一种更低刺激性的镇痛古方微乳凝胶及其在抗关节炎药物中的应用

1.本发明属于中药领域，具体涉及一种更低刺激性的镇痛古方微乳凝胶及其在抗关节炎药物中的应用。


背景技术：

2.作为我国传统中药剂型之一的黑膏药依然存在着其制剂工艺带来的“火毒”皮肤刺激性、含药量难以控制、铅中毒等问题、色泽污染、生物利用度较低等潜在问题。使用过程中发现，镇痛古方黑膏药基质本身的黑色会对皮肤和衣服造成色泽污染问题，长期使用会使局部皮肤产生瘙痒、红肿、溃疡等过敏症状。针对这些缺陷，基质改良研究成为黑膏药制剂现代化改进和发展的手段之一。
3.近年来，由于具有更高的生物相容性、可调的生物降解性能和机械强度、含水量高等优点，水凝胶被广泛应用与生物医学领域。在经皮给药系统中，水凝胶可通过自身的保湿保水性能与皮肤水合作用，从而促进药物的渗透，发挥局部和全身的作用，因此也使其成为了潜在的现代药物制剂载体。由于水凝胶是亲水性药物载体，为了负载黑膏药的脂溶性成分，微乳被应用到水凝胶中作为储药库。微乳是水、油、表面活性剂和助表面活性剂按适当的比例混合，自发形成的各向同性、透明、热力学稳定的分散体系，将微乳用于透皮给药制剂，能够增加亲水和亲脂性药物的溶解度、增强药物的稳定性、增加药物的经皮扩散速率，从而提高药效。
4.综上所述，一方面，为了提高镇痛古方黑膏药的药效；另一方面，为了解决黑膏药基质本身存在的上述潜在问题，本研究将利用水凝胶技术对黑膏药的基质进行改良，完成其新剂型开发研究，并将该新型中药制剂应用于抗关节炎研究中。


技术实现要素：

5.针本发明前期提供了一种镇痛古方黑膏药，虽然镇痛古方黑膏药本身具有一定的镇痛功效，但是效果非常低，而且黑膏药本身含有大量的重金属铅毒性，且颜色黑，粘性极强，使用后难以清洗，非常不方便。对上述技术问题，本发明提供了一种更低刺激性的镇痛古方微乳凝胶及其在抗关节炎药物中的应用。具体包括以下内容：
6.第一方面，本发明提供了一种更低刺激性的镇痛古方微乳凝胶，所述微乳凝胶包括镇痛古方载药微乳液和凝胶基质；
7.所述镇痛古方载药微乳液由质量比为0.15-0.6:1-3:1:0.8-1.3的油相、表面活性剂、助表面活性剂、水相制成；
8.所述油相中含有镇痛古方黑膏药脂溶性提取物；
9.所述水相为镇痛古方黑膏药水溶性提取物；
10.所述镇痛古方黑膏药由下述重量份的原料组成：生乳香20～40份；没药20～40份；沉香40～60份；血竭40～60份；马钱子20～40份；三七20～40份；白花蛇舌草40～60份；蟾酥
10～30份；牛黄10～30份；百部10～30份；桔梗20～40份；水蛭20～40份；牤虫20～40份；蜈蚣20～40份；全蝎40～60份；守宫40～60份；红丹1000～1400份；香油2000～4000份。
11.优选地，所述镇痛古方黑膏药水溶性提取物为：将镇痛古方黑膏药加入水中，超声提取，过滤，取过滤后的滤液即为镇痛古方黑膏药水提液；
12.所述镇痛古方黑膏药脂溶性提取物为：取上述过滤后的滤渣加入乙酸乙酯中，超声提取，过滤，取过滤后的滤液即为镇痛古方黑膏药脂溶性提取物。
13.优选地，所述镇痛古方黑膏药的制备方法为：
14.将生乳香、没药、沉香、血竭、马钱子、三七、白花蛇舌草、蟾酥、牛黄、百部、桔梗、水蛭、牤虫、蜈蚣、全蝎、守宫混合均匀后粉碎，并过80～120目筛，得到混合粉末；
15.将香油加热至沸腾后加入红丹，搅拌并冷却，然后加入所述混合粉末，搅拌并加热至沸腾后关火、拌匀，得到中药膏；
16.将所述中药膏与丙烯酸压敏胶、水刺无纺布、离型纸按常规方法制成治疗贴即可。
17.优选地，所述油相选自油酸。
18.优选地，所述表面活性剂选自蓖麻油聚氧乙烯醚，所述助表面活性剂选自聚乙二醇400。
19.优选地，所述表面活性剂与助表面活性剂的比例为1-3:1。
20.优选地，所述表面活性剂与助表面活性剂的比例为2:1。
21.优选地，所述凝胶基质选自透明质酸。
22.第二方面，本发明提供了上述第一方面所述镇痛古方微乳凝胶的制备方法，所述方法包括：
23.在油相中加入镇痛古方黑膏药脂溶性提取物，并加入表面活性剂和助表面活性剂，获得混合体系；在搅拌下，向所述混合体系中滴加镇痛古方黑膏药水溶性提取物，得镇痛古方载药微乳液；
24.将透明质酸加入水中，溶胀过夜，获得透明质酸基质；将所述镇痛古方载药微乳液与透明质酸基质进行等体积混合，加入ph调节剂，调节ph至5.5-6.0，得镇痛古方微乳凝胶。
25.优选地，所述ph调节剂选自三乙醇胺。
26.优选地，所述溶胀好的透明质酸基质的浓度为4％m/v。
27.优选地，所述方法为：
28.(1)将表面活性剂与助表面活性剂按2:1混合均匀，获得混合表面活性剂；
29.(2)向油酸中加入25％的镇痛古方黑膏药脂溶性提取物，超声30min后，3000rpm离心10min，取上清加入到步骤(1)所述混合表面活性剂中，得到混合体系；
30.(3)在磁力搅拌下，往步骤(2)所述混合体系中逐滴缓慢滴加镇痛古方黑膏药水提液，即得镇痛古方载药微乳液；
31.(4)称量透明质酸放入水中，溶胀过夜，获得浓度为4％m/v的透明质酸基质；
32.(5)将步骤(3)所述的镇痛古方载药微乳液与步骤(4)所述的透明质酸基质等体积混合均匀；加入ph调节剂三乙醇胺，调节ph至5.5-6.0，得镇痛古方微乳凝胶。
33.第三方面，本发明提供了上述第一方面所述镇痛古方微乳凝胶在制备镇痛抗炎药物中的应用。
34.第四方面，本发明提供了上述第一方面所述镇痛古方微乳凝胶在制备抗关节炎药
物中的应用。
35.本发明的有益效果是：本发明在原有镇痛古方黑膏药的基础上，提供了一种镇痛古方微乳凝胶；本发明首先解决了黑膏药的色泽问题，改善外观，解决了使用后清除困难和颜色污染问题；而且，相较于原有镇痛古方黑膏药，本发明所述镇痛古方微乳凝胶使用更简便，降低了原有黑膏药的皮肤刺激性，且具有良好的抗炎活性，可用于抗关节炎药物的制备。
附图说明
36.图1本技术的研究示意图；
37.图2以油酸为油相、蓖麻油聚氧乙烯醚为表面活性剂、聚乙二醇400为助表面活性剂、去离子水为水相的伪三元相图；
38.图3本技术所述镇痛古方微乳凝胶的外观图；
39.图4本技术所述镇痛古方微乳凝胶对大鼠类风湿关节炎指数的影响；结果以均值
±
标准差表示(n＝8)，与模型组相比
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40.图5本技术所述镇痛古方微乳凝胶对大鼠类风湿关节炎足跖周长的影响；结果以均值
±
标准差表示(n＝8)，与模型组相比，
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41.图6本技术所述镇痛古方微乳凝胶的皮肤刺激性试验结果。
具体实施方式
42.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明的各实施例进行详细的阐述。
43.实施例1镇痛古方微乳凝胶的制备
44.1.镇痛古方黑膏药的制备
45.参照专利cn107551198a制备镇痛古方黑膏药：
46.黑膏药由下述重量份的原料组成：生乳香40份；没药40份；沉香60份；血竭60份；马钱子40份；三七40份；白花蛇舌草60份；蟾酥30份；牛黄30份；百部30份；桔梗40份；水蛭40份；牤虫40份；蜈蚣40份；全蝎60份；守宫60份；红丹1400份；香油4000份。
47.制备方法包括以下步骤：
48.(1)按配比称重；
49.(2)将生乳香、没药、沉香、血竭、马钱子、三七、白花蛇舌草、蟾酥、牛黄、百部、桔梗、水蛭、牤虫、蜈蚣、全蝎、守宫混合均匀后粉碎，并过80～120目筛，得到混合粉末；
50.(3)将香油加热至沸腾后加入红丹，搅拌并冷却，然后加入混合粉末，搅拌并加热至沸腾后关火、拌匀，得到中药膏；
51.(4)将所述中药膏与丙烯酸压敏胶、水刺无纺布、离型纸按常规方法制成治疗贴即可。丙烯酸压敏胶与水刺无纺布的剥离强度不小于1.0n/cm，持粘性不大于2.5mm。
52.2.镇痛古方微乳凝胶的制备
53.镇痛古方微乳凝胶的制备示意图如图1所示，具体如下：
54.2.1镇痛古方活性成分的提取
55.采用经典的浸渍与超声波辅助提取法制备镇痛古方黑膏药的水溶性提取物和脂溶性提取物，具体为：
56.取10.0g镇痛古方黑膏药，剪碎后放入250.0ml锥形瓶中，加入100.0ml蒸馏水(加入少量乙醇以提高溶出效率)使其足以淹没药物，将锥形瓶放入超声波清洗机中，温度设置为60℃，进行浸渍与超声波辅助提取，时间为12h。过滤后的滤液即为镇痛古方黑膏药水溶性提取物，放入4℃保存，备用，滤渣用于下一步。
57.滤渣放入锥形瓶中，加入100.0ml乙酸乙酯使其足以淹没，将其放入超声波清洗机中以与上述同样方式进行提取。过滤后即得镇痛古方乙酸乙酯提取液。使用旋转蒸发仪对乙酸乙酯提取液进行浓缩，得浓缩浸膏。将浸膏放入电热鼓风干燥箱中干燥24h后得到镇痛古方黑膏药脂溶性提取物，放入4℃保存，备用。
58.2.2微乳各组分比例的筛选
59.以油酸作为油相，以蓖麻油聚氧乙烯醚作为表面活性剂和以聚乙二醇400作为助表面活性剂且通过水滴定法制备微乳并构建微乳的伪三元相图。表面活性剂与助表面活性剂的比例(km值)，以及这两个组分与油酸、水的比例是通过伪三元相图确定的：在室温(25℃)下将油酸与混合表面活性剂(表面活性剂和助表面活性剂质量比分别为1:1、2:1和3:1，作为混合表面活性剂)以质量比(o/s)分别为0.5：9.5、1.0：9.0、1.5：8.5、2.0：8.0、2.5：7.5、3.0：7.0、3.5：6.5、4.0：6.0、4.5：5.5、5.0：5.0、5.5：4.5、6.0：4.0、6.5：3.5、7.0：3.0、7.5：2.5、8.0：2.0、8.5：1.5、9.0：1.0、9.5：0.5混合于烧杯中；在磁力搅拌器搅拌下，在这些混合物中逐滴缓慢滴加去离子水；通过肉眼目测体系的透明度，水滴加后体系逐渐浑浊，并随着水的滴加到一定程度后变为澄清，此时即为滴定的终点，得到澄清透明的液体即为微乳液；记录各体系滴定终点时每个组分的质量百分数，以油相(o)、混合表面活性剂(s)和水相(w)为顶点，在origin 2021中绘制伪三元相图；通过image-pro plus计算个相图中微乳区域的面积；通过微乳区域面积的大小筛选合适的km值。
60.以油酸为油相、蓖麻油聚氧乙烯醚为表面活性剂、聚乙二醇400为助表面活性剂、去离子水为水相的伪三元相图如图2所示，其中km值分别为1:1(左)、2:1(中)、3:1(右)，阴影部分为微乳区域。
61.不同km值下相图中的微乳区域面积如表1所示，表面活性剂和助表面活性剂是制备微乳的关键成分。油相和水相是两个互不相溶不可相互扩散的体系，表面活性剂以降低液体的界面张力促进油水的扩散，同时，它可以使扩散的圆形液滴形成可形变的柔性薄膜，该作用也促进了液滴的扩散；然而，单一的表面活性剂往往不能达到微乳所需的较低张力，往往需要加入另一种两亲化合物作为助表面活性剂。过多的表面活性剂也会带来毒性。此外，油相是微乳液中的药物载体，油相含量的高低决定了微乳的载药量。通过伪三元相图可以筛选出体系稳定、表面活性剂剂较少且含油量较高的微乳。基于这些研究结果，得到了3个微乳处方，如表2所示。
62.表1不同km值下相图中的微乳区域面积
[0063][0064]
表2km＝2:1下得到的微乳处方及其各组分比例
[0065][0066]
2.3镇痛古方微乳凝胶的制备
[0067]
为了获得较高的载药量和更低的毒性，本实施例决定使用“微乳3”作为水凝胶的载体。以油酸中含有25％的镇痛古方黑膏药脂溶性提取物为油相，以镇痛古方黑膏药水溶性提取物为水相，制得镇痛古方微乳，微乳凝胶由微乳和透明质酸凝胶1:1混合而得，其中含有1.38％的乙酸乙酯提取物和13.23％的水提取液，具体如下：
[0068]
向油酸中加入25％的镇痛古方黑膏药脂溶性提取物，超声30min后，3000rpm离心10min，取上清加入混合表面活性剂(蓖麻油聚氧乙烯醚和聚乙二醇400)中得到混合体系，在磁力搅拌下，往该体系中逐滴缓慢滴加处方量镇痛古方黑膏药水溶性提取物，即得镇痛古方载药微乳液。
[0069]
选取4％的透明质酸作为基质制备微乳凝胶：精确称量800mg透明质酸放入装有20ml蒸馏水的烧杯中，溶胀过夜；将制备好的镇痛古方载药微乳液与溶胀好的透明质酸基质进行等体积比混合，用玻璃棒搅拌均匀；将适量ph调节剂三乙醇胺滴入微乳凝胶中，调ph至5.5，改善凝胶性状至合适粘弹性，即得镇痛古方微乳凝胶。
[0070]
制备的镇痛古方微乳凝胶的外观如图3所示，其中a为镇痛古方，b为镇痛古方载药微乳液，c为镇痛古方微乳凝胶；镇痛古方载药微乳液和镇痛古方微乳凝胶外观检查显示：镇痛古方载药微乳液的外观澄清，透明，可见度高，微乳液中未见絮状物或分层，表明本实验获得了稳定的微乳液体系；将镇痛古方载药微乳液与透明质酸胶体混合后得到的镇痛古方微乳凝胶是一个粘弹性半固体制剂。
[0071]
实施例2镇痛古方微乳凝胶的抗关节炎作用研究
[0072]
大鼠被随机分为5组，每组8只。实验前一天用剃须刀剃去小鼠腿部的毛发，通过每个小鼠的腿进行局部给药(面积均约为2cm
×
2cm)。异氟烷麻醉大鼠，测量完全弗氏佐剂造模前的大鼠爪周长；随后趁其麻醉，将100μl完全弗氏佐剂注射于大鼠足底以诱导类风湿关节炎慢性炎症模型，诱导后第3天和第7天观察其关节炎发生程度确认造模是否成功；造模后的第7天至第28天对双氯芬酸钠组、镇痛古方黑膏药以及镇痛古方微乳凝胶组进行给药治疗，模型组不作给药处理；在造模后的整个实验周期内，对大鼠关节炎指数(5级评分法：“0分”代表关节正常，“1分”代表爪关节肿大、呈轻度红肿，“2分”代表足跖肿大、呈中度红肿，“3分”代表踝关节以下的足肿大、严重红肿，“4分”代表包括膝关节在内的整肢足肿大，重度红肿)、爪周长进行评估和测量，每周2次。
[0073]
造模7天后，大鼠后足发生单侧类风湿关节炎，其红肿程度以关节炎指数评分分级。如表3和图4所示，给药21天后，测量结果表明，与模型组相比，其余各组的关节炎指数评分均在给药后有明显降低，这说明了上述药物对类风湿关节炎具有一定的抗炎作用。在第28天，镇痛古方微乳凝胶大鼠的关节炎指数甚至低于镇痛古方黑膏药组，表明本技术所述的镇痛古方微乳凝胶具有更显著的抗炎效果。
[0074]
表3给药21天后各组小鼠的关节炎指数统计(n＝8)
[0075]
分组关节炎指数(均值
±
标准差)空白组——模型组3.00
±
0.53双氯芬酸钠1.57
±
0.53镇痛古方2.50
±
0.53镇痛古方微乳凝胶1.85
±
0.37
[0076]
镇痛古方及其微乳凝胶对大鼠关节炎导致的足跖炎症的影响通过爪周长变化趋势反映，如表4和图4所示：给药21天后，与模型组相比，双氯芬酸钠组、镇痛古方黑膏药及镇痛古方微乳凝胶组大鼠的炎症情况得到改善，爪周长增长趋势得到缓解；其中，镇痛古方黑膏药及镇痛古方微乳凝胶均在第28天降低了关节炎肿胀，而镇痛古方微乳凝胶的效果更加明显。
[0077]
表4给药21天后大鼠的爪周长统计表(n＝8)
[0078]
分组周长(均值
±
标准差)空白组2.39
±
0.09模型组3.05
±
0.17双氯芬酸钠2.65
±
0.07镇痛古方2.89
±
0.09镇痛古方微乳凝胶2.74
±
0.07
[0079]
实施例3镇痛古方微乳凝胶的皮肤刺激性
[0080]
balb/c小鼠被平均分为4组，分别为生理盐水组、双氯芬酸钠组、镇痛古方黑膏药组和镇痛古方微乳凝胶组，每组5只。动物在使用前用剃毛器对其背部进行修剪(受试面积为1.5cm
×
1.5cm)，接着用配制的8％硫化钠涂抹脱毛2-3min，随后用生理盐水清洗。24h后进行试验，连续使用3天，在第0天、第4天进行观察并拍照记录小鼠给药部位的红肿情况。
[0081]
结果图如图6所示，经过3天的连续给药和持续观察发现，生理盐水组小鼠的皮肤没有发生明显变化。而双氯芬酸钠连续给药3天后，皮肤发生了明显发红，表明该药具有明显的皮肤刺激性。而镇痛古方黑膏药连续给药3天后，皮肤发生了轻微红肿，表明该药具有一定的皮肤刺激性。镇痛古方微乳凝胶连续给药3天后，小鼠皮肤没有发生明显变化，保持了极好的完整性，与生理盐水组类似，表明该药对皮肤几乎没有产生任何刺激。
[0082]
综上所述，本技术所述的镇痛古方微乳凝胶的皮肤刺激性较原镇痛古方黑膏药低，且抗炎效果优于原镇痛古方黑膏药，安全性明显优于双氯芬酸钠，表明本技术所述的镇
痛古方微乳凝胶安全性良好，且抗炎效果显著。

技术特征：
1.一种更低刺激性的镇痛古方微乳凝胶，其特征在于，所述微乳凝胶包括镇痛古方载药微乳液和凝胶基质；所述镇痛古方载药微乳液由质量比为0.15-0.6:3-1:1:0.8-1.3的油相、表面活性剂、助表面活性剂、水相制成；所述油相中含有镇痛古方黑膏药脂溶性提取物；所述水相为镇痛古方黑膏药水溶性提取物；所述镇痛古方黑膏药由下述重量份的原料组成：生乳香20～40份；没药20～40份；沉香40～60份；血竭40～60份；马钱子20～40份；三七20～40份；白花蛇舌草40～60份；蟾酥10～30份；牛黄10～30份；百部10～30份；桔梗20～40份；水蛭20～40份；牤虫20～40份；蜈蚣20～40份；全蝎40～60份；守宫40～60份；红丹1000～1400份；香油2000～4000份。2.如权利要求1所述的镇痛古方微乳凝胶，其特征在于，所述镇痛古方黑膏药水溶性提取物为：将镇痛古方黑膏药加入水中，超声提取，过滤，取过滤后的滤液即为镇痛古方黑膏药水提液；所述镇痛古方黑膏药脂溶性提取物为：取上述过滤后的滤渣加入乙酸乙酯中，超声提取，过滤，取过滤后的滤液即为镇痛古方黑膏药脂溶性提取物。3.如权利要求1所述的镇痛古方微乳凝胶，其特征在于，所述镇痛古方黑膏药的制备方法为：将生乳香、没药、沉香、血竭、马钱子、三七、白花蛇舌草、蟾酥、牛黄、百部、桔梗、水蛭、牤虫、蜈蚣、全蝎、守宫混合均匀后粉碎，并过80～120目筛，得到混合粉末；将香油加热至沸腾后加入红丹，搅拌并冷却，然后加入所述混合粉末，搅拌并加热至沸腾后关火、拌匀，得到中药膏；将所述中药膏与丙烯酸压敏胶、水刺无纺布、离型纸按常规方法制成治疗贴即可。4.如权利要求1所述的镇痛古方微乳凝胶，其特征在于，所述油相选自油酸。5.如权利要求1所述的镇痛古方微乳凝胶，其特征在于，所述表面活性剂选自蓖麻油聚氧乙烯醚，所述助表面活性剂选自聚乙二醇400。6.如权利要求1所述的镇痛古方微乳凝胶，其特征在于，凝胶基质选自透明质酸。7.如权利要求1-6任一所述镇痛古方微乳凝胶的制备方法，其特征在于，所述方法包括：油相中加入镇痛古方黑膏药脂溶性提取物，加入表面活性剂和助表面活性剂，获得混合体系；在搅拌下，向所述混合体系中滴加镇痛古方黑膏药水溶性提取物，得镇痛古方载药微乳液；将透明质酸加入水中，溶胀过夜；将所述镇痛古方载药微乳液与溶胀好的透明质酸基质进行等体积混合，加入ph调节剂，调节ph至5.5-6.0，得镇痛古方微乳凝胶。8.如权利要求7所述镇痛古方微乳凝胶的制备方法，其特征在于，所述溶胀好的透明质酸的浓度为4％m/v。9.如权利要求7所述镇痛古方微乳凝胶的制备方法，其特征在于，所述ph调节剂选自三乙醇胺。10.如权利要求1-6任一所述镇痛古方微乳凝胶在制备镇痛抗炎药物中的应用。

技术总结
本发明属于中药领域，具体涉及一种更低刺激性的镇痛古方微乳凝胶及其在抗关节炎药物中的应用。本发明发现，将由生乳香、没药、沉香、血竭、马钱子、三七、白花蛇舌草、蟾酥、牛黄、百部、桔梗、水蛭、牤虫、蜈蚣、全蝎、守宫、红丹、香油制成的黑膏药进行水溶性和脂溶性成分提取后，制备成一种更低刺激性的镇痛古方微乳凝胶；相较于黑膏药本身，所述微乳凝胶的镇痛效果显著提升，且具有良好的抗炎效果，可用于制备抗关节炎药物；且所述微乳凝胶的毒性降低，使用更方便。使用更方便。使用更方便。


技术研发人员：陈朋 涂洪源 杨瑞
受保护的技术使用者：兰州大学
技术研发日：2023.07.12
技术公布日：2023/9/23