金合欢烷倍半萜类化合物的抗旋毛虫病应用

：本发明属于中药、天然药物制药领域，具体地，涉及以金合欢烷倍半萜类化合物为活性成分的药物组合，及其在抗旋毛虫病制剂中的应用。
2.技术背景：无环倍半萜主要分布于菊科菊蒿属、蒿属、旋覆花属、蓍草属，玄参科地黄属，漆树科芒果属，伞形科阿魏属，无患子科鳞花木属等属的植物中，其主要类型为金合欢烷倍半萜类化合物（farnesane sesquiterpenoids）。文献报道金合欢烷倍半萜类化合物具有抗癌、抗菌等生物活性（masi m, roscetto e, cimmino a, et al. farnesane-type sesquiterpenoids with antibiotic activity from chiliadenus lopadusanus. antibiotics, 2021, 10, 148; shen c, huang xy, geng ca, et al. artemlavanins a and b from artemisia lavandulaefolia and their cytotoxicity against hepatic stellate cell line lx2. nat. prod. bioprospect, 2020, 10, 243-250）。迄今为止，未见该类化合物抗旋毛虫病活性报道。
3.

技术实现要素：
本发明旨在提供一类金合欢烷倍半萜类化合物，以其为活性成分的药物组合物，它们的制备方法，以及它们在制备抗旋毛虫病制剂中的应用。
4.本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：下述结构所示的二苯并呋喃类化合物1-10，。
5.化合物1-10的制备方法，取蔷薇科悬钩子属植物的全株，用有机溶剂氯仿或乙酸乙酯或丙酮或甲醇或乙醇或水直接冷浸或者热回流提取，或者先用上述有机溶剂或水冷浸或回流提取后再用乙酸乙酯萃取得到总浸膏，总浸膏经反复柱层析得到化合物1-10。
6.本发明化合物1-10的制备方法更具体地是用：a：丙酮或甲醇或乙醇或水冷浸或热回流提取悬钩子属植物的全株得到总浸膏，乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯浸膏，经反复柱层析可得到化合物1-10。
7.b：有机溶剂（如：氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷）直接冷浸或热回流提取悬钩子属植物的全株的粗粉得到总浸膏，总浸膏经反复柱层析可得到化合物1-10。
8.更具体地，化合物1-10的制备方法，是将悬钩子属植物的全株阴干，粉碎到30目，用95%乙醇在室温条件下浸提3次，每次24 h，提取液合并，减压浓缩提取液得浸膏后，用适量水混悬，再用乙酸乙酯分配数次，得乙酸乙酯萃取物，萃取物用适量氯仿∕丙酮溶解后用
硅胶80-100目拌样，然后用200-300目硅胶进行柱层析划段粗分，以1 : 0-0 : 1氯仿∕丙酮或1 : 0-0 : 1氯仿∕甲醇进行梯度洗脱，得到8个主要部分，将1 : 0氯∕丙部分、9 : 1氯∕丙部分、8 : 2氯∕丙部分及7 : 3氯∕丙部分进行硅胶柱层析，以30 : 1-1 : 2石油醚∕丙酮进行梯度洗脱，得10个部分，再分别进行反复硅胶、rp-18、mci和sephadex lh-20柱层析分别得化合物1-10。
9.抗旋毛虫病制剂，含有化合物1-10中任一化合物和常规辅剂。
10.药物组合物，其中含有治疗有效量的化合物1-10中任一化合物和药学上可接受的载体。
11.化合物1-10中任一化合物在制备抗旋毛虫病制剂中的应用。
12.所述的任一化合物在制备治疗旋毛虫病药物中的应用。
13.本发明用于抗旋毛虫病的药物组合物，其中含有化合物1-10中任一化合物和药学上可接受的载体。
14.本发明药物组合物中所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体。本发明化合物可以组合物的形式通过口服、鼻吸入、直肠或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊等，制成液体制剂如油悬浮剂、糖浆、酏剂等；用于肠外给药时，可将其制成注射用的溶液等。优选的形式是片剂、胶囊和注射剂。
15.本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。
16.本发明的药物组合物优选含有重量比为0.1%-99.5%的活性成分，最优选含有重量比为0.5%-95%的活性成分。
17.本发明化合物的施用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01-10 mg/kg体重，优选0.1-5 mg/kg体重。可以一次或多次施用。
18.本发明的化合物显示出较好的抗旋毛虫病活性。
19.本发明对化合物1-10进行了抗旋毛虫活性筛选，该类化合物显示较好的抗旋毛虫活性。在抗旋毛虫病应用中，化合物1-10是以如下的量施用于基材或一种群上，所述量的范围1-1000
ꢀµ
m，优选在10-200
ꢀµ
m，任选地与载体和/或媒体相结合。
20.具体实施方式：下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，可以使本专业人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
21.实施例1：本发明化合物1-10的提取、分离和纯化：将三叶悬钩子的枝叶（15 kg）阴干，粉碎到30目，用95%乙醇在室温条件下浸提3次，每次60 l、24 h，提取液合并，减压浓缩提取液得浸膏（2.7 kg）。该浸膏用氯仿∕丙酮溶解后以适量80-100目硅胶吸附，然后用3.0 kg 200-300目硅胶进行柱层析划段粗分，以氯仿∕丙酮（1 : 0-0 : 1）进行梯度洗脱，得到8个主要部分，将1 : 0氯仿部分、9 : 1氯∕丙部分、8 : 2氯∕丙部分及7 : 3氯∕丙部分进行柱层析。其中第一洗脱和第二洗脱部分进行反复硅胶、rp-18和sephadex lh-20柱层析得化合物8-10。第三洗脱和第四洗脱部分进行反复
硅胶、rp-18、mci和sephadex lh-20柱层析得化合物1-7。
22.实施例2：本发明化合物1-10的物理和波谱数据：化合物1：无色油状物。uv (meoh) λ
max (log ε): 203 (3.5) nm; cd (meoh) λ
max (dε): 191 (+3.6), 218 (-0.5) nm; 1
h nmr (400 mhz, cd3cocd3) δ: 5.94 (1h, dd, j = 17.3, 10.7 hz, h-2), 5.67 (1h, dt, j = 15.5, 7.4 hz, h-5), 5.51 (1h, dt, j = 15.5, 1.2 hz, h-6), 5.20 (1h, dd, j = 17.3, 1.8 hz, h-1a), 4.96 (1h, dd, j = 10.7, 1.8 hz, h-1b), 4.58 (1h, d, j = 7.7 hz, h-1'), 3.90 (1h, t, j = 6.8 hz, h-10), 3.80 (1h, dd, j = 11.4, 2.1 hz, h-6'a), 3.61 (1h, dd, j = 11.4, 4.4 hz, h-6'b), 3.39 (1h, t, j = 8.7 hz, h-3'), 3.31 (1h, overlap, h-4'), 3.29 (1h, m, h-5'), 3.11 (1h, dd, j = 8.7, 7.8 hz, h-2'), 2.21 (2h, dt, j = 7.4, 1.4 hz, h-4), 1.87 (2h, m, h-9), 1.84 (1h, m, h-8a), 1.64 (1h, m, h-8b), 1.27 (3h, s, h-14), 1.25 (3h, s, h-12), 1.20 (3h, s, h-15), 1.17 (3h, s, h-13); 13
c nmr (100 mhz, cd3cocd3) δ: 111.4 (t, c-1), 146.8 (d, c-2), 72.8 (s, c-3), 46.2 (t, c-4), 123.8 (d, c-5), 139.5 (s, c-6), 83.6 (s, c-7), 38.0 (t, c-8), 27.4 (t, c-9), 85.3 (d, c-10), 79.3 (s, c-11), 22.7 (q, c-12), 23.1 (q, c-13), 27.5 (q, c-14), 27.6 (q, c-15), 98.4 (d, c-1'), 75.0 (d, c-2'), 78.2 (d, c-3'), 71.8 (d, c-4'), 77.0 (d, c-5'), 63.1 (t, c-6')。
23.化合物2：无色油状物。uv (meoh) λ
max (log ε): 203 (3.5) nm; cd (meoh) λ
max (dε): 190 (+4.9), 218 (-1.9) nm; 1
h nmr (400 mhz, cd3cocd3) δ: 5.94 (1h, dd, j = 17.3, 10.7 hz, h-2), 5.72 (1h, dt, j = 15.7, 6.8 hz, h-5), 5.64 (1h, brd, j = 15.7 hz, h-6), 5.19 (1h, dd, j = 17.3, 1.9 hz, h-1a), 4.95 (1h, dd, j = 10.7, 1.9 hz, h-1b), 4.58 (1h, d, j = 7.7 hz, h-1'), 3.93 (1h, t, j = 6.9 hz, h-10), 3.79 (1h, brd, j = 11.4 hz, h-6'a), 3.61 (1h, dd, j = 11.4, 4.4 hz, h-6'b), 3.39 (1h, t, j = 8.5 hz, h-3'), 3.31 (1h, overlap, h-4'), 3.29 (1h, m, h-5'), 3.11 (1h, dd, j = 8.7, 7.8 hz, h-2'), 2.22 (2h, m, h-4), 1.91 (2h, m, h-9), 1.83 (1h, m, h-8a), 1.72 (1h, m, h-8b), 1.26 (3h, s, h-12), 1.23 (3h, s, h-14), 1.20 (3h, s, h-15), 1.19 (3h, s, h-13); 13
c nmr (100 mhz, cd3cocd3) δ: 111.4 (t, c-1), 146.7 (d, c-2), 72.9 (s, c-3), 46.3 (t, c-4), 123.5 (d, c-5), 140.5 (s, c-6), 83.3 (s, c-7), 38.7 (t, c-8), 27.4 (t, c-9), 85.5 (d, c-10), 79.3 (s, c-11), 22.8 (q, c-12), 23.5 (q, c-13), 26.5 (q, c-14), 27.7 (q, c-15), 98.4 (d, c-1'), 75.1 (d, c-2'), 78.3 (d, c-3'), 71.8 (d, c-4'), 77.1 (d, c-5'), 63.1 (t, c-6')。
24.化合物3：无色油状物。uv (meoh) λ
max (log ε): 203 (3.7) nm; cd (meoh) λ
max (dε): 190 (+3.9), 218 (-1.0) nm; 1
h nmr (400 mhz, cd3od) δ: 5.84 (1h, dd, j = 17.3, 10.7 hz, h-2), 5.56 (1h, dt, j = 15.5, 6.8 hz, h-5), 5.38 (1h, brd, j = 15.5 hz, h-6), 5.09 (1h, dd, j = 17.3, 1.9 hz, h-1a), 4.85 (1h, dd, j = 10.7, 1.9 hz, h-1b), 4.28 (1h, d, j = 7.8 hz, h-1'), 3.83 (1h, t, j = 7.0 hz, h-10), 3.64 (1h, brd, j = 11.4 hz, h-6'a), 3.50 (1h, dd, j = 11.4, 4.4 hz, h-6'
b), 3.25 (1h, m, h-5'), 3.20 (1h, overlap, h-4'), 3.10 (1h, t, j = 8.5 hz, h-3'), 3.03 (1h, dd, j = 8.7, 7.8 hz, h-2'), 2.16 (2h, m, h-4), 1.75 (2h, m, h-9), 1.78 (2h, m, h-8), 1.16 (3h, s, h-15), 1.07 (3h, s, h-14), 1.05 (3h, s, h-12), 1.01 (3h, s, h-13); 13
c nmr (100 mhz, cd3od) δ: 111.5 (t, c-1), 146.7 (d, c-2), 80.3 (s, c-3), 46.3 (t, c-4), 123.6 (d, c-5), 139.8 (s, c-6), 83.5 (s, c-7), 38.7 (t, c-8), 27.4 (t, c-9), 85.9 (d, c-10), 72.7 (s, c-11), 27.1 (q, c-12), 26.1 (q, c-13), 26.9 (q, c-14), 27.7 (q, c-15), 98.9 (d, c-1'), 75.1 (d, c-2'), 78.2 (d, c-3'), 71.8 (d, c-4'), 77.1 (d, c-5'), 63.1 (t, c-6')。
25.化合物4：无色油状物。uv (meoh) λ
max (log ε): 203 (3.6) nm; cd (meoh) λ
max (dε): 190 (+4.5), 218 (-0.9) nm; 1
h nmr (400 mhz, cd3od) δ: 5.84 (1h, dd, j = 17.3, 10.7 hz, h-2), 5.53 (1h, dt, j = 15.5, 6.8 hz, h-5), 5.35 (1h, brd, j = 15.5 hz, h-6), 5.09 (1h, dd, j = 17.3, 1.9 hz, h-1a), 4.85 (1h, dd, j = 10.7, 1.9 hz, h-1b), 4.28 (1h, d, j = 7.8 hz, h-1'), 3.73 (1h, t, j = 7.0 hz, h-10), 3.64 (1h, brd, j = 11.4 hz, h-6'a), 3.50 (1h, dd, j = 11.4, 4.4 hz, h-6'b), 3.25 (1h, m, h-5'), 3.20 (1h, overlap, h-4'), 3.10 (1h, t, j = 8.5 hz, h-3'), 3.03 (1h, dd, j = 8.7, 7.8 hz, h-2'), 2.15 (2h, m, h-4), 1.76 (2h, m, h-9), 1.80 (2h, m, h-8), 1.16 (3h, s, h-15), 1.08 (3h, s, h-14), 1.05 (3h, s, h-12), 1.02 (3h, s, h-13); 13
c nmr (100 mhz, cd3od) δ: 111.5 (t, c-1), 146.7 (d, c-2), 80.2 (s, c-3), 46.2 (t, c-4), 123.7 (d, c-5), 139.5 (s, c-6), 83.7 (s, c-7), 38.2 (t, c-8), 27.4 (t, c-9), 85.7 (d, c-10), 72.7 (s, c-11), 27.1 (q, c-12), 26.1 (q, c-13), 27.8 (q, c-14), 27.6 (q, c-15), 98.8 (d, c-1'), 75.1 (d, c-2'), 78.1 (d, c-3'), 71.8 (d, c-4'), 77.1 (d, c-5'), 63.0 (t, c-6')。
26.化合物5：无色油状物。uv (meoh) λ
max (log ε): 203 (3.7) nm; cd (meoh) λ
max (dε): 190 (+2.9), 204 (+0.7), 224 (-1.0) nm; 1
h nmr (400 mhz, cd3od) δ: 5.86 (1h, dd, j = 17.4, 10.8 hz, h-2), 5.14 (1h, dd, j = 17.4, 1.6 hz, h-1a), 5.13 (1h, overlap, h-6), 4.98 (1h, dd, j = 10.8, 1.6 hz, h-1b), 4.45 (1h, d, j = 7.8 hz, h-1'), 3.77 (1h, dd, j = 11.9, 2.1 hz, h-6'a), 3.60 (1h, dd, j = 11.9, 5.3 hz, h-6'b), 3.38 (1h, dd, j = 10.5, 1.4 hz, h-10), 3.31 (1h, overlap, h-4'), 3.26 (1h, overlap, h-3'), 3.21 (1h, m, h-5'), 3.11 (1h, dd, j = 8.7, 7.8 hz, h-2'), 2.18 (1h, m, h-8a), 1.98 (3h, overlap, h-5, 8b), 1.56 (3h, s, h-14), 1.55 (1h, m, h-9a), 1.46 (2h, m, h-4), 1.32 (1h, m, h-9b), 1.20 (3h, s, h-15), 1.17 (3h, s, h-13), 1.16 (3h, s, h-12); 13
c nmr (100 mhz, cd3od) δ: 112.0 (t, c-1), 146.3 (d, c-2), 73.9 (s, c-3), 43.4 (t, c-4), 23.7 (t, c-5), 126.0 (d, c-6), 135.9 (s, c-7), 37.8 (t, c-8), 30.6 (t, c-9), 78.0 (d, c-10), 81.8 (s, c-11), 21.3 (q, c-12), 23.8 (q, c-13), 16.0 (q, c-14), 27.6 (q, c-15), 98.5 (d, c-1'), 75.1 (d, c-2'), 77.6 (d, c-3'), 71.5 (d, c-4'), 77.6 (d, c-5'), 62.5 (t, c-6')。
(dε): 190 (+10.8), 215 (-0.8) nm; 1
h nmr (400 mhz, cdcl3) δ: 5.86 (1h, dd, j = 17.3, 10.7 hz, h-2), 5.52 (2h, overlap, h-5, 6), 5.14 (1h, dd, j = 17.3, 1.4 hz, h-1a), 4.99 (1h, dd, j = 10.7, 1.4 hz, h-1b), 3.72 (1h, t, j = 7.1 hz, h-10), 2.22 (2h, m, h-4), 1.78 (3h, m, h-8a, 9), 1.64 (1h, m, h-8b), 1.26 (3h, s, h-14), 1.20 (3h, s, h-12), 1.15 (3h, s, h-15), 1.07 (3h, s, h-13); 13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ: 111.9 (t, c-1), 144.8 (d, c-2), 72.6 (s, c-3), 45.1 (t, c-4), 122.3 (d, c-5), 139.9 (d, c-6), 82.8 (s,c-7), 37.8 (t, c-8), 26.5 (t, c-9), 85.5 (d, c-10), 71.4 (s, c-11), 27.2 (q, c-12), 24.1 (q, c-13), 27.0 (q, c-14), 27.2 (q, c-15)。
31.化合物10：无色油状物。uv (meoh) λ
max (log ε): 203 (3.8) nm; cd (meoh) λ
max (dε): 191 (+2.9), 204 (+0.7), 224 (-1.1) nm; 1
h nmr (400 mhz, cdcl3) δ: 5.90 (1h, dd, j = 17.4, 10.8 hz, h-2), 5.18 (1h, dd, j = 17.4, 1.6 hz, h-1a), 5.20 (1h, overlap, h-6), 5.05 (1h, dd, j = 10.8, 1.6 hz, h-1b), 3.35 (1h, dd, j = 10.5, 1.4 hz, h-10), 2.08 (1h, overlap, h-5), 2.06 (2h, overlap, h-8), 1.59 (3h, s, h-14), 1.55 (3h, overlap, h-4a, 9), 1.38 (1h, m, h-4b), 1.28 (3h, s, h-15), 1.17 (3h, s, h-13), 1.14 (3h, s, h-12); 13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ: 111.9 (t, c-1), 145.0 (d, c-2), 73.5 (s, c-3), 41.9 (t, c-4), 22.7 (t, c-5), 125.1 (d, c-6), 135.4 (s, c-7), 36.8 (t, c-8), 29.6 (t, c-9), 78.3 (d, c-10), 72.8 (s, c-11), 26.4 (q, c-12), 23.2 (q, c-13), 16.0 (q, c-14), 27.8 (q, c-15)。
32.实施例3：本发明化合物的抗旋毛虫活性检测：昆明种雄性小鼠适应性喂养一周后，每只小鼠灌胃含200条旋毛虫幼虫的生理盐水悬液。感染3 h后给药，模型组灌胃0.5% cmc-na，给药组灌胃相应剂量化合物。连续给药7 d，末次给药24 h后，解剖小鼠取小肠，去除其内容物，沿小肠中间剖开并剪成2 cm左右的小段，置于生理盐水中，37 ℃孵育3小时后，收集成虫计数并计算其减虫率。减虫率按以下公式计算：减虫率% = [1
ꢀ−ꢀ
(模型组平均虫数
−
给药组平均虫数)/(模型组平均虫数)]
ꢀ×ꢀ
100。
[0033]
活性数据见表1。
[0034]
表1 化合物1-10的抗旋毛虫活性数据（mean
ꢀ±ꢀ
s, n = 5）实施例4：片剂：实施例1和2所得任一种化合物1-10 10 mg，乳糖180 mg，淀粉55 mg，硬脂酸镁5 mg；制备方法：将化合物、乳糖和淀粉混合，用丙二醇均匀湿润，把湿润后的混合物过
筛并干燥，再过筛，加入硬脂酸镁，然后将混合物压片，每片重250 mg，化合物含量为10 mg。
[0035]
实施例5：安瓿剂：实施例1和2所得任一种化合物1-10 2 mg；制备方法：实施例1和2所得任一种化合物1-10溶解于3 ml丙二醇中，过滤所得溶液，在无菌条件下装入安瓿瓶中。
[0036]
实施例6：胶囊剂：实施例1和2所得任一种化合物1-10 10 mg，乳糖187 mg，硬脂酸镁3 mg；制备方法：将化合物与助剂混合，过筛，均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊，每个胶囊中200 mg，活性成分含量为10 mg。

技术特征：
1.下述结构式所述的金合欢烷倍半萜类化合物，。2.药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述任一化合物和药学上可接受的载体。3.抗旋毛虫病制剂，其中含有权利要求1所述任一化合物和常规辅剂。4.权利要求1所述任一化合物在制备抗旋毛虫病药物中的应用。

技术总结
本发明涉及金合欢烷倍半萜类化合物在制备抗旋毛虫病产品中的应用，属于中药、天然药物制药领域。以本发明金合欢烷倍半萜类化合物为活性成分的抗旋毛虫药物。本发明拓展了金合欢烷倍半萜类化合物的药用价值。欢烷倍半萜类化合物的药用价值。


技术研发人员：姜北 肖朝江 郝艺 王敏 罗晓磊 刘蓉 张伟
受保护的技术使用者：大理大学
技术研发日：2022.10.24
技术公布日：2023/9/23