一种肝纤维化或非酒精性脂肪性肝炎动物模型的构建方法及应用与流程

1.本发明属于医药技术领域，具体涉及一种肝纤维化或非酒精性脂肪性肝炎动物模型的构建方法及应用。


背景技术：

2.肝脏是腹腔内最大的实质性器官，具有多种代谢、解毒和免疫等重要的生理功能。多种物理因素、化学因素、生物因素等均可引发肝损伤。损伤的结果往往会导致肝坏死、脂肪肝、胆汁淤积、肝纤维化、肝硬化及肝癌等，其中的纤维化，即肝细胞外基质各成分的过渡沉积及分布异常，则是肝脏对各种慢性损伤所产生的共有应答反应。肝纤维化的进一步，可会引起肝小叶改变，假小叶和结节形成，进入肝硬化阶段。目前，中国是世界上的肝病大国。慢性肝病在其疾病进程中都会发生纤维化并朝着肝硬化、肝癌的方向发展，因此阻止肝脏纤维化，逆转纤维化是临床和药物科研过程中重要的一个选题。
3.研究肝纤维化需要进行肝纤维动物造模，传统的造模方法是在小鼠的腹腔注射四氯化碳（ccl4），诱导小鼠肝纤维化的发生。ccl4诱导模型有纤维化形成速度较快，造模稳定等特点，但是其不仅会造成肝纤维化，还会导致小鼠其他器官损伤且具有较高的死亡率。因此，有必要开发一种特异地造成肝纤维化的小鼠模型。在申请人已授权专利《一种条件性细胞死亡动物模型的构建方法及应用》（公告号：cn112868603b）中，构建了一种基于gsdmd蛋白介导的条件性细胞死亡动物模型。该专利的实施例中使用了2 mg/ml的dox进行诱导，造成了小鼠肝脏的急性损伤模型，而肝纤维化是一种慢性的肝损伤过程，因此有必要对dox诱导条件进行优化，使得小鼠肝脏细胞死亡减缓，诱导小鼠出现肝纤维化的症状。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于：提供一种肝纤维化或非酒精性脂肪性肝炎动物模型的构建方法及应用。1、通过该方法构建得到的一种肝纤维化动物模型，可以实现不同程度的肝纤维化以及不同速度的肝纤维化造模，为肝纤维化的药物治疗和机制研究提供更可靠的模型工具。2、通过该方法构建得到的一种非酒精性脂肪性肝炎（nash）动物模型，可以实现nash造模，为nash的药物治疗和机制研究提供更可靠的模型工具。
5.为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：一种肝纤维化动物模型的构建方法，包括以下步骤：s1.gsdmd-nt小鼠与alb-cre小鼠配繁，得到gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠；s2.用浓度为15 μg/ml的dox，添加高脂饮食进行诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠，得到肝纤维化动物模型。
[0006] gsdmd-nt基因是gasdermin蛋白家族的n端结构域编码基因，能够介导细胞焦亡，细胞焦亡是一种程序性细胞死亡，表现为细胞不断胀大直至细胞膜破裂，导致细胞内容物的释放进而激活强烈的炎症反应。
[0007]
进一步地，dox可特异性地诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-双阳性小鼠肝细胞中表达gsdmd-nt。利用dox进行诱导，具有在肝脏细胞内特异性表达gsdmd-nt的能力。表达的gsdmd-nt可以造成肝脏细胞焦亡，持续使用dox诱导，可以造成肝脏细胞持续死亡，逐渐形成瘢痕，导致纤维化的发生。
[0008]
进一步地，在15 μg/ml dox条件下，gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠在6周左右会出现肝纤维化症状；在15 μg/ml dox的基础上，添加高脂饮食条件下，gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠出现纤维化更快，纤维化程度更高。
[0009]
一种非酒精性脂肪性肝炎动物模型的构建方法，包括以下步骤：s1.gsdmd-nt小鼠与alb-cre小鼠配繁，得到gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠；s2.对gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠先进行高脂饮食喂养，再添加浓度为0.05~20 μg/ml dox进行浓度梯度诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠，得到非酒精性脂肪性肝炎动物模型。
[0010]
优选地，对诱导后的gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠取不同时间点的小鼠肝脏进行病理切片，观察肝纤维化和肝炎水平。
[0011]
优选地，所述s1步骤中，alb-cre小鼠为肝脏细胞特异表达cre重组酶的小鼠。
[0012]
优选地，所述gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠是由含有cre-loxp系统的表达gsdmd-nt小鼠和alb-cre小鼠配繁得到的双阳性小鼠。
[0013]
采用上述的一种肝纤维化动物模型的构建方法得到的肝纤维化动物模型在研究肝纤维化机制或用于药物的药效评价或药理实验中的应用。
[0014]
采用上述的一种非酒精性脂肪性肝炎动物模型在研究非酒精性脂肪性肝炎机制或用于药物的药效评价或药理实验中的应用。
[0015]
本发明的有益效果为：本发明提供了一种肝纤维化或非酒精性脂肪性肝炎动物模型的构建方法及应用，首先由含有cre-loxp系统的表达gsdmd-nt小鼠和alb-cre小鼠配繁得到的gsdmd+/-; alb-cre+/-双阳性小鼠；其次通过不同浓度的dox对gsdmd+/-; alb-cre+/-双阳性小鼠进行诱导，dox具有在肝脏细胞内特异性表达gsdmd-nt的能力，表达的gsdmd-nt可以造成肝脏细胞焦亡，导致纤维化的发生；最后得到确定浓度的dox以实现不同程度的小鼠肝纤维化造模，即15 μg/ml；进一步在15 μg/ml dox的基础上添加高脂饮食，对gsdmd+/-; alb-cre+/-双阳性小鼠进行诱导，实现不同速度的小鼠肝纤维化造模。另外，在高脂饮食条件下，通过不同浓度的dox对gsdmd+/-; alb-cre+/-双阳性小鼠进行诱导，能够导致非酒精性脂肪性肝炎（nash）的发生；最后得到确定浓度的dox以实现小鼠非酒精性脂肪性肝炎（nash）造模，即高脂饮食饲喂8周后，施用浓度梯度为0.05~20 μg/ml dox。
[0016]
此构建方法造模速度快，操作方便，便于重复；造模后，模型持续时间长且稳定；造模所用药物安全性高，可及性强；为肝纤维化和非酒精性脂肪性肝炎（nash）的机制研究和药物的药效评价提供更可靠的模型工具。
附图说明
[0017]
图1为肝纤维化小鼠模型繁育示意图；图2为gsdmd-nt，alb-cre双阳性小鼠基因鉴定结果；图3为不同浓度dox诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠肝功alt（谷丙转氨酶、图a）、
ast(谷草转氨酶、图b)检测值，图a和图b中数据以平均值
±
标准误呈现，小鼠只数=3；图4为不同浓度dox条件下的小鼠肝脏病理切片示意图，bar=200 μm；图5为15 μg/ml dox诱导不同时间后小鼠肝脏病理切片示意图，bar=200 μm；图6为15 μg/ml dox加高脂饮食条件下与ccl4分别诱导小鼠肝脏病理切片示意图，bar=200 μm；图7为奥贝胆酸药效评价示意图；图8为奥贝胆酸评价病理切片示意图，bar=100μm；图9为奥贝胆酸评价免疫组化图片，bar=100 μm；图10为不同浓度 dox饮水条件下诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠的nash表型示意图，bar=100 μm。
具体实施方式
[0018]
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细说明，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法及未说明配方的试剂均为按照本领域常规条件。
[0019]
目前肝纤维化模型动物大多是使用四氯化碳（ccl4）进行诱导造成肝慢性损伤进而形成肝纤维化。ccl4在肝脏中由细胞色素p450超家族的单加氧酶（cyp家族）代谢为三氯甲基自由基（ccl
3-）。随后，这种自由基与核酸、蛋白质和脂质发生反应，从而损害关键的细胞过程，导致脂质代谢改变和蛋白质含量降低。ccl3*氧化产生的三氯甲基过氧自由基（ccl3oo*）进一步引发脂质过氧化和多不饱和脂肪酸的破坏。因此，所有细胞室（线粒体、内质网和质膜）的膜通透性降低，出现以炎症、纤维化、肝硬化和肝癌为特征的全身性肝损伤。ccl4诱导肝纤维化具有速度快、造模稳定等特点，然而其造模过程中死亡率较高且与临床病中肝纤维病理特征有一定差异，且纤维化不能完全模拟临床。
[0020]
由于目前肝纤维化造模手段的上述缺陷，因此有必要开发一种全新的肝纤维化模型动物，该模型小鼠应当具有以下优点：（1）肝纤维化病理特征与临床接近，具有临床研究意义；（2）造模速度快，操作方便，便于重复；（3）造模后，模型持续时间长且稳定；（4）造模所用药物安全性高，可及性强。
[0021]
本发明提供了一种肝纤维化动物模型的构建方法，通过该方法构建的肝纤维化小鼠模型，可以实现不同程度的肝纤维化以及不同速度的肝纤维化造模，为肝纤维化的药物治疗和机制研究提供更可靠的模型工具。
[0022]
具体地，本发明以小鼠为例，在gsdmd蛋白介导的条件性细胞死亡动物模型基础上，采用低浓度的dox诱导，制备了肝纤维化实验动物模型。此外，在低浓度dox诱导的基础上添加高脂饮食，可以促进肝纤维化进程，缩短造模时间。
[0023]
所述小鼠模型为申请人已授权专利《一种条件性细胞死亡动物模型的构建方法及应用》（公告号：cn112868603b）中，构建的一种基于gsdmd蛋白介导的条件性细胞死亡动物模型。具体地，是可在cre重组酶及dox同时存在时，特异地在肝脏细胞内表达gsdmd-nt基因的转基因鼠。该转基因鼠是由含有cre-loxp系统的表达gsdmd-nt小鼠和alb-cre小鼠配繁得到的双阳性后代。该小鼠使用gsdmd-nt清除细胞。gsdmd-nt基因是gasdermin蛋白家族的
n端结构域编码基因，能够导致细胞焦亡，细胞焦亡是一种程序性细胞死亡，表现为细胞不断胀大直至细胞膜破裂，导致细胞内容物的释放进而激活强烈的炎症反应。
[0024]
所述dox为强力霉素盐酸盐，全称：doxycycline hydrochloride，文中简称dox，可特异性地诱导gsdmd+/-;alb-cre+/-双阳性小鼠肝细胞中表达gsdmd-nt。
[0025]
所述高脂饮食为60%高脂饲料，名称：rodent diet with 60% kcal% fat，常用于诱导构建小鼠肥胖、脂肪肝等模型。
[0026]
具体地，本发明提供的一种肝纤维化动物模型的构建方法，以小鼠为例，包括以下步骤：（1）由含有cre-loxp系统的表达gsdmd-nt小鼠和alb-cre小鼠配繁得到双阳性小鼠后代；（2）研究不同浓度的dox诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-双阳性小鼠所引发的肝纤维化表型，并确定引发gsdmd+/-; alb-cre+/-双阳性小鼠出现肝纤维化的具体的dox浓度；（3）在确定具体dox浓度的情况下，给小鼠添加高脂饮食，诱导小鼠更快出现肝纤维化；（4）分别对诱导后的双阳性小鼠在不同时间阶段进行肝脏病理切片，观察获得肝纤维化表型以及出现纤维化的时间节点。
[0027]
实施例1 gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠的构建gsdmd-nt小鼠与alb-cre小鼠（肝脏特异性表达cre重组酶的工具鼠）交配产生的后代，利用dox进行诱导，具有在肝脏细胞内特异性表达gsdmd-nt的能力。表达的gsdmd-nt可以造成肝脏细胞焦亡，持续使用dox诱导，可以造成肝脏细胞持续死亡，逐渐形成瘢痕，导致纤维化的发生。gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠的构建其具体实施过程如下：首先通过繁育得到杂合或者纯合的gsdmd-nt小鼠与alb-cre小鼠，然后将gsdmd-nt阳性小鼠与alb-cre阳性小鼠互配，繁育过程如图1所示。通过基因鉴定获得gsdmd+/-; alb-cre+/-双阳性小鼠。基因鉴定引物见表1，鉴定结果电泳图如图2所示，b6为c57bl/6jgpt，阴性对照；n为negative空白对照，无模板的对照；p为阳性对照；数字为鼠尾号；结果：获得13只阳性f0小鼠，如图2所示，1587#，1588#，1589#，1591#，1592#，1594#，1596#，1599#，1602#，1605#，1609#，1610#，1611#小鼠为正确进行gsdmd+/-; alb-cre+/-构建的阳性小鼠。
[0028]
表1 gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠鉴定引物实施例2 不同浓度dox诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠肝脏损伤1、用不同浓度的dox（2000 μg/ml、20 μg/ml、18 μg/ml、15 μg/ml、10 μg/ml、5 μg/ml、0.5 μg/ml、0.05 μg/ml）对gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠进行肝损伤评价。dox浓度分别为2 mg/ml，15 μg/ml，dox给药方式为腹腔注射。
[0029]
2、将gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠进行分组，并用dox诱导，具体如下：取8周龄雄性gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠27只。实验分9组，每组3只，具体分组处
理情况见表2。除g1组小鼠以外，其余小鼠dox饮水诱导3周以后，收集小鼠血清血，检测肝功alt、ast。
[0030]
表2不同dox浓度诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠肝脏损伤分组注：cd为正常饮食，采用普通饲料喂养。
[0031]
检测结果如图3所示。g1组小鼠2000 μg/ml dox饮水诱导后第二天呈现滨死状态，血清总alt、ast值非常高，推断g1组小鼠出现急性肝损伤。其余组小鼠随着dox的浓度增加，alt、ast值有升高。
[0032]
实施例3 dox诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠肝脏纤维化由于对gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠的安全性和诱导肝纤维化的有效性考虑，浓度太高导致小鼠容易死亡，太低则诱导不出肝纤维化的表型效果。则dox诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠肝脏纤维化优选dox浓度为15 μg/ml进行实施。实验分组设计如表3所示。小鼠品系分别为c57bl/6、gsdmd+/-和gsdmd+/-; alb-cre+/-。取不同时间点小鼠肝脏进行病理切片，观察肝纤维化水平。实验开始后观察小鼠状态并在dox饮水2周、4周、6周和9周后分批对小鼠进行安乐死，采集肝脏组织进行固定以及石蜡包埋，切片进行he染色评价肝脏纤维化情况。
[0033]
表3 dox诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠肝脏纤维化
注：cd为正常饮食，采用普通饲料喂养。
[0034]
数据表明，在15 μg/ml dox饮水浓度条件下，gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠在6周左右会出现肝纤维化症状，小鼠天狼星红任瑟病理切片如图4所示。
[0035]
实施例4 高脂饮食加速gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠肝脏纤维化诱导高脂饮食能够加速gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠肝脏纤维化诱导实验分组设计如表4所示。
[0036]
表4 高脂饮食加速gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠肝脏纤维化诱导注：cd为正常饮食，采用普通饲料喂养。
[0037]
在15 μg/ml dox饮水浓度基础上添加高脂饮食，诱导观察6周。高脂饮食组小鼠在2周后便会出现肝纤维化的表型，肝脏天狼星红染色病理结果如图5所示，gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠在dox诱导6周后出现明显的肝纤维化表型。gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠在诱导dox加高脂饮食条件下2周后即出现明显的肝纤维化表型。与仅15 μg/ml dox饮水诱导相比，dox联合高脂饮食诱导小鼠出现纤维化更快，纤维化程度更高。
[0038]
实施例5 与经典的ccl4诱导肝纤维化疾病模型对比dox诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠肝纤维模型与经典的ccl4诱导肝纤维化疾病模型对比，具体实施步骤如下：以15 μg/ml dox饮水诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠15 μg/ml dox饮水诱导具体分组如表5所示：表5 gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠与经典的ccl4诱导肝纤维化疾病模型对比注：cd为正常饮食，采用普通饲料喂养。
[0039]
与经典的ccl4肝纤维化模型相比，本发明所述肝脏纤维化动物模型的天狼星红染色后的病理结果与ccl4诱导肝纤维化病理结果明显不同。如图6所示，ccl4诱导肝纤维化模型的胶原以血管为中心，呈现发散状态；gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠在15 μg/ml dox加高脂饮食条件（为图5中的g2组所示）下诱导2周后即出现明显的肝纤维化表型。本发明所述肝脏纤维化动物模型胶原呈现弥漫状态，与本领域临床病人肝纤维化病理切片更为相近。
[0040]
实施例6 dox诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠构建方法得到的肝纤维化动物模型在研究肝纤维化机制和/或药物中的应用。
[0041]
在gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠基础上，利用一定浓度的dox诱导的肝纤维化疾病动物模型，可以用于肝纤维疾病机理研究，以及缓解或者逆转肝纤维进展到的药物评价。例如，可用于奥贝胆酸缓解肝纤维的药效评价，如图7所示。图8为奥贝胆酸评价病理切片，g1组为完全对照组（空白载体组），g2组为对比实验组（添加dox不加奥贝胆酸），g3组为奥贝胆酸治疗组（添加dox和奥贝胆酸），g1-g3组均为正常饮食（cd）。奥贝胆酸治疗4w后gsdmd+/-; alb-cre+/
‑ꢀ
15 μg/ml＋oca组（g3组）小鼠肝脏切片，肝纤维化改善（对比实验组（g2组），治疗组（g3组）masson染色显示胶原纤维减少，sr染色也显示胶原纤维减少）、脂肪变性减少（油红染色显示治疗组肝细胞脂肪堆积减少，脂肪变性减少）。图9为奥贝胆酸评价免疫组化图片，g1组为完全对照组（空白载体组），g2组为对比实验组（添加dox不加奥贝胆酸），g3组为奥贝胆酸治疗组（添加dox和奥贝胆酸），g1-g3组均为正常饮食（cd）。治疗前gsdmd+/-; alb-cre+/
‑ꢀ
15 μg/ml＋vehicle组（g2组）肝星状细胞被激活，胶原合成增多；巨噬细胞在肝脏的浸润显示组织的慢性炎症；在奥贝胆酸治疗后， gsdmd+/-; alb-cre+/
‑ꢀ
15 μg/ml＋oca组（g3组）肝星状细胞激活减少，巨噬细胞浸润改善。
[0042]
在上述肝纤维化模型中，通过奥贝胆汁酸，药物治疗组小鼠的的肝纤维化得到缓解。
[0043]
以上数据表明，本发明通过在dox特异性地诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-双阳性小鼠肝细胞中表达gsdmd-nt。利用dox进行诱导，具有在肝脏细胞内特异性表达gsdmd-nt的能力。表达的gsdmd-nt可以造成肝脏细胞焦亡，持续使用dox诱导，可以造成肝脏细胞持续死亡，逐渐形成瘢痕，导致纤维化的发生。进而在15 μg/ml dox浓度基础上添加高脂饮食，可以进一步促进肝纤维化进程，缩短造模时间，实现不同程度的肝纤维化以及不同速度的肝纤维化造模，是一种较为理想的肝纤维化动物模型。
[0044]
实施例7 dox诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠非酒精性脂肪性肝炎（nash）在gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠上使用不同浓度dox和不同时期添加高脂饮食进行诱导，探索nash造模条件。数据表明，在饲喂8周60%高脂饮食后添加dox饮水，dox浓度为为0.05~20 μg/ml，每三天更换一个浓度，gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠会出现nash症状，sr病理染色如图10所示，g1组为对照组，即b6小鼠正常饮食（cd）、不添加dox，g2组为60%高脂饮食喂养，dox处理21天后出现明显的nash表型，此时dox浓度为15 μg/ml。
[0045]
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，依据本发明的技术实质，在本发明的精神和原则之内，对以上实施例所作的任何简单的修改、等同替换与改进等，均仍属于本发明技术方案的保护范围之内。

技术特征：
1.一种肝纤维化动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：s1.gsdmd-nt小鼠与alb-cre小鼠配繁，得到gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠；s2.用浓度为15 μg/ml的dox，添加高脂饮食进行诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠，得到肝纤维化动物模型。2.根据权利要求1所述的一种肝纤维化动物模型的构建方法，其特征在于，对诱导后的gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠取不同时间点的小鼠肝脏进行病理切片，观察肝纤维化水平。3.根据权利要求1所述的一种肝纤维化动物模型的构建方法，其特征在于，所述s1步骤中，alb-cre小鼠为肝脏细胞特异表达cre重组酶的小鼠。4.根据权利要求1所述的一种肝纤维化动物模型的构建方法，其特征在于，所述gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠是由含有cre-loxp系统的表达gsdmd-nt小鼠和alb-cre小鼠配繁得到的双阳性小鼠。5.一种非酒精性脂肪性肝炎动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：s1.gsdmd-nt小鼠与alb-cre小鼠配繁，得到gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠；s2.对gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠先进行高脂饮食喂养，再添加浓度为0.05~20 μg/ml dox进行浓度梯度诱导gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠，得到非酒精性脂肪性肝炎动物模型。6.根据权利要求5所述的一种非酒精性脂肪性肝炎动物模型的构建方法，其特征在于，对诱导后的gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠取不同时间点的小鼠肝脏进行病理切片，观察肝炎水平。7.根据权利要求5所述的一种非酒精性脂肪性肝炎动物模型的构建方法，其特征在于，所述s1步骤中，alb-cre小鼠为肝脏细胞特异表达cre重组酶的小鼠；所述gsdmd+/-; alb-cre+/-小鼠是由含有cre-loxp系统的表达gsdmd-nt小鼠和alb-cre小鼠配繁得到的双阳性小鼠。8.采用权利要求1所述的一种肝纤维化动物模型的构建方法得到的肝纤维化动物模型在研究肝纤维化机制或用于药物的药效评价或药理实验中的应用。9.采用权利要求5所述的一种非酒精性脂肪性肝炎动物模型在研究非酒精性脂肪性肝炎机制或用于药物的药效评价或药理实验中的应用。

技术总结
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种肝纤维化或非酒精性脂肪性肝炎动物模型的构建方法及应用。本发明公开了一种肝纤维化动物模型的构建方法，包括以下步骤：S1.GSDMD-NT小鼠与Alb-Cre小鼠配繁，得到GSDMD+/-;Alb-Cre+/-小鼠；S2.用浓度为15μg/mL的DOX，添加高脂饮食进行诱导GSDMD+/-;Alb-Cre+/-小鼠，得到肝纤维化动物模型。所述构建方法得到的肝纤维化动物模型或非酒精性脂肪性肝炎动物模型在研究肝纤维化或NASH机制和/或用于药物的药效评价或药理实验中的应用。通过本发明可以实现不同程度和不同速度的小鼠在纤维化造模，为肝纤维化和非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的机制研究和药物的药效评价提供更可靠的模型工具。和药物的药效评价提供更可靠的模型工具。和药物的药效评价提供更可靠的模型工具。


技术研发人员：史培良 吴正中 宁椿游 丁雪梅 王铭泽 吴俊 成星熠 王雪
受保护的技术使用者：成都药康生物科技有限公司
技术研发日：2023.08.11
技术公布日：2023/9/23