微孔板、使用其的测定方法、自动测定系统以及程序与流程

1.本发明涉及微孔板、使用其的测定方法、自动测定系统以及程序。


背景技术：

2.一直以来，微孔板被用于各种生物化学分析、医疗诊断等。通过将微孔板用在自动分注装置中，从而在相同条件下能够再现性良好、高效率或大量地获取数据。酶标仪能够使用微孔板进行吸光、荧光、发光等光测定。另外，还已知设置有用于使探针光从侧方入射的光学测定用池的微孔板(专利文献1)。
3.现有技术文献
4.专利文献
5.专利文献1：日本特开2016-24054


技术实现要素：

6.但是，对于例如微量的对象溶液而言，光学测定并不适合。另外，在进行电化学测定时，需要将微孔板暂时从主体装置取出并导入到合适的感测装置。这可能会使从微孔板中的溶液混合等准备至电化学测定的反应时间产生误差。
7.本发明的若干实施方式中提供具备传感器的微孔板(卡盒(cartridge))。
8.若干实施方式中提供微孔板(卡盒)，其具备光学测定孔和电化学传感器。
9.本发明的若干实施方式中提供自动测定系统，其包括或使用微孔板。
10.本发明的若干实施方式中提供测定方法、其控制方法、及其程序或其存储介质，其使用具备传感器的微孔板。
11.由此，例如能够对微量的对象物质进行相对准确的或误差小的测定。例如在进行两个以上测定(光学测定以及一个或两个以上传感器测定)时，能够进行测定间误差小的测定或能够并行地进行两个以上测定。
12.根据仅示出、说明本发明的例示性实施方式的以下的详细说明，本领域技术人员容易明确本发明的进一步方式和优点。如所理解的那样，本发明可以是其它不同的实施方式，其一些详细情况可以在不脱离本发明的情况下在各种显而易见的方面加以修正。因此，附图和说明本质上应被视为例示，而不应被视为限定。
附图说明
13.图1示出说明一个实施方式的微孔板的构成的示意性侧视图。
14.图2示出说明一个实施方式的微孔板的使用的示意性侧视图。
15.图3示出说明一个实施方式的微孔板的使用的示意性侧视图。
16.图4a-4d示出说明一个实施方式的微孔板的使用的示意性侧视图。
17.图4e-4g示出说明一个实施方式的微孔板的使用的示意性侧视图。
18.图5示出一个实施方式的微孔板的俯视图和剖视图。
19.图6示出一个实施方式的传感器的分解图。
20.图7示出一个实施方式的传感器的分解图。
21.图8示出一个实施方式的微孔板和测定器主体的外观立体图。
22.图9示出一个实施方式的微孔板和测定器主体的剖视图。
23.图10示出一个实施方式的微孔板的立体图。
24.图11示出一个实施方式的微孔板的俯视图和剖视图。
具体实施方式
25.＜测定对象＞
26.若干实施方式中，对象者(被检者)可以包括人，可以为人。若干实施方式中，对象者可以包括人以外的动物，可以为人以外的动物。对象者可以包括哺乳类动物，可以为哺乳类动物。对象者例如非限定性地可以为役用动物、家畜动物、观赏动物、野生动物。
27.测定对象的试样可以为溶液。“溶液”可以为体液，可以为体液来源的溶液，可以为体液的稀释液。溶液可以是不为体液(非体液来源)的溶液，可以为体液或体液来源的溶液与非体液来源的溶液的混合液。溶液可以为样品测定中使用的溶液，可以为校准用测定中使用的溶液。例如，溶液可以为标准液、校准液。例如，溶液可以是为了在校准等中使用而有意地或计划性地不含测定对象物质的液体。成为测定对象的试样可以为检体。溶液可以为含有化学物质的溶液。
[0028]“体液”可以为淋巴液，可以为组织间液、细胞间液、间质液等组织液，可以为体腔液、浆膜腔液、胸水、腹水、心包液、脑脊髓液(髓液)、关节液(滑液)、眼房水(房水)。体液可以为唾液、胃液、胆汁、胰液、肠液等消化液，可以为汗、泪液、鼻涕、尿、精液、阴道液、羊水、乳汁。体液可以为动物的体液，可以为人的体液。“体液”可以为溶液。溶液可以包括含有测定对象物质的磷酸缓冲生理盐水(pbs)、n-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸缓冲液(tes)等生理缓冲液。溶液只要含有测定对象物质则没有特别限定。
[0029]
溶液可以含有测定对象物质。溶液可以具有含有测定对象物质的可能性。若干实施方式中，测定对象物质可以为分子、离子、高分子、生物分子等。测定对象物质可以具备生物分子。测定对象物质可以为蛋白质、糖化蛋白等。例如，溶液为泪液，测定对象物质为泪液中所含的白蛋白、糖化白蛋白、血红蛋白和/或糖化血红蛋白。或者，测定对象物可以为血液、血清或血浆中的白蛋白、糖化白蛋白、血红蛋白、糖化血红蛋白，可以为间质液、尿或唾液中的白蛋白、糖化白蛋白、血红蛋白、糖化血红蛋白。白蛋白可以为氧化型白蛋白(hna)、还原型白蛋白(hma)。若干实施方式中，测定对象物质可以为age(advanced glycation end products、糖基化终产物、晚期糖基化终产物)。若干实施方式中，测定对象物质可以为糖化脂质。
[0030]
＜传感器＞
[0031]
传感器可以为化学传感器、生物传感器、离子传感器等(以下有时称为“传感器”、“生物化学传感器”、“化学传感器”或“电化学传感器”。)。传感器可以具备两个以上传感器。
[0032]
传感器可以具备电极。电极可以为安培测定型电极。电极可以具备过氧化氢电极。电极可以具备氧电极。电极可以为伏安分析型电极。电极可以为离子检测用的电极(ph电极、氰离子电极、碘离子电极等)。
[0033]
若干实施方式中，传感器可以输出电信号。若干方式中，传感器可以输出电流信号。传感器可以输出电压信号或电荷。传感器可以与电流计、电压计等进行电连接。
[0034]
＜过氧化氢的测定＞
[0035]
若干实施方式中，可以使生成的糖化氨基酸与酮胺氧化酶反应而产生过氧化氢。若干实施方式中，可以测定所产生的过氧化氢的量(浓度)。若干实施方式中，可以通过电学方式测定过氧化氢的量(浓度)。
[0036]“酮胺氧化酶”通常是指识别糖化氨基酸或包含被糖化的氨基酸残基的肽或肽片段的酮胺结构并将糖化氨基酸氧化而产生氨基酸、葡糖醛酮(α-酮醛)和过氧化氢的氧化酶。因此，酮胺氧化酶生成与所识别的糖化氨基酸或包含被糖化的氨基酸残基的肽或肽片段浓度成比例的或相关的浓度的过氧化氢。
[0037]
酮胺氧化酶可以为脱氢酶，可以为激酶，可以为氧化酶。酮胺氧化酶可以为果糖基氨基酸氧化酶(faod)、果糖基肽氧化酶、果糖基缬氨酰基组氨酸氧化酶、果糖基胺氧化酶、阿马多里酶、果糖基胺去糖化酶、这些的改造型。
[0038]
若干实施方式中，酮胺氧化酶可以为作用于α-氨基被糖化的氨基酸或肽的氧化酶(酮胺氧化酶i组)。氨基酸或肽可以为缬氨酸、甘氨酸、赖氨酰基组氨酸。通过使用作用于α-氨基被糖化的氨基酸或肽的氧化酶，可以构成糖化血红蛋白传感器或糖化血红蛋白a1c(hba1c)传感器。
[0039]
若干实施方式中，酮胺氧化酶可以为作用于ε-氨基被糖化的氨基酸或肽的氧化酶(酮胺氧化酶ii组)。氨基酸可以为赖氨酸。被糖化的氨基酸可以为果糖基赖氨酸。通过使用选择性作用于ε-氨基被糖化的氨基酸或肽的氧化酶，可以构成糖化白蛋白传感器。
[0040]
若干实施方式中，酮胺氧化酶可以为作用于α-氨基和/或ε-氨基被糖化的氨基酸或肽的氧化酶(酮胺氧化酶iii组)。氨基酸或肽可以为赖氨酸、缬氨酸、甘氨酸、缬氨酰基组氨酸。通过使用作用于α-氨基和/或ε-氨基被糖化的氨基酸或肽的氧化酶，可以构成糖化蛋白传感器。
[0041]
若干实施方式中，传感器可以具备检测部。检测部可以为过氧化氢检测部。“过氧化氢检测部”(过氧化氢传感器)可以为电化学方式的电极，可以为过氧化氢电极。过氧化氢电极可以具有对电极、参比电极和工作电极。一个实施方式中，检测部可以检测氧。例如，可以检测酶反应中减少的氧的量或浓度。一般认为，氧检测的灵敏度相对于成为噪声源的分子、离子而言比较低、干扰较强。通过氧检测，可以计测氧的消耗量。检测部已达到大气饱和，因此可以用于酶的感测。检测部可以按照能够选择性进行或组合进行多种检测方法的方式来构成。
[0042]
＜使用离子交换树脂的噪声降低＞
[0043]
一个实施方式的传感器可以在检测器上具有离子交换树脂。传感器可以在酮胺氧化酶层与过氧化氢电极之间具有离子交换树脂。
[0044]
例如，使用以nafion(注册商标)为代表的阳离子交换树脂，可以抑制或防止体液中存在的抗坏血酸、尿酸、特别是负离子等透过并到达检测部。例如，使用聚吡咯等阴离子交换树脂，可以抑制或防止多巴胺等、特别是正离子等透过并到达检测部。
[0045]
离子交换树脂可以包含一种、两种以上或至少一种离子交换树脂。离子交换树脂可以具有一种、两种以上或至少一种的层而构成。
[0046]
＜分子印迹聚合物传感器＞
[0047]
传感器可以具备分子印迹聚合物(molecular imprinted polymer，mip)膜。可以检测通过mip的分子识别而产生的电荷或电位的变化(伏安分析型)。可以检测通过mip的分子识别而产生的在电极中流通的电流(例如介质的电流)的变化(安培测定型)。
[0048]
＜蛋白酶＞
[0049]“蛋白酶”通常为对蛋白质、多肽进行水解、异化的肽键水解酶的总称。蛋白酶可以为将蛋白质分解为肽片段的酶。在蛋白质包含被糖化的氨基酸残基的情况下，通过蛋白酶的作用而生成的肽片段中可能存在包含被糖化的氨基酸残基的肽片段和完全未被糖化的肽片段。
[0050]“蛋白酶”可以为动物来源的蛋白酶，可以为植物来源的蛋白酶，可以为微生物来源的蛋白酶。蛋白酶可以为外肽酶，可以为内肽酶。蛋白酶可以为天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶或硫醇蛋白酶。
[0051]“蛋白酶”可以包含两个以上类型或种类的蛋白酶，也可以包含一个类型或种类的蛋白酶。例如，蛋白酶可以包含内肽酶和外肽酶中的一者，也可以包含两者。有时通过将两种以上蛋白酶混合来提高分解效率。
[0052]
动物来源的蛋白酶可以为胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、牛胰蛋白酶、组织蛋白酶、钙蛋白酶、蛋白酶-i型、蛋白酶-xx型、氨肽酶n、羧肽酶、胰酶(蛋白酶、淀粉酶等多种酶的混合物)等。
[0053]
植物来源的蛋白酶可以为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、生姜蛋白酶、激肽释放酶、无花果蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶等。
[0054]
微生物来源的蛋白酶可以为芽孢杆菌(bacillus)来源蛋白酶、曲霉(aspergillus)来源蛋白酶、青霉(penicillium)来源蛋白酶、链霉菌(streptomyces)来源蛋白酶、溶杆菌(lysobacter)来源蛋白酶、酵母(yeast)来源蛋白酶、麦轴梗霉(tritirachium)来源蛋白酶、栖热菌(thermus)来源蛋白酶、假单胞菌(pseudomonas)来源蛋白酶、无色杆菌(achromobacter)来源蛋白酶等。
[0055]
若干实施方式中，蛋白酶可以以液状提供，也可以与溶液混合。若干实施方式中，蛋白酶可以以固体状(例如粉末)添加或混合于溶液中。若干实施方式中，蛋白酶可以负载于负载材料并导入到溶液中。蛋白酶可以负载于平板、曲面、球体、珠、蛋白质等生物分子、高分子等。
[0056]
＜光学测定＞
[0057]
本说明书使用的“光学测定”一般是指使用光学元件或器件确定物质的光学特性。若干实施方式中，可以对对象物质的光学测定进行测定。若干方式中，可以对与对象物质已结合的或相关的物质(以下，即使不是对象物质本身，也是与对象物质进行化学、生物或物理的结合或相关的物质(例如试剂))的特性进行测定。可以对试剂的特性进行测定。有时将该试剂称为“对象物质”。
[0058]
若干方式中，光学测定可以包括分光测定。例如，可以对对象物质的吸光度进行测定。若干方式中，可以导入与对象物质对应的显色指示剂。可以对提示指示剂进行检测或测定。
[0059]
＜显色指示剂＞
[0060]
本说明书中使用的“显色指示剂”通常是指加酸显色的化学合成物。颜色变化通常可以为可逆性的。显色指示剂例如非限定性地包括酸碱指示剂(ph指示剂)、氧化还原指示剂、吸附指示剂、tlc显色指示剂等。其根据ph而改变其溶液的颜色。ph指示剂例如非限定性地可以为溴甲酚紫(bcp)、溴甲酚绿(bcg)等。
[0061]
若干实施方式中，可以对白蛋白使用bcp或bcg。例如，白蛋白与溴甲酚绿(bcg)结合而生成白蛋白-溴甲酚绿复合体。在ph4附近时，该复合体呈现蓝色。因此，通过测定吸光度，可以求出白蛋白浓度(bcg法)。测定试剂中可以添加表面活性剂。测定试剂中可以不添加表面活性剂。例如，可以加入或不加入蛋白质变性剂(sds等)。
[0062]
例如，白蛋白与溴甲酚紫(bcp)结合而生成白蛋白-溴甲酚紫复合体。该复合体呈现蓝色。因此，通过测定吸光度，可以求出白蛋白浓度(bcp法)。另外，通常也可以利用氧化剂的作用使还原型白蛋白全部变为氧化型白蛋白后，通过与bcp的显色反应测定白蛋白浓度(改良bcp法)。测定试剂中可以添加表面活性剂。测定试剂中可以不添加表面活性剂。例如，可以加入或不加入蛋白质变性剂(sds等)。
[0063]
若干实施方式中，可以将使白蛋白与溴甲酚紫(bcp)或溴甲酚绿(bcg)结合而生成复合体的反应称为“第一反应”。
[0064]
若干实施方式中，显色指示剂可以以液状提供，也可以与溶液混合。若干实施方式中，显色指示剂可以以固体状(例如粉末)添加或混合于溶液中。
[0065]
＜吸光度的测定＞
[0066]
若干实施方式中，可以使用吸光光度计(比色计)。吸光光度计具有光源和受光器。从光源发出的光全部或一部分进入对象溶液内。从溶液通过的光全部或一部分进入受光器。可以分析对象物质所吸收的光。
[0067]
光源的波长可以根据使用的显色指示剂适当选择。例如，bcp的情况下可以在主波长600～630nm等波长下测定吸光度，bcg的情况下可以在565～660nm下测定吸光度。测定的波长可以根据ph等各条件而变更。
[0068]
若干实施方式中，可以测定显色指示剂的吸光度的时间变化。若干方式中，可以在至少2个(或两个以上)时刻测定吸光度。例如，可以基于2个时刻的测定值求出初始(蛋白酶分解开始前、t＝0)的蛋白质的总量。若干方式中，可以在蛋白酶分解开始的时刻进行测定，基于与该开始时刻起的时间对应的测定值求出蛋白质的总量。若干方式中，可以基于3个以上时刻的测定值求出蛋白质的总量。即使从蛋白酶分解开始时刻起的时间不明，由至少3个以上测定值有时也可以求出初始的蛋白质的总量。
[0069]
若干实施方式中，可以参考预先准备的表示吸光度与蛋白质浓度的关系的校正曲线来求出蛋白质浓度。例如，预先准备表示以时间(t)变化的吸光度a(t)与该时间变化(δa(t)/δt)的关系的校正曲线。求出实际测定中某一时刻(t＝t1)的吸光度a(t1)及其斜率(δa(t1)/δt)。由此可以求出蛋白酶分解开始时刻t＝t0的吸光度a(t＝t0)。
[0070]
若干实施方式中，可以从蛋白酶分解开始时刻起经过预先确定的或规定的时间后开始糖化蛋白的测定。若干实施方式中，在吸光度a变得足够小的时刻开始糖化蛋白的测定。若干实施方式中，吸光度的时间变化(δa/δt)如果实质上变为零，则判断为充分的蛋白酶的分解已完成，可以开始糖化蛋白的测定或者可以采用此时的糖化蛋白的测定结果。若干实施方式中，如果吸光度的时间变化达到规定值，则判断为已完成规定的利用蛋白酶
的分解，可以开始糖化蛋白的测定或者可以采用此时的糖化蛋白的测定结果。
[0071]
若干实施方式中，可以进行吸光度测定的校准。可以对包括光学测定用池、发光元件、受光元件等的光学系统进行校准。例如，可以在将溶液导入到光学系统之前(例如光学测定用池空置的状态、其初始状态等)和之后(例如测定溶液已被导入到光学测定用池的状态)测定吸光度。可以求出它们的吸光度的差值。
[0072]
＜微孔板＞
[0073]
本发明提供微孔板。本说明书中使用的“微孔板”通常是指具有两个以上作为试管起作用的小型“孔”的平板。微孔板也被称为微滴定板、微板、多孔、卡盒等(以下有时称为“微孔板”。)。“微孔板”通常形成为长方形，但形状不限于此。“微孔板”通常具有两个以上呈列状或矩阵状规则排列的“孔”，但是孔的排列不限于此。
[0074]
至少一个或两个以上孔、以及光学测定孔的至少一个或两个以上可以收容前处理溶液、稀释溶液、准备液、酶溶液、生物化学溶液、指示剂溶液等。
[0075]
若干实施方式中，微孔板可以具备电化学传感器以及至少一个或两个以上孔。若干实施方式中，微孔板可以具备光学测定孔、电化学传感器、以及至少一个或两个以上孔。
[0076]
本发明提供传感器。本发明的若干实施方式中，微孔板可以具备传感器。若干实施方式中，微孔板可以以安装有或固定有传感器的方式构成。例如传感器可以与微孔板分开制造并安装于微孔板。例如微孔板和传感器可以分别分开导入到测定装置中。例如微孔板和传感器可以在测定装置内组合。微孔板和传感器在测定装置内可以物理性隔离，可以实质上组合而彼此关联或协同地进行测定溶液的调整和测定。例如一个传感器既可以对于两个以上微孔板使用，也可以重复使用。若干实施方式中，传感器可以与微孔板一体成型。
[0077]
＜微孔板的构成例＞
[0078]
若干实施方式中，微孔板可以具备以下：
[0079]
(a0)内包稀释液的稀释液孔；
[0080]
(b0)安装有过滤器的过滤器孔；
[0081]
(c0)内包用于光学测定的准备液的光学测定准备液孔；
[0082]
(d0)内包指示剂液的指示剂液孔；
[0083]
(e0)用于搅拌溶液的第一搅拌孔；
[0084]
(f0)能够从外部入射光并向外部取出光的光学测定孔；
[0085]
(g0)内包用于电化学测定的准备(例如酶)溶液的电化学测定准备液孔；
[0086]
(h0)用于搅拌溶液的第二搅拌孔；
[0087]
(i0)内包传感器洗涤液的传感器洗涤液孔；和
[0088]
(j0)内包传感器校准液的传感器校准液孔中的至少一个，以及
[0089]
(s0)电化学传感器。
[0090]
若干实施方式中，可以通过光学测定来测定对象试样内的对象蛋白的浓度。若干实施方式中，可以通过电测定或电化学传感器来测定对象试样内的对象糖化蛋白的浓度。
[0091]
若干实施方式中，微孔板可以用于蛋白质的分析、检测或测定。一个或两个以上孔可以内包含有蛋白酶的溶液。蛋白酶将测定对象物质的蛋白质分解成肽片段或氨基酸。可以利用光学方式和/或电化学传感器测定由此生成的肽片段或氨基酸。
[0092]
若干实施方式中，可以通过电学方式测定糖化蛋白。可以使仅与被蛋白酶分解而
产生的氨基酸或肽中的糖化的氨基酸或肽特异性反应的酮胺氧化酶进行作用，由此产生过氧化氢，使用电极测定该过氧化氢。由此，可以求出溶液内的糖化蛋白的浓度。
[0093]
以下的实施方式1至5中，例示性地说明用于进行糖化蛋白的测定的微孔板的构成和使用它们的步骤。
[0094]
＜实施方式1＞
[0095]
图1示出一个实施方式的微孔板10。微孔板10可以测定糖化蛋白。可以测定对象蛋白的浓度(糖化和非糖化蛋白的合计量)和该糖化蛋白的浓度。微孔板10可以进行光学测定和电测定。微孔板10具备两个以上孔(a～j)和电化学传感器(s)。参考本实施方式的微孔板10，作为一例、但是非限定性地对血液中的白蛋白浓度的光学测定和糖化白蛋白浓度的使用电化学传感器的测定进行说明。
[0096]
图1所示的微孔板10具备：
[0097]
(a)内包稀释液的稀释液孔；
[0098]
(b)安装有过滤器的过滤器孔；
[0099]
(c)内包用于蛋白质的光学测定的准备液的准备液孔；
[0100]
(d)内包指示剂液的指示剂液孔；
[0101]
(e)用于搅拌溶液的第一搅拌孔；
[0102]
(f)能够从外部入射光并向外部取出光的光学测定孔；
[0103]
(g)内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；
[0104]
(h)用于搅拌溶液的第二搅拌孔；
[0105]
(i)内包传感器洗涤液的传感器洗涤液孔；
[0106]
(j)内包传感器校准液的传感器校准液孔；和
[0107]
(s)电化学传感器。
[0108]
微孔板10安装有2个移液器吸头t1、t2。分别用于光学测定和电测定。
[0109]
过滤器孔(b)的过滤器具有过滤血液并取出血浆或血清的能力。例如，过滤器可以为血浆或血清分离过滤器。过滤器孔(b)在初始时空置，接收血液被导入并从过滤器通过后的血浆或血清成分。过滤器可以具有除去尘埃、测定中不需要或对测定有不良影响的物质的能力。
[0110]
稀释液孔(a)的稀释溶液用于对采集的血液进行稀释。稀释溶液例如为生理盐水(例如磷酸缓冲液、pbs)。
[0111]
若干实施方式中，稀释液可以含有酮胺氧化酶。血浆或血清中一般存在低分子肽。为了测定糖化白蛋白浓度，应该仅将本来用蛋白酶分解糖化白蛋白而生成的糖化肽片段用酮胺氧化酶氧化、并利用产生的过氧化氢来进行测定。但是，存在于血液中的糖化低分子肽可不经蛋白酶分解而有助于产生过氧化氢。这可能成为测定结果错误或噪声的原因。通过将酮胺氧化酶添加于测定前的血浆或血清成分，可以预先将血液中的低分子肽分解而消除或降低这些噪声等的原因。
[0112]
若干实施方式中，稀释液可以含有过氧化氢酶。过氧化氢酶分解过氧化氢。由此，可以消除或降低噪声等的原因。若干实施方式中，可以在任意孔、例如除稀释液以外的孔中收容有叠氮化钠。叠氮化钠抑制利用过氧化氢酶的过氧化氢的分解反应。通过预先添加叠氮化钠，能够抑制过氧化氢酶，仅将利用蛋白酶分解糖化白蛋白而生成的糖化肽片段用酮
胺氧化酶氧化，仅测定产生的过氧化氢。
[0113]
准备液孔(c)内的准备液含有氧化剂。不限于该实施方式，若干实施方式中，准备液可以含有氧化剂。该孔可以收容有其它物质。例如，可以含有缓冲剂、氯化物、表面活性剂、蛋白质变性剂、ph调节剂、螯合剂/抗氧化剂(抗坏血酸)、防腐剂等。
[0114]
指示剂液孔(d)含有bcp溶液。不限于该实施方式，若干实施方式中，指示剂可以为bcp或bcg。该孔可以收容有其它物质。例如，可以含有缓冲剂、氯化物、表面活性剂、蛋白质变性剂、ph调节剂、螯合剂/抗氧化剂(抗坏血酸)、防腐剂等。
[0115]
第一搅拌孔(e)在初始时空置，接收规定量的准备液、指示剂液和稀释混合液。通过移液操作，第一搅拌孔内的溶液得到充分搅拌。
[0116]
光学测定孔(f)在初始时空置，接收用于光学测定的混合液。具有可实现来自外部的光的入射和取出的一个或两个以上窗。
[0117]
蛋白酶液孔(g)内包蛋白酶液。该孔可以收容有其它物质。例如，可以含有缓冲剂、氯化物、表面活性剂、ph调节剂、螯合剂/抗氧化剂(抗坏血酸)、防腐剂、介质等。
[0118]
第二搅拌孔(h)在初始时空置，接收规定量的蛋白酶液和稀释混合液。通过移液操作，第二搅拌孔内的溶液得到充分搅拌。第二搅拌孔以可从外部进行加热的方式构成。
[0119]
传感器洗涤液孔(i)内包用于洗涤传感器(s)的洗涤液。例如，可以在使用前洗涤传感器(s)而进行测定的准备。
[0120]
传感器校准液孔(j)可以含有校准液、例如针对酶传感器的酶的底物。例如，为了测定糖化白蛋白，校准液可以含有果糖基赖氨酸、糖化肽片段。
[0121]
若干实施方式中，光学测定孔(f)可以具有用于测定光(探针)的入射和/或取出的用于光学测定的窗。使用光学测定用窗，可以使测定光(探针)入射至光学测定用混合液并检测由此发出的光。若干实施方式中，可以设置一个光学测定用窗。若干实施方式中，可以使入射光和出射光从一个窗通过。若干实施方式中，可以设置两个或两个以上光学测定用窗。可以分开设置入射光用窗和出射光用窗。入射光用窗和出射光用窗可以设置在光学测定孔的对称位置(面)。例如，可以在水平方向的孔的一面和另一面分别设置光用窗。
[0122]
参考图2～图4对微孔板10的使用进行说明。
[0123]
＜前处理＞
[0124]
将采集的体液(例如血液)导入到稀释液孔(a)(图2a)。进行搅拌，从而准备由导入量的体液和稀释液构成的稀释混合液(图2b)。
[0125]
通过移液操作，将稀释混合液从稀释液孔(a)取出并使其从过滤器孔的过滤器通过。经过滤的稀释混合液被导入到过滤器孔(b)内(图2c)。该移液操作可以利用体液导入器具进行。
[0126]
将过滤器从过滤器孔(b)拆下。图2中被转移到稀释液孔(a)。由此，移液器可以接近过滤器孔(b)内的经过滤的稀释混合液(图2d)。
[0127]
＜光学测定＞
[0128]
在用于光学测定的溶液处理中，使用一个移液器吸头t1(图3a)。图3b～d中，使用移液器吸头t1，但是图中未示出。
[0129]
通过移液操作，从准备液孔(c)取出规定量的准备液(例如氧化剂)并导入到第一搅拌孔(e)。进而，通过移液操作，从指示剂液孔(d)取出规定量的指示剂液(例如bcp)并导
入到第一搅拌孔(e)。由此，准备含有准备液和指示剂的指示剂混合液(图3b)。
[0130]
通过移液操作，从过滤器孔(b)取出规定量的经过滤的稀释混合液并导入到第一搅拌孔(e)。导入后，对第一搅拌孔(e)内的溶液进行搅拌。由此，准备光学测定用混合液(图3c)。
[0131]
通过移液操作，从第一搅拌孔(e)取出规定量的光学测定用混合液并导入到光学测定孔(f)。测定位于光学测定孔(f)内的光学测定用混合液的光学特性(图3d)。
[0132]
光学测定孔(f)以能够充分进行探针光的导入和测定光的输出的方式构成。基于光学测定用混合液的光学特性，可以求出初始溶液内的对象物质(例如蛋白质)的量(例如浓度)。
[0133]
图3c至图3d所示的步骤也可以用其它方法代替。例如，可以先将指示剂混合液导入到光学测定孔(f)并测定光学特性，接着将经过滤的稀释混合液导入到光学测定孔(f)并测定光学特性。这种情况下，可以由导入测定样品前后的光学特性的差值来求出对象物质的量。
[0134]
＜电测定＞
[0135]
在用于电测定的溶液的处理中，使用另一移液器吸头t2(图4a)。图4b～g中，使用移液器吸头t2，但是图中未示出。
[0136]
通过移液操作，从传感器洗涤液孔(i)取出规定量的传感器洗涤液并洗涤传感器(s)(图4b)。
[0137]
通过移液操作，从传感器校准液孔(j)取出传感器校准液并导入到传感器(s)(图4c)。使用该传感器校准液对传感器进行校准。
[0138]
通过移液操作，从传感器洗涤液孔(i)取出规定量的传感器洗涤液并洗涤传感器(s)，将校准液从传感器(s)除去(图4d)。若干实施方式中，对于校准液，在校准后可以不进行洗涤。可以向存在校准液的传感器(s)中导入测定液并开始测定。
[0139]
通过移液操作，从蛋白酶液孔(g)取出规定量的蛋白酶溶液并导入到第二搅拌孔(h)(图4e)。
[0140]
通过移液操作，从过滤器孔(b)取出规定量的经过滤的稀释混合液并导入到第二搅拌孔(h)。导入后，对第二搅拌孔(h)内的溶液进行搅拌。由此准备蛋白酶混合液(图4f)。导入到第二搅拌孔(h)的稀释混合液可以被加热。第二搅拌孔(h)可以从导入稀释混合液之前起被加热。第二搅拌孔(h)可以在导入稀释混合液之后被加热。蛋白酶混合液例如可以被加热到蛋白酶的最适温度。
[0141]
通过移液操作，从第二搅拌孔(h)取出规定量的蛋白酶混合液并导入到传感器(s)(图4g)。传感器(s)对蛋白酶混合液进行电测定。传感器(s)可以以蛋白酶溶液与稀释混合液的混合开始的时刻为基准来测定输出的时间变化。
[0142]
例如，基于利用传感器(s)的测定，可以求出作为对象的糖化蛋白的量。
[0143]
例如，可以由光学测定孔(f)中的通过光学测定求出的蛋白质的量和通过传感器(s)求出的糖化蛋白的量求出蛋白质的糖化度。
[0144]
＜实施方式2＞
[0145]
若干实施方式中，微孔板可以至少具备：
[0146]
(a2)内包稀释液的稀释液孔；
[0147]
(d2)内包指示剂液和光学测定用准备液的指示剂液孔；
[0148]
(e2)用于搅拌溶液的第一搅拌孔；
[0149]
(f2)具有光学测定用窗的光学测定孔；
[0150]
(g2)内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；
[0151]
(h2)用于搅拌溶液的第二搅拌孔；和
[0152]
(s2)电化学传感器。
[0153]
即，微孔板可以至少具备6个孔和1个传感器。微孔板可以具备2个搅拌孔。
[0154]
对采集的体液(例如血液)预先进行血浆分离。将含有血浆成分的样品导入到稀释液孔(a2)。由此，样品与稀释液混合。为了混合，可以对溶液进行搅拌。
[0155]
通过移液操作，从指示剂液孔(d2)取出规定量的指示剂混合液并导入到第一搅拌孔(e2)。
[0156]
通过移液操作，从稀释液孔(a2)取出规定量的稀释混合液并导入到第一搅拌孔(e2)。导入后，对第一搅拌孔(e2)内的溶液进行搅拌。由此，准备光学测定用混合液。
[0157]
通过移液操作，从第一搅拌孔(e2)取出规定量的光学测定用混合液并导入到光学测定孔(f2)。测定位于光学测定孔(f2)内的光学测定用混合液的光学特性。
[0158]
通过移液操作，从蛋白酶液孔(g2)取出规定量的蛋白酶溶液并导入到第二搅拌孔(h2)。
[0159]
通过移液操作，从稀释液孔(a2)取出规定量的稀释混合液并导入到第二搅拌孔(h2)。导入后，对第二搅拌孔(h2)内的溶液进行搅拌。由此，准备蛋白酶混合液。
[0160]
通过移液操作，从第二搅拌(h2)取出规定量的蛋白酶混合液并导入到传感器(s2)。传感器(s2)对蛋白酶混合液进行电化学测定。
[0161]
若干实施方式中，可以在稀释液孔(a等)内准备稀释混合液。这种情况下，不需要过滤器孔(b等)。若干实施方式中，用于蛋白质的光学测定的准备液可以已经在指示剂液孔(d等)内与指示剂液进行了混合。这种情况下，不需要准备液孔(c等)。若干实施方式中，不需要校准液孔(j等)。若干实施方式中，传感器(s等)不需要使用传感器洗涤液等的测定准备。这种情况下，不需要传感器洗涤液孔(i等)。
[0162]
＜实施方式3＞
[0163]
若干实施方式中，微孔板可以至少具备：
[0164]
(a3)内包稀释液的稀释液孔；
[0165]
(d3)内包蛋白质用指示剂液的指示剂液孔；
[0166]
(f3)具有光学测定用窗的光学测定孔；
[0167]
(g3)内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；和
[0168]
(j3)电化学传感器。
[0169]
即，微孔板可以至少具备4个孔和1个传感器。微孔板可以不分开具备搅拌孔。
[0170]
对采集的体液(例如血液)预先进行血浆分离。将含有血浆成分的样品导入到稀释液孔(a3)。由此，样品与稀释液混合。为了混合，可以对溶液进行搅拌。
[0171]
通过移液操作，从稀释液孔(a3)取出规定量的稀释混合液并导入到指示剂液孔(d3)。导入后，对指示剂液孔(d3)内的溶液进行搅拌。由此，准备光学测定用混合液。
[0172]
通过移液操作，从指示剂液孔(d3)取出规定量的光学测定用混合液并导入到光学
测定孔(f3)。测定位于光学测定孔(f3)内的光学测定用混合液的光学特性。
[0173]
其它实施方式中，通过移液操作，从稀释液孔(a3)取出规定量的稀释混合液并导入到光学测定孔(f3)，从指示剂液孔(d3)取出规定量的指示剂混合溶液并导入到光学测定孔(f3)。将它们在光学测定孔(f3)内混合，测定位于光学测定孔(f3)内的光学测定用混合液的光学特性。
[0174]
通过移液操作，从稀释液孔(a3)取出规定量的稀释混合液并导入到蛋白酶液孔(g3)。导入后，对蛋白酶液孔(g3)内的溶液进行搅拌。由此，准备蛋白酶混合液。可以对蛋白酶液孔(g3)进行加热。
[0175]
通过移液操作，从蛋白酶液孔(g3)取出规定量的蛋白酶混合液并导入到传感器(s3)。传感器(s3)对蛋白酶混合液进行电化学测定。
[0176]
若干实施方式中，指示剂液孔可以内包经定量的蛋白质用指示剂液。若干实施方式中，稀释混合液可以在指示剂液孔内进行搅拌或与蛋白质用指示剂液混合。若干实施方式中，稀释混合液可以在蛋白酶液孔内进行搅拌或与蛋白酶液混合。
[0177]
＜实施方式4＞
[0178]
若干实施方式中，微孔板可以至少具备：
[0179]
(a4)内包稀释液的稀释液孔；
[0180]
(f4)内包蛋白质用指示剂液、具有光学测定用窗的光学测定孔；
[0181]
(g4)内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；和
[0182]
(s4)电化学传感器。
[0183]
即，微孔板可以至少具备3个孔和1个传感器。光学测定孔可以收容有经预先定量的蛋白质用指示剂液。可以在光学测定孔内进行溶液的混合、搅拌且对该溶液进行测定。
[0184]
对采集的体液(例如血液)预先进行血浆分离。将含有血浆成分的样品导入到稀释液孔(a4)。由此，样品与稀释液混合。为了混合，可以对溶液进行搅拌。
[0185]
通过移液操作，从稀释液孔(a4)取出规定量的稀释混合液并导入到光学测定孔(f4)。导入后，对光学测定孔(f4)内的溶液进行搅拌。由此，准备光学测定用混合液。测定位于光学测定孔(f4)内的光学测定用混合液的光学特性。
[0186]
通过移液操作，从稀释液孔(a4)取出规定量的稀释混合液并导入到蛋白酶液孔(g4)。导入后，对蛋白酶液孔(g4)内的溶液进行搅拌。由此，准备蛋白酶混合液。可以对蛋白酶液孔(g4)进行加热。
[0187]
通过移液操作，从蛋白酶液孔(g4)取出规定量的蛋白酶混合液并导入到传感器(s4)。传感器(s4)对蛋白酶混合液进行电化学测定。
[0188]
若干实施方式中，稀释混合液可以在光学测定孔内进行搅拌或与含有蛋白质用指示剂液和光学测定用准备液的混合液进行混合。若干实施方式中，稀释混合液可以在蛋白酶液孔内进行搅拌或与蛋白酶液混合。
[0189]
＜实施方式5＞
[0190]
若干实施方式中，微孔板可以至少具备：
[0191]
(a5)内包稀释液的稀释液孔；
[0192]
(f5)内包含有蛋白质用指示剂和蛋白酶液的溶液、具有光学测定用窗的光学测定孔；和
[0193]
(s5)电化学传感器。
[0194]
即，微孔板可以至少具备2个孔和1个传感器。光学测定孔可以收容有经定量的含有蛋白质用指示剂和蛋白酶的溶液。在光学测定孔内进行光学测定，将相同溶液导入到传感器。若干实施方式中，对象蛋白可以在光学测定用指示剂存在下被蛋白酶分解。若干实施方式中，传感器可以含有指示剂，可以测定被蛋白酶分解的肽。
[0195]
对采集的体液(例如血液)预先进行血浆分离。将含有血浆成分的样品导入到稀释液孔(a5)。由此，样品与稀释液混合。为了混合，可以对溶液进行搅拌。
[0196]
通过移液操作，从稀释液孔(a5)取出规定量的稀释混合液并导入到光学测定孔(f5)。导入后，对光学测定孔(f5)内的溶液进行搅拌。由此，准备混合有蛋白酶的光学测定用混合液。测定位于光学测定孔(f5)内的光学测定用混合液的光学特性。可以对光学测定孔(f5)进行加热。
[0197]
通过移液操作，从光学测定孔(f5)取出规定量的混合有蛋白酶的光学测定用混合液并导入到传感器(s5)。传感器(s5)对蛋白酶混合液进行电化学测定。
[0198]
若干实施方式中，指示剂液孔可以还内包光学测定用准备液。例如，指示剂液孔(d2、d3等)可以内包蛋白质用指示剂和光学测定用准备液。例如，光学测定孔(f4等)可以内包蛋白质用指示剂和光学测定用准备液。例如，光学测定孔(f5等)可以内包蛋白质用指示剂、光学测定用准备液和蛋白酶。
[0199]
实施方式1至4中，为了进行糖化蛋白的测定，在光学测定中使用指示剂、在电化学测定中使用酶，但是为例示，本发明不限于此。孔中使用的溶液可以为其它溶液。实施方式1至4中，测定对象、溶液、孔的数量、孔的名称、步骤等可以根据应用而适当变更。
[0200]
若干实施方式中，可以在本测定之前、过程中或之后进行对照测定。例如，可以导入浓度已知的标准液实施与上述同样或加入了需要的变更的工艺。
[0201]
＜废液槽＞
[0202]
若干实施方式中，微孔板可以还具备废液槽。若干实施方式中，废液槽可以以收容从传感器排出的溶液的方式构成。若干实施方式中，传感器可以具备废液槽。由此，例如可以将微孔板中使用的液体与卡盒一起废弃。由此，例如可以提高溶液处理的安全性或降低感染风险。
[0203]
＜盖＞
[0204]
若干实施方式中，微孔板可以具备盖。微孔板可以以与盖结合的方式构成。盖可以实质上防止使用后残留的孔内溶液泄漏或洒出。由此，例如可以提高溶液处理的安全性或降低感染风险。
[0205]
通过使用本发明的微孔板或方法，例如非限定性地可以对微量的对象物质进行比较准确或误差小的测定。例如，变异系数(cv)可能达到5％、4％、3％、2％、1％或小于它们中任一者。例如可以以cv值5％～8％或其以下来进行基于糖化白蛋白浓度的ga值测定。例如非限定性地进行两个以上测定(光学测定以及一个或两个以上传感器测定)时，可以并行地进行这些两个以上测定，即，可以高效地进行测定。
[0206]
＜实施例1：微孔板＞
[0207]
图5示出一个实施例的微孔板20的俯视图(图5a)和图5a中的a-a剖视图(图5b)。微孔板20具有沿着长度方向配置的孔20a～20j和传感器安装部20s。第二搅拌孔20h、光学测
定孔20f和传感器安装部20s配置在中心线上。其孔和位置相对于中心线对称，在长度方向上配置成2列。以下，从图的左侧起依次说明配置的孔或结构。
[0208]
首先配置过滤器孔20a和稀释液孔20b。在这些孔的开口周围设置壁。该壁21接受过滤器和使用后的采血器具并稳定地保持。
[0209]
接着设置开口的移液器吸头放置架22。这些可以不是孔，例如可以为贯通孔。
[0210]
在其相邻处配置第二搅拌孔20h。第二搅拌孔20h不是配置成2列，而是单独配置。可以确保下方或侧方的空间，由此使加热器(未图示)靠近。例如加热器可以具有与第二搅拌孔20h的外侧形状接触的凹形表面。由此，可以以较大的面积与第二搅拌孔20h接触。例如加热器可以以从下方接近第二搅拌孔20h的方式构成。加热器可以控制第二搅拌孔20h内的溶液的温度、优化试剂的反应。
[0211]
然后，将6个孔配置成2列。若干实施方式中，它们作为准备液孔20c、指示剂液孔20d、第一搅拌孔20e、蛋白酶液孔20g、传感器洗涤液孔20i、和传感器校准液孔20j使用。
[0212]
在其相邻处配置光学测定孔20f。光学测定孔20f不是配置成2列，而是单独配置。由此，能够使探针光与长度方向垂直且沿着水平方向从光学测定孔20f通过。
[0213]
图中最右侧设置有安装传感器(未图示)的传感器安装部20s。传感器另行制造并安装于此。
[0214]
＜实施例2：传感器＞
[0215]
图6示出一个实施例的传感器100的分解立体图。传感器100具备下部主体110、传感器基板支撑件120、传感器基板130、流路间隔件140、上部主体150、上部密封件160、和固定螺丝170。
[0216]
在下部主体110设有凹部，在其内部铺设有传感器基板支撑件120。传感器基板130通常由玻璃或硅形成，因此较脆。为了避免由组装或按压导致的机械损伤，传感器基板支撑件120可以由树脂等比较柔软的材料形成。
[0217]
在其上载置传感器基板130。传感器基板130在其表面具备感测电极131和与感测电极131电连接的感测电极端子132。感测电极131识别在其表面或其附近发生的化学反应并产生与此对应的电流或电压。该电信号经由感测电极端子132被传输到外部。
[0218]
在传感器基板130上载置流路间隔件140。流路间隔件140具有流路贯通孔141。流路间隔件140通过流路贯通孔141周围的面、在下侧以包围感测电极131的方式与感测基板130密合，在上侧与上部主体150密合。因此，流路贯通孔141通过其宽度、厚度和长度而实质上确定感测流路的形状。流路间隔件140还具有确保向感测电极端子132的接近的端子贯通孔142。
[0219]
在其上载置上部主体150。上部主体150通过固定螺丝170与下部主体110机械固定。由此，传感器基板支撑件120、传感器基板130和流路间隔件140在其间相互密合。流路除了入口和出口以外形成为流体式密闭结构。
[0220]
上部主体150具有废液槽151。上部密封件160以堵住废液槽的开口的方式粘贴于上部主体150。上部密封件160具有空气孔161。
[0221]
上部主体150具有用于导入待测定溶液的导入口154。导入口154例如可以具有容易安装移液器的结构。从导入口154导入的溶液通过流路贯通孔141而流到划定的流路内。溶液从感测电极131的表面通过并在此处进行测定。
[0222]
上部主体150具有电极端子153。通过组装，电极端子153的下端能够从流路间隔件140的端子贯通孔142通过并与传感器基板130的传感器电极端子132直接接触。电极端子153的上端可与外部的电路连接。由此，能够将通过传感器电极131得到的电信号发送到传感器100的外部。
[0223]
溶液相对于流路141的溶液导入口154从相反侧沿着在上部主体150内沿着上下方向设置的废液导槽152上行，从其上端流到废液槽151内。伴随着溶液流到废液槽151，位于其内部的空气从空气孔161被排出到外部。
[0224]
废液槽151中收容的废液在常规使用中不从空气孔161排出。因此，废液可以以保管于废液槽151内的状态与传感器100或微孔板(卡盒)一起废弃。
[0225]
＜实施例3：传感器＞
[0226]
图7示出一个实施例的传感器200的分解立体图。传感器200具备下部主体210、传感器基板支撑件220、传感器基板230、流路间隔件240、上部主体250、上部密封件260、和固定螺丝270。
[0227]
在下部主体210设有凹部，在其内部铺设有传感器基板支撑件220。传感器基板支撑件220可以由树脂等比较柔软的材料形成。下部主体210还具备废液槽211a、211b。
[0228]
在其上载置传感器基板230。传感器基板230在其表面具备感测电极231和与感测电极231电连接的感测电极端子232。感测电极231识别在其表面或其附近发生的化学反应并产生与此对应的电流或电压。该电信号经由感测电极端子232被传输到外部。
[0229]
在传感器基板230上载置流路间隔件240。流路间隔件240具有流路贯通孔241。流路间隔件240通过流路贯通孔241周围的面、在下侧以包围感测电极231的方式与感测基板230密合，在上侧与上部主体250密合。因此，流路贯通孔241通过其宽度、厚度和长度而实质上确定感测流路的形状。流路间隔件240还具有确保向感测电极端子232的接近的端子贯通孔242。流路间隔件240还具备能够实现下部主体210与上部主体250之间的溶液流动的废液贯通孔243。
[0230]
在其上载置上部主体250。上部主体250通过固定螺丝270与下部主体210机械固定。由此，传感器基板支撑件220、传感器基板230和流路间隔件240在其间相互密合。流路除了入口和出口以外形成为流体式密闭结构。
[0231]
上部主体250具有用于导入待测定溶液的导入口254。从导入口254导入的溶液通过流路贯通孔241而流到划定的流路内。溶液从感测电极231的表面通过并在此处进行测定。
[0232]
上部主体250具有电极端子253。通过组装，电极端子253的下端能够从流路间隔件240的端子贯通孔242通过并与传感器基板230的传感器电极端子232直接接触。电极端子253的上端可与外部的电路连接。由此，能够将通过传感器电极231得到的电信号发送到传感器200的外部。
[0233]
溶液相对于流路241的溶液导入口254从相反侧沿着在上部主体250内沿着上下方向设置的第一废液导槽252a上行后下行，通过流路间隔件240的一个废液贯通孔243并进入下部主体210的第一废液槽211a。
[0234]
第一废液槽211a装满后，来自流路的废液有时会继续供给。此时，废液从第一废液槽211a通过流路间隔件240的一个废液贯通孔243，沿着第二废液导槽252b上行，超过流路
上端，然后流到配置于相反侧的下部主体210的第二废液槽211b。
[0235]
在上部主体250的最上部粘贴有上部密封件260。废液导槽252a、252b的上部流路具有开口结构。上部密封件260将它们堵住而将废液导槽252a、252b密闭。
[0236]
上部密封件260还具有空气孔261。位于第一废液槽211a和第二废液槽211的内部的空气通过流路间隔件240的其它废弃贯通孔，通过上部主体250的空气导槽252c，最终从上部密封件260的空气孔261排出到外部。
[0237]
废液槽211a、211b中收容的废液在常规使用中不会从空气孔261排出。因此，废液可以以保管于废液槽211a、211b内的状态与传感器200或微孔板(卡盒)一起废弃。
[0238]
若干实施方式中，预先收容溶液的孔可以通过密封件而密闭。密封件可以在使用前撕掉。也可以通过移液器吸头的动作使其前端贯通密封件。
[0239]
实施例2和实施例3的传感器的电极可以为过氧化氢电极、氧电极或其它电极或它们的组合。
[0240]
＜实施例4：自动测定系统＞
[0241]
图8和图9分别示出表示一个实施例的具备微孔板510、测定主体520和移液器530的自动测定系统500的构成的立体图和剖视图。
[0242]
微孔板510具有沿着长度方向延长、并嵌入其一端的传感器510s。微孔板510可以预先配置移液器吸头511、过滤器512。示意性地画出采血管513。
[0243]
测定主体520具有直线导轨(或导槽)521，其以接收沿着长度方向(x)方向)滑动地插入的微孔板510的方式构成。
[0244]
测定主体520具备加热器系统522。加热器系统522具备：以与微孔板510的加热用孔(例如第二搅拌孔)510i的底部和侧面接触或接近、对其进行加热的方式构成的加热器522a；以及，能够使加热器522a上下运动的加热器移动机构522b。加热器系统522可以与电源(未图示)连接。
[0245]
测定主体520具备具有发光元件523a和受光元件523b的光学测定系统523。发光元件523a至受光元件523b的光路被规定为垂直于微孔板510或导轨521的长度方向的方向，并且通过微孔板510的光学测定孔510f。由此，能够测定光学测定孔510f内的光学特性。
[0246]
测定主体520具备电测定系统524。电测定系统524具备探针端子524a，其能够下降并与传感器510s的电极端子(未图示)接触。从传感器510s输出的电信号被电测定系统524接收，进行分析和/或进一步发送至外部。电测定系统524可以与外部的运算单元通过无线或有线方式进行电磁连接。
[0247]
移液器530以相对于测定主体520或其上固定的微孔板510相对地上下(z方向)移动和相对于长度方向在水平面内垂直的方向(y方向)移动的方式构成。移液器530与能够实现这样的移动的移动机构(移液器移动机构、未图示)连接或具备这样的移动机构。
[0248]
测定主体520以在水平面内相对于移液器530相对地沿着微孔板510的长度方向(x方向)移动的方式构成。测定主体520与能够实现这样的移动的移动机构(测定主体移动机构、未图示)连接。
[0249]
通过这些移动机构，可以控制移液器530相对于微孔板510的适当的移液动作。
[0250]
若干实施方式中，这些移动机构、加热器系统522、电测定系统524分别或者一部分或全部一起与控制系统(未图示)连接。
[0251]
若干实施方式中，自动测定装置可以还具备计算机或计算机系统，可以与其可连接地校准。可以在将微孔板安装于装置主体起或安装后起通过计算机控制本发明的方法中的各种步骤。计算机可以具备中央处理装置(cpu)和存储用于进行这些控制的程序的存储介质。
[0252]
＜校准＞
[0253]
若干实施方式中，传感器可以在测定之前、过程中、之后或这些中的两个以上时刻进行校准。构成可以使用规定的校准液。若干实施方式中，传感器可以预先在出厂时或制造时进行了校准。传感器可以具有条形码、qr码(注册商标)、文字码、图片码等读取码。代码可以安装或印刷于传感器主体的表面。代码可以为磁码。代码可以安装于传感器内部。代码可以与制造信息、出厂信息、校准信息等传感器信息相关联。用户或装置可以通过读取代码而获得相关信息。通过读取代码，可以获得该传感器的校准线。
[0254]
若干实施方式中，微孔板可以具备两个以上传感器。若干实施方式中，微孔板可以通过连接两个以上亚微孔板而构成。若干实施方式中，可以对一个检体设置一个孔组和一个传感器。若干实施方式中，可以对一个检体设置两个以上孔组和一个传感器。若干实施方式中，可以对一个检体设置一个孔组和两个以上传感器。若干实施方式中，可以对一个检体设置两个以上孔组和两个以上传感器。
[0255]
＜实施例5：多通道微孔板＞
[0256]
图10示出一个实施例的微孔板30的立体图。作为一例，微孔板30具备8列亚微孔板30-1～30-8。若干实施方式中，各亚微孔板可以为上述的实施例或实施方式中所说明那样的微孔板。图10的各亚微孔板30-1～30-8分别具备传感器30s-1～30s-n。由此，可以并列地实施测定。可以高效或高通量地进行测定。
[0257]
＜实施例6：单排微孔板＞
[0258]
图11示出一个实施例的微孔板40的俯视图(图11a)和图11a中的a-a剖视图(图11b)。微孔板40具有沿着长度方向配置的孔40a～40j和传感器安装部40s。与图5所示的实施例1的微孔板20的一个不同点如下。即，图5所示的实施例1的微孔板20中，其一部分孔相对于中心线是对称的，沿着长度方向排列成2列。与此相对地，图11所示的微孔板40中，所有的孔沿着长度方向在中心线上排列成一列。以下从图的左侧起依次说明配置的孔或结构。
[0259]
首先配置过滤器孔40a。将过滤器(未图示)压入到该过滤器孔40a中。如图11b所示，底部具有一部分斜面，由此能够将经过滤的溶液(或稀释混合液)高效地收集到更深的部位。
[0260]
接着设置移液器吸头放置架42。移液器吸头放置架42具有配置在开口部的壁。由此，能够稳定地保持移液器吸头等以避免位置偏离。若干实施方式中，移液器吸头吸头放置架如图11b所示可以具有封闭的底面。由此，能够将使用中、使用后可能产生的液滴保持在卡盒内，从而不污染装置、保持清洁。
[0261]
在其相邻处配置传感器洗涤液孔40i和稀释液孔40b。
[0262]
然后，配置第一搅拌孔40e。测定装置具有相对于移液器卡盒40从下方接近、包围第一搅拌孔40e并对其进行加热的加热器。可以控制内部的温度以适合于规定的混合或搅拌。
[0263]
蛋白酶液孔40g、传感器校准液孔40j、准备液孔40c、和指示剂液孔40d被配置成单
排。
[0264]
在其相邻处配置光学测定孔40f。光学测定孔40f以相对于长度方向垂直且能够使探针光沿着水平方向通过光学测定孔40f的方式构成。
[0265]
测定装置具有相对于移液器卡盒40从下方接近、从侧方和下方以所谓的u字形接触这些孔(具有凹形表面)的加热器。由此，能够将收容在这些孔中的溶液设定为适合于混合或光学测定孔40f内的测定的温度。若干实施方式中，该加热器可以以同时加热蛋白酶液孔40g、传感器校准液孔40j、准备液孔40c、指示剂液孔40d、和光学测定孔40f的方式构成。若干实施方式中，该加热器可以以同时加热蛋白酶液孔40g、传感器校准液孔40j、准备液孔40c、和指示剂液孔40d的方式构成。若干实施方式中，该加热器可以以仅加热光学测定孔40f或单独加热光学测定孔40f的方式构成。若干实施方式中，该加热器可以以单独加热蛋白酶液孔40g、传感器校准液孔40j、准备液孔40c、和指示剂液孔40d以及光学测定孔40f的方式构成。
[0266]
图中最右侧设置有安装传感器(未图示)的传感器安装部40s。传感器另行制造并安装于此。
[0267]
＜应用例＞
[0268]
上述的实施方式和实施例是基于白蛋白和糖化白蛋白的测定而记载的，但是本发明不限于此。若干实施方式中，可以实质上同时或并行地对2个不同的测定对象物质进行测定。可以对一者进行光学测定、对另一者进行电化学测定。若干实施方式中，可以对于某一种物质的由变形、修饰、基团键合的差异或有无等形成的多种形态中的一者进行光学测定，并且对另一者进行电化学测定。本发明提供各种对象物质和各种测定方法。以下示出若干应用例作为非限定性例示。
[0269]
＜应用例1：酶感测＞
[0270]
若干实施方式中，可以使用本发明的任意微孔板进行酶感测。例如，可以对各种底物进行规定的酶反应并通过传感器测定其产物。
[0271]
若干实施方式中，可以进行使用两个以上阶段、2个阶段的酶反应的感测。两个以上酶反应有时各自的指定条件不同。另外，存在某酶反应对整体的酶反应进行限速的情况。将酶反应分开，通过移液在量和时间上准确地对各酶反应进行控制，由此能够进行准确且误差小的酶感测。
[0272]
＜胆固醇＞
[0273]
若干实施方式中，对胆固醇进行酶感测。由胆固醇酯和水，通过胆固醇酯酶的酶反应而生成胆固醇和脂肪酸。由胆固醇和氧，通过胆固醇氧化酶的酶反应而生成胆甾烯酮和过氧化氢。通过测定此时的氧、过氧化氢，可以求出初始的胆固醇酯和/或胆固醇的量。
[0274]
可以将胆固醇酯酶溶液和胆固醇氧化酶溶液分别收容于规定的孔。传感器可以具备氧电极、过氧化氢电极或其它电极、或者它们的组合。
[0275]
＜蔗糖＞
[0276]
若干实施方式中，可以对蔗糖进行酶感测。由蔗糖和水，通过转化酶的酶反应而生成α-d-葡萄糖和果糖。由α-d-葡萄糖，通过变旋酶的酶反应而生成β-d-葡萄糖。由β-d-葡萄糖和氧，通过葡萄糖氧化酶(gox)的酶反应而生成葡糖酸内酯和过氧化氢。通过测定此时的氧、过氧化氢，可以求出初始的蔗糖和/或中间产物的量。
[0277]
可以将转化酶溶液和变旋酶溶液分别收容于规定的孔。传感器可以具备氧电极、过氧化氢电极或其它电极、或者它们的组合。
[0278]
除了上述的底物以外，测定对象的分子和使用的酶不限于上述。例如，对于葡萄糖、磷脂酰胆碱、中性脂肪等底物，可以在一个或两个以上孔内进行一阶段或多阶段的酶反应并通过传感器检测酶反应的中间或最终产物。若干实施方式中，溶液可以含有辅因子。若干实施方式中，溶液可以含有酶和辅因子。
[0279]
＜应用例2：介质型感测＞
[0280]
若干实施方式中，可以使用gox和介质(二茂铁衍生物、1,4-苯醌、四硫富瓦烯等)测定葡萄糖。可以将gox和介质收容在不同的孔中。
[0281]
在以往的方法中，需要在加入介质后体系的ph达到稳定的状态下进行测定。因此灵敏度不高。本应用例中，例如可以将ph调节到还原侧并向其中加入介质。可以在其灵敏度高的状态下进行测定。ph随着时间而变化。但是，能够从灵敏度高的状态起测定传感器的输出的时间变化。由此，能够更准确、更高效地进行测定。
[0282]
＜应用例3：酶效价的评价＞
[0283]
若干实施方式中，可以使用本发明的任意微孔板测定对象酶的效价。例如，可以评价酶效价。
[0284]
若干实施方式中，将评价对象的酶导入到第一孔内。由此准备酶溶液。取该酶溶液的一部分，加入到光学测定孔。对该酶进行光学测定，可以求出初始的酶的总量。取酶溶液的一部分，导入到第二孔。在第二孔内，将氧溶液和已知量或已知浓度的底物混合。底物可以预先收容在第二孔内，也可以在氧溶液的导入前或导入后从其它孔或外部导入到第二孔内。由此准备底物混合液。底物例如可以为糖化肽、糖化赖氨酸等。由此，通过酶反应而生成过氧化氢。在规定时间之后，取出该反应液并导入到传感器。可以测定与从底物与酶的反应实质性开始时刻起的时间对应的输出。由其可以求出酶溶液中的活性酶的量。由酶的总量和活性酶的量，可以求出酶的效价。
[0285]
若干实施方式中，可以配置两个以上传感器。两个以上传感器可以分别对不同的对象物质进行检测或定量。
[0286]
＜应用例4：比率测定＞
[0287]
若干实施方式中，可以求出2个对象物质的比率。例如，可以求出白蛋白/球蛋白比(a/g比)。白蛋白与球蛋白可以利用各自的对应溶液进行处理，可以通过各自适用的方法或感测来测定。
[0288]
＜应用例5：平衡测定＞
[0289]
若干实施方式中，可以进行平衡测定。例如，可以测定氨基酸平衡。可以根据各氨基酸的官能团使用多种测定方法(光测定、电化学测定)。例如，可以测定金属平衡(mb检查)。例如，可以测定激素平衡。
[0290]
＜应用例6：水质测定＞
[0291]
若干实施方式中，可以测定水质。例如，可以通过光测定来评价对象溶液的光学特性。光测定可以为分光测定。可以由各波长下的特性求出溶液中的物质的种类和/或各自的量。可以通过电测定来求出ph、电解质的量等。可以将水的光学特性与电特性结合来评价对象的水质。
[0292]
＜应用例7：微生物感测＞
[0293]
若干实施方式中，可以使用微生物来评价对象溶液。可以向对象溶液中加入植物性的微生物。若干方式中，可以向各孔中导入不同的微生物。若干方式中，可以向两个以上孔中导入一个或两个以上相同微生物，并且对各孔设定光照射条件。可以对其混合溶液照射两个以上或者规定的波长或强度的光。可以将其孔内的温度调节至对于各微生物而言适宜的温度。由此，各微生物通过呼吸而产生氧。或者，各植物性微生物通过光合作用而产生二氧化碳。它们的呼吸和光合作用依赖于作为环境指标的水质。在规定的反应时间后将溶液导入到传感器。传感器测定溶液内的氧和/或二氧化碳的量。由此，可以测定bod等水质。
[0294]
本发明还提供以下的实施方式。
[0295]
a001
[0296]
一种微孔板，其具备：
[0297]
至少一个(或两个以上)孔；和
[0298]
电化学传感器。
[0299]
a002
[0300]
一种微孔板，其是用于进行光学测定和电化学测定的微孔板，其具备：
[0301]
至少一个(或两个以上)孔；
[0302]
光学测定孔；和
[0303]
电化学传感器。
[0304]
a011
[0305]
一种微孔板，其是用于进行光学测定和电测定的微孔板，其具备：
[0306]
内包稀释液的稀释液孔；
[0307]
内包含有蛋白质用指示剂和蛋白酶的溶液、具有光学测定用窗的光学测定孔；和
[0308]
电化学传感器。
[0309]
a011b
[0310]
根据a011所述的微孔板，其中，
[0311]
上述稀释孔和上述光学测定孔中的任一者中内包有用于蛋白质的光学测定的准备液。
[0312]
a012
[0313]
一种微孔板，其是用于进行光学测定和电测定的微孔板，其具备：
[0314]
内包稀释液的稀释液孔；
[0315]
内包蛋白质用指示剂液、具有光学测定用窗的光学测定孔；
[0316]
内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；和
[0317]
电化学传感器。
[0318]
a012b
[0319]
根据a012所述的微孔板，其中，
[0320]
上述稀释孔和上述光学测定孔中的任一者中内包有用于蛋白质的光学测定的准备液。
[0321]
a013
[0322]
一种微孔板，其是用于进行光学测定和电测定的微孔板，其具备：
[0323]
内包稀释液的稀释液孔；
[0324]
内包蛋白质用指示剂液的指示剂液孔；
[0325]
具有光学测定用窗的光学测定孔；
[0326]
内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；和
[0327]
电化学传感器。
[0328]
a013b
[0329]
根据a013所述的微孔板，其中，
[0330]
上述稀释孔、上述指示剂液孔和上述光学测定孔中的任一者中内包有用于蛋白质的光学测定的准备液。
[0331]
a014
[0332]
一种微孔板，其是用于进行光学测定和电测定的微孔板，其具备：
[0333]
(a)内包稀释液的稀释液孔；
[0334]
(d)内包指示剂液的指示剂液孔；
[0335]
(e)用于搅拌溶液的第一搅拌孔；
[0336]
(f)具有光学测定用窗的光学测定孔；
[0337]
(g)内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；
[0338]
(h)用于搅拌溶液的第二搅拌孔；和
[0339]
(s)电化学传感器。
[0340]
a014b
[0341]
根据a014所述的微孔板，其中，
[0342]
上述孔(a)至(h)中的任一者中内包有用于蛋白质的光学测定的准备液。
[0343]
a015
[0344]
一种微孔板，其是用于进行光学测定和电测定的微孔板，其具备：
[0345]
(a)内包稀释液的稀释液孔；
[0346]
(b)安装有过滤器的过滤器孔；
[0347]
(c)内包用于蛋白质的光学测定的准备液的准备液孔；
[0348]
(d)内包指示剂液的指示剂液孔；
[0349]
(e)用于搅拌溶液的第一搅拌孔；
[0350]
(f)能够从外部入射光并向外部取出光的光学测定孔；
[0351]
(g)内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；
[0352]
(h)用于搅拌溶液的第二搅拌孔；
[0353]
(i)内包传感器洗涤液的传感器洗涤液孔；和
[0354]
(s)电化学传感器。
[0355]
a015b
[0356]
根据a015所述的微孔板，其中，
[0357]
上述孔(a)至(i)中的任一者中内包有用于蛋白质的光学测定的准备液。
[0358]
a016
[0359]
一种微孔板，其是用于进行光学测定和电测定的微孔板，其具备：
[0360]
(a)内包稀释液的稀释液孔；
[0361]
(b)安装有过滤器的过滤器孔；
[0362]
(c)内包用于蛋白质的光学测定的准备液的准备液孔；
[0363]
(d)内包指示剂液的指示剂液孔；
[0364]
(e)用于搅拌溶液的第一搅拌孔；
[0365]
(f)能够从外部入射光并向外部取出光的光学测定孔；
[0366]
(g)内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；
[0367]
(h)用于搅拌溶液的第二搅拌孔；
[0368]
(i)内包传感器洗涤液的传感器洗涤液孔；
[0369]
(j)内包传感器校准液的传感器校准液孔；和
[0370]
(s)电化学传感器。
[0371]
a016b
[0372]
一种微孔板，其是用于进行光学测定和电测定的微孔板，其具备：
[0373]
(a)内包稀释液的稀释液孔；
[0374]
(b)安装有过滤器的过滤器孔；
[0375]
(c)内包用于蛋白质的光学测定的准备液的准备液孔；
[0376]
(d)内包指示剂液的指示剂液孔；
[0377]
(e)用于搅拌溶液的搅拌孔；
[0378]
(f)能够从外部入射光并向外部取出光的光学测定孔；
[0379]
(g)内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；
[0380]
(i)内包传感器洗涤液的传感器洗涤液孔；
[0381]
(j)内包传感器校准液的传感器校准液孔；和
[0382]
(s)电化学传感器。
[0383]
a021
[0384]
根据实施方式a001至a016b中任一项所述的微孔板，其中，还具备以收容来自上述电化学传感器的排出液的方式构成的废液槽。
[0385]
b001
[0386]
一种系统，其为求出蛋白质的糖化度的自动测定系统，其具备：
[0387]
至少一个移液器头；
[0388]
具备至少一个(或两个以上)孔、光学测定孔和电化学传感器的微孔板；
[0389]
用于使上述移液器头和上述微孔板相对移动的驱动系统；和
[0390]
以与上述电化学传感器连接的方式构成的电测定单元。
[0391]
b002
[0392]
根据实施方式b001所述的系统，其中，还具备控制上述微孔板的至少一部分的温度的温度控制系统。
[0393]
b003
[0394]
根据实施方式b002所述的系统，其中，
[0395]
上述温度控制系统具备以相对于上述微孔板相对地移动并与至少一个孔靠近的方式构成的加热器。
[0396]
b011
[0397]
根据实施方式b003所述的系统，其中，还具备控制上述驱动系统的动作、利用上述加热器的加热和上述加热器的动作中的至少一个的计算机。
[0398]
c001
[0399]
一种通过电化学方式测定对象物质的方法，其具备下述步骤：
[0400]
提供实施方式a001至a021中任一项所述的微孔板；
[0401]
提供可能包含对象物质的液体；
[0402]
通过移液操作将上述液体导入到上述微孔板的任意孔；
[0403]
在上述孔内或上述微孔板的其它孔内对上述液体或上述对象物质进行测定所必需的处理；
[0404]
通过移液操作将经上述处理的上述孔内的溶液导入到电化学传感器；和
[0405]
使用上述电化学传感器检测或测定对象物质。
[0406]
c011
[0407]
一种测定蛋白质的糖化度的方法，其包括下述步骤：
[0408]
提供实施方式a016所述的微孔板；
[0409]
获得可能具有糖化蛋白的体液；
[0410]
将采集的体液导入到稀释液孔，准备稀释混合液；
[0411]
通过移液操作，将规定量的体液与稀释液的混合液(稀释混合液)从稀释液孔取出，使其通过过滤器孔的过滤器，将经过滤的稀释混合液导入到过滤器孔内；
[0412]
将过滤器从过滤器孔拆下；
[0413]
通过移液操作，将规定量的准备液孔内的溶液(例如氧化剂)从准备液过滤器孔取出，导入到第一搅拌孔；
[0414]
通过移液操作，将规定量的指示剂液(例如bcp)从指示剂液孔取出，导入到第一搅拌孔，准备指示剂混合液；
[0415]
通过移液操作，将规定量的经过滤的混合液从过滤器孔取出，导入到第一搅拌孔，准备光学测定用混合液；
[0416]
通过移液操作，将规定量的光学测定用混合液从第一搅拌孔取出，导入到光学测定孔；
[0417]
测定位于光学测定孔内的光学测定用混合液的光学特性；
[0418]
基于光学测定用混合液的光学特性求出蛋白质的量；
[0419]
通过移液操作，将规定量的传感器洗涤液从传感器洗涤液孔取出，使其流到传感器；
[0420]
通过移液操作，将规定量的传感器校准液从传感器校准液孔取出，使其流到传感器；
[0421]
使用传感器校准液对传感器进行校准；
[0422]
通过移液操作，将规定量的蛋白酶溶液从蛋白酶液孔取出，导入到第二搅拌孔；
[0423]
通过移液操作，将规定量的经过滤的混合液从过滤器孔取出，导入到第二搅拌孔，准备蛋白酶混合液；
[0424]
通过移液操作，将规定量的蛋白酶混合液在从蛋白酶导入起的规定时刻从第二搅拌孔取出，导入到传感器；
[0425]
利用传感器对于蛋白酶混合液进行电测定；
[0426]
基于电测定求出作为对象的糖化蛋白的量；和
[0427]
由求出的蛋白质的量和求出的糖化蛋白的量求出蛋白质的糖化度。
[0428]
c012
[0429]
根据实施方式c011所述的方法，其中，
[0430]
准备上述蛋白酶混合液的步骤具备加热上述第二搅拌孔内的溶液而激活蛋白酶反应的步骤。
[0431]
c021
[0432]
一种测定蛋白质的糖化度的方法，其具备下述步骤：
[0433]
提供实施方式a016b所述的微孔板；
[0434]
获得可能具有糖化蛋白的体液；
[0435]
将采集的体液导入到稀释液孔，准备稀释混合液；
[0436]
通过移液操作，将规定量的体液与稀释液的混合液(稀释混合液)从稀释液孔取出，使其通过过滤器孔的过滤器，将经过滤的稀释混合液导入到过滤器孔内；
[0437]
将过滤器从过滤器孔拆下；
[0438]
通过移液操作，将规定量的准备液(例如氧化剂)从准备液孔取出，导入到光学测定孔；
[0439]
通过移液操作，将规定量的指示剂液(例如bcp)从指示剂液孔取出，导入到光学测定孔，准备指示剂混合液；
[0440]
通过移液操作，将规定量的经过滤的稀释混合液从过滤器孔取出，导入到光学测定孔，准备光学测定用混合液；
[0441]
测定位于光学测定孔内的光学测定用混合液的光学特性；
[0442]
基于光学测定用混合液的光学特性求出蛋白质的量；
[0443]
通过移液操作，将规定量的传感器洗涤液从传感器洗涤液孔取出，使其流到传感器；
[0444]
通过移液操作，将规定量的传感器校准液从传感器校准液孔取出，使其流到传感器；
[0445]
使用传感器校准液对传感器进行校准；
[0446]
通过移液操作，将规定量的蛋白酶溶液从蛋白酶液孔取出，导入到第一搅拌孔；
[0447]
通过移液操作，将规定量的经过滤的稀释混合液从过滤器孔取出，导入到第一搅拌孔，准备蛋白酶混合液；
[0448]
通过第一搅拌孔周围的加热器以规定温度将第一搅拌孔加热规定时间，使蛋白酶混合液进行反应；
[0449]
通过移液操作，将规定量的蛋白酶混合液在从蛋白酶导入起的规定时刻从第一搅拌孔取出，导入到传感器；
[0450]
利用传感器对于蛋白酶混合液进行电测定；
[0451]
基于电测定求出作为对象的糖化蛋白的量；和
[0452]
由求出的蛋白质的量和求出的糖化蛋白的量来求出蛋白质的糖化度。
[0453]
d001
[0454]
一种计算机软件，其用于使计算机执行实施方式c001至c012所述的方法。
[0455]
e001
[0456]
一种存储介质，其存储实施方式d001所述的计算机软件。
[0457]
以上对本发明的若干实施方式和实施例进行了说明，但是这些实施方式和实施例是对本发明进行例示性说明的。例如，上述各实施方式是为了容易理解地说明本发明而详细说明的，可以根据需要追加变更尺寸、构成、材质、电路。需要说明的是，将上述列举的本发明的一个或两个以上特征任意组合而成的实施方式也包含在本发明的范围内。在不脱离本发明的技术思想的范围内，权利要求书包括针对实施方式的多种变形方式。因此，本说明书公开的实施方式和实施例是用于例示而示出的，不应认为是对本发明的范围进行限定。

技术特征：
1.一种微孔板，其具备：至少一个或两个以上孔；和电化学传感器。2.一种微孔板，其是用于进行光学测定和电化学测定的微孔板，其具备：至少一个(或两个以上)孔；光学测定孔；和电化学传感器。3.一种微孔板，其是用于进行光学测定和电测定的微孔板，其具备：内包稀释液的稀释液孔；内包含有蛋白质用指示剂和蛋白酶的溶液、具有光学测定用窗的光学测定孔；和电化学传感器。4.一种微孔板，其是用于进行光学测定和电测定的微孔板，其具备：内包稀释液的稀释液孔；内包蛋白质用指示剂液、具有光学测定用窗的光学测定孔；内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；和电化学传感器。5.一种微孔板，其是用于进行光学测定和电测定的微孔板，其具备：内包稀释液的稀释液孔；内包蛋白质用指示剂液的指示剂液孔；具有光学测定用窗的光学测定孔；内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；和电化学传感器。6.一种微孔板，其是用于进行光学测定和电测定的微孔板，其具备：(a)内包稀释液的稀释液孔；(d)内包指示剂液的指示剂液孔；(e)用于搅拌溶液的第一搅拌孔；(f)具有光学测定用窗的光学测定孔；(g)内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；(h)用于搅拌溶液的第二搅拌孔；和(s)电化学传感器。7.一种微孔板，其是用于进行光学测定和电测定的微孔板，其具备：(a)内包稀释液的稀释液孔；(b)安装有过滤器的过滤器孔；(c)内包用于蛋白质的光学测定的准备液的准备液孔；(d)内包指示剂液的指示剂液孔；(e)用于搅拌溶液的第一搅拌孔；(f)能够从外部入射光并向外部取出光的光学测定孔；(g)内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；(h)用于搅拌溶液的第二搅拌孔；
(i)内包传感器洗涤液的传感器洗涤液孔；和(s)电化学传感器。8.一种微孔板，其是用于进行光学测定和电测定的微孔板，其具备：(a)内包稀释液的稀释液孔；(b)安装有过滤器的过滤器孔；(c)内包用于蛋白质的光学测定的准备液的准备液孔；(d)内包指示剂液的指示剂液孔；(e)用于搅拌溶液的第一搅拌孔；(f)能够从外部入射光并向外部取出光的光学测定孔；(g)内包蛋白酶液的蛋白酶液孔；(h)用于搅拌溶液的第二搅拌孔；(i)内包传感器洗涤液的传感器洗涤液孔；(j)内包传感器校准液的传感器校准液孔；和(s)电化学传感器。9.根据权利要求1至8中任一项所述的微孔板，其中，还具备以收容来自所述电化学传感器的排出液的方式构成的废液槽。10.一种系统，其为求出蛋白质的糖化度的自动测定系统，其具备：至少一个移液器头；具备至少一个(或两个以上)孔、光学测定孔和电化学传感器的微孔板；用于使所述移液器头和所述微孔板相对移动的驱动系统；和以与所述电化学传感器连接的方式构成的电测定单元。11.根据权利要求10所述的系统，其中，还具备控制所述微孔板的至少一部分的温度的温度控制系统。12.根据权利要求11所述的系统，其中，所述温度控制系统具备以相对于所述微孔板相对地移动并与至少一个孔靠近的方式构成的加热器。13.根据权利要求12所述的系统，其中，还具备控制所述驱动系统的动作、利用所述加热器的加热和所述加热器的动作中的至少一个的计算机。14.一种通过电化学方式测定对象物质的方法，其具备下述步骤：提供权利要求1至9中任一项所述的微孔板；提供可能包含对象物质的液体；通过移液操作将所述液体导入到所述微孔板的任意孔；在所述孔内或所述微孔板的其它孔内对所述液体或所述对象物质进行测定所必需的处理；通过移液操作将经所述处理的所述孔内的溶液导入到电化学传感器；和使用所述电化学传感器检测或测定对象物质。15.一种测定蛋白质的糖化度的方法，其包括下述步骤：提供权利要求8所述的微孔板；获得可能具有糖化蛋白的体液；
将采集的体液导入到稀释液孔，准备稀释混合液；通过移液操作，将规定量的体液与稀释液的混合液(稀释混合液)从稀释液孔取出，使其通过过滤器孔的过滤器，将经过滤的稀释混合液导入到过滤器孔内；将过滤器从过滤器孔拆下；通过移液操作，将规定量的准备液孔内的溶液(例如氧化剂)从准备液过滤器孔取出，导入到第一搅拌孔；通过移液操作，将规定量的指示剂液(例如bcp)从指示剂液孔取出，导入到第一搅拌孔，准备指示剂混合液；通过移液操作，将规定量的经过滤的混合液从过滤器孔取出，导入到第一搅拌孔，准备光学测定用混合液；通过移液操作，将规定量的光学测定用混合液从第一搅拌孔取出，导入到光学测定孔；测定位于光学测定孔内的光学测定用混合液的光学特性；基于光学测定用混合液的光学特性求出蛋白质的量；通过移液操作，将规定量的传感器洗涤液从传感器洗涤液孔取出，使其流到传感器；通过移液操作，将规定量的传感器校准液从传感器校准液孔取出，使其流到传感器；使用传感器校准液对传感器进行校准；通过移液操作，将规定量的蛋白酶溶液从蛋白酶液孔取出，导入到第二搅拌孔；通过移液操作，将规定量的经过滤的混合液从过滤器孔取出，导入到第二搅拌孔，准备蛋白酶混合液；通过移液操作，将规定量的蛋白酶混合液在从蛋白酶导入起规定时刻从第二搅拌孔取出，导入到传感器；利用传感器对蛋白酶混合液进行电测定；基于电测定求出作为对象的糖化蛋白的量；和由求出的蛋白质的量和求出的糖化蛋白的量求出蛋白质的糖化度。16.根据权利要求15所述的方法，其中，准备所述蛋白酶混合液的步骤具备加热所述第二搅拌孔内的溶液而激活蛋白酶反应的步骤。17.一种计算机软件，其用于使计算机执行权利要求14至16所述的方法。

技术总结
根据本发明的一个实施方式，提供具备至少一个(或两个以上)孔和电化学传感器的微孔板。一个(或两个以上)孔和电化学传感器的微孔板。一个(或两个以上)孔和电化学传感器的微孔板。


技术研发人员：片山宪和 熊谷阳子 伊藤成史
受保护的技术使用者：株式会社普欧威盖特
技术研发日：2022.01.21
技术公布日：2023/9/23