(zn)的红外光谱图；
25.图9为pcn-224(zn)放置不同时间的稳定性结果；其中，(a)为荧光稳定性；(b)为水合粒径稳定性；
26.图10为pcn-224(zn)对gsh检测的选择性结果；其中，(a)为pcn-224(zn)与不同物
质作用的荧光光谱图；(b)为pcn-224(zn)检测gsh的选择性和抗干扰实验荧光强度柱状图；
27.图11为pcn-224(zn)检测gsh的灵敏度结果；其中，(a)为滴定曲线；(b)为荧光增强图谱；
28.图12为pcn-224(zn)与gsh反应前后的xps图谱。
具体实施方式
29.下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
30.应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
31.需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
32.本发明提供一种用于检测谷胱甘肽的荧光探针的制备方法，往反应容器中加入pcn-224、zncl2和dmf，充分溶解得到混合液，混合液转移至水热反应釜，在100-150℃下加热10-20h，得到所述荧光探针pcn-224(zn)。
33.在另一种技术方案中，pcn-224在混合液中的浓度为1.5-3.5mg/ml，zncl2在混合液中的浓度为0.04-0.44mm。
34.在另一种技术方案中，利用超声波充分溶解1-10min。
35.在另一种技术方案中，pcn-224的制备方法为：将0.1-0.5mmol的tcpp、1-5mmol的zrocl2·
8h2o和200-250mmol的ba加入到10mldmf中，超声波充分溶解1-10min，转移至以聚四氟乙烯作为内衬的水热反应釜中接着放入烘箱，在100-150℃下加热12-24h，得到深紫色混合物，混合物用dmf洗涤2-3次，干燥，得到紫色固体pcn-224。
36.用于检测谷胱甘肽的荧光探针，由上述的用于检测谷胱甘肽的荧光探针的制备方法制得。
37.用于检测谷胱甘肽的荧光探针在谷胱甘肽检测中的应用。
38.实施例1
39.一种用于检测谷胱甘肽的荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
40.1)合成pcn-224：将0.1mmol的tcpp、1mmol的zrocl2·
8h2o和200mmol的ba加入到10ml dmf中，超声波充分溶解1min，转移至以聚四氟乙烯作为内衬的水热反应釜中，接着放入烘箱，在100℃下加热24h，得到深紫色混合物，混合物用dmf洗涤2次，干燥，得到紫色固体pcn-224；
41.2)往反应容器中加入pcn-224、zncl2，加入dmf溶解以使pcn-224在dmf中的浓度为1.5mg/ml，zncl2在dmf中的浓度为0.04mm，超声波充分溶解1min，充分溶解得到混合液，混合液转移至水热反应釜，在100℃下加热20h，得到的墨绿色固体用dmf充分洗涤3次，分散在hepes缓冲溶液中，得到所述荧光探针pcn-224(zn)。
42.实施例2
43.一种用于检测谷胱甘肽的荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
44.1)合成pcn-224：将0.5mmol的tcpp、5mmol的zrocl2·
8h2o和250mmol的ba加入到10mldmf中，超声波充分溶解10min，转移至以聚四氟乙烯作为内衬的水热反应釜中，放入烘
箱，在150℃下加热12h，得到深紫色混合物，混合物用dmf洗涤3次，干燥，得到紫色固体pcn-224；
45.2)往反应容器中加入pcn-224、zncl2，加入dmf溶解以使pcn-224在dmf中的浓度为3.5mg/ml，zncl2在dmf中的浓度为0.44mm，超声波充分溶解10min，充分溶解得到混合液，混合液转移至水热反应釜，在150℃下加热10h，得到的墨绿色固体用dmf充分洗涤3次，分散在hepes缓冲溶液中，得到所述荧光探针pcn-224(zn)。
46.实施例3
47.一种用于检测谷胱甘肽的荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
48.1)合成pcn-224：将0.2mmol的tcpp、3.6mmol的zrocl2·
8h2o和216mmol的ba加入到10mldmf中，超声波充分溶解5min，转移至以聚四氟乙烯作为内衬的水热反应釜中，放入烘箱，在120℃下加热18h，得到深紫色混合物，混合物用dmf洗涤3次，干燥，得到紫色固体pcn-224；
49.2)往反应容器中加入pcn-224、zncl2，加入dmf溶解以使pcn-224在dmf中的浓度为2.0mg/ml，zncl2在dmf中的浓度为0.28mm，超声波充分溶解5min，充分溶解得到混合液，混合液转移至水热反应釜，在120℃下加热12h，得到的墨绿色固体用dmf充分洗涤3次，分散在hepes缓冲溶液中，得到所述荧光探针pcn-224(zn)。
50.试验一、pcn-224(zn)合成与表征
51.一、pcn-224(zn)合成
52.如图1所示，本发明采用先合成pcn-224，再将zn
2+
掺杂进入tcpp配体合成pcn-224(zn)。当zn
2+
成功掺入tcpp，tcpp中n-n环的n-h键被破坏，导致荧光减弱，所以pcn-224(zn)相对于pcn-224的荧光猝灭效率可以作为zn
2+
被成功掺杂的量的参考依据，荧光强度猝灭效率越大，掺入的zn
2+
离子越多。以此为参考，优化zncl2和pcn-224的用量。
53.首先对zncl2的用量进行优化，取6个烧杯，固定pcn-224的量不变，分别加入25mg pcn-224，再分别加入不同物质的量的zncl2(0.04、0.12、0.2、0.28、0.36、0.44mm)，向7个烧杯中分别加入10ml的dmf，超声波充分溶解5min。转移至水热反应釜，120℃下加热12h。得到的墨绿色固体用dmf充分洗涤3次，分散在hepes缓冲溶液中，测量其荧光光谱。
54.然后对pcn-224的用量进行优化，取6个烧杯，固定zncl2的量不变，向每个烧杯中加入0.28mm，再分别加入不同量的pcn-224(10、15、20、25、30、35mg)，向7个烧杯中分别加入10ml的dmf，超声波充分溶解5min。转移至水热反应釜，120℃下加热12h。将得到的墨绿色固体用dmf充分洗涤3次，分散在hepes缓冲溶液中，测量其荧光光谱。
55.图2(a)为优化zncl2的优化结果，随着加入的zn
2+
量增多，pcn-224(zn)荧光猝灭效率呈上升趋势，当zn
2+
用量为0.28mm时pcn-224(zn)的荧光猝灭效率最高，随着zn
2+
的继续增多，pcn-224(zn)的荧光猝灭效率逐渐降低，所以以0.28mm为zncl2的最佳用量。
56.图2(b)为优化pcn-224用量的结果，固定zncl2为0.28mm不变，增加pcn-224的浓度，pcn-224(zn)的荧光猝灭效率呈增强趋势，当其浓度为2.0mg/ml时pcn-224(zn)荧光猝灭效率最高，由于可与pcn-224结合的zncl2数量固定，且已尽数与pcn-224相结合，继续增加pcn-224的浓度，不会使更多的pcn-224(zn)形成，溶液的荧光猝灭效率逐渐降低。所以pcn-224的最佳浓度为2.0mg/ml。
57.二、pcn-224(zn)表征
58.对pcn-224(zn)进行表征。如图3(a)所示，pcn-224的分散液在日光灯下呈现紫色，在紫外灯箱照射下发出红色荧光，pcn-224(zn)的分散液在日光灯下呈浅黄绿色，在紫外灯箱照射下无法用肉眼观测到荧光。对pcn-224(zn)采用荧光光谱、紫外-可见吸收光谱、xps的表征。如图3(b)，pcn-224在500-700nm的q带紫外吸收峰属于tcpp中n-n环的特征峰，有四个小峰，相比于pcn-224，pcn-224(zn)在500-700nm的q带紫外吸收峰减少为两个，这是由于zn
2+
的掺入取代了n-h键中间的h，使n-h键变为n-zn键，改变了tcpp配体的结构。图中3(c)，410nm左右的强紫外吸收峰产生红移，这是由于卟啉环发生了形变，而吸收峰的红移程度与卟啉环形变程度相关。如图3(b)，相比pcn-224的荧光峰，因为tcpp配体的改变导致pcn-224(zn)荧光峰位置的蓝移，由pcn-224的664nm移至610nm，且由于卟啉的金属化影响了其发光基团，荧光强度大幅减弱。
59.(一)缓冲溶液对荧光探针性能的影响
60.取四份pcn-224(zn)分别溶解于hepes、tris-hcl、pbs、h2o缓冲溶液，使pcn-224(zn)浓度为20.0μg/ml，每份混合溶液分别加入4μm的gsh，测量加入gsh前后的荧光光谱。
61.结果如图4所示，pcn-224(zn)在hepes中对gsh的荧光增强响应最为强烈，而pbs主要由磷酸盐构成，磷酸盐会与pcn-224(zn)中的zro产生强相互作用结合形成zr-op从而打断金属节点与有机配体的电子转移使材料的荧光大幅度增强。当pcn-224(zn)分散在tris-hcl与h2o中，对gsh的荧光增强响应并不灵敏，所以选择hepes作为缓冲溶剂。
62.(二)pcn-224(zn)的xps的测量
63.对pcn-224(zn)进行xps的测量，图5(a)为pcn-224(zn)的xps全谱图，1022.8ev处的峰对应zn元素的2p
1/2
。如图5(d)在zn的高分辨率2p光谱中，zn2p自旋分裂分为两个峰，分别为zn2p
1/2
和zn2p
3/2
，表明zn
2+
成功掺入pcn-224。如图5(b)为c1s的高分辨光谱，对其进行分峰拟合，表明其中含有三种类型的c原子分别为c＝c、c＝n、c＝o。图5(c)为高分辨zr3d图谱，为pcn-224中锆簇的特征峰。
64.(三)pcn-224(zn)的tem表征及粒径统计
65.对pcn-224(zn)进行tem表征并统计其粒径。如图6所示，pcn-224(zn)为梭形晶体，平均粒径为122nm，具有良好的形貌和分散性。与pcn-224相比，pcn-224(zn)边缘变得不平整，这可能是由于zn
2+
的掺入导致部分tcpp的结构被破坏，从而有部分框架结构脱离。
66.(四)pcn-224(zn)的xrd图谱
67.对比pcn-224(zn)和pcn-224的xrd图谱，如图7所示，pcn-224具有良好的相纯度，拥有pcn-224的特征晶面，但合成的pcn-224(zn)因为zn
2+
的掺入导致其晶体结构不完整，结晶度变差，这可能是因为zn
2+
的掺入导致卟啉结构有一定程度的形变。
68.(五)pcn-224(zn)的ftir分析
69.为验证zn
2+
成功掺入pcn-224，进一步说明元素的结合方式，通过ftir对其进行分析。图8为tcpp、pcn-224、pcn-224(zn)的红外光谱图，如图8(a)所示，tcpp在960cm-1
处有卟啉n-n环的n-h的特征峰，pcn-224也在相同位置有这个n-h峰，说明pcn-224中的卟啉环结构依然完整。而在pcn-224(zn)的红外光谱图中观察到n-h键(960cm-1
)的消失和n-zn键(1006cm-1
)的形成。说明zn
2+
通过取代tcpp中n-h键上的h离子成功掺入pcn-224。pcn-224和pcn-224(zn)的c-oh键(1246cm-1
)和c＝o键(1696cm-1
)的不对称振动强度远低于tcpp，归因于zr6与苯甲酸提供的羧基配位。
70.(六)pcn-224(zn)的稳定性分析
71.为探究其稳定性，将pcn-224(zn)分散在hepes缓冲溶剂中，测量其七天内的荧光图谱和dls水合粒径图谱。如图9(a)所示，pcn-224(zn)在七天内基本保持荧光强度不变，其荧光强度维持在5089.2左右。dls结果显示(图9(b))，pcn-224(zn)在七天内保持平均粒径基本不变，维持在224.3nm左右。两个结果证明pcn-224(zn)具有良好的稳定性，放置不会改变其性质，便于保存。
72.试验二、pcn-224(zn)对gsh检测的选择性
73.取若干份含有20.0μg/ml的pcn-224(zn)hepes缓冲溶液2ml，分别加入gsh(4μm)、组氨酸(his)、半胱氨酸(cys)、抗坏血酸(aa)、赖氨酸(lys)、谷氨酸(glu(e))、甘氨酸(gly)、异白氨酸(iso)、丝氨酸(ser)、脯氨酸(pro)、缬氨酸(val)、葡萄糖(glu(g))、氧化型谷胱甘肽(gssg)、人血清白蛋白(hsa)、牛血清白蛋白(bsa)、ba
2+
、na
+
、ca
2+
、no
2-，其中gsh与glu(e)、cys、gly浓度比为1:25(4μm:100μm)，与其他离子的浓度比为1:5(4μm:20μm)，测量加入gsh与干扰物前后的荧光光谱。
74.另取若干份含有20.0μg/ml的pcn-224(zn)hepes缓冲溶液2ml，每份中加入等量的gsh(4μm)，再分别加入gsh(4μm)、组氨酸(his)、半胱氨酸(cys)、抗坏血酸(aa)、赖氨酸(lys)、谷氨酸(glu(e))、甘氨酸(gly)、异白氨酸(iso)、丝氨酸(ser)、脯氨酸(pro)、缬氨酸(val)、葡萄糖(glu(g))、氧化型谷胱甘肽(gssg)、人血清白蛋白(hsa)、牛血清白蛋白(bsa)、ba
2+
、na
+
、ca
2+
、no
2-，依然使gsh与glu(e)、cys、gly浓度比为1:25(4μm:100μm)，与其他离子的浓度比为1:5(4μm:20μm)，测量加入gsh与干扰物前后的荧光光谱。
75.以最佳检测条件对pcn-224(zn)检测gsh的选择性进行测试。在pcn-224(zn)分散液分别加入了gsh(4μm)、组氨酸(his)、半胱氨酸(cys)、抗坏血酸(aa)、赖氨酸(lys)、谷氨酸(glu(e))、甘氨酸(gly)、异白氨酸(iso)、丝氨酸(ser)、脯氨酸(pro)、缬氨酸(val)、葡萄糖(glu(g))、氧化型谷胱甘肽(gssg)、人血清白蛋白(hsa)、牛血清白蛋白(bsa)、ba
2+
、na
+
、ca
2+
、no
2-，其中由于gsh是一种由glu(e)、gly、cys组成的三肽，为验证这三种氨基酸对荧光探针的影响，设置gsh与glu(e)、cys、gly浓度比为1:25(4μm:100μm)，与其他物质浓度比值为1:5。如图10(a)所示，pcn-224(zn)只对gsh有较强的荧光响应，对高浓度的glu(e)、gly、cys没有明显的荧光响应，对其他物质也没有强烈的荧光响应。为保证pcn-224(zn)可以在更为复杂的环境中检测gsh，在pcn-224(zn)分散液中同时加入gsh与其他干扰物，仍设置且gsh与glu(e)、cys、gly浓度比为1:25(4μm:100μm)，与其他干扰物质浓度比值仍为1:5。如图10(b)所示，在gsh存在情况下，高浓度的glu(e)、gly、cys与其他干扰物质都不能使pcn-224(zn)对gsh的荧光响应性产生影响，说明pcn-224(zn)可以很好的在复杂的生物样本或食品样本中检测出gsh。
76.试验三、pcn-224(zn)对gsh检测的灵敏度
77.取若干份含有20.0μg/ml的pcn-224(zn)hepes缓冲溶液2ml，分别加入不同浓度的gsh(0.01、0.1、0.5、1、2、4、6、8、10、12、14μm)，测量加入gsh前后的荧光光谱。
78.在20μg/ml的pcn-224(zn)分散液分别加入对不同浓度的gsh，反应4min，图11(b)为pcn-224(zn)的荧光增强图谱，随着gsh浓度的增强，pcn-224(zn)的荧光强度逐步增强。如图11(a)所示，以加入gsh前后pcn-224(zn)的荧光强度差值为纵坐标，pcn-224(zn)的荧光强度差值与gsh浓度呈现良好的线性关系，随着gsh浓度的增加，pcn-224(zn)的荧光强度
差值增大。以gsh浓度为横坐标，加入gsh前后的荧光强度差值为纵坐标作标准曲线，其线性关系拟合为y＝3017.4x+110.6，在gsh为0.01μm～6.00μm线性关系范围内可实现对gsh的高灵敏度检测，相关系数r2＝0.999，最低检出限(lod)低至1.5nm。
79.试验四、pcn-224(zn)对gsh检测机理的验证
80.gsh与pcn-224(zn)反应后可以将pcn-224(zn)中的zn猝灭剂消除，而zn被消除后可通过xps对其进行表征，zn 2p的特征峰将会消失或减少。所以通过测量pcn-224(zn)与gsh反应前后xps，观察图谱中zn 2p特征峰位置的峰强度变化来体现元素变化，从而验证pcn-224(zn)检测gsh的反应机理。
81.结果如图12所示，pcn-224(zn)除了zr、c、o、n以外还拥有zn 2p的特征峰，但随着gsh的加入，gsh与zn
2+
产生反应，将zn
2+
夺走。zn 2p特征峰消失，证明zn
2+
成功的被从pcn-224(zn)夺走。
82.试验五、效果试验
83.采用加标回收法进行实际样品实验。将胎牛血清稀释十倍在2ml hepes缓冲溶液中，配置该溶液三份，每份中加入pcn-224(zn)使其浓度为20.0μg/ml，分别加入不同浓度的gsh(0.1、0.5、1.0μm)，测量加入gsh前后的荧光光谱。
84.将蔬菜榨汁过滤稀释十倍在2ml hepes缓冲溶液中，配置该溶液三份，每份中加入pcn-224(zn)使其浓度为2.0mg/ml，分别加入不同浓度的gsh(0.1、0.5)，测量加入gsh前后的荧光光谱。
85.pcn-224(zn)在胎牛血清和菠菜汁实际样品中检测gsh结果如下表1所示。
86.表1pcn-224(zn)在胎牛血清中检测gsh
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用加标回收法，在最佳检测条件下对胎牛血清中的gsh进行检测，分别加标0.1、0.5、1μm的gsh，得到的检测结果回收平均值在99.5％～100.4％之间。同样用加标回收法，在最佳检测条件下对菠菜汁中的gsh进行检测，分别加标0.1、0.5μm的gsh，得到的检测结果回收平均值在99.4％～100.2％之间。上述结果表明，构建的荧光探针pcn-224(zn)对gsh的检测具有良好的可靠性，pcn-224(zn)可以用于实际样品中的检测。
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尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

技术特征：
1.用于检测谷胱甘肽的荧光探针的制备方法，其特征在于，往反应容器中加入pcn-224、zncl2和dmf，充分溶解得到混合液，混合液转移至水热反应釜，在100-150℃下加热10-20h，得到所述荧光探针。2.根据权利要求1所述的用于检测谷胱甘肽的荧光探针的制备方法，其特征在于，pcn-224在混合液中的浓度为1.5-3.5mg/ml，zncl2在混合液中的浓度为0.04-0.44mm。3.根据权利要求1所述的用于检测谷胱甘肽的荧光探针的制备方法，其特征在于，利用超声波充分溶解1-10min。4.根据权利要求1所述的用于检测谷胱甘肽的荧光探针的制备方法，其特征在于，pcn-224的制备方法为：将tcpp、zrocl2·
8h2o、ba加入到dmf中，超声波充分溶解1-10min以使tcpp的浓度为0.01-0.05mmol/ml、zrocl2·
8h2o的浓度为0.1-0.5mmol/ml和ba浓度为20-25mmol/ml，，转移至以聚四氟乙烯作为内衬的水热反应釜中放入烘箱，在100-150℃下加热12-24h，得到深紫色混合物，混合物用dmf洗涤2-3次，干燥，得到紫色固体pcn-224。5.用于检测谷胱甘肽的荧光探针，其特征在于，由权利要求1-4任一项所述的用于检测谷胱甘肽的荧光探针的制备方法制得。6.如权利要求5所述的用于检测谷胱甘肽的荧光探针在谷胱甘肽检测中的应用。

技术总结
本发明公开了一种用于检测谷胱甘肽的荧光探针的制备方法，往反应容器中加入PCN-224、ZnCl2和DMF，充分溶解得到混合液，混合液转移至水热反应釜，在100-150℃下加热10-20h，得到所述荧光探针。本发明将Zn


技术研发人员：杨立云 姜乃嘉 张潇 吴辉艳 周志强
受保护的技术使用者：南宁师范大学
技术研发日：2023.06.20
技术公布日：2023/9/23