包含黄烷醇单体和E-葡萄素的组合物的制作方法

包含黄烷醇单体和e-葡萄素的组合物
技术领域
1.本发明涉及一种作为人类或动物的营养品或药品的包含黄烷醇单体和ε-葡萄素组合的组合物。


背景技术：

2.内皮是布满血管内部的单细胞层，充当组织层和循环期之间的物理屏障。它特别有助于调节血管张力。内皮机能障碍或内皮功能障碍的特征是因血流量增加而使血管扩张，从而导致血管能力下降。它主要是由于一氧化氮(no)的利用度下降，这可能是由于产生的no减少，或者由于其捕获率增大，尤其是氧化应激现象引起的捕获率增大。
3.通过测量血流介导的血管扩张(通常被称为“fmd”，是“flow-mediated dilation”的英文首字母缩写，或法文“dilatation m
é
di
é
e par le flux”)评价了内皮功能。
4.因此，内皮在维持血流(大血管和微血管)方面起着核心作用。因此，内皮功能改变主要导致心血管疾病或障碍，特别是动脉粥样硬化，或者还有血管疾病、眼部疾病、与认知能力下降相关的疾病、功能性肠道疾病、勃起功能障碍、或与更年期有关的障碍。
5.已知内皮功能障碍是心血管疾病的早期预测标志，先于其临床表现。然而，心血管疾病成为世界上导致死亡的最主要原因(占世界死亡人数的30％)，并成为重大公共卫生问题。
6.因此，有必要确定一种能够改善内皮功能的产品，特别是有助于预防心血管疾病的产品。
7.此外，内皮功能障碍也被描述为认知能力下降的预测标志，包括未出现脑血管疾病的情况下(naiberg等人，psychosom med.2016年；78(2):192-207)。事实上，在认知功能中起关键作用的脑血流与内皮功能密切相关(fouda等人，arterioscler thromb vasc biol.2019年4月；39(4):593-602)。
8.保持良好的血管健康状况(并因此保持最佳内皮功能)对视力也很重要。事实上，心血管疾病(糖尿病、高血压，但也包括高胆固醇血症)可能引起各种眼部疾病，如高血压视网膜病变、糖尿病视网膜病变、青光眼等(singh等人，eur j ophthalmol.2020年4月27:1120672120914232)。
9.内皮功能障碍也被认为是炎性肠病的病因之一(cibor等人world jgastroenterol.2016年1月21；22(3):1067-1077)。
10.另一方面，血管扩张剂no，在触发勃起方面也起着至关重要的作用。因此，对于男性，内皮功能障碍通常与勃起功能障碍相关(kov
á
cs i等人，j.cardiovasc pharmacol，2008年2月；51(2):148-53)。
11.对于女性，雌激素刺激内皮细胞产生no。然而，在绝经期间，雌激素下降导致fmd急剧下降，这表现为内皮功能障碍(somani yb等人，am j physiol heart circ physiol，2019年8月1；317(2):h395-h404)。此外，精神紧张已被证实会诱发内皮功能受损(takase b等人，clin cardiol.2004年4月；27(4):223-7)。同样，睡眠缺陷和某些睡眠障碍会损害内
皮功能(budhiraja等人，j clin sleep med.2007年6月15；3(4):409-15)。内皮功能，和微循环一样，也在暴露于紫外线时受到影响(wolf等人，exp physiol.2019年；104(7):1136-1146)。
12.因此，内皮功能障碍是许多病理的原因或与之有关。
13.因此，需要维持或改善内皮功能。
14.多项临床研究表明，摄入富含类黄酮的食物或饮料后，fmd有显着改善。在类黄酮中，已证明摄入单剂量表儿茶素可在2小时内诱导fmd显着提高(shafabakhsh等人，crit rev food sci nutr。2020年；60(14):2369-2378)。
15.另一方面，流行病学研究表明，通过饮食摄入类黄酮与老年性认知能力下降之间存在负相关关系。特别是，黄烷醇单体(儿茶素和表儿茶素)已被证明对认知功能产生有利作用，并且这些作用主要是由于黄烷醇单体增加脑血流量的能力(haskell-ramsay等人，nutrients，2018年7月27；10(8):986)。评价表儿茶素对认知功能作用的研究证明，表儿茶素的剂量大于50mg/天时，对于50岁以上受试者的有利作用持续至少28天(haskell-ramsay等人，营养素。2018年7月27；10(8):986)。
16.还证明了补充白藜芦醇后fmd显着提高(并因此改善内皮功能)、脑血流量和部分认知能力得到改善(cicero等人，arch med sci.2019年；15(4):936-943)。临床前实验表明，白藜芦醇二聚体，特别是ε-葡萄素和δ-葡萄素，可能能够诱导相同的作用(wu等人，the kaohsiung journal of medical sciences 36(2020):535
–
542)。
17.因此，已经报告了类黄酮、白藜芦醇或其二聚体各自对内皮功能的有益作用。
18.然而，仍然迫切需要一种能够预防或治疗内皮功能障碍和相关疾病、睡眠障碍、紧张、认知或能够防晒的产品，与现有技术相比，其有效性有所改善。


技术实现要素：

19.因此，本发明的目的是提供一种新组合物，与单独摄入的特定分子相比，该组合物在对抗内皮功能障碍相关疾病方面的有效性高于现有产品。
20.发明人出人意料地发现了一种包含天然来源分子的特定组合的组合物，以及所述分子在所述组合物中的特定含量，所述组合物具有协同作用并因此具有改善的内皮功能有效性。发明人还证明了所述组合物的抗氧化作用的利用，以及用于保护皮肤免受uvb(紫外线b)伤害，防止日光红斑，预防色素过度沉着，预防和/或减少老年性褐斑。最后，该组合物还用于改善记忆力和/或注意力和/或专注力和/或灵敏性和/或警觉性和/或学习和/或语言和/或情绪和/或紧张和/或焦虑和/或睡眠。
21.本发明的目的特别是一种组合物，具体包含至少一种属于类黄酮类的分子和至少一种属于二苯乙烯类的分子。这种组合物旨在用作人类或动物的营养品、饮食补充剂或药物。
22.本发明具体地涉及一种包含分子混合物的组合物，所述分子包括：
[0023]-至少15％的黄烷醇单体，该百分比为干重与组合物总干重之比，
[0024]
以及
[0025]-至少15ppm的epsilon-葡萄素(ε-葡萄素)，该比值为干重与组合物总干重之比。
[0026]
因此，这种组合物与单独施用所述分子相比具有协同作用。
[0027]
根据本发明的优选目的，黄烷醇单体的量高于ε-葡萄素的量。优选地，黄烷醇单体与ε-葡萄素之比在20000至4之间。
[0028]
黄烷醇单体和ε-葡萄素可来自植物提取物，优选地来自至少一种葡萄(vitis vinifera)提取物和/或至少两种葡萄(vitis vinifera)提取物的混合物。
[0029]
该组合物可作为营养品、饮食补充剂或药物口服施用。该组合物和/或组合物中的一种或多种分子可以包封或微囊包封在食品载体中。该组合物可以是粉末、硬胶囊、片剂、软胶囊、溶液、混悬液、乳液或口香糖的形式。
[0030]
当组合物旨在用作药物或饮食补充剂时，该组合物优选地用于预防和/或治疗选自心血管疾病、血管疾病、与认知能力下降相关的疾病、与记忆丧失相关的疾病、神经退行性疾病、消化系统疾病、关节疾病、勃起障碍和与绝经期相关的障碍。
[0031]
本发明的另一方面涉及一种根据本发明的组合物对于健康人类或动物的非治疗用途，用以改善认知功能和/或执行功能，和/或限制与老年性正常认知能力下降和/或改善记忆力和/或注意力和/或专注力和/或灵敏性和/或警觉性和/或学习和/或语言和/或情绪和/或紧张和/或焦虑和/或睡眠和/或淡化皮肤色素沉着，和/或减少老年性皮肤色斑的出现和/或调节黑色素生成和/或预防皮肤色素过度沉着，和/或预防日晒红斑，和/或改善肤色。
[0032]
下面通过对本发明的详细描述、实施例和附图来阐述其他特征及优点。
附图说明
[0033]
[图1]图1示出了，评价酪氨酸酶活性时，与对照组相比，各种受试组合物在7min时的吸光度测量(标准化并校正)(平均值
±
sem)及其各自的抑制百分比。n：重复次数。受试浓度：红葡萄渣提取物：0.025mg/ml，甘草提取物：0.0375mg/ml，葡萄籽提取物：0.0286mg/ml，包含本发明组合物的混合物：0.1mg/ml。该混合物由58.8％的根据本发明的组合物和41.2％的甘草提取物构成，所述组合物本身由53.4％的e1和46.6％的e3(根据本发明的组合物含19.4％的黄烷醇单体和28ppm的ε-葡萄素)构成，所述甘草提取物含8.1％的甘草酸。
[0034]
红葡萄渣提取物的p值：《0.724，甘草提取物的p值：《0.0001，葡萄籽提取物的p值：《0.0001，3种提取物相互作用时的p值：《0.0001。
[0035]
[图2]图2是a：为观察到的或者根据添加到器官罐中的样品累计体积估计的血管松弛百分比(平均值
±
sem)示图。示出的曲线表明了2mg/ml受试混合物的作用、1.1mg/ml葡萄籽提取物(e1)的估计作用和0.1mg/ml白葡萄渣提取物(e5)的估计作用。受试混合物本身包含65％的根据本发明的组合物和35％的麦芽糊精，所述组合物本身由92.3％的e1和7.7％的e5(根据本发明的组合物含33％的黄烷醇单体和459ppm的ε-葡萄素)构成。事先将1.1mg/ml葡萄籽提取物的估计作用与观察数据进行了比较。通过t检验进行的统计分析未表明估计值与100μl至2000μl之间的累计体积的观测值之间存在显着差异。b：示出了添加到器官罐中的300μl样品的血管松弛百分比(平均
±
sem)的直方图。
[0036]
[图3]图3示出了用cm-h2dcfda标记的细胞发出的平均荧光强度(mfi)(平均
±
sem)。提取物混合物：270.9mg/ml的受试混合物，并且包含：53.7％的根据本发明的组合物和37.5％的甘草提取物，所述组合物本身由53.4％的e1和46.6％的e3(根据本发明的组合物含19.4％的黄烷醇单体和28ppm的ε-葡萄素)构成。***p《0.001。
[0037]
[图4]图4示出了以百分比表示的角质形成细胞增殖速率(恢复至每种条件的非照射对照值，平均值
±
sem)。提取物混合物：270.9mg/ml的受试混合物，并且包含：53.7％的根据本发明的组合物和37.5％的甘草提取物，所述组合物本身由53.4％的e1和46.6％的e3(根据本发明的组合物包含19.4％的黄烷醇单体和28ppm的ε-葡萄素)构成。***p《0.001。
具体实施方式
[0038]
定义
[0039]
在本发明的含义中，“动物”是指除人以外的任何动物。
[0040]
在本发明的含义中，“vitis vinifera提取物”或“葡萄提取物”是指一种提取物，其包含至少一种分子，特别是至少包含黄烷醇单体和/或ε-葡萄素，优选从葡萄(vitis vinifera)和/或葡萄(vitis vinifera)副产物获得的所有分子。原料可以是叶和/或果实和/或种子和/或果皮和/或果梗和/或木质部分(藤、蔓枝、根)，和/或果渣和/或葡萄酒，优选地，原料是葡萄渣(包括种子、果皮和可选的果梗)和/或葡萄籽。
[0041]“ppm”是指混合物中的百万分比。
[0042]
在本发明的含义中，“营养品”是指单独使用或与食品制剂中的其他成分或食品添加剂结合使用的，用于营养目的的食品成分，包括食品补充剂和供人或动物使用的食品。
[0043]
在本发明的含义中，“药品”是指单独使用或与药物配方中的其他活性或非活性成分结合使用的，用于治疗目的的活性成分，包括植物疗法或具有治疗作用的食品补充剂，供人或动物使用。
[0044]
在本发明的含义中，“预防(动词)”或“预防(名词)”是指将一种特定现象的发生风险或概率降低至较小程度，也就是说，在本发明的背景中指疾病或障碍。
[0045]
在本发明的含义中，“治疗(动词)”或“治疗(名词)”，是指疾病或障碍进展的降低、稳定、逆转或消退，甚至中断或抑制疾病或障碍的进展。在本发明的背景中，这些术语也适用于本发明的所述疾病或障碍的一种或几种症状。
[0046]
组合物
[0047]
因此本发明的目的是一种新组合物，尤其在改善或维持内皮功能和防晒方面具有高有效性。
[0048]
为此，本发明涉及一种包含分子混合物的组合物，所述分子包括：
[0049]-至少15％的黄烷醇单体，所述百分比为干重与组合物总干重之比，以及
[0050]-至少15ppm的ε-葡萄素，所述比值为干重与组合物总干重之比。
[0051]
黄烷醇单体是类黄酮类化合物，特别是黄烷醇亚类，尤其包括黄烷-3-醇或黄烷醇或儿茶素。最丰富的一类是儿茶素和/或表儿茶素。它们是强效抗氧化剂，尤其有助于预防炎性疾病和冠心病，还可以维持或提高认知能力。在本发明的背景中，黄烷醇单体选自儿茶素、表儿茶素以及它们的没食子基化形式，例如表儿茶素-3-o-没食子酸酯、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯。这些单体可提取自一种或多种植物(整株或部分)，例如茶(camelia sinensis)、苹果(malus domestica)、可可(theobroma cacao)或属于葡萄属的植物(整株或部分)，优选葡萄(vitis vinifera)。它们也可以来自微藻。
[0052]
ε-葡萄素是一种二苯乙烯类的天然酚，特别是类二苯乙烯。ε-葡萄素也是白藜芦醇的二聚体。它可以提取自一种或多种植物，例如属于鸢尾属-鸢尾科；槐属-豆科；买麻藤
属-买麻藤科；苔草属-莎草科；芍药属-芍药科；双翅果属-双翅果科的植物(整株或部分)，更具体地属于葡萄属的植物，优选葡萄(vitis vinifera)。ε-葡萄苷也可以来自微藻。
[0053]
根据本发明的目的，该组合物优选地包含至少100ppm的二苯乙烯，所述二苯乙烯包含至少15ppm的ε-葡萄素。因此，根据本发明的组合物包含至少100ppm的二苯乙烯，其中包含至少15ppm的ε-葡萄素。换言之，该组合物可包含例如除ε-葡萄素以外的85ppm二苯乙烯和15ppm的ε-葡萄素。所述其它二苯乙烯可以是赤松素、白皮杉醇、反式白藜芦醇、反式紫檀芪、丹叶大黄素、异丹叶大黄素、土大黄苷素、反式虎杖甙或云杉苷。(delta和/或omega和/或alpha和/或r和/或r2)葡萄素、安培洛辛a和/或e和/或f和/或h、宫苯醇c、parthenocissine a、pallidol、vitisin c、hopeaphenol、isohopeaphenol、葡萄醇e。
[0054]
根据优选的实施例，根据本发明的组合物可包含至少20％的黄烷醇单体，所述百分比为干重与组合物总干重之比，更优选至少25％的黄烷醇单体。
[0055]
根据另一实施例，根据前述任何一种实施例的组合物可包含至少50ppm的ε-葡萄素，所述比值为干重与组合物总干重之比，更优选至少100ppm的ε-葡萄素。
[0056]
根据另一优选目的，发明人确定，当黄烷醇单体的量高于二苯乙烯的重量，优选地高于ε-葡萄素的重量时，根据本发明的组合物具有改善的活性。
[0057]
优选地，黄烷醇单体与ε-葡萄素之比在20000至4之间。比，是指黄烷醇的量与ε-葡萄素的量值之比(黄烷醇单体/ε-葡萄素)。特别地，该比在15000至30之间，甚至更优选地在10000至100之间。
[0058]
优选地，黄烷醇单体是天然来源的。因此这些分子可以从天然产物中获得，优选地来自植物提取物，更优选地选自葡萄属(vitis)，优选葡萄(vitis vinifera)提取物、茶(camelia sinensis)提取物、苹果(malus do-mestica)提取物、可可(theobroma cacao)提取物。它们也可以来自微藻。
[0059]
ε-葡萄素是天然来源的，并且因此可以从天然产物中获得，优选植物提取物，更优选地选自葡萄属植物提取物，优选葡萄(vitis vinifera)提取物。
[0060]
当黄烷醇单体和ε-葡萄素是从同一植物获得时，该植物优选是葡萄属植物提取物，更优选葡萄(vitis vinifera)提取物。
[0061]
已知葡萄和葡萄酒含有黄烷醇单体。然而，二苯乙烯并且特别是ε-葡萄素不是普遍存在的，如下表1所示。此外，葡萄(vitis vinifera)中的单体浓度从未自然地超过总多酚的10％。
[0062]
然而，根据本发明的组合物涉及一种包含至少15％黄烷醇单体的分子混合物。因此，允许获得一种或多种提取物的原料的来源和类型与允许获得所述提取物的适用方法相结合，以获得包含至少15％黄烷醇单体和至少15ppm的ε-葡萄素的分子混合物。因不同葡萄原料而异的分子浓度见下表1。
[0063]
[表1]
ethnopharmacol，2005年7月14；99(3):317-24)。外用，尤其是局部使用，也有文献记载。因此，甘草提取物通常被用于旨在改善皮肤外观的化妆品配方中。
[0074]
优选地，甘草提取物包含甘草酸和/或光甘草定。
[0075]
作为额外植物提取物的示例，组合物优选地还包含至少一种提取物，选自咖啡、橄榄叶、黑醋栗、虎杖、柑橘、万寿菊的提取物及其混合物。
[0076]
可选地存在于根据本发明的组合物中的一种或多种多酚可以选自例如多酚，尤其是植物提取物(橄榄叶或橄榄、黑醋栗、咖啡、虎杖、柑橘、刺山柑的提取物)形式、还有维生素c，尤其是植物提取物(针叶樱桃、石榴、柑橘的提取物)形式、维生素e、维生素a，尤其是植物提取物的形式；或其衍生物、锌、硒及其混合物。
[0077]
可选地存在于根据本发明的组合物中的一种或多种维生素可以选自例如维生素b9、维生素b12、维生素c、维生素d、维生素e、维生素a，包括维生素原a、它们的衍生物和混合物。
[0078]
可选地存在于根据本发明的组合物中的一种或多种微量元素或微量元素可以选自例如锌、硒或铬及其混合物。
[0079]
锌是一种通过改善胰岛素敏感性、减少氧化应激和炎症来维持正常大脑功能的必需矿物。此外，欧洲食品安全局在第1924/2006号法规的框架内认可以锌在正常认知功能中的作用。
[0080]
可选地存在于根据本发明的组合物中的一种或多种类胡萝卜素可以选自例如叶黄素、玉米黄质、藏红花素、藏红花苦苷及其混合物。
[0081]
可选地存在于根据本发明的组合物中的一种或多种moega-3脂肪酸可以选自例如二十二碳六烯酸(dha)和二十碳五烯酸(epa)及其混合物。
[0082]
长链omega-3脂肪酸如二十二碳六烯酸(dha)对老年小鼠临床前水平的认知功能有益。它对神经炎症的有益作用今天已被广泛认可，并在文献中大量描述。
[0083]
可选地存在于根据本发明的组合物中的一种或多种或天然油可以选自例如鱼油、植物油、微藻油及其混合物。
[0084]
组合物还可包含其它成分，尤其例如赋形剂，包衣剂如麦芽糊精、微晶纤维素、环糊精、淀粉、可溶性或不溶性纤维、水或醇。
[0085]
根据本发明的另一目的，组合物和/或组合物中的一种或多种分子可以包封或微囊包封在食品载体中，所述食品载体选自麦芽糊精、阿拉伯树胶、氢化油、非氢化油、蜡、藻酸盐、淀粉、蛋白质及其混合物。
[0086]
包封是特别有利的，并且允许稳定并保护根据本发明的分子混合物免受其环境影响，尤其是免受摄取该组合物的人或动物的有机体的影响。因此，黄烷醇单体和ε-葡萄素受到保护，并且其生物利用度得到改善。
[0087]
此外，包封允许捕获基质中的挥发性和热敏性的活性代谢物，改善所述分子混合物在食品基质中的稳定性、生物利用度和用途，尤其包括掩盖味道和抵抗食品生产过程中化合物可能发生的变质。
[0088]
根据一种变型，该组合物和/或一种或多种分子可以经过微囊包封。微囊包封允许将活性物质保护在粒度为1μm至1000μm之间的颗粒中，更优选地30μm至500μm之间，甚至更优选地在50μm至300μm之间。
[0089]
根据另一个目的，根据本发明的组合物为粉末、硬胶囊、片剂、软胶囊、溶液、混悬液、乳液或口香糖的形式。
[0090]
该组合物旨在用作营养品、食品或饮食补充剂时，该组合物可以是乳制品、谷物、含谷物产品或饮料的形式。
[0091]
优选地，根据本发明的组合物每天向人类或动物提供剂量至少0.25mg/kg体重的黄烷醇单体和0.025μg/kg体重的ε-葡萄素。
[0092]
方法
[0093]
允许获得在所述组合物总重量中的重量占比至少为15％的黄烷醇单体和至少15ppm的ε-葡萄素的任何方法，都可用于获得根据本发明的组合物。这可以是所需比例的不同分子的混合物，也可以是包含所需比例的不同分子的植物提取物的混合物。
[0094]
根据一种实施例，根据本发明的组合物是从葡萄(vitis vinifera)提取物或葡萄(vitis vinifera)提取物的混合物获得的。允许获得重量占比至少为15％的黄烷醇单体和至少15ppm的ε-葡萄素的任何方法，都可用于获得所述提取物。
[0095]
用于获得葡萄(vitis vinifera)提取物的特别合适的方法包括以下步骤：
[0096]-用水和/或醇(尤其是乙醇)提取葡萄(vitis vinifera)(例如果实、果皮、种子、叶、果梗、藤、蔓枝、木质部分、根)，优选葡萄(vitis vinifera)籽和/或葡萄(vitis vinifera)渣(含有葡萄皮的果渣，即葡萄皮、葡萄籽和可选的果梗)，种子和/或果渣尤其可来自葡萄酒酿造过程中的压榨残留物，和/或葡萄(vitisvinifera)叶和/或葡萄(vitis vinifera.)藤、蔓枝、木质部分、根。
[0097]
水或水醇溶液(30％v/v至96％v/v)的用量优选地在所用物料质量的2倍至10倍之间。提取持续时间可在30分钟至24小时之间，提取温度在20℃至80℃之间。
[0098]
所用原料可以是干燥、新鲜或冷冻的完整植物或粉碎物形式；
[0099]-通过例如离心滗析或通过压制和过滤，从水和/或醇溶液中分离出固体物；由此获得的提取物称为粗提物a，
[0100]-可以通过在优选地低于60℃的温度和小于100mbar的压力下通过真空蒸发除去醇。
[0101]
如果使用几种原料，例如葡萄籽和葡萄渣，则该方法可以包括对两种混合原料单次提取，或者该方法可以包括获得两种单独的提取物(分别针对每种提取物实施全部或部分方法，然后对获得的两种提取物的终混)。
[0102]
基于之前获得的一种或几种粗提物a，该方法可以包括特定步骤以获得富含黄烷醇单体和/或葡萄素的一种或几种纯化提取物。
[0103]
对于黄烷醇单体，纯化可以实施如下：
[0104]-通过本领域技术人员已知的超滤和/或纳滤膜分离对预先脱除溶剂的提取物进行纯化，从而优选地选择单体并除去黄烷醇聚合物，以使获得的提取物包含富含黄烷醇单体的部分，
[0105]-使用本领域技术人员已知的有机溶剂，特别是使用乙酸乙酯，通过液/液分离进行纯化，
[0106]-通过盐(例如nacl)沉淀对黄烷醇聚合物进行纯化，然后通过例如过滤进行固/液分离。
[0107]
由此获得的提取物是富含黄烷醇单体的纯化提取物，被称为提取物b。
[0108]
该方法优选地包括对提取物a和/或提取物b进行色谱纯化的额外步骤。该步骤在于使提取物a和/或b过本领域技术人员已知的特别适于多酚的吸附树脂色谱柱，然后用水溶液，再用优选地含60％v/v至80％v/v之间的乙醇水溶液的洗脱相冲洗树脂。
[0109]
从由此获得的洗脱液中蒸发出醇，并且在优选地低于60℃的温度和低于100mbar的压力下，通过真空浓缩步骤，将洗脱液浓缩成富含多醇，并且更优选地富含黄烷醇单体和/或ε-葡萄素的洗脱液。
[0110]
该方法可包括额外步骤，所述额外步骤在于通过本领域技术人员已知的技术对纯化提取物进行干燥，所述技术包括例如雾化、在真空烘箱中干燥或冷冻干燥(有或没有载体，例如麦芽糊精、阿拉伯树胶)。
[0111]
该方法还可以包括包封或微囊包封分子和/或组合物的步骤。
[0112]
一旦获得提取物，制备根据本发明的组合物的方法可包括混合富含黄烷醇单体和ε-葡萄素的葡萄(vitis vinifera)提取物。
[0113]
用途
[0114]
根据另一方面，本发明还涉及根据前述任何一种实施例所述的组合物用作人或动物药物的用途。
[0115]
优选地，根据本发明的组合物旨在用于预防和/或治疗与内皮功能障碍相关的疾病，选自心血管疾病、血管疾病、与认知能力下降相关的疾病、与记忆丧失相关的疾病、神经退行性疾病、消化系统疾病、关节疾病、眼部疾病、勃起障碍和与绝经期相关的障碍。
[0116]
当该组合物旨在预防和/或治疗与认知能力下降相关的疾病时，包括神经退行性疾病或与记忆丧失相关的疾病，所述疾病选自阿尔茨海默症、帕金森病、亨廷顿病、运动神经元病、痴呆、抑郁、焦虑、精神分裂症、智力迟缓和认知功能障碍综合征(cds)。
[0117]
当该组合物旨在预防和/或治疗心血管疾病时，所述疾病选自动脉高血压、动脉粥样硬化、心肌梗塞、心绞痛(angor)。
[0118]
当该组合物旨在预防和/或治疗血管疾病时，所述疾病选自慢性静脉功能不全、静脉血栓形成、静脉曲张。
[0119]
当该组合物旨在预防和/或治疗消化系统疾病时，所述疾病选自肠易激综合征、克罗恩病、溃疡性结肠炎和消化不良。
[0120]
当该组合物旨在预防和/或治疗关节疾病时，所述疾病选自骨关节炎、类风湿性关节炎、类风湿性多关节炎和强直性脊柱炎。
[0121]
当该组合物旨在预防和/或治疗眼部疾病时，所述疾病选自老年性黄斑变性(dmla)、高血压性视网膜病变、糖尿病性视网膜病变、青光眼、白内障或富克斯角膜内皮营养不良。
[0122]
当该组合物旨在预防和/或治疗睡眠障碍时，所述障碍选自失眠、异态睡眠、呼吸暂停和/或睡眠低通气。
[0123]
当该组合物旨在预防和/或治疗与更年期相关的障碍时，所述病症选自潮热、盗汗、腹部脂肪量增加、阴道干燥、性欲减退、情绪障碍。
[0124]
根据另一方面，本发明还涉及根据本发明的组合物对于健康人类或动物的非治疗用途，用以改善认知功能和/或执行功能，和/或限制与老年性正常认知能力下降和/或改善
记忆力和/或注意力和/或专注力和/或灵敏性和/或警觉性和/或学习和/或语言和/或情绪和/或紧张和/或焦虑和/或睡眠和/或淡化皮肤色素沉着和/或改善皮肤美感和/或减少老年性皮肤色斑的出现，和/或调节黑色素生成和/或过量产生黑色素引起的色素过度沉着，和/或预防与日晒有关的皮肤损伤和/或紊乱，例如红斑和皮肤衰老。
[0125]
当根据本发明的组合物旨在用于淡化皮肤色素沉着和/或改善皮肤美感和/或减少老年性皮肤色斑的出现，和/或调节黑色素生成和/或过量产生黑色素引起的色素过度沉着，和/或预防与日晒相关的皮肤损伤和/或紊乱(例如红斑)和皮肤衰老时，该组合物优选地包含至少一种甘草提取物。
[0126]
在本发明的含义中，过量产生黑色素引起的色素过度沉着，是指炎症后色素沉着过度，或者由于植物光性皮炎、肿瘤过程(扁疹病，黑色素瘤)、黄褐斑、雀斑、黑棘皮症，这是由服用药物或阳光照射引起的。
[0127]
下面将通过根据本发明的组合物、根据本发明的提取物、非本发明的提取物的非限制性示例以及通过有效性结果来阐述本发明。
[0128]
实施例
[0129]
实施例1：富含黄烷醇单体的葡萄籽提取物
[0130]
该提取物是根据以下方法获得的：
[0131]-在400kg加热至85℃的水中，水提取40kg干葡萄籽
[0132]-液/固分离，然后水提取物过《15kd的膜
[0133]-然后渗透液过c18吸附色谱柱
[0134]-以2bv/h的速度用10bv吸附树脂纯化，
[0135]-以2bv/h的速度用4bv水洗涤
[0136]-以1bv/h的速度用2bv的80％v/v乙醇水溶液洗脱
[0137]-在60mbar、40℃下真空浓缩并脱醇
[0138]-喷雾干燥
[0139]
经folin方法测定，由此获得的葡萄籽提取物包含至少15％的黄烷醇单体和至少50％的总多酚。这种提取物(e1)的特征见如下表2。
[0140]
实施例2：富含花色素类但不含二苯乙烯的红葡萄皮提取物
[0141]
该提取物是根据以下方法获得的：
[0142]-40kg红葡萄渣
[0143]-用含0.1％亚硫酸盐的200kg水溶液提取
[0144]-在100mbar、50℃下真空浓缩，部分除去亚硫酸盐
[0145]-喷雾干燥。
[0146]
由此获得的葡萄提取物(e2)的特征见如下表2。
[0147]
实施例3：含二苯乙烯的葡萄渣提取物
[0148]
该提取物是根据以下方法获得的：
[0149]-水醇提取
[0150]-红葡萄渣提取物(e3)
[0151]-在80℃下，按固液比1/10，用30％v/v水醇对10kg干渣提取4小时，同时以350rpm的速度搅拌
[0152]-通过20μm过滤进行固液分离
[0153]-40℃下真空浓度
[0154]-喷雾干燥
[0155]
由此获得的葡萄提取物(e3)的特征见如下表2。
[0156]
实施例4：含二苯乙烯的纯化葡萄渣提取物
[0157]
该提取物是根据以下方法获得的：
[0158]-在80℃下，按固液比1/10，用50％v/v的水醇提取4小时
[0159]-在80℃下，按固液比1/10，用30％v/v水醇对10kg干燥果渣提取4小时，同时以350rpm的速度搅拌
[0160]-通过20μm过滤进行固液分离
[0161]-40℃下真空浓缩
[0162]-以2bv/h的速度进行20bv吸附树脂纯化
[0163]-以2bv/h的速度进行4bv水洗涤
[0164]-以1bv/h的速度，用2bv的80％v/v的乙醇水溶液洗脱
[0165]-在200mbar、40℃下真空浓缩并脱醇
[0166]-冷冻干燥
[0167]
由此获得的葡萄提取物(e4)的特征见如下表2。
[0168]
实施例5：含二苯乙烯的白葡萄渣提取物
[0169]
该提取物是根据以下方法获得的：
[0170]-在80℃下，按固液比1/10，用30％v/v的水醇对125kg的白葡萄渣提取4小时，同时以350rpm的速度搅拌
[0171]-通过20μm过滤进行固液分离
[0172]-100mbar、40℃下真空浓缩/脱醇
[0173]-以2bv/h的速度用20bv吸附树脂纯化
[0174]-以2bv/h的速度用4bv水洗涤
[0175]-以1bv/hv的速度用2bv的80％v/v乙醇水溶液洗脱
[0176]-在200mbar、40℃下真空浓缩并脱醇
[0177]-冷冻干燥。
[0178]
由此获得的葡萄提取物(e5)的特征见如下表2。
[0179]
实施例6：含二苯乙烯但不含黄烷醇单体的葡萄藤提取物
[0180]
该提取物是根据以下方法获得的：
[0181]-在80℃下，用250g的90％v/v的水醇对40g藤提取4小时
[0182]-过滤以进行固液分离
[0183]-脱醇和真空浓缩
[0184]-冷冻干燥。
[0185]
获得的葡萄(vitis vinifera)提取物(e6)包含5.1％的白藜芦醇、8.5％的ε-葡萄苷、15.5％的二苯乙烯和0％的儿茶素和表儿茶素。
[0186]
[表2]
[0187][0188]
[0189][0190]
实施例7：根据本发明的组合物示例
[0191]
下面的表3示出了组合物的若干示例，所述组合物包含来自上述实施例1至6所述方法的提取物。
[0192]
[表3]
[0193][0194]
需要说明的是，按干重计的黄烷醇二聚体(pac b1和b2)浓度大于组合物干重的5％。此外，对于来自果渣部分(种子、果皮、果梗)的葡萄(vitis vinifera)提取物，按干重计的黄酮醇浓度等于或大于组合物干重的0.05％。
[0195]
实施例8：根据本发明的组合物对于酪氨酸酶活性的作用评价
[0196]
包含黄烷醇单体和ε-葡萄素的组合物的作用评价
[0197]
该测定的目的是，通过实验设计对酶酪氨酸酶(与黑色素形成有关的酶)这种酶的活性建模，并确定黄烷醇单体和ε葡萄素对于酶对特定底物(左旋多巴)的活性的作用。通过比色反应体外测定了酪氨酸酶活性。在酪氨酸酶的作用下，左旋多巴被氧化并转化为多巴醌。然后可以在475nm处通过光谱测定监测多巴醌的形成。
[0198]
在96孔板中，每孔中沉积以下量的：80μl磷酸盐缓冲液(50mm)、40μl待测样品或缓冲液、40μl的125u/ml酪氨酸酶。最后，加入40μl左旋多巴(2.5mm)以引发反应，然后以475nm处的吸光度监测25min。
[0199]
对于每个孔，根据以下公式，相对于第一次吸光度(a
t0
)测定对随时间变化的吸光度值(a
x
)标准化：标准吸光度(an)＝a
x
–at0
。然后根据以下公式修正标准吸光度(每个时间点)：校正标准吸光度(a
nc
)＝a
n-a
clt
，其中a
clt
为存在样品(缓冲液+酪氨酸酶+样品)的情况下，试剂的标准吸光度值。观察值(a
nc
)越低，酪氨酸酶的活性(对于左旋多巴底物)下降得越多。
[0200]
为了进行该测定，使用了专家设计软件和集中复合方案作为实验设计，其中因子为1μm至50μm之间的黄烷醇单体浓度、0.0050μm至0.05μm之间的ε-葡萄素浓度，响应为7分钟后测得的修正标准吸光度。黄烷醇单体和ε-葡萄素之比在10000至1000之间。
[0201]
所得结果表明，校正标准吸光度可以通过二次线性模型(p《0.0001)进行建模(表
4)。
[0202]
[表4]
[0203]
来源平方和df均方根f-值p-值模型0.034950.007027.53《0.0001a-黄烷醇0.027510.0275108.46《0.0001b-ε-葡萄素0.000510.00051.880.1780ab0.002310.00239.000.0047a20.003010.003011.760.0015b20.000610.00062.420.1285残留物0.0096380.0003
ꢀꢀ
失拟0.001930.00062.860.0509
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
数值
ꢀꢀꢀꢀ
r20.7837
ꢀꢀꢀꢀ
修正的r20.7552
ꢀꢀꢀꢀ
预测的r20.7025
ꢀꢀꢀꢀ
[0204]
结果还表明黄烷醇单体对于酪氨酸酶于左旋多巴底物的活性有显着影响。对编码因子系数的分析(表5)表明，黄烷醇单体降低了酪氨酸酶对左旋多巴底物的活性。
[0205]
[表5]
[0206]
因子估计系数df标准误差95％置信区间(低)95％置信区间(高)截距0.150810.00410.14260.1591a-黄烷醇-0.033810.0032-0.0404-0.0273b-ε-葡萄素-0.004510.0032-0.01100.0021ab-0.011910.0040-0.0200-0.0039a20.017110.00500.00700.0273b20.007810.0050-0.00240.0179
[0207]
另一方面，在实验设计中，受试浓度范围内未观察到ε-葡萄素的显着作用。最后，有意义的是，观察到了黄烷醇单体与ε-葡萄素之间的显着相互作用。此外，这些因子的相互作用系数为负，这表明黄烷醇单体和ε-葡萄素的组合也会降低酪氨酸酶对左旋多巴底物的活性。
[0208]
黄烷醇单体和ε-葡萄素组合的作用高于分子的加性效应。实际上，黄烷醇单体浓度为35μm而ε-葡萄素浓度为0.005μm时，获得了0.158的吸光度值，而加性效应时的吸光度值为0.332。因此，根据本发明的组合物具有协同作用。
[0209]
葡萄(vitis vinifera)提取物和甘草提取物的混合物的作用评价。
[0210]
该测定的目的是，存在包含以下成分的混合物的情况下，评价酪氨酸酶(对左旋多巴底物)的活性：
[0211]-58.8％的根据本发明的组合物，所述组合物本身由53.4％的e1和46.6％的e3(根据本发明的组合物含19.4％的黄烷醇单体和28ppm的ε-葡萄素)构成，以及
[0212]-41.2％的甘草提取物，含8.1％的甘草酸。
[0213]
该活性将与单独存在e1或e3或甘草提取物情况下的酶活性进行比较。
[0214]
为此，通过上述比色反应对酪氨酸酶活性进行了体外监测和测量。按以下浓度下对提取物进行了测试：0.028mg/ml的葡萄籽提取物、0.025mg/ml的红葡萄渣提取物、0.037mg/ml的甘草提取物。
[0215]
根据以下方程，在t＝7min时，在校正标准吸光度下，测定了酪氨酸酶的抑制百分比。
[0216][0217]
其中，对照品a
nc
是标准反应(缓冲液+酪氨酸酶+左旋多巴)的校正标准吸光度的测量平均值，样品a
nc
是存在样品(缓冲液+酪氨酸酶+左旋多巴+样品)情况下反应的校正标准吸光度。
[0218]
利用三因子变异数分析(anova)对吸光度值(t＝7min)进行了统计比较，其中因子1是用葡萄籽提取物处理，因子2是用红葡萄渣提取物处理，因子3是用甘草提取物处理。p《0.05的值被视为是显著的。
[0219]
存在红葡萄渣提取物情况下，观察到酪氨酸酶活性的小幅且不显着的下降(图1)。存在甘草提取物或葡萄籽提取物情况下，观察到酪氨酸酶活性分别显着下降40.2％和49.8％。最后，发现葡萄籽提取物、红葡萄渣提取物和甘草提取物之间存在显著的相互作用。因此，根据本发明的这种混合物表明，相比单独使用红葡萄渣提取物、葡萄籽提取物或甘草提取物所观察到的，酪氨酸酶活性下降更明显(84.9％)。因此，酪氨酸酶对左旋多巴底物的活性下降能够允许减少黑色素的产生，并因此改善肤色均匀性和减少老年性色素斑或色素沉着过度的进程。
[0220]
实施例9：根据本发明的组合物对于内皮功能的作用评价。
[0221]
该测定的目的是，存在包含以下成分的混合物情况下，评价大鼠主动脉的离体血管松弛：
[0222]-65％的根据本发明的组合物，所述组合物本身由92.3％的e1和7.7％的e5(根据本发明的组合物含33％的黄烷醇单体和459ppm的ε-葡萄素)构成，以及
[0223]-35％的麦芽糊精
[0224]
这种混合物诱导的血管松弛将与单独由e1和e5提取物诱导的血管松弛进行比较。
[0225]
为此，将大鼠胸主动脉移除、清洁并切断成2mm-3mm的环。然后将环浸入到隔离的器官罐中的40℃的20ml krebs溶液(118mm nacl、25mm nahco3、5.5mm d-葡萄糖、4.7mm kcl、1.18mm kh2po4、2.4mm mgso4和3.3mm cacl2，ph 7.8)中，并且用95％的o2和5％的co2持续起泡。为了测试内皮的反应性，用kcl(80mm)诱导收缩，直到达到平台期。然后用克雷布斯溶液对器官罐洗涤3次。然后测定功能性内皮，包括首先添加0.5％去甲肾上腺素(0.1μm)来诱导收缩，然后加入乙酰胆碱(在10μm)以诱导至少80％的血管松弛。然后将累计体积的样品添加到器官罐中，以在1小时内达到2000μl的最终体积，并构建收缩-松弛曲线。对每种样品进行了三次独立测定。
[0226]
结果表明，包含本发明组合物的混合物诱导强烈的主动脉切片血管松弛(图2a)。实际上，观察到的最大血管松弛幅度为58％，并且是在加入300μl样品后达到的。相比单独使用葡萄皮提取物(并且浓度与包含本发明组合物的混合物中的浓度相同)和单独使用白
葡萄渣提取物(并且浓度与包含本发明组合物的混合物中的浓度相同)所观察到的，存在包含本发明组合物的混合物情况下，对血管松弛的作用更显着(图2b)。由包含本发明组合物的混合物所诱导的作用还高于单独使用这些提取物(不包括本发明)的作用。这些结果表明，在包含本发明组合物的混合物中，黄烷醇单体和ε-葡萄素之间存在协同相互作用。本发明组合物的这种协同作用允许提供改善内皮功能并因此改善血管功能的配方。
[0227]
实施例10：葡萄(vitisvinifera)提取物混合物的抗氧化能力的评价。
[0228]
该测定的目的是，通过与维生e类似物：trolox进行对照，确定葡萄(vitis vinifera)提取物，例如葡萄提取物，或含50％e1和50％e3的葡萄(vitis vinifera)提取物混合物的抗氧化活性。采用分光光度法，通过自由基氧吸收容量测试(orac)测量了抗氧化活性。该测试基于这样的事实，即在产生过氧自由基的氧化剂：aaph(“2,2
’‑
偶氮双(2-脒基丙烷)二盐酸盐”)的作用下，荧光素分子的荧光下降。抗氧化剂的存在防止或减缓荧光的损失，这是通过随时间变化的曲线下面积计算的。然后，受试样品的抗氧化能力用trolox当量来表示，即在给定浓度下，与受试样品具有相同活性的trolox浓度的关系。获得的orac值与样品受试浓度无关。
[0229]
在96孔板中，每孔中沉积以下量的：25μl磷酸盐缓冲液(50mm，ph7.5)作为空白品，或者25μl trolox(25μm、20μm、15μm、10μm、5μm、2μm)、25μl稀释样品、150μl荧光素(8nm)。然后将平板在37℃下孵育30分钟。在继续读数之前，加入25μl的aaph(153mm)。
[0230]
结果表明，葡萄籽提取物以及葡萄(vitis vinifera)提取物的混合物具有强抗氧化能力，其中orac值在10524至24142之间。因此，根据本发明的葡萄(vitis vinifera)提取物的混合物允许提供具有强抗氧化能力的配方。鉴于建议每天摄入3000至5000单位orac以减少氧化应激，根据本发明的这种组合物将允许实现这种情况。
[0231]
实施例11：葡萄(vitis vinifera)提取物和甘草提取物的混合物的抗uvb的抗氧化作用评价。
[0232]
这项测定的目的是，存在根据本发明的组合物的情况下，长时间uvb暴露后角质形成细胞产生活性氧(ero)与对照品进行比较。
[0233]
为此，即时将人新鲜皮肤的碎片切成5
×
5mm的碎片，并在37℃下用胰蛋白酶-edta处理3小时或在4℃下过夜，以将表皮与真皮分离。将角质形成细胞按1x105个细胞/cm2接种到75cm2的含kgm-2培养基的烧瓶中，其中含氢化可的松(0.33μg/ml)、表皮生长因子egf(0.125ng/ml)、胰岛素(5μg/ml)、牛垂体提取物(4μl/ml)、肾上腺素(0.39μg/ml)和转铁蛋白(10μg/ml)。当培养物达到70％-80％汇合时，用10％胰蛋白酶-edta分离细胞，然后重悬于额外的kgm-2培养基中并用cellule de malassez计数。然后在12孔平板上，按5x104个细胞/孔培养角质形成细胞，以通过h2dcfda氯甲基衍生物、cm-h2dcfda来测定细胞质ero的产生。在uvb照射前三天，存在或不存在细胞的情况下，放置包含本发明组合物的混合物。受试混合物如下：
[0234]-53.7％的根据本发明的组合物，所述组合物本身由53.4％的e1和46.6％的e3(根据本发明的组合物含19.4％的黄烷醇单体和28ppm的ε-葡萄素)，以及
[0235]-37.5％的甘草提取物。
[0236]
更换培养基后，以60mj/cm2对细胞进行第1次照射或不照射，然后在存在或不存在提取物混合物的情况下，重新放置新培养基并将细胞放回37℃烘箱。第1次照射后24小时，
更换培养基，并以60mj/cm2对细胞进行第2次照射或不照射，然后在存在或不存在提取物混合物的情况下，重新放置新培养基并将细胞放回37℃烘箱。第2次照射后24小时，更换培养基，并以60mj/cm2对细胞进行第3次照射或不照射，然后在存在或不存在提取物混合物的情况下，重新放置新培养基并将细胞在37℃烘箱内再次放置30分钟。
[0237]
在第3次也是最后一次照射后30分钟，通过胰蛋白酶-edta处理将细胞从培养孔中分离出来，洗涤，并在37℃和黑暗环境下，用1μm/管的cm-h2dcfda孵育30分钟。孵育后，将细胞用pbs洗涤2次，然后通过流式细胞术进行分析。每次测试至少收集1x104个细胞并进行分析。cm-h2dcfda允许指示细胞中的活性氧衍生物(dro)。它被动地扩散到细胞中，其中其乙酸根被细胞内酯酶裂解，而其与硫醇反应的氯甲基与细胞内谷胱甘肽和其他硫醇反应。由此引起的氧化产生荧光加合物，该加合物被捕获到细胞内。
[0238]
利用两因子变异数分析(anova)对每种细胞的平均荧光强度值进行了统计比较，其中因子1是用提取物混合物处理或不处理，因子2是照射处理或不处理。p《0.05的值被视为是显著的。
[0239]
结果表明，60mj/cm2的长时间照射诱导氧化应激并大量产生ero。事实上，暴露于uvb后，每个细胞的平均荧光强度从1389显着增加至5346。另一方面，存在葡萄(vitis vinifera)提取物和甘草提取物的混合物的情况下，未观察到平均荧光强度增加，这意味着细胞质未产生ero(图3)。
[0240]
这些结果表明了葡萄(vitis vinifera)提取物和甘草提取物的混合物对于uvb照射的抗氧化能力和保护作用。
[0241]
实施例12：暴露于uvb后并且存在葡萄(vitisvinifera)提取物和甘草提取物的混合物情况下对细胞活力的评价。
[0242]
这项测定的目的是，存在根据本发明的组合物的情况下，比较长时间暴露于uvb后角质形成细胞的细胞增殖率与对照细胞。
[0243]
分离角质形成细胞后，在96孔平板上，按5x103个细胞/孔对其进行培养。在uvb照射前三天，存在或不存在细胞的情况下，放置包含本发明组合物的混合物。受试混合物如下：
[0244]-53.7％的根据本发明的组合物，所述组合物本身由53.4％的e1和46.6％的e3(根据本发明的组合物含19.4％的黄烷醇单体和28ppm的ε-葡萄素)构成，以及
[0245]-37.5％的甘草提取物。
[0246]
更换培养基后，以60mj/cm2对细胞进行第1次照射或不照射，然后在存在或不存在提取物的情况下，重新放置新培养基并将细胞放回37℃烘箱。第1次照射后24小时，更换培养基，并以60mj/cm2对细胞进行第2次照射或不照射，然后在存在或不存在提取物的情况下，重新放置新培养基并将细胞放回37℃烘箱。第2次照射后24小时，更换培养基，并以60mj/cm2对细胞进行第3次照射或不照射，然后在存在或不存在提取物的情况下，重新放置新培养基并将细胞在37℃烘箱内再次放置30分钟。
[0247]
在第3次也是最后一次照射后24小时，将20μl的mts加入孔中，然后细胞在37℃、5％co2的条件下，在烘箱中重新放置3小时。在3小时结束时，通过分光光度计读取490nm处的吸光度(do)。然后将do值表示为每个条件下与非经照射对照品的百分比。
[0248]
利用两因子变异数分析(anova)对细胞存活百分比进行了统计比较，其中因子1是
用提取物混合物处理或不处理，因子2是照射处理或不处理。p《0.05的值被视为是显著的。
[0249]
结果表明，以60mj/cm2长时间照射可诱导活细胞数量显着减少。事实上，暴露于uvb后的存活率为41.5％。
[0250]
另一方面，存在葡萄(vitis vinifera)提取物和甘草提取物的混合物的情况下，暴露于uvb后未观察到存活细胞数量显着下降(图4)。
[0251]
这些结果表明了根据本发明的组合物对uvb照射后的细胞存活力有保护作用。
[0252]
实施例13：以不同形式用于人类的组合物示例
[0253]
根据本发明的组合物示例如下表6所示。
[0254]
[表6]
[0255][0256][0257]
实施例14：用于人类的营养饮料
[0258]
实施例14是50ml含有相当于300mg葡萄(vitis vinifera)提取物的饮料。该混合物可以由225mg葡萄籽提取物和75mg红葡萄渣提取物构成。提取物可以经微囊包封。建议剂量为每天1份至2份。
[0259]
实施例15：用于人类的富含营养素的油
[0260]
实施例15是含葡萄(vitis vinifera)提取物和类胡萝卜素的葡萄籽油构成的油。20ml的每日剂量含150mg葡萄(vitis vinifera)提取物和20mg玉米黄质的混合物。
[0261]
实施例16：高蛋白粉制剂
[0262]
实施例16是用于特定医疗目的的食品配方或富含蛋白质的食品配方成分组成详见表7。剂量可以是例如每日一剂所述粉末制剂。所述剂量可稀释到饮料或菜肴中，并且约为12g。
[0263]
实施例17：酸奶
[0264]
实施例17是酸奶形式的制剂，每日摄入2次至3次。成分组成详见表7。
[0265]
[表7]
[0266][0267]
实施例18：狗粮
[0268]
实施例18是狗粮形式的配方，每10公斤体重每日喂食200g：-每公斤体重0.450mg儿茶素和/或表儿茶素，以及-每公斤体重0.045μgε-葡萄素。

技术特征：
1.一种包含分子混合物的组合物，所述分子包括：-至少15％的黄烷醇单体，所述百分比为干重与组合物总干重之比，以及-至少15ppm的ε-葡萄素，所述比值为干重与组合物总干重之比，所述分子混合物是从至少一种葡萄(vitis vinifera)提取物或葡萄(vitis vinifera)提取物的混合物获得的。2.根据上述权利要求所述的组合物，包含至少100ppm的二苯乙烯，所述二苯乙烯包含至少15ppm的ε-葡萄素。3.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述黄烷醇单体的量高于所述ε-葡萄素的量。4.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述黄烷醇单体与所述ε-葡萄素之比在20000至4之间。5.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含黄烷醇二聚体(pac b1和b2)，并且所述黄烷醇二聚体(pac b1和b2)的浓度大于5％，所述百分比为干重与组合物总干重之比。6.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述分子混合物是从一种或多种天然产物获得的，所述一种或多种天然产物选自葡萄提取物、茶提取物、苹果提取物、可可提取物、鸢尾属提取物、槐属提取物、买麻藤属提取物、苔草属提取物、芍药属提取物、双翅果属提取物和微藻提取物。7.根据上述权利要求所述的组合物，其特征在于，所述葡萄(vitis vi-nifera)提取物包含至少50％总多酚，所述百分比为干重与所述葡萄(vitis vinifera)提取物总干重之比。8.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述分子混合物至少是从葡萄渣提取物和/或葡萄籽提取物获得的。9.根据上述权利要求所述的组合物，其特征在于，所述一种或多种葡萄渣提取物包含黄酮醇并且所述组合物中黄酮醇按干重计的浓度高于或等于组合物总干重的0.05％。10.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含甘草提取物。11.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物和/或所述组合物中的一种或多种分子可以包封或微囊包封在食品载体中，所述食品载体选自麦芽糊精、阿拉伯树胶、氢化油、非氢化油、蜡、藻酸盐、淀粉、蛋白质及其混合物。12.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物为粉末、硬胶囊、片剂、软胶囊、溶液、混悬液、乳液或口香糖的形式。13.根据上述权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物为乳制品、谷物、含谷物产品或饮料的形式。14.根据权利要求1至12中任一项所述的组合物，用作人或动物药物的用途。15.根据上述权利要求所述的组合物，用于预防和/或治疗与内皮功能障碍相关的疾病，选自心血管疾病、血管疾病、与认知能力下降相关的疾病、与记忆丧失相关的疾病、神经退行性疾病、消化系统疾病、关节疾病、勃起障碍和与绝经期相关的障碍。16.根据上述权利要求所述的组合物，用于预防和/或治疗选自阿尔茨海默病、帕金森
病、亨廷顿病、运动神经元疾病、痴呆、抑郁、焦虑、精神分裂症、智力迟缓、认知功能障碍综合征(cds)、动脉高血压、动脉粥样硬化、心肌梗塞、心绞痛(angor)、慢性静脉功能不全、静脉血栓形成、静脉曲张、肠易激综合征、克罗恩病、溃疡性结肠炎和消化不良、骨关节炎、类风湿性关节炎、类风湿性多关节炎和强直性脊柱炎、老年性黄斑变性(dmla)、高血压性视网膜病变、糖尿病视网膜病变、青光眼、白内障或富克斯角膜内皮营养不良。17.一种根据权利要求1至14中任一项所述的组合物对于健康人类或动物的非治疗用途，用以改善认知功能和/或执行功能，和/或限制老年性正常认知能力下降和/或改善记忆力和/或注意力和/或专注力和/或灵敏性和/或警觉性和/或学习和/或语言和/或情绪和/或紧张和/或焦虑和/或睡眠和/或淡化皮肤色素沉着，和/或减少老年性皮肤色斑的出现和/或调节黑色素生成。

技术总结
本发明涉及一种作为人类或动物的营养品或药品的包含黄烷醇单体和ε-葡萄素组合的组合物。合物。


技术研发人员：D
受保护的技术使用者：艾克瑅夫因赛德
技术研发日：2021.09.27
技术公布日：2023/9/23