用于预防或治疗结核病的药物组合物的制作方法

1.本发明涉及一种融合蛋白，其包含：源自结核分枝杆菌(mycoba terium tuberculosis)的融合多肽；多核苷酸，用于编码上述蛋白；重组载体，包含上述多核苷酸；以及用于预防或治疗结核病的药物组合物，包含上述融合蛋白、多核苷酸或重组载体。


背景技术：

2.结核病是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis)引起的感染性疾病，当传染性肺结核患者咳嗽或打喷嚏时，结核分枝杆菌便会排到空气中，周围人可能吸入这些飞沫而被感染。通常是通过呼吸道传染，但并非每个感染者均成为结核病患者，在正常免疫系统的状态下，即使被感染了结核分枝杆菌也不会发病，也可过正常人的生活。因此，需要开发一种用于预防或治疗结核病的疫苗，以保护未感染结核病的人群或被感染结核病的人群。
3.卡介苗(bacillus calmette-gurin，bcg)是一种减弱牛型结核分枝杆菌(mycobacterium bovis)的减毒活疫苗，是全球最常用的结核疫苗，可有效保护儿童。但其存在如下问题，即持续时间仅限于童年，并且对作为结核病主要形式的成人肺结核的预防效果处于0～80％的不稳定状态。由此，世界各国家正在开发能够代替或补充现有结核疫苗的新结核疫苗。
4.开发出的新型结核疫苗包括：利用结核病抗原的蛋白质亚单位疫苗；将诱导防御免疫的结核抗原表达在质粒dna或病毒载体中的dn a疫苗或病毒载体疫苗；将诱导防御免疫的结核抗原表达在结核抗原的bcg疫苗的重组bcg疫苗；去除结核细菌的致病基因的基因重组结核病疫苗等。迄今为止，作为新型结核病预防疫苗，较多尝试的是dna疫苗，并在动物模型中证明了其功效。此外，利用dna疫苗技术开发了许多结核病抗原。
5.dna疫苗已被证明在建立包括细胞毒性t淋巴细胞(cytotoxic tlymphocyte，ctl)和th1反应在内的细胞免疫反应方面非常有效，已知上述ctl和th1反应对于在小鼠和人类中获得有效的抗细菌免疫(anti-mycobacteria immunity)至关重要(bonato vl et al.，infect immun，1998，66:169-175)。此外，由于在引入有效的免疫技术方面，选择对结核病的防御功效至关重要的适当抗原的重要性，因此正在努力进行抗原的开发。
6.为此，本发明人利用具有结核病的防御功效的抗原开发了用于预防或治疗结核病的疫苗，并完成了本发明。


技术实现要素：

7.技术问题
8.本发明的一目的在于，提供包含源自结核分枝杆菌的融合多肽的融合蛋白。
9.本发明的再一目的在于，提供用于编码上述融合蛋白的多核苷酸。
10.本发明另一目的在于，提供包含上述多核苷酸的重组载体。
11.本发明的还有一目的在于，提供包含上述融合蛋白的用于预防或治疗结核病的药
物组合物。
12.本发明又一目的在于，提供包含上述多核苷酸的用于预防或治疗结核病的药物组合物。
13.本发明又一目的在于，提供包含上述重组载体的用于预防或治疗结核病的药物组合物。
14.本发明又一目的在于，提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述融合蛋白的步骤。
15.本发明又一目的在于，提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述多核苷酸的步骤。
16.本发明又一目的在于，提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述重组载体的的步骤。
17.本发明又一目的在于，提供上述融合蛋白在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用提供上述的使用。
18.本发明又一目的在于，提供上述多核苷酸在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用。
19.本发明又一目的在于，提供上述重组载体在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用。
20.解决问题的手段
21.为了实现上述目的，本发明提供包含源自结核分枝杆菌的融合多肽的融合蛋白。
22.并且，本发明提供用于编码上述融合蛋白的多核苷酸。
23.并且，本发明提供包含上述多核苷酸的重组载体。
24.并且，本发明提供包含上述融合蛋白的用于预防或治疗结核病的药物组合物。
25.并且，本发明提供包含上述多核苷酸的用于预防或治疗结核病的药物组合物。
26.并且，本发明提供包含上述重组载体的用于预防或治疗结核病的药物组合物。
27.并且，本发明提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述融合蛋白的步骤。
28.并且，本发明提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述多核苷酸的步骤。
29.并且，本发明提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述重组载体的步骤。
30.并且，本发明提供上述融合蛋白在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用。
31.并且，本发明提供上述多核苷酸在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用。
32.并且，本发明提供上述重组载体在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用。
33.发明的效果
34.根据本发明的融合蛋白具有可以增加人体对结核病抗原的特异性免疫反应且显著减少肺部中结核杆菌数量的效果，因此可有效用于结核病的预防或治疗上。
附图说明
35.图1示出用于制备融合蛋白的基因构建体。
36.图2示出在对小鼠动物模型施用dna疫苗之后，通过ifn-γelispot分析测定对结核抗原的特异性免疫反应的结果。
37.图3示出在对小鼠动物模型施用dna疫苗之后，测定肺部中结核杆菌数量的结果及肺部组织病理结果。
38.图4示出在对小鼠动物模型施用dna疫苗之后，测定肺部中结核杆菌数量的结果及肺部组织病理结果。
39.图5示出在对小鼠动物模型施用dna疫苗并用结核分枝杆菌再次感染后，测定肺部中的结核杆菌数量的结果。
具体实施方式
40.实施本发明的最佳方式
41.本发明提供包含源自结核分枝杆菌的融合多肽的融合蛋白。
42.上述融合多肽可以选自由ag85a、tb10.4、mtb32b及psts3组成的组，优选地，可以包含ag85a、tb10.4、mtb32b及psts3。在本发明的一实施例中，上述ag85a可以由序列号1的氨基酸序列组成；上述tb10.4可以由序列号2的氨基酸序列组成；上述mtb32b可以由序列号3的氨基酸序列组成；上述psts3可以由序列号4的氨基酸序列组成。
43.并且，上述融合多肽还可以包含选自由ppe39、glcb及ripa组成的组中的多肽，优选地，还可以包含含有ppe39、glcb及ripa的多肽。在本发明的一实施例中，上述ppe39可以由序列号5的氨基酸序列组成；上述glcb可以由序列号6的氨基酸序列组成；上述ripa可以由序列号7的氨基酸序列组成。
44.上述融合多肽可以通过2a肽(2a self-cleaving peptide)或gs接头连接，优选地，上述gs接头可以包含(gs)n(此时，n为1至10的整数)。在本发明的一实施例中，上述gs接头可以由序列号8的氨基酸序列组成。
45.在本发明中，上述融合蛋白还可以包含信号肽。
46.本发明的术语“信号肽(signal peptide)或分泌信号序列(signalsequence)”是指指定为分泌路径(secretory pathway)的存在于新合成蛋白的n端的长度约为20至30个氨基酸的短肽。
47.上述信号肽可以选自由组织型纤溶酶原激活剂(tissue plaminoge n activator，tpa)信号肽、单纯疱疹病毒糖蛋白ds(herpes simplex virus glycoprotein ds，hsv gds)信号肽及生长激素(growth hormo ne)信号肽组成的组，优选地，可以使用在包括哺乳动物在内的高等真核细胞中使用的分泌信号序列，更优选地，可以使用tpa序列。
48.在本发明的一实施例中，上述tpa序列可以由序列号9的氨基酸序列组成。并且，本发明的信号序列可以由宿主细胞中表达频率高的密码子代替来使用。
49.在本发明中，上述融合蛋白还包含免疫增强肽。
50.本发明的术语“免疫增强肽”是指通过激活参与免疫反应的细胞(例如，树突状细胞等)来增加免疫反应的肽。
51.上述免疫增强肽可以选自由cd40配体、fms样酪氨酸激酶3配体(fms-like tyrosine kinase-3，flt3)配体、鞭毛蛋白(flagellin)及ox 40组成的组，优选地，可以为flt3配体，但不限于此。在本发明的一实施例中，上述flt3配体可以由序列号10的氨基酸序
列组成。
52.本发明提供融合蛋白，其包含：信号肽；flt3配体的免疫增强肽；以及包含含有ag85a、tb10.4、mtb32b及psts3的融合多肽。
53.在本发明的一实施例中，上述融合蛋白可以由序列号11的氨基酸序列组成。
54.并且，本发明提供融合蛋白，其包含：信号肽；flt3配体的免疫增强肽；以及包含含有ppe39、glcb及ripa的融合多肽。
55.在本发明的一实施例中，上述融合蛋白可以由序列号12的氨基酸序列组成。
56.并且，本发明提供用于编码上述融合蛋白的多核苷酸。
57.本发明的多核苷酸可以通过化学合成法或基因工程技术来制备。化学合成法是本发明所属技术领域的普通技术人员已知的，可以使用任意方法。也可通过委托商业化核酸合成及提供商购买。在通过基因工程技术制备的情况下，例如，可通过分别获得编码以往所知的源自结核分枝杆菌的融合多肽、信号肽及免疫增强肽的核酸片段，并将这些片段以适合框架的方式连接来制备。获得上述核酸片段的方法在本发明所属技术领域中是众所周知的，本发明所属技术领域的普通技术人员可以使用适当的限制酶来轻松连接。在本发明的具体实施例中公开了利用化学合成法来制备的方法。
58.本发明的多核苷酸可以包含用于编码含有ag85a、tb10.4、mtb32b及psts3的融合多肽的多核苷酸。
59.上述ag85a可以由序列号13的核酸序列组成；上述tb10.4可以由序列号14的核酸序列组成；上述mtb32b可以由序列号15的核酸序列组成；上述psts3可以由序列号16的核酸序列组成。ag85a、tb10.4、mtb32b及psts3可以通过gs接头连接，优选地，gs接头可以由选自序列号20至23的核酸序列组成。
60.并且，本发明的多核苷酸可以包含用于编码含有ppe39、glcb及ripa的融合多肽的多核苷酸。
61.上述ppe39可以由序列号17的核酸序列组成；上述glcb可以由序列号18的核酸序列组成；上述ripa可以由序列号19的核酸序列组成。ppe39、glcb及ripa可以通过gs接头连接，优选地，gs接头可以由选自序列号20至23的核酸序列组成。
62.并且，本发明的多核苷酸还可以包含用于编码信号肽的多核苷酸，上述信号肽可以为tpa序列，编码上述tpa序列的多核苷酸可以由序列号24或25的核酸序列组成。
63.并且，本发明的多核苷酸还可以包含用于编码免疫增强肽的多核苷酸，上述免疫增强肽可以为flt3配体，编码上述flt3配体的多核苷酸可以由序列号26或27的核酸序列组成。
64.在本发明的一实施例中，上述多核苷酸可以包含：用于编码包含ag85a、tb10.4、mtb32b及psts3的融合多肽的多核苷酸；用于编码信号肽的多核苷酸；以及用于编码免疫增强肽的多核苷酸。优选地，上述多核苷酸可以由序列号28的核酸序列组成。
65.在本发明的一实施例中，上述多核苷酸可以包含：用于编码包含ppe39、glcb及ripa的融合多肽的多核苷酸；用于编码信号肽的多核苷酸；以及编码免疫增强肽的多核苷酸。优选地，上述多核苷酸可以由序列号29的核酸序列组成。
66.并且，本发明提供包含上述多核苷酸的重组载体。
67.本发明的术语“载体”是指基因构建体，上述基因构建体包含插入到编码多肽的基
因组内的外部dna。在本发明的重组表达载体是在在基因组中插入了编码包含源自结核分枝杆菌的融合多肽、信号肽及免疫增强肽的融合蛋白的多核苷酸的载体。
68.上述载体可以为质粒载体、病毒载体、粘粒载体或人工染色体载体，上述病毒载体可以为噬菌体载体、腺病毒载体、逆转录病毒载体或腺相关病毒载体。
69.本发明的重组载体可能包含能够以适合于在宿主细胞中表达编码本发明融合蛋白的核酸的形式编码上述融合蛋白的核酸。即，本发明的重组载体包含根据用于表达的宿主细胞来选择的一个以上的调节序列，这些与要表达的核酸序列可操作地连接。
70.本发明的术语“可操作地连接”是指所期望的核苷酸序列(例如，在体外转录/翻译系统或宿主细胞中)以允许其表达的方式与上述调节序列相连接。
71.本发明的术语“调节序列”是指启动子、增强子及其他调节元件(例如，聚腺苷酸化信号)。调节序列包括指示所期望的核酸在许多宿主细胞中表达的序列，以及指示所期望的核酸仅在特定的宿主细胞中能够表达的序列(例如，组织特异性调节序列)。只要是本发明所属技术领域的普通技术人员就可以理解，表达载体的设计可根据诸如待转化的宿主细胞的选择以及所需的蛋白表达水平等的因素而变化。本发明的表达载体可通过引入到宿主细胞来表达上述融合蛋白。
72.并且，本发明提供包含上述融合蛋白的用于预防或治疗结核病的药物组合物。
73.在本发明的一实施例中，上述组合物还可以包含含有白细胞介素-12(il-12)、白细胞介素-21(il-21)及巨噬细胞炎性蛋白-1α(mip-1a)蛋白的免疫佐剂(adjuvant)，优选地，上述免疫佐剂可包含序列号30至33的氨基酸序列。其中，il-12p35由序列号30的氨基酸序列组成；il-12p40由序列号31的氨基酸序列组成；il-21由序列号32的氨基酸序列组成；mip-1a(mip-1alpha)由序列号33的氨基酸序列组成。
74.本发明的术语“免疫佐剂”是指添加到疫苗中以刺激抗原的免疫系统反应的物质。
75.并且，本发明提供包含上述多核苷酸或上述重组载体的用于预防或治疗结核病的药物组合物。
76.上述组合物还可包含用于编码含有il-12、il-21及mip-1a蛋白的免疫佐剂的多核苷酸，优选地，可以为编码序列号30至33的氨基酸序列的多核苷酸，更优选地，可包含序列号34至37的核酸序列。
77.本发明的药物组合物还可以包含药学上可接受的载体。在本发明中的术语“药学上可接受的载体”是指其对暴露于上述组合物中的细胞或人表现出无毒特性。并且可以不受限制地使用本发明所属技术领域中已知的载体，例如缓冲液、防腐剂、无痛剂、增溶剂、等渗剂、稳定剂、基剂、赋形剂及润滑剂等。
78.本发明的组合物可以配制成口服制剂或注射剂等的非口径制剂，例如颗粒剂、散剂、溶液剂、片剂、胶囊剂或干糖浆剂等。优选地，本发明的组合物可以为溶液剂或注射剂等形式，但不限于此。
79.在本发明的药物组合物中，按药学有效量施用。本发明的术语“施用”是指以适当的方式向受试者引入预定的物质，上述组合物的施用途径可通过任何常规途径施用，只要能够到达所期望的组织即可。可以为腹腔内施用、静脉施用、肌内施用、皮下施用、皮内施用、口服施用、局部施用、鼻内施用、肺内施用及直肠内施用，但不限于此。
80.上述术语“受试者”是指包括人类在内的所有动物，例如大鼠、小鼠和家畜等。优选
地，可以为包括人类在内的哺乳动物。
81.上述术语“药学有效量”是指以适用于医学治疗的合理受益/风险比率足以治疗疾病且不会引起副作用的量，本发明所属技术领域的普通技术人员可根据如下条件容易确定有效量水平，如根据患者的性别、年龄、体重、健康状况、疾病类型、严重程度、药物活性、对药物的敏感性、施用方法、施用时间、施用途径及排出率、治疗期间、组合或包含同时使用的药物的元素以及在其他医学领域中众所周知的元素。在施用时，可以按照上述推荐剂量每天施用一次，也可分数次施用。
82.并且，本发明提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述融合蛋白的步骤。
83.并且，本发明提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述多核苷酸或上述重组载体的步骤。
84.优选地，上述治疗有效量可根据所要实现的反应类型和程度、根据情况是否使用其它制剂等的具体组合物、受试者年龄、体重、一般健康状态、性别及饮食、施用时间、施用途径及组合物的分泌率、治疗期、与具体组合物一起使用或同时使用的药物等多种因素以及广泛应用于医学领域的相似因素来不同地应用。因此，优选地，可根据上述因素来确定适合于本发明目的的组合物的有效量。
85.上述受试者可适用于任意哺乳动物，上述哺乳动物不仅包括人类及灵长类动物，还包括牛、猪、羊、马、狗及猫等的家畜。
86.并且，本发明提供上述融合蛋白在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用。
87.并且，本发明提供上述多核苷酸或上述重组载体在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用。
88.本发明的实施方式
89.以下，通过实施例对本发明进行更详细的说明。这些实施例用于更详细地说明本发明，但是本发明的范围并不仅局限于这些实施例。
90.实施例1.融合蛋白的制备
91.本发明的融合蛋白包含源自结核分枝杆菌的融合多肽、信号肽及免疫增强肽(immunity enhancer peptide)。上述源自结核分枝杆菌的融合多肽包含ag85a、tb10.4、mtb32b及psts3，并且各个多肽(抗原)通过2a肽连接来制备。并且，在上述融合多肽的n末端上连接信号肽中的tpa肽及免疫增强肽中的flt3l配体来制备。
92.并且，上述源自结核分枝杆菌的融合多肽除ag85a、tb10.4、mt b32b及psts3之外还包含ppe39、glcb及/或ripa的多肽来制备。各个多肽(抗原)通过2a肽或gs接头连接来制备，在上述融合多肽的n末端上也被制备成连接信号肽中的tpa肽及免疫增强肽中的flt3l配体。
93.以下，ag85a、tb10.4、mtb32b及psts3的融合多肽通过2a肽连接，将在c末端上添加ha tag的融合蛋白记载为“gx-70”，通过2a肽连接ag85a、tb10.4、mtb32b、ppe39及psts3的融合多肽的融合蛋白记载为“gx-171a”，将通过2a肽连接ag85a、tb10.4、mtb32b、ripa及psts3的融合多肽的融合蛋白记载为“gx-171b”，将通过gs接头连接ag85a、tb10.4、mtb32b及psts3的融合多肽的融合蛋白记载为“gx-170a”，将通过gs接头连接ppe39、glcb及ripa的融合多肽的融合蛋白记载为“gx-170b”(图1)。
94.上述候选融合蛋白通过合成每个相应的融合蛋白的基因序列插入到高表达载体的pgx27(参照韩国授权专利第1442254号)中来制备。
95.实施例2.免疫佐剂的制备
96.本发明的免疫佐剂包含il-12、il-21及mip-1a蛋白。il-12的n末端与cmv启动子(pcmv)相连接，il-21的n末端与rsv启动子(prsv)相连接，mip-1a的n末端与ef1a启动子(pef1a)相连接。以下，将包含il-12、il-21及mip-1a蛋白的免疫佐剂记载为“bd-121a”(图1)。
97.通过合成用于表达每个相应的融合蛋白的盒，并将其插入到高表达载体的pgx27(参照韩国授权专利第1442254号)中来制备。
98.实施例3.包含融合蛋白及免疫佐剂的组合物的免疫增强功效分析
99.本发明人进行了实验以确认包含融合蛋白及免疫佐剂的组合物是否具有免疫增强功效。简而言之，利用(sl vaxigen，韩国)体内电穿孔仪在c57bl/6小鼠的大腿肌肉施用pbs(剂型对照组)或dna疫苗，每隔2周施用2次。最终施用2周后摘除脾脏，并利用ifn-γelispot分析对结核抗原的特异性免疫反应进行了测定。pbs或dna疫苗给药组的信息如下：组1，pbs(剂型对照组)；组2，gx-70 8μg；组3，gx-70 8μg+bd-121a 8μg；组4，gx-171a8μg；组5，gx-171a 8μg+bd-121a 8μg；组6，gx-171b 8μg；以及组7，gx-171b 8μg+bd-121a 8μg。
100.结果确认到，在结核病的候选物质gx-70、gx-171a及gx-171b中诱导出结核特异性免疫反应，尤其在gx-70、gx-171a及gx-171b中添加了免疫佐剂bd-121a的组3、5及7中，结核特异性免疫反应得到进一步增加(图2)。
101.实施例4.结核病的预防功效分析
102.本发明人进行了实验以确认包含融合蛋白及免疫佐剂的组合物是否具有预防结核病的功效。简而言之，利用(sl vaxige n，韩国)体内电穿孔仪在c57bl/6小鼠的大腿肌肉上施用pbs(剂型对照组)或dna疫苗，每隔3周施用3次。在阳性对照组bcg组中，在第3周给c57bl/6小鼠施用1次。最终施用3周后，将结核分枝杆菌释放到空气当中，3周后，测定肺部中结核分支杆菌数量，确认对结核分枝杆菌的防御功效。pbs或dna疫苗给药组的信息如下：组1，pbs(剂型对照组)；组2，gx-70 4μg；组3，gx-171a 4μg+bd-121a 4μg；组4，gx-171b 4μg+bd-121a 4μg；以及组5，bcg(阳性对照组)。
103.结果确认到，在所有疫苗候选物质的施用组中，与剂型对照组相比显示较低的结核分支杆菌数量，在肺组织病理结果中，炎症程度也得到了抑制(图3)。然而，各个疫苗候选物质之间的防御功效上的差异尚未得到确认。
104.为此，本发明人联合施用另外制备的gx-170a及gx-170b，进行了进一步实验，以评估预防结核病的功效。简而言之，利用orbijector(sl vaxigen，韩国)体内电穿孔仪在c57bl/6小鼠的大腿肌肉上施用了pbs(剂型对照组)或dna疫苗，每隔3周施用3次。在阳性对照组的bcg组中，在第3周给c57bl/6小鼠施用了一次。最终施用3周后，将结核分枝杆菌释放到空气当中，3周后，测定肺部中结核分支杆菌数量，确认对结核分枝杆菌的预防功效。pbs或dna疫苗给药组的信息如下：组1，pbs(剂型对照组)；组2，gx-70 8μg；组3，gx-70 8μg+bd-121a 8μg；组4，gx-171a 8μg+bd-121a 8μg；组5，gx-170a8μg+gx-170b 8μg+bd-121a4μg；以
及组6，bcg(阳性对照组)。
105.结果确认到，在所有疫苗候选物质的施用组中，与剂型对照组相比，具有显著的预防结核病的功效(图4)。在施用gx-70的组中确认到，与剂型对照组相比，无论是否添加免疫佐剂都具有预防结核病的功效，在联合施用gx-171a及bd-121a的组中确认到，与施用gx-70的组具有相似效果(图4)。尤其，在联合施用gx-170a、gx-170b及bd-121a的组中确认到，与施用gx-70的组相比，具有更显著的预防结核病的效果，在肺组织病理结果中观察到了同样的效果(图4)。
106.实施例5.结核病的治疗功效分析
107.本发明人进行了实验以确认含有融合蛋白及免疫佐剂的组合物是否具有治疗结核病的效果。简而言之，将结核分枝杆菌释放到空气当中后，4周后，将结核病的药剂inh(isoniazid)和pza(pyrazinamid e)施用到c57bl/6小鼠中，并利用饮用水进行了14周的治疗。在此治疗期间，给bcg组(阳性对照组)每8周施用1次，并且利用orbi (sl vaxigen，韩国)体内电穿孔仪在c57bl/6小鼠的大腿肌肉上施用了pbs(剂型对照组)或dna疫苗，每隔5、8、11及13周施用3次。在结核病药物治疗结束时间点确认了未检测出结核分枝杆菌之后，在第20周将结核分枝杆菌第二次释放到空气中，之后肺部中观察再次感染的结核杆菌数量。施用dna疫苗的组的信息如下：组1，未施用结核病药剂的naive；组2，pbs(剂型对照组)；组3，gx-70 8μg；组4，gx-170a 8μg；组5，gx-170a 8μg+gx-170b8μg；组6，gx-70 8μg+bd-121a 8μg；组7，gx-170a 8μg+bd-121a 8μg；以及组8，gx-170a 8μg+gx-170b 8μg+bd-121a8μg。
108.结果确认到，在所有组中，与感染结核后未治疗的组相比，结核病再次感染发病数较低(图5)。在联合施用gx-170a及gx-170b的组中，结核杆菌数量呈下降趋势，尤其，在联合施用gx-170a、gx-170b及bd-121a的组中确认到，与剂型对照组相比，结核分支杆菌数量显著低于剂型对照组(图5)。
109.从上述结果中本发明人确认到，当联合施用gx-170a及gx-170b时具有治疗结核病的功效，并证实了当联合施用另外的免疫佐剂时结核病的治疗功效会进一步提高。

技术特征：
1.一种融合蛋白，其特征在于，包含源自结核分枝杆菌(mycoba cterium tuberculosis)的融合多肽。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，上述融合多肽选自由ag85a、tb10.4、mtb32b及psts3组成的组。3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，上述ag85a由序列号1的氨基酸序列组成；上述tb10.4由序列号2的氨基酸序列组成；上述mtb32b由序列号3的氨基酸序列组成；上述psts3由序列号4的氨基酸序列组成。4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，上述融合多肽还包含选自由ppe39、glcb及ripa组成的组中的多肽。5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于，上述ppe39由序列号5的氨基酸序列组成；上述glcb由序列号6的氨基酸序列组成；上述ripa由序列号7的氨基酸序列组成。6.根据权利要求2或4所述的融合蛋白，其特征在于，上述融合多肽通过gs接头连接。7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其特征在于，上述gs接头由序列号8的氨基酸序列组成。8.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，上述融合蛋白还包含信号肽。9.根据权利要求8所述的融合蛋白，其特征在于，上述信号肽选自由组织型纤溶酶原激活剂信号肽、单纯疱疹病毒糖蛋白ds信号肽及生长激素信号肽组成的组。10.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，上述融合蛋白还包含免疫增强肽。11.根据权利要求10所述的融合蛋白，其特征在于，上述免疫增强肽选自由cd40配体、fms样酪氨酸激酶3配体、鞭毛蛋白及ox40组成的组。12.一种多核苷酸，其特征在于，上述多核苷酸用于编码根据权利要求1至11中任一项所述的融合蛋白。13.一种重组载体，其特征在于，包含根据权利要求12所述的多核苷酸。14.根据权利要求13所述的重组载体，其特征在于，上述重组载体为质粒载体或病毒载体。15.一种用于预防或治疗结核病的药物组合物，其特征在于，包含根据权利要求1至11中任一项所述的融合蛋白。16.根据权利要求15所述的组合物，其特征在于，上述组合物还包含含有白细胞介素-12、白细胞介素-21及巨噬细胞炎性蛋白-1α的免疫佐剂。17.根据权利要求16所述的组合物，其特征在于，上述免疫佐剂包含序列号30至33的氨基酸序列。18.一种用于预防或治疗结核病的药物组合物，其特征在于，包含根据权利要求12所述的多核苷酸。19.根据权利要求18所述的组合物，其特征在于，上述组合物还包含用于编码含有白细胞介素-12、白细胞介素-21及巨噬细胞炎性蛋白-1α的免疫佐剂的多核苷酸。20.一种用于预防或治疗结核病的药物组合物，其特征在于，包含根据权利要求13所述的重组载体。

技术总结
本发明涉及一种融合蛋白，其包含：源自结核分枝杆菌(Mycoba terium tuberculosis)的融合多肽；多核苷酸，用于编码上述蛋白；重组载体，包含上述多核苷酸；以及用于预防或治疗结核病的药物组合物，包含上述融合蛋白、多核苷酸或重组载体。酸或重组载体。酸或重组载体。


技术研发人员：徐裕锡 朴基硕
受保护的技术使用者：疾病管理厅
技术研发日：2021.12.03
技术公布日：2023/9/23