包含来源于藤黄微球菌的细胞外囊泡的、用于预防或治疗中性粒细胞肺病的组合物的制作方法

1.本发明涉及来源于藤黄微球菌的细胞外囊泡及其用途，更具体地，涉及用于预防或治疗中性粒细胞肺病的组合物等，其包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
2.本技术要求分别于2020年12月28日和2021年11月2日向韩国知识产权局提交的韩国专利申请第10-202-0184337号和第10-2021-0148789号的优先权和权益，并且这些申请的说明书和附图中公开的所有内容都包含在本技术中。


背景技术：

3.随着21世纪的开始，过去被视为流行病的急性传染病的重要性已经降低，而发生在我们身体主要器官的、以免疫功能障碍引起的炎症为主要发病机制的慢性疾病已经改变了疾病的模式，成为降低生活质量和决定人类预期寿命的主要疾病。
4.免疫是细胞抵抗生物、化学、物理和精神压力的防御机制，通过先天免疫和适应性免疫发生。最近，已知来源于生物病因因素的病原体相关分子模式(pamp)和损伤相关分子模式(damp)是由细胞损伤产生的危险信号，通过与炎症疾病的发病机制相关的模式识别受体(prr)识别，从而引发炎症。在prr中，核苷酸结合寡聚化结构域样受体(nod样受体；nlr)是一种识别细胞中的pamp和damp的prr，是炎症反应或细胞死亡的关键材料。含有3(nlrp3)炎症小体的核苷酸结合寡聚化结构域、富含亮氨酸的重复序列和热蛋白结构域是一种nod样受体，识别细胞中存在的pamp或damp以形成炎症小体，并通过k+流出和胱天蛋白酶-1活化引起炎症反应。近年来，注意力集中在nlrp3炎症小体是各种顽固性炎症疾病的发病机制中的重要信号系统的这一事实。
5.同时，已知人体内共存的微生物数量达到100万亿，大约比人类细胞的数量多，微生物的基因的数量比人类大100倍。微生物群或微生物组是指存在于特定栖息地的微生物群落，包括细菌、古菌和真核生物。
6.我们体内共存的细菌和周围环境中存在的细菌会分泌纳米大小的囊泡，与其他细胞交换如基因、低分子化合物和蛋白质等信息。粘膜形成物理防御膜，大小为200纳米或更大的颗粒不能穿过该物理防御膜，因此，共存于粘膜中的细菌不能穿过粘膜，但细菌衍生的囊泡大小为200纳米或更小，因此相对自由地穿过粘膜的上皮细胞，从而被我们的身体吸收。如上所述，尽管细菌衍生的囊泡是由细菌分泌的，但它们在成分、在体内的吸附速率和副作用风险方面与细菌不同，因此，细菌衍生囊泡的使用与活细胞完全不同或具有显著效果。
7.局部分泌的细菌衍生的囊泡通过粘膜的上皮细胞吸收，以诱导局部炎症反应，而穿过上皮细胞的囊泡则通过淋巴管被系统吸收，从而被分布到各个器官，并调节囊泡分布到的器官中的免疫和炎症反应。例如，来源于致病性革兰氏阴性菌(如大肠杆菌)的囊泡是引起局部结肠炎的致病性纳米颗粒，当被血管吸收时被吸收到血管内皮细胞中，以通过诱导炎症反应促进全身炎症反应和血液凝固，并且还被吸收到肌肉细胞中，在肌肉细胞中胰
岛素起到引起胰岛素抵抗和糖尿病的作用。相反，来自有益细菌的囊泡可通过调节致病性囊泡引起的免疫和代谢功能障碍来调节疾病。
8.藤黄微球菌是属于微球菌属的革兰氏阳性细菌，广泛分布于自然界(例如水、灰尘和土壤)中。这种细菌具有过氧化氢酶，因此将过氧化氢(一种活性氧)转化为水，并且当在有毒有机污染物(如吡啶)中生长时产生核黄素。此外，它还具有一种叶黄素色素，其具有紫外线吸收和抗氧化作用。此外，已知该细菌也从乳制品和啤酒中分离出来，在干燥或高盐环境中生长，不会形成孢子，而是在冰箱中在冷藏温度下存活很长一段时间。
9.在我们呼吸的灰尘中，存在各种生物病因因素，如病毒、细菌衍生的囊泡和脂多糖(lps)，它们会诱导肺部炎症。反复吸入这些病因因素会诱导肺部炎症，因为炎症介质是通过prr介导的信号系统从肺上皮细胞和巨噬细胞分泌的，而反复的压力会导致中性粒细胞肺部炎症疾病。用于治疗或预防中性粒细胞肺部炎症疾病的常见组合物广泛包括甾体和非甾体组合物，最近，人们对tnf-α抑制剂越来越感兴趣，其是已知为炎症疾病主要介质的炎症细胞因子。
10.然而，迄今为止，还没有来源于藤黄微球菌的囊泡用于治疗中性粒细胞肺病的报道。


技术实现要素：

11.技术问题
12.作为解决现有技术中上述问题的深入研究的结果，本发明人已经证实，当口服或鼻内施用来源于藤黄微球菌的囊泡时，囊泡穿过粘膜并分布在肺中，并证实在用囊泡治疗的过程中，致病性纳米颗粒分泌炎症介质被显著抑制。此外，本发明人证实，来源于藤黄微球菌的囊泡不仅有效抑制由生物病因因素引起的免疫功能障碍，而且通过抑制nlrp3蛋白的表达来调节免疫功能障碍，所述蛋白是与各种疾病的发病机制相关的模式识别受体(prr)，并通过增加内皮no合成酶(enos)信号传导来增加细胞稳态。此外，本发明人证实，当用来源于藤黄微球菌的囊泡治疗由细菌衍生的囊泡和lps污染的过敏原引起的中性粒细胞肺病的小鼠模型时，中性粒细胞肺部炎症和气道高反应性被显著抑制，从而完成了基于此的本发明。
13.因此，本发明的一个目的是提供一种用于预防或治疗中性粒细胞肺病的药物组合物，其包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
14.此外，本发明的一个目的是提供一种用于预防或减轻中性粒细胞肺病的食品组合物，其包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
15.此外，本发明的一个目的是提供一种用于预防或治疗中性粒细胞肺病的吸入剂组合物，其包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
16.此外，本发明的一个目的是提供一种用于预防或减轻中性粒细胞肺病的准药物组合物，其包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
17.此外，本发明的一个目的是提供一种用于递送用于治疗中性粒细胞肺病的药物的组合物，其包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
18.然而，本发明要实现的技术问题不限于上述问题，本领域技术人员可以通过以下描述清楚地理解未提及的其他问题。
19.技术方案
20.为了实现如上所述的本发明的目的，本发明可以提供一种用于预防或治疗中性粒细胞肺病的药物组合物，其包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
21.此外，本发明可以提供一种用于预防或减轻中性粒细胞肺病的食品组合物，其包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
22.此外，本发明可以提供一种用于预防或治疗中性粒细胞肺病的吸入剂组合物，其包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
23.此外，本发明可以提供一种用于预防或减轻中性粒细胞肺病的准药物组合物，其包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
24.此外，本发明可以提供一种用于递送治疗中性粒细胞肺病的药物的组合物，其包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
25.作为本发明的一个示例性实施方式，肺病可以是由含有3(nlrp3)炎症小体的核苷酸结合寡聚化结构域、富含亮氨酸的重复序列和热蛋白结构域介导的肺病，但不限于此。
26.作为本发明的另一个示例性实施方式，肺病可以是选自由哮喘、肺气肿、囊性纤维化(cf)、细菌性肺炎、病毒性肺炎、特发性肺纤维化(ipf)、间质性肺炎、急性呼吸窘迫综合征(ards)和急性肺损伤(ali)组成的组的一种或多种疾病，哮喘可以是中性粒细胞哮喘，但不限于此。
27.作为本发明的又一示例性实施方式，囊泡可以具有10至200nm的平均直径，但不限于此。
28.作为本发明的又一个示例性实施方式，囊泡可以由藤黄微球菌自然分泌或人工产生，但不限于此。
29.作为本发明的又一个示例性实施方式，该组合物可以抑制nlrp3炎症小体的活性，但不限于此。
30.此外，本发明提供了一种预防或治疗中性粒细胞肺病的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物。
31.此外，本发明提供了一种组合物的用途，该组合物包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为预防或治疗中性粒细胞肺病的活性成分。
32.此外，本发明提供了来源于藤黄微球菌的囊泡用于制备治疗中性粒细胞肺病的药物的用途。
33.此外，本发明提供了一种递送用于治疗中性粒细胞肺病的药物的方法，该方法包括将包含来源于藤黄微球菌的囊泡的组合物作为活性成分施用给需要的受试者，所述囊泡携带用于治疗待靶向的中性粒细胞肺病的药物。
34.此外，本发明提供了一种组合物的用途，该组合物包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分，用于递送治疗中性粒细胞肺病的药物。
35.有利效果
36.本发明人证实，当口服或鼻内给药来源于藤黄微球菌的囊泡时，囊泡穿过粘膜并输送到肺部。此外，本发明人证实，当用囊泡处理上皮细胞和炎症细胞时，生物病因因素分泌炎症介质被显著抑制，而且当用囊泡处理细胞时，生物病因因素分泌nlrp3蛋白也被显著抑制。此外，证实了当将囊泡施用到由生物病因因素引起的中性粒细胞疾病的小鼠模型时，
中性粒细胞肺部炎症和功能变化被显著抑制，使得根据本发明的来源于藤黄微球菌的囊泡不仅能够有效地用于开发用于预防、改善症状或治疗中性粒细胞肺病的药物或健康功能性食品，而且还能够有效地用作治疗该疾病的药物递送系统。
附图说明
37.图1a的视图示出了：通过向小鼠口服给药来源于藤黄微球菌的囊泡，然后随时间去除每个器官，在每个器官中的荧光强度。
38.图1b的视图示出了：在向小鼠口服给药来源于藤黄微球菌的囊泡之后，囊泡随时间分布在肺中的模式。
39.图2的视图示出了：在向小鼠鼻内给药来源于藤黄微球菌的囊泡后，囊泡随时间分布在器官中的模式。
40.图3的视图示出了：用于评估来源于藤黄微球菌的囊泡(mdh-101evs)对上皮细胞(a549)分泌炎症介质的抑制效果的实验方案。
41.图4a和图4b示出了证实来源于藤黄微球菌的囊泡对上皮细胞分泌炎症介质il-8的抑制效果的结果，图4a的视图示出了：根据来源于藤黄微球菌的囊泡(mdh-101)的浓度对il-8分泌的抑制效果；图4b的视图示出了：阳性对照药物地塞米松(dex)和囊泡的il-8分泌抑制效果的比较结果(*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，n.s.表示不显著，下文相同)。
42.图5的视图示出了：用于评估来源于藤黄微球菌的囊泡(藤黄微球菌ev)对作为炎性细胞的巨噬细胞(raw 264.7)分泌炎性介质的抑制效果的实验方案。
43.图6a和6b证实了来源于藤黄微球菌的囊泡(藤黄微球菌ev)对巨噬细胞分泌炎症介质的抑制效果，图6a的视图示出了对tnf-α分泌的抑制效果，图6b的视图示出了对il-6分泌的抑制效果。
44.图7的视图示出了：用于评估对作为炎症病因因素的来源于大肠杆菌的囊泡(大肠杆菌ev)分泌炎症介质的抑制效果的实验方案，通过用来源于藤黄微球菌的囊泡(藤黄微球菌ev)或阳性对照药物地塞米松(dex)(血浆pbmc：血浆外周血单核细胞)处理从外周血分离的中性粒细胞。
45.图8的视图示出了：在用来源于藤黄微球菌的囊泡(mdh-101)或阳性对照药物地塞米松处理从外周血分离的中性粒细胞后，通过中性粒细胞弹性蛋白酶(ne)分泌评价来源于大肠杆菌的囊泡(大肠杆菌ev)对中性粒细胞的活化程度的结果。
46.图9是一个实验方案，用于在由作为致病性纳米颗粒的来源于大肠杆菌的囊泡(大肠杆菌ev)引起的中性粒细胞肺病的小鼠模型中，评估来源于藤黄微球菌的囊泡(藤黄微球菌ev)的抗炎效果。
47.图10a和图10b示出了：在由作为致病性纳米颗粒的来源于大肠杆菌的囊泡(大肠杆菌ev)引起的中性粒细胞肺病的小鼠模型中，证实来源于藤黄微球菌的囊泡(藤黄微球菌ev)的抗炎效果的结果，图10a的视图示出了：确认小鼠模型(nc：阴性对照)的支气管肺泡灌洗液(balf)中的巨噬细胞和中性粒细胞的数量的结果，图10b的视图示出了：确认肺组织中的炎性细胞浸润的结果。
48.图11a至11c证实了：在由作为致病性纳米颗粒的来源于大肠杆菌的囊泡(大肠杆菌ev)引起的中性粒细胞肺病的小鼠模型中，来源于藤黄微球菌的囊泡(藤黄微球菌ev)对
炎症介质分泌的抑制效果，并且它们的视图示出了：证实对小鼠支气管肺泡灌洗液(balf)中cxcl-1(a)、tnf-α(b)和il-1β(c)分泌的抑制效果的结果。
49.图12a至12c证实了：在由作为致病性纳米颗粒的来源于大肠杆菌的囊泡(大肠杆菌ev)引起的中性粒细胞肺病的小鼠模型中，来源于藤黄微球菌的囊泡(藤黄微球菌ev)对免疫相关细胞因子的分泌的效果，并且它们的视图分别示出了：证实il-6、il-17和il-10的分泌的结果。
50.图13的视图示出了：在由作为致病性纳米颗粒的来源于大肠杆菌的囊泡(大肠杆菌ev)引起的中性粒细胞肺病的小鼠模型中，来源于藤黄微球菌的囊泡(藤黄微球菌ev)对气道高反应性的效果(nc：阴性对照)。
51.图14是一个实验方案，用于在由lps污染的过敏原(lps+卵清蛋白(ova))引起的中性粒细胞肺病的小鼠模型中，评估来源于藤黄微球菌的囊泡(mdh-101)的抗炎效果。
52.图15a至图15c证实了，由lps污染的过敏原(lps+ova)引起的中性粒细胞肺病的小鼠模型中，来源于藤黄微球菌的囊泡(mlev)的抗炎效果，图15a和图15b的视图示出了：证实支气管肺泡灌洗液(balf)中炎性细胞总数和中性粒细胞数目的结果，图15c的视图示出了：确认肺组织中的炎性细胞浸润(lps：被lps污染的过敏原)的结果。
53.图16a和16b的视图证实了，在由lps污染的过敏原(lps+ova)(lps：被lps污染的过敏原)引起的中性粒细胞肺病的小鼠模型中，来源于藤黄微球菌的囊泡(mlev)对炎症介质il-1β(a)和th17免疫应答指标il-17(b)的效果。
54.图17的视图示出了：确认作为免疫功能调节蛋白的nlrp3、t-bet和ror-γt蛋白在小鼠肺组织中表达的结果，以评估来源于藤黄微球菌的囊泡(mlev)在由lps污染的过敏原(lps：被lps污染的过敏原)引起的中性粒细胞肺病的小鼠模型中的免疫功能调节效果。
55.图18的视图示出了：在用来源于藤黄微球菌的囊泡或阳性对照药物地塞米松(dex)治疗肺上皮细胞后，评估作为炎症病因因素的来源于大肠杆菌的囊泡对enos信号活性的效果的结果，以评估藤黄微球菌来源的囊泡(mdh-101)对enos信号的效果，其诱导抑制气道高反应性的一氧化氮(no)的产生。
具体实施方式
56.本发明涉及来源于藤黄微球菌的囊泡及其用途。
57.在下文中，将详细描述本发明。
58.本发明人证实，当口服或鼻内给药来源于藤黄微球菌的囊泡时，囊泡穿过粘膜并分布在肺组织中。本发明人进一步证实，当用囊泡处理上皮细胞时，炎症介质的分泌被生物病因因素显著抑制，而且，当用囊泡处理巨噬细胞和中性粒细胞(它们是代表性炎症细胞)时，由生物病因因素引起的炎症介质的分泌和中性粒粒细胞的激活也以剂量依赖性的方式受到抑制。此外，本发明人证实，当给药囊泡时，由生物病因因素表达的nlrp3蛋白的表达被显著抑制，并且证实了，当给药囊泡时，被生物病因因素抑制的enos信号被显著恢复。此外，本发明人证实，当将囊泡给药至由致病性纳米颗粒和lps污染的过敏原引起的中性粒细胞肺病的小鼠模型时，中性粒细胞肺部炎症、免疫功能障碍和气道高反应性的发展被显著抑制，从而基于此完成了本发明。
59.因此，本发明可以提供一种用于预防或治疗中性粒细胞肺病的药物组合物，其包
括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
60.如本文所用，术语“中性粒细胞肺病”是指以肺组织中的中性粒细胞浸润为特征的疾病，其由灰尘中存在的生物病因因素(如病毒、细菌衍生的囊泡、脂多糖(lps)和过敏原)引起，在本发明中，具体地，中性粒细胞肺病可以是由含有3(nlrp3)炎症小体的核苷酸结合寡聚化结构域、富含亮氨酸的重复序列和热蛋白结构域介导的肺病，但不限于此，并且可以包括以肺组织中的中性粒细胞浸润为特征的任何肺疾病。
61.中性粒细胞肺病的实施例包括哮喘、肺气肿、囊性纤维化(cf)、细菌性肺炎、病毒性肺炎、特发性肺纤维化(ipf)、间质性肺炎、急性呼吸窘迫综合征(ards)和急性肺损伤(ali)，但不限于此。
[0062]“nlrp3炎症小体介导的肺病”是指由炎症小体的异常过度形成引起的肺病，在本发明中，由于来源于藤黄微球菌的囊泡可以抑制nlrp3炎性小体的形成，因此可以由来源于藤黄微球菌的囊泡有效地预防、改善或治疗nlrp3炎症小体介导的中性粒细胞肺病。
[0063]
此外，“哮喘”是指在肺部呼吸道变得非常敏感的状态下，由遗传和环境因素的组合引起的具有代表性的过敏性疾病，根据穿透气道或肺组织的免疫细胞的类型和浸润模式，可分为嗜酸性和中性粒细胞哮喘，并且在本发明中，具体地，哮喘可以是中性粒细胞哮喘。
[0064]
如本文所用，术语“细胞外囊泡”或“囊泡”是指由各种细菌分泌的纳米尺寸膜形成的结构，其实例包括衍生自革兰氏阴性细菌(例如含有脂多糖、有毒蛋白质和细菌dna和rna等的大肠杆菌)的囊泡，外膜囊泡(omv)，来源于革兰氏阳性细菌(如微球菌，除了蛋白质和核酸等之外，其还含有作为细菌细胞壁成分的肽聚糖和脂磷壁酸等)的囊泡。
[0065]
在本发明中，细胞外囊泡或囊泡可以笼统地指从藤黄微球菌天然分泌的或由人工产生的膜组成的所有结构，并且可以在本发明中用mdh-101、mdh-101ev、藤黄微球菌ev或mlev不同地表示。
[0066]
囊泡可以在藤黄微球菌培养过程中通过热处理或高压灭菌法分离，或使用选自由离心、超离心、高压灭菌、挤出、超声处理、细胞裂解、均质化、冻融、电穿孔、机械降解、化学处理、过滤器过滤、凝胶过滤色谱、预流电泳和细胞培养的毛细管电泳构成的组的一种或多种方法处理。此外，为了分离，可以进一步进行洗涤以去除杂质，并浓缩所获得的囊泡。
[0067]
在本发明中，通过所述方法分离的囊泡呈球形，并且可以具有10至200nm、10至190nm、10至180nm、10至170nm、10至160nm、10至150nm、10至140nm、10至130nm、10至120nm、10至110nm、10至100nm、10至90nm、10至80nm、10至70nm、10至60nm、10至50nm、20至200nm、20至180nm、20至160nm，20至140nm、20至120nm、20至100nm或20至80nm、优选20至200nm的平均直径，但平均直径不限于此。
[0068]
如本文所用，术语“包含作为活性成分”是指包含足够量，以实现来源于藤黄微球菌的囊泡的功效或活性。
[0069]
本发明的组合物中囊泡的量可以根据疾病的症状、症状的进展程度、患者的状况等进行适当调整，并且可以相对于组合物的总重量在例如0.0001wt％至99.9wt％或0.001wt％至50wt％的范围内，但是本发明不限于此。重量比是基于除去溶剂的干燥产物的量的值。
[0070]
本发明的药物组合物可以包括药学上可接受的载体。药学上可接受的载体通常用
于制剂中，并且包括盐水、无菌水、林格液、缓冲盐水、环糊精、右旋糖溶液、麦芽糊精溶液、甘油、乙醇、脂质体等，但不限于此，并且如果需要，还可以包括其他典型的添加剂，例如抗氧化剂和缓冲剂。此外，可以通过另外添加稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂、润滑剂等，将组合物配制成可注射制剂(例如水溶液、悬浮液和乳液)、药丸、胶囊、颗粒或片剂。关于合适的药学上可接受的载体和制剂，组合物可以优选地通过使用remington文献中公开的方法根据每种成分配制。本发明的药物组合物在配方上没有特别限制，而是可以配制成注射剂、吸入剂、皮肤外用制剂、口服剂等。
[0071]
根据目标方法，本发明的药物组合物可以口服给药或非肠道给药(例如，静脉内、皮下、皮内、鼻内或气管内给药)，并且给药剂量可以根据患者的状况和体重、疾病的严重程度、药物形式、以及给药途径和时间而变化，但可由本领域普通技术人员适当选择。
[0072]
根据本发明的药物组合物以药学上有效的量给药。在本发明中，药学上有效的量是指足以以适用于医疗的合理收益/风险比治疗疾病的量，并且有效剂量水平可以根据多种因素确定，包括患者的疾病类型、疾病的严重程度、药物的活性、对药物的敏感性、给药时间、给药途径、排泄率、治疗周期、同时使用的药、以及其他医学领域众所周知的因素。本发明的组合物可以作为单独的治疗剂或与其他治疗剂组合给药，可以与相关技术中的治疗剂顺序或同时给药，并且可以单剂量或多剂量给药。重要的是，考虑到所有上述因素，以能够在没有任何副作用的情况下获得最大效果的最小量施用组合物，并且这可以由本领域普通技术人员容易地确定。
[0073]
具体地，根据本发明的药物组合物的有效量可以根据患者的年龄、性别和体重而变化，并且通常地，每1kg体重可以每天或每隔一天给药或者每天给药一至三次0.001至150mg的组合物，优选0.01至100mg的组合物。然而，由于有效量可以根据给药途径、肥胖的严重程度、性别、体重、年龄等而增加或减少，因此该剂量不旨在以任何方式限制本发明的范围。
[0074]
如本文所用，术语“预防”是指通过施用根据本发明的组合物来抑制中性粒细胞肺病(如哮喘、肺气肿、囊性纤维化(cf)、细菌性肺炎、病毒性肺炎、特发性肺纤维化(ipf)、间质性肺炎、急性呼吸窘迫综合征(ards)和急性肺损伤(ali))或延缓其发展的所有作用。
[0075]
如本文所用，术语“治疗”是指通过给药根据本发明的药物组合物改善或有益地改变中性粒细胞肺病(如哮喘、肺气肿、囊性纤维化(cf)、细菌性肺炎、病毒性肺炎、特发性肺纤维化(ipf)、间质性肺炎、急性呼吸窘迫综合征(ards)和急性肺损伤(ali))的症状的所有作用。
[0076]
此外，本发明提供了一种预防或治疗中性粒细胞肺病的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物。
[0077]
此外，本发明提供了包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物的用于预防或治疗中性粒细胞肺病的用途。
[0078]
此外，本发明提供了来源于藤黄微球菌的囊泡用于制备用于治疗中性粒细胞肺病的药物的用途。
[0079]
如本文所用，“受试者”是指需要治疗疾病的受试者，更具体地，是指哺乳动物，如人或非人灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马和牛，但本发明不限于此。
[0080]
如本文所用，“给药”是指通过使用任意适当的方法向受试者提供本发明的预定组
合物。
[0081]
此外，本发明可以提供一种用于预防或减轻中性粒细胞肺病的食品组合物，其包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
[0082]
如本文所用，术语“缓解”是指至少减少与待治疗的症状相关的参数(例如症状的程度)的所有行动。
[0083]
食品组合物可以是健康功能性食品组合物，但不限于此。
[0084]
根据本发明的囊泡可以通过将活性成分原样添加到食物中来使用，或者可以与其他食物或食物成分一起使用，但可以根据典型的方法适当使用。活性成分的混合量可以根据其使用目的(用于预防或减轻)适当确定。通常，当制备食品或饮料时，基于原料，本发明的组合物以15wt％或更少、优选10wt％或更少的量加入。然而，对于出于健康和卫生目的或出于健康控制目的的长期摄入，该量可能低于上述范围。
[0085]
食物的种类没有特别的限制。可以添加该材料的食物的实施例包括肉类、香肠、面包、巧克力、糖果、零食、蜜饯、披萨、方便面、其他面条、口香糖、包括冰淇淋的乳制品、各种汤、饮料、茶、饮品、酒精饮料、维生素复合物等，并且包括典型意义上的所有健康功能性食物。
[0086]
根据本发明的健康饮料组合物可以包含各种口味或天然碳水化合物等作为典型饮料中的附加成分。上述天然碳水化合物可以是单糖(如葡萄糖和果糖)、二糖(如麦芽糖和蔗糖)、多糖(如糊精和环糊精)、以及糖醇(如木糖醇、山梨醇和赤藓糖醇)。作为甜味剂，可以使用天然甜味剂(如奇异果甜蛋白和甜菊提取物)、合成甜味剂(如糖精和阿斯巴甜)等。天然碳水化合物的比例通常为每100毫升本发明组合物约0.01至0.20克或约0.04至0.10克。
[0087]
此外，本发明可以提供一种用于预防或治疗中性粒细胞肺病的吸入剂组合物，其包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
[0088]
在吸入剂组合物的情况下，该化合物可以根据本领域已知的方法配制，并且可以通过使用合适的推进剂(例如，二氯氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体)，方便地从加压包或喷雾器以气溶胶喷雾的形式递送。在加压气溶胶的情况下，可以通过提供用于传送计量数量的阀来确定剂量单位。例如，用于吸入器或吹入器的明胶胶囊和药筒可以配制成含有化合物和合适的粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
[0089]
此外，本发明可以提供一种用于预防或减轻中性粒细胞肺病的准药物组合物，其包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
[0090]
当来源于藤黄微球菌的囊泡用作准药物添加剂时，囊泡可以原样添加，或者与另一种准药物或其他准药物成分一起使用，并且可以根据典型方法适当使用。混合的活性成分的量可以根据使用目的(预防、健康或治疗性治疗)适当确定。准药物组合物在制剂上没有特别限制，并且可以以本领域已知的、可有效预防或改善中性粒细胞肺病的准药物的形式不同地配制。准药物组合物可以是例如防腐清洁剂、淋浴泡沫、漱口水、湿巾、清洁皂、洗手液、加湿器填充物、面罩、软膏、吸入剂或过滤填充物，但不限于此。
[0091]
此外，本发明可以提供一种用于递送治疗中性粒细胞肺病的药物的组合物，该组合物包括来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。
[0092]
如本文所用，术语“药物递送”是指在根据本发明的组合物中装载和递送药物以将
药物递送到特定器官、组织、细胞或细胞器的所有手段或作用。
[0093]
此外，本发明提供了一种用于递送用于治疗中性粒细胞肺病的药物的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物，所述囊泡携带用于治疗待靶向的中性粒细胞肺病的药物。
[0094]
此外，本发明提供了包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物的用于递送治疗中性粒细胞肺病的药物的用途。
[0095]
在下文中，将提出有助于理解本发明的优选实施例。然而，提供以下实施例只是为了更容易理解本发明，本发明的内容不受以下实施例的限制。
[0096]
发明的模式
[0097]
实施例
[0098]
实施例1.从藤黄微球菌培养液分离囊泡
[0099]
培养藤黄微球菌菌株后，分离、分析和表征其囊泡。在37℃的好氧培养室中，将藤黄微球菌在德曼罗格萨和夏普(mrs)培养基中培养，直到吸光度(od600)为1.0至1.5，然后再进行亚培养。随后，回收含有菌株的培养基上清，在10000g和4℃下离心20分钟，菌株被去除，然后通过0.22μm过滤器过滤。使用100kda pellicon 2盒式滤膜(merck millipore，us)和masterflex泵系统(cole parmer，us)通过微滤将过滤的上清浓缩至50ml的体积。然后，使用0.22μm过滤器再次过滤浓缩的上清。随后，使用bca测定法对蛋白质进行定量，并对获得的囊泡进行以下实验。
[0100]
实施例2.来源于藤黄微球菌的囊泡在口服给药过程中的药代动力学特征分析
[0101]
为了研究口服给药期间来源于藤黄微球菌的囊泡的药代动力学特征，通过向小鼠口服给药荧光染色试剂染色的来源于藤黄微球菌的囊泡，测量每个器官中表达的荧光长达48小时。如图1a所示，证实了当通过图像随时间评估荧光染色的来源于藤黄微球菌的囊泡的器官分布时，囊泡分布在各种器官中。此外，如图1b所示，证实了当用图表表示在肺中表达的来源于藤黄微球菌的囊泡的荧光强度时，囊泡从口服给药后3小时起分布在肺中，这持续到24小时，并且在这之后，大部分荧光信号已经消失。从上述结果可以看出，来源于藤黄微球菌的囊泡在口服给药时穿过粘膜，被吸收到体内，移动到肺部并分布。
[0102]
实施例3.来源于藤黄微球的囊泡在吸入给药期间的药代动力学特征分析
[0103]
为了研究吸入给药期间来源于藤黄微球菌的囊泡的药代动力学特征，通过向小鼠鼻内给药用荧光染色试剂染色的来源于藤黄微球菌的囊泡，测量每个器官中表达的荧光长达72小时。如图2所示，证实当荧光染色的来源于藤黄微球菌的囊泡的器官分布随时间进行图像评估时，来源于藤黄微球菌的囊泡主要分布在肺组织中，在给药后1小时至6小时出现，然后排泄。从上述结果可以看出，当鼻内给药时，来源于藤黄微球菌的囊泡通过粘膜，被吸收到体内，并分布在肺组织中。
[0104]
实施例4.来源于藤黄微球菌的囊泡在上皮细胞中的抗炎效果的评价
[0105]
如图3所示，用来源于藤黄微球菌的囊泡(藤黄微球菌ev)或阳性对照药物地塞米松(dex)预处理上皮细胞(a549细胞)，然后用来源于大肠杆菌的囊泡(大肠杆菌ev)处理，以便通过酶联免疫吸附测定(elisa，r&d systems)测量炎性细胞因子il-8的分泌量。具体而言，巨噬细胞用不同浓度(1、10和100μg/ml)的来源于藤黄微球菌的囊泡预处理24小时，然后用浓度为1ng/ml的来源于大肠杆菌的囊泡处理24小时，以测量分泌到培养基中的il-8。
[0106]
结果，如图4a所示，证实il-8的分泌被来源于藤黄微球菌的囊泡以剂量依赖性方式抑制。此外，如图4b所示，证实与对照药物地塞米松相比，对诱导中性粒细胞浸润的代表性细胞因子il-8的分泌的抑制效果甚至更好，并且当囊泡被热处理并随后给药时，il-8分泌抑制效果丧失。从上述结果可以看出，来源于藤黄微球菌的囊泡具有比代表性的抗炎药地塞米松更好的对中性粒细胞炎症的治疗效果，并且从来源于藤黄微球菌的囊泡在热处理时失去抗炎效果的事实可以看出，抗炎作用是由囊泡中的蛋白质介导的。
[0107]
实施例5.评估来源于藤黄微球菌的囊泡在作为炎症细胞的巨噬细胞中的抗炎效果
[0108]
如图5所示，在用来源于藤黄微球菌的囊泡(藤黄微球菌ev)预处理并随后用诱导炎症的来源于大肠杆菌的囊泡(大肠杆菌ev)处理巨噬细胞(raw 264.7细胞)之后，通过elisa(r&d systems)方法测量炎性细胞因子tnf-α和il-6的分泌水平。具体而言，在用不同浓度(1、10和100μg/ml)的来源于藤黄微球菌的囊泡预处理巨噬细胞24小时后，通过用浓度为1ng/ml的来源于大肠杆菌的囊泡处理巨噬细胞24小时，测量分泌到培养基中的tnf-α和il-6的分泌量。
[0109]
结果，如图6a和6b所示，证实当用来源于藤黄微球菌的囊泡预处理巨噬细胞时，tnf-α(图6a)和il-6(图6b)通过来源于大肠杆菌的囊泡的分泌被以剂量依赖性方式被抑制。从上述结果可以看出，来源于藤黄微球菌的囊泡有效抑制了由致病性生物病因因素引起的炎症的发展。
[0110]
实施例6.证实来源于藤黄微球菌的囊泡在作为炎症细胞的中性粒细胞中的中性粒细胞活化抑制效果
[0111]
如图7所示，在使用lymphoprep从人血液中提取中性粒细胞以评估中性粒细胞的活化后，通过elisa(r&d systems)测量作为中性粒细胞中的颗粒蛋白的中性粒细胞弹性蛋白酶(ne)。具体而言，在包含acd溶液的试管中收集10ml血液后，将血液小心地放置在20ml lymphoprep上并离心。离心后，收集红血层并将其与12ml右旋糖酐混合，并将所得混合物在室温下静置45分钟。层分离后，将40ml 1x hbss加入上清中并再次离心，然后用高压灭菌的millipore水除去红细胞，并使用中性粒细胞分离试剂盒(macs)分离中性粒细胞。使用rpmi1640培养基培养分离的中性粒细胞，并用来源于大肠杆菌的囊泡(大肠杆菌ev)和来源于藤黄微球菌的囊泡(藤黄微球菌ev)共处理24小时，然后在培养基中测量ne。用地塞米松(dex)作为阳性对照药物处理分离的中性粒细胞。
[0112]
因此，如图8所示，对照药物地塞米松不能抑制中性粒细胞弹性蛋白酶(ne)的分泌，这是中性粒细胞活化的指标，但当中性粒细胞用来源于藤黄微球菌的囊泡处理时，中性粒细胞的ne分泌以剂量依赖性方式被抑制。从上述结果可以看出，由于中性粒细胞的活化，来源于藤黄微球菌的囊泡可以有效治疗由中性粒细胞弹性蛋白酶介导的炎症疾病。
[0113]
实施例7.来源于藤黄微球菌的囊泡在对中性粒细胞肺病的小鼠模型中的治疗效果评价
[0114]
如图9所示，通过鼻内施用10ng/ml的作为致病性纳米颗粒的来源于大肠杆菌的囊泡(大肠杆菌ev)来制备肺病小鼠模型，以评估来源于藤黄微球菌的囊泡对肺病的影响，通过向小鼠模型鼻内施用来源于藤黄微球菌的囊泡(藤黄微球菌ev)来评估治疗效果。
[0115]
如图10a和10b所示，评估支气管肺泡灌洗液(balf)中炎性细胞的数量和肺中的组
织学变化，以评估对肺部炎症的治疗效果。具体而言，对于支气管肺泡灌洗液(balf)中炎性细胞的数量，通过将含有1ml pbs的注射器连接到气道来收集支气管肺泡灌洗液(balf)，然后使用台盼蓝(abcam)测量细胞总数。此外，为了评估肺的组织学变化，使用苏木精和曙红染色方法，特别是在将载玻片连接到cytopro(elitech)以固定细胞后，将细胞用苏木精(dako)和曙红(sigma，usa)染色，然后测量中性粒细胞的数量。
[0116]
结果，如图10a所示，证实在给药来源于藤黄微球菌的囊泡的组中，支气管肺泡灌洗液(balf)中巨噬细胞和中性粒细胞的数量以剂量依赖性方式减少。此外，如图10b所示，证实在给药来源于藤黄微球菌的囊泡的组的肺组织中，炎性细胞浸润显著减少。
[0117]
此外，由于评估支气管肺泡灌洗液(balf)中炎症介质的分泌程度，如图11a至11c所示，证实作为诱导炎症的细胞因子的cxcl-1(图11a)和tnf-α(图11b)以及il-1β(图11c)的分泌被来源于藤黄微球菌的囊泡以剂量依赖性方式抑制。
[0118]
从上述结果可以看出，由致病性纳米颗粒诱导的中性粒细胞肺部炎性疾病可以通过来源于藤黄微球菌的囊泡有效治疗。
[0119]
实施例8.来源于藤黄微球菌的囊泡在中性粒细胞肺病小鼠模型中的获得性免疫调节效果的评估
[0120]
通过向实施例7的肺病小鼠模型鼻内施用来源于藤黄微球菌的囊泡，评估免疫功能调节效果。结果，如图12a和12b所示，证实诱导中性粒细胞炎症的th17免疫应答相关细胞因子il-6(图12a)和il-17(图12b)的分泌被来源于藤黄微球菌的囊泡以剂量依赖性方式抑制。
[0121]
同时，如图12c所示，抑制免疫功能的il-10的分泌不受来源于藤黄微球菌的囊泡的抑制。
[0122]
从上述结果可以看出，来源于藤黄微球菌的囊泡的抗炎效果在抑制由致病性纳米颗粒诱导的th17免疫应答的同时出现。
[0123]
实施例9.来源于藤黄微球菌的囊泡在中性粒细胞肺病小鼠模型中的气道高反应性抑制效果的评价
[0124]
免疫功能障碍引起的炎症反应导致器官功能变化，导致肺功能障碍。通过向实施例7的肺病小鼠模型鼻内施用来源于藤黄微球菌的囊泡来评估肺的功能变化。具体而言，通过使用flexivent(加拿大scireq)测量乙酰甲胆碱引起的气道高反应性(ahr)来评估功能变化。也就是说，在以不同浓度(0mg/ml，6.25mg/ml，12.5mg/ml和25mg/ml)向每只小鼠施用气溶胶乙酰甲胆碱(sigma，usa)后，测量了对吸入的乙酰甲胆碱的最大气道反应。
[0125]
结果，如图13所示，证实乙酰甲胆碱诱导的气道高反应性在施用来源于藤黄微球菌的囊泡的组中以剂量依赖性方式被抑制。从上述结果可以看出，由致病性纳米颗粒诱导的与肺病相关的功能变化可以通过来源于藤黄微球菌的囊泡有效治疗。
[0126]
实施例10.来源于藤黄微球菌的囊泡在lps污染的过敏原引起的肺病的小鼠模型中的抗炎效果评估
[0127]
当仅吸入蛋白质抗原时，呼吸道中会发生免疫耐受而不是免疫超敏反应，因此不会发生由过敏原引起的炎症性疾病，但是当同时吸入细菌病因因素(如脂多糖(lps))和过敏原时，由于lps引起的先天性免疫功能障碍，对过敏原产生超敏反应。特别是，低浓度的lps通过th2免疫应答引起嗜酸性粒细胞哮喘，高浓度的lps通过th17免疫应答引起中性粒
细胞哮喘。如图14所示，通过鼻内施用过敏原(卵清蛋白；ova)和高浓度的lps来制备中性粒细胞肺病小鼠模型。具体而言，同时鼻内施用75μg蛋白质抗原卵清蛋白(ova)和10μg lps 4天，以诱导对ova的超敏反应，然后鼻内施用50μg ova 3周以制备由蛋白质抗原引起的肺病的小鼠模型。将来源于藤黄微球菌的囊泡(藤黄微球菌ev)与ova同时鼻内施用3周，以诱导ova疾病。作为对照药物，腹膜内施用20μg地塞米松(dex)。
[0128]
结果，如图15a和15b所示，类似于施用地塞米松的组，在施用来源于藤黄微球菌的囊泡的组中，与由lps污染的过敏原诱导的肺病阳性对照组相比，支气管肺泡灌洗液(balf)中的炎性细胞数量和中性粒细胞数量显著减少。
[0129]
此外，如图15c所示，通过使用苏木精和曙红染色方法评估肺部的组织学变化，证实与lps污染的过敏原诱导的肺病阳性组相比，施用来源于藤黄微球菌的囊泡的组显著抑制炎性细胞浸润到肺组织中，类似于施用地塞米松的组。
[0130]
此外，使用elisa(r&d systems)测量支气管肺泡灌洗液中的il-1β和il-17，以评估来源于藤黄微球菌的囊泡在小鼠模型中的免疫调节效果。
[0131]
结果，如图16a和16b所示，证实作为蛋白质抗原引起的th17免疫应答标志物的炎性细胞因子il-1β(图16a)和il-17(图16b)在支气管肺泡灌洗液(balf)中的浓度被来源于藤黄微球菌的囊泡显著降低。
[0132]
从上述结果可以看出，由过敏原引起的th17免疫应答导致的中性粒细胞肺病可以通过来源于藤黄微球菌的囊泡有效治疗。
[0133]
实施例11.来源于藤黄微球菌的囊泡的免疫调节机制分析
[0134]
已知对各种压力的先天免疫反应对于疾病的发病机理非常重要。特别是，已知存在于细胞质中的nlrp3蛋白是由免疫功能障碍引起的各种难治性疾病的发病机理中的关键信号通路。此外，已知与蛋白质抗原诱导的免疫功能障碍的发病机制相关的t-bet和ror-γt分别是th1细胞和th17细胞对抗原产生超敏反应的关键信号传导材料。
[0135]
为了评估来源于藤黄微球菌的囊泡的免疫功能调节效果，获得了实施例10的小鼠模型中的肺组织，然后通过蛋白质印迹证实先天免疫相关蛋白nlrp3和在t细胞中表达的获得性免疫相关蛋白t-box蛋白(t-bet)和视黄酸受体相关孤核受体γ(ror-γt)的表达。使用50μg蛋白质来测量每种蛋白质的表达水平。
[0136]
结果，如图17所示，证实在施用lps污染的过敏原的组中，与对照组相比，nlrp3表达显著增加，并且在施用来源于藤黄微球菌的囊泡的组中，与施用地塞米松的组类似，nlrp3表达被显著抑制。此外，证实在施用来源于藤黄微球菌的囊泡的组中，与地塞米松相比，t-bet和ror-γt的表达被更有效地抑制。
[0137]
从上述结果可以看出，来源于藤黄微球菌的囊泡在lps污染的过敏原产生th1和th17超敏反应时抑制nlrp3炎症小体信号，从而抑制过敏原特异性th1和th17细胞的形成，以调节免疫功能。
[0138]
实施例12.来源于藤黄微球菌的囊泡对抗氧化应激的细胞稳态的调节功效的评估
[0139]
当细胞反复暴露于各种压力时，由于细胞中的氧化应激而发生细胞衰老，并导致细胞功能障碍和细胞死亡，从而导致疾病。特别是，通过enos信号产生的低浓度一氧化氮(no)不仅通过拮抗主要负责氧化应激的活性氧(ros)的作用而在维持细胞稳态中起关键作用，而且还抑制气道高反应性的发展，这是肺病的重要功能变化。
[0140]
为了评估来源于藤黄微球菌的囊泡对enos信号激活的影响(这是抗氧化应激的防御机制之一)，通过实施例4的方法用来源于藤黄微球菌的囊泡处理a549细胞，然后评估enos信号蛋白的表达模式。作为评估信号蛋白表达的特定方法，使用裂解缓冲液溶解细胞，提取蛋白质，并使用bca蛋白质测定试剂盒(thermo，usa)定量蛋白质。使每个样品的50μg蛋白质在10％聚丙烯酰胺凝胶中电泳，并将分离的蛋白质转移到硝化纤维素膜上。在室温下用含有0.05％吐温20的、加入脱脂牛奶的tris缓冲盐水(tbst)封闭30分钟后，将对p-erk、erk、enos、p-enos和β-肌动蛋白特异的一抗稀释1/1000，并使其在4℃下反应24小时。此后，将一抗用含有0.05％吐温-20的磷酸盐缓冲盐水(pbst)洗涤三次，每次10分钟，并使其在室温下与以1/5000稀释的二抗反应1小时。用pbst洗涤五次，每次10分钟，之后使用ecl选择试剂确认条带。
[0141]
结果，如图18所示，在用作为致病性纳米颗粒的来源于大肠杆菌的囊泡(大肠杆菌ev)处理后，enos信号激活被抑制。相反，在用来源于藤黄微球菌的囊泡处理后，erk和enos的磷酸化增加，类似于施用地塞米松(dex)时。此外，证实当施用热处理的来源于藤黄微球菌的囊泡时，通过来源于藤黄微球菌的囊泡的enos磷酸化被抑制。
[0142]
从上述结果可以看出，来源于藤黄微球菌的囊泡不仅通过激活enos信号诱导低浓度的no以增加细胞稳态，而且还抑制了与肺病相关的功能变化的发展。
[0143]
通过上述结果，可以看出，本发明的来源于藤黄微球菌的囊泡有效抑制了中性粒细胞肺病的发展。特别地，可以看出囊泡通过抑制由氧化应激、线粒体功能障碍和溶酶体损伤等诱导的nlrp3蛋白表达和炎症小体产生来恢复先天性和获得性免疫功能。此外，可以看出enos信号诱导低浓度no的产生以增加细胞稳态。特别是，已经证实，当口服或鼻内给药时，来源于藤黄微球菌的囊泡通过粘膜以分布在肺组织中，因此本发明的来源于藤黄微球菌的囊泡不仅可用于改善、预防或治疗中性粒细胞肺病，还可有效地用作治疗肺病的药物载体。
[0144]
本发明的上述描述是为了说明目的而提供的，本发明所属领域的普通技术人员将理解的是，本发明可以容易地修改为其他特定形式，而不改变本发明的技术精神或基本特征。因此，应该理解，上述例子在所有方面都是仅说明性的，并且不是限制性的。
[0145]
工业实用性
[0146]
本发明人证实，当口服或鼻内施用来源于藤黄微球菌的囊泡时，囊泡通过粘膜并被递送至肺。此外，本发明人证实，当用囊泡处理上皮细胞和炎性细胞时，通过生物病因因素的炎症介质的分泌被显著抑制，而且当用囊泡处理细胞时，通过生物病因因素的nlrp3蛋白的分泌也被显著抑制。此外，已经证实，当将囊泡施用到由生物病因因素引起的中性粒细胞疾病的小鼠模型时，中性粒细胞肺部炎症和功能变化被显著抑制，因此，可以预期的是，根据本发明的来源于藤黄微球菌的囊泡不仅能够有效地用于开发用于预防、改善症状或治疗中性粒细胞肺病的药物或健康功能性食品，而且能够用作治疗疾病的药物递送系统。

技术特征：
1.一种用于预防或治疗中性粒细胞肺病的药物组合物，其包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述肺病是由含有3(nlrp3)炎症小体的核苷酸结合寡聚化结构域、富含亮氨酸的重复序列和热蛋白结构域介导的肺病。3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述肺病是选自由哮喘、肺气肿、囊性纤维化(cf)、细菌性肺炎、病毒性肺炎、特发性肺纤维化(ipf)、间质性肺炎、急性呼吸窘迫综合征(ards)和急性肺损伤(ali)构成的组的一种或多种疾病。4.根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述哮喘是中性粒细胞哮喘。5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述囊泡的平均直径为10至200nm。6.根据权利要求1所述药物组合物，其中所述囊泡由藤黄微球菌天然分泌或人工产生。7.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物抑制nlrp3炎症小体的活性。8.一种用于预防或缓解中性粒细胞肺病的食品组合物，其包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。9.根据权利要求8所述的食品组合物，其中所述肺病是选自由哮喘、肺气肿、囊性纤维化(cf)、细菌性肺炎、病毒性肺炎、特发性肺纤维化(ipf)、间质性肺炎、急性呼吸窘迫综合征(ards)和急性肺损伤(ali)组成的组的一种或多种疾病。10.一种用于预防或治疗中性粒细胞肺病的吸入剂组合物，其包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。11.根据权利要求10所述的吸入剂组合物，其中所述肺病是选自由哮喘、肺气肿、囊性纤维化(cf)、细菌性肺炎、病毒性肺炎、特发性肺纤维化(ipf)、间质性肺炎、急性呼吸窘迫综合征(ards)和急性肺损伤(ali)组成的组的一种或多种疾病。12.一种用于预防或缓解中性粒细胞肺病的准药物组合物，其包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。13.一种用于递送用于治疗中性粒细胞肺病的药物的组合物，其包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分。14.一种用于预防或治疗中性粒细胞肺病的方法，所述方法包括向需要的受试者施用包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物。15.包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物的预防或治疗中性粒细胞肺病的用途。16.来源于藤黄微球菌的囊泡用于制备用于治疗中性粒细胞肺病的药物的用途。17.一种用于递送用于治疗中性粒细胞肺病的药物的方法，所述方法包括向需要的受试者施用包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物，所述囊泡携带用于治疗中性粒细胞肺病的药物。18.包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分的组合物的用途，用于递送用于治疗中性粒细胞肺病的药物。

技术总结
本发明涉及来源于藤黄微球菌的细胞外囊泡及其用途，特别是涉及用于改善、预防或治疗中性粒细胞肺病的组合物等，其包含来源于藤黄微球菌的囊泡作为活性成分，该组合物能够有效治疗由含有3炎症小体(NLRP3炎症小体)的核苷酸结合寡聚化结构域、富含亮氨酸的重复序列和热蛋白结构域介导的中性粒细胞肺病。热蛋白结构域介导的中性粒细胞肺病。热蛋白结构域介导的中性粒细胞肺病。


技术研发人员：金润根
受保护的技术使用者：MD保健株式会社
技术研发日：2021.11.03
技术公布日：2023/9/23