一种核酸污染去除剂及其使用方法与流程

1.本发明涉及核酸污染去除剂技术领域，特别涉及一种核酸污染去除剂及其使用方法。


背景技术：

2.随着分子生物学的发展，核酸编辑、扩增、测序、鉴定等以核酸为中心的技术变得越来越先进和方便。尤其是dna/rna测序、数字pcr和转基因技术的出现，使得核酸技术应用越来越广泛，灵敏度也越来越高。核酸是脱氧核糖核酸(dna)和核糖核酸(rna)的总称，是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子化合物。核酸检测是一项具有高度准确性的科学实验，实验室阳性对照、质控、阳性样本等污染是一个不可避免的难题，其中实验环境导致的污染既是最容易产生的污染，也是最难消除的污染，核酸污染极易造成假阳性结果，有效清除pcr实验室污染，成了一个实验室必须解决的难题。现有技术的核酸清理都是以消毒剂成分，如过氧化物为过氧化氢、过氧化钠和过氧乙酸中的一种或几种；或者氯离子为主要消毒成分的核酸清除剂，利用过氧化物、裂解液等强氧化剂的氧化功能，把实验室残留的核酸裂解掉，从而降低实验室环境中的核酸，强氧化剂大多都有不愉快的气味和强酸性，长期使用会腐蚀实验室仪器、设备和设施，对实验室操作人员有一定的危害性，并且长期使用消毒剂成分不可能清除干净，会造成实验室二次污染。


技术实现要素：

3.为了解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：一种核酸污染去除剂，包括以下重量份的原料：a液含广谱核酸酶0.005ku-1ku/ml,缓冲液0.001%-2%、glycerol10%-50%，金属离子盐0.001%-1%；b液含缓冲液0.01％-1％、金属离子盐0 .01％-0.1％和去离子水；c液含氯试剂0 .2％-2％、表面活性剂0.5%-3%、缓冲剂0.01%-1%、蛋白变性剂0.5%-3%、醋酸钾（kac）0.01%-1%及去离子水。
4.作为优选方案，所述广谱核酸酶为为冻干粉剂，所述广谱核酸酶的纯度 ≥98% 、活性 ≥ 1.0 x 106u/ml 、比活≥ 1.0 x 106u/mg（蛋白），使用广谱核酸酶冻干粉剂制备a液1000ml，称量广谱核酸酶冻干粉0.01ug-15ug加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.01ml-0.2ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称配1克-5克金属离子盐加入到容器内，称量100ml-500mlglycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30-60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值7.5-8.5，加去离子水至1000ml，备用，如a液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，-20
°
冷冻保存。
5.作为优选方案，所述广谱核酸酶为无菌液体酶，所述广谱核酸酶的纯度 ≥90% 、活性 ≥ 2.5 x 105u/ml、比活≥≥ 1.5
×
106u/mg（蛋白）；使用无菌液体酶作为a液的原料制备a液1000ml，配制方法如下：移液枪取广谱核酸酶无菌液0.4ml-60ml加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐1ml-20ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，再用移液
枪吸取1克-5克金属离子盐加入到容器内，称量100ml-500mlglycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30-60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值7.5-8.5，加去离子水至1000ml，备用；如a液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，-20
°
冷冻保存使用时复溶至室温。
6.作为优选方案，所述b液为稀释液，常温保存，制备1000mlb液稀释剂配制方法如下：用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.1ml-2ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称取0.1g-10g金属离子盐加入到容器内，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30-60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值7.5-8.5，加去离子水至1000ml。
7.作为优选方案，所述c液为含氯离子的消毒剂，制备1000mlc液的方法如下：用移液枪吸取含氯试剂2ml-20ml，加入到容器内，再用移液枪吸取5ml-30ml表面活性剂加入到容器内，用移液枪吸取缓冲剂0.1ml-10ml加入到容器内，称量5ml-30m蛋白质变性剂加入到容器中，再称量醋酸钾0.1g-10g加入到容器内，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30-60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值7.5-8.5，加去离子水至1000ml，备用。
8.作为优选方案，所述a液的广谱核酸酶包括但不限于野生型、各种基因改造的广谱核酸外切酶、野生型、各种基因改造的广谱核酸内切酶，包含从3
′
端
→5′
端外切酶端开始逐个水解核苷酸和从5
′
端
→3′
端逐个水解的外切酶以及广谱核酸内切酶包括水解5
′
磷酸二酯键，把磷酸基团留在3
′
位置上的5
′‑
内切酶、水解3
′‑
磷酸二酯键，把磷酸基团留在5
′
位置上的3
′‑
内切酶以及对磷酸酯键一侧的碱基有高度专一性核酸内切酶；所述a液的缓冲液包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100。
9.作为优选方案，所述b液的缓冲液包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100，b液的金属离子包括但不限于氯化钾、氯化钠、氯化镁、氯化钙以及钾、钠、镁、钙所成的盐类化合物。
10.8.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂，其特征在于，所述c液的含氯试剂包括但不限于次氯酸钠、次氯酸以及含有次氯酸根的化合物，c液的缓冲剂包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100，c液的蛋白变性剂包括但不限于过氧化物、十二烷基硫酸钠、胍盐、尿素；一种核酸污染去除剂的使用方法，实验台面、超净工作台、设备及仪器表面的清洁，将a液倒入b液中，充分摇匀，按压b液瓶喷头，将核酸清除剂均匀的喷洒在以上物体表面，根据实验室污染程度，选择喷洒量及喷洒时间，喷洒后停留15分钟，用洁净的纸巾或洁净的无纺布擦干即可。
11.实验室核酸气溶胶的清洁，关闭pcr实验室的送回风系统后用本产品对实验室的墙面、台面、地面及空气喷雾处理后等待30分钟后，打开pcr实验室室送回风系统30分钟以后再进行实验操作；当实验室的核酸气溶胶污染较为严重时，重复处理2-3次。
12.使用本产品一定周期（一两个月）后，关闭pcr实验室的送回风系统后用c液对实验室的墙面、台面、地面及空气喷雾，处理后等待30分钟后，打开pcr实验室室送回风系统30分钟以后再进行实验操作，如有液体残留，用洁净的纸巾或洁净的无纺布擦干即可。
13.与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明核酸去除剂不是消毒剂、不含有过氧化物、氯离子等消毒成分；采用分子生物学大分子多能核酸酶，能快速切断dna/rna的磷酸二酯键，降解核酸为单碱基；ph值弱碱性，对检验仪器的感光元件和反应器产生腐蚀作
用，安全、无毒，可以皮肤、粘膜接触；a液、b液、c液三种液体联合使用既能保持较高的酶活性、达到有效、快速清除核酸残留，防止假阳性，又能解决长期使用核酸酶，通过降解核酸酶达到定期清除核酸酶残留，防止实验室二次污染的目的。
具体实施方式
14.下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细描述：实施例一：一种核酸污染去除剂，包括以下重量份的原料：a液含广谱核酸酶0.005ku/ml,缓冲液0.001%、glycerol10%，金属离子盐0.001%；b液含缓冲液0.01％、金属离子盐0 .01％和去离子水；c液含氯试剂0 .2％、表面活性剂0.5%、缓冲剂0.01%、蛋白变性剂0.5%、醋酸钾（kac）0.01%及去离子水。
15.进一步地，所述广谱核酸酶为为冻干粉剂，所述广谱核酸酶的纯度 ≥98% 、活性 ≥ 1.0 x 106u/ml 、比活≥ 1.0 x 106u/mg（蛋白），使用广谱核酸酶冻干粉剂制备a液1000ml，称量广谱核酸酶冻干粉0.01ug加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.01ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称配1克金属离子盐加入到容器内，称量100mlglycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值7.5，加去离子水至1000ml，备用，如a液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，-20
°
冷冻保存。
16.进一步地，所述广谱核酸酶为无菌液体酶，所述广谱核酸酶的纯度 ≥90% 、活性 ≥ 2.5 x 105u/ml、比活≥≥ 1.5
×
106u/mg（蛋白）；使用无菌液体酶作为a液的原料制备a液1000ml，配制方法如下：移液枪取广谱核酸酶无菌液0.4ml加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐1ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，再用移液枪吸取1克金属离子盐加入到容器内，称量100mlglycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值7.5，加去离子水至1000ml，备用；如a液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，-20
°
冷冻保存使用时复溶至室温。
17.进一步地，所述b液为稀释液，常温保存，制备1000mlb液稀释剂配制方法如下：用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.1ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称取0.1g金属离子盐加入到容器内，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值7.5，加去离子水至1000ml。
18.进一步地，所述c液为含氯离子的消毒剂，制备1000mlc液的方法如下：用移液枪吸取含氯试剂2ml，加入到容器内，再用移液枪吸取5ml表面活性剂加入到容器内，用移液枪吸取缓冲剂0.1ml加入到容器内，称量5ml蛋白质变性剂加入到容器中，再称量醋酸钾0.1g加入到容器内，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值7.5，加去离子水至1000ml，备用。
19.进一步地，所述a液的广谱核酸酶包括但不限于野生型、各种基因改造的广谱核酸外切酶、野生型、各种基因改造的广谱核酸内切酶，包含从3
′
端
→5′
端外切酶端开始逐个水解核苷酸和从5
′
端
→3′
端逐个水解的外切酶以及广谱核酸内切酶包括水解5
′
磷酸二酯键，把磷酸基团留在3
′
位置上的5
′‑
内切酶、水解3
′‑
磷酸二酯键，把磷酸基团留在5
′
位置上的3
′‑
内切酶以及对磷酸酯键一侧的碱基有高度专一性核酸内切酶；所述a液的缓冲液包括但
不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100。
20.进一步地，所述b液的缓冲液包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100，b液的金属离子包括但不限于氯化钾、氯化钠、氯化镁、氯化钙以及钾、钠、镁、钙所成的盐类化合物。
21.进一步地，所述c液的含氯试剂包括但不限于次氯酸钠、次氯酸以及含有次氯酸根的化合物，c液的缓冲剂包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100，c液的蛋白变性剂包括但不限于过氧化物、十二烷基硫酸钠、胍盐、尿素；如上所述的核酸污染去除剂的使用方法：实验台面、超净工作台、设备及仪器表面的清洁，将a液倒入b液中，充分摇匀，按压b液瓶喷头，将核酸清除剂均匀的喷洒在以上物体表面，根据实验室污染程度，选择喷洒量及喷洒时间，喷洒后停留15分钟，用洁净的纸巾或洁净的无纺布擦干即可。
22.实验室核酸气溶胶的清洁，关闭pcr实验室的送回风系统后用本产品对实验室的墙面、台面、地面及空气喷雾处理后等待30分钟后，打开pcr实验室室送回风系统30分钟以后再进行实验操作；当实验室的核酸气溶胶污染较为严重时，重复处理2次。
23.使用本产品一定周期（一两个月）后，关闭pcr实验室的送回风系统后用c液对实验室的墙面、台面、地面及空气喷雾，处理后等待30分钟后，打开pcr实验室室送回风系统30分钟以后再进行实验操作，如有液体残留，用洁净的纸巾或洁净的无纺布擦干即可。
24.实施例二：一种核酸污染去除剂，包括以下重量份的原料：a液含广谱核酸酶0.008ku/ml,缓冲液0.001%-2%、glycero80%，金属离子盐0.05%；b液含缓冲液0.05％、金属离子盐0 .08％和去离子水；c液含氯试剂1％、表面活性剂1%、缓冲剂0.05%、蛋白变性剂1%、醋酸钾（kac）0.05%及去离子水。
25.进一步地，所述广谱核酸酶为为冻干粉剂，所述广谱核酸酶的纯度 ≥98% 、活性 ≥ 1.0 x 106u/ml 、比活≥ 1.0 x 106u/mg（蛋白），使用广谱核酸酶冻干粉剂制备a液1000ml，称量广谱核酸酶冻干粉0.01ug-15ug加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.1ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称配3克金属离子盐加入到容器内，称量300mlglycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（40转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值8，加去离子水至1000ml，备用，如a液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，-20
°
冷冻保存。
26.进一步地，所述广谱核酸酶为无菌液体酶，所述广谱核酸酶的纯度 ≥90% 、活性 ≥ 2.5 x 105u/ml、比活≥≥ 1.5
×
106u/mg（蛋白）；使用无菌液体酶作为a液的原料制备a液1000ml，配制方法如下：移液枪取广谱核酸酶无菌液30ml加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐10ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，再用移液枪吸取1克-5克金属离子盐加入到容器内，称量200mlglycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值8.5，加去离子水至1000ml，备用；如a液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，-20
°
冷冻保存使用时复溶至室温。
27.进一步地，所述b液为稀释液，常温保存，制备1000mlb液稀释剂配制方法如下：用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.5ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称取5g金属离子盐加入到容器内，去离子水加到950ml，常温下搅拌（60转/分钟）30分钟，使以上物质充分
混合，用氢氧化钠调ph值8，加去离子水至1000ml。
28.进一步地，所述c液为含氯离子的消毒剂，制备1000mlc液的方法如下：用移液枪吸取含氯试剂10ml，加入到容器内，再用移液枪吸取5ml-30ml表面活性剂加入到容器内，用移液枪吸取缓冲剂5ml加入到容器内，称量10m蛋白质变性剂加入到容器中，再称量醋酸钾5g加入到容器内，去离子水加到950ml，常温下搅拌（40转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值8，加去离子水至1000ml，备用。
29.进一步地，所述a液的广谱核酸酶包括但不限于野生型、各种基因改造的广谱核酸外切酶、野生型、各种基因改造的广谱核酸内切酶，包含从3
′
端
→5′
端外切酶端开始逐个水解核苷酸和从5
′
端
→3′
端逐个水解的外切酶以及广谱核酸内切酶包括水解5
′
磷酸二酯键，把磷酸基团留在3
′
位置上的5
′‑
内切酶、水解3
′‑
磷酸二酯键，把磷酸基团留在5
′
位置上的3
′‑
内切酶以及对磷酸酯键一侧的碱基有高度专一性核酸内切酶；所述a液的缓冲液包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100。
30.进一步地，所述b液的缓冲液包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100，b液的金属离子包括但不限于氯化钾、氯化钠、氯化镁、氯化钙以及钾、钠、镁、钙所成的盐类化合物。
31.进一步地，所述c液的含氯试剂包括但不限于次氯酸钠、次氯酸以及含有次氯酸根的化合物，c液的缓冲剂包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100，c液的蛋白变性剂包括但不限于过氧化物、十二烷基硫酸钠、胍盐、尿素；如上所述的核酸污染去除剂的使用方法：实验台面、超净工作台、设备及仪器表面的清洁，将a液倒入b液中，充分摇匀，按压b液瓶喷头，将核酸清除剂均匀的喷洒在以上物体表面，根据实验室污染程度，选择喷洒量及喷洒时间，喷洒后停留15分钟，用洁净的纸巾或洁净的无纺布擦干即可。
32.实验室核酸气溶胶的清洁，关闭pcr实验室的送回风系统后用本产品对实验室的墙面、台面、地面及空气喷雾处理后等待30分钟后，打开pcr实验室室送回风系统30分钟以后再进行实验操作；当实验室的核酸气溶胶污染较为严重时，重复处理2次。
33.使用本产品一定周期（一两个月）后，关闭pcr实验室的送回风系统后用c液对实验室的墙面、台面、地面及空气喷雾，处理后等待30分钟后，打开pcr实验室室送回风系统30分钟以后再进行实验操作，如有液体残留，用洁净的纸巾或洁净的无纺布擦干即可。
34.实施例三：一种核酸污染去除剂，包括以下重量份的原料：a液含广谱核酸酶1ku/ml,缓冲液2%、glycero50%，金属离子盐1%；b液含缓冲液1％、金属离子盐0.1％和去离子水；c液含氯试剂2％、表面活性剂3%、缓冲剂1%、蛋白变性剂3%、醋酸钾（kac）1%及去离子水。
35.进一步地，所述广谱核酸酶为为冻干粉剂，所述广谱核酸酶的纯度 ≥98% 、活性 ≥ 1.0 x 106u/ml 、比活≥ 1.0 x 106u/mg（蛋白），使用广谱核酸酶冻干粉剂制备a液1000ml，称量广谱核酸酶冻干粉15ug加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.2ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称配5克金属离子盐加入到容器内，称量500mlglycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值8.5，加去离子水至1000ml，备用，如a液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，-20
°
冷冻保存。
36.进一步地，所述广谱核酸酶为无菌液体酶，所述广谱核酸酶的纯度 ≥90% 、活性 ≥ 2.5 x 105u/ml、比活≥≥ 1.5
×
106u/mg（蛋白）；使用无菌液体酶作为a液的原料制备a液1000ml，配制方法如下：移液枪取广谱核酸酶无菌液60ml加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐20ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，再用移液枪吸取5克金属离子盐加入到容器内，称量500mlglycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值8.5，加去离子水至1000ml，备用；如a液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，-20
°
冷冻保存使用时复溶至室温。
37.进一步地，所述b液为稀释液，常温保存，制备1000mlb液稀释剂配制方法如下：用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.1ml-2ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称取10g金属离子盐加入到容器内，去离子水加到950ml，常温下搅拌（60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值8.5，加去离子水至1000ml。
38.进一步地，所述c液为含氯离子的消毒剂，制备1000mlc液的方法如下：用移液枪吸取含氯试剂2ml-20ml，加入到容器内，再用移液枪吸取30ml表面活性剂加入到容器内，用移液枪吸取缓冲剂10ml加入到容器内，称量5ml-30m蛋白质变性剂加入到容器中，再称量醋酸钾10g加入到容器内，去离子水加到950ml，常温下搅拌（60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值8.5，加去离子水至1000ml，备用。
39.进一步地，所述a液的广谱核酸酶包括但不限于野生型、各种基因改造的广谱核酸外切酶、野生型、各种基因改造的广谱核酸内切酶，包含从3
′
端
→5′
端外切酶端开始逐个水解核苷酸和从5
′
端
→3′
端逐个水解的外切酶以及广谱核酸内切酶包括水解5
′
磷酸二酯键，把磷酸基团留在3
′
位置上的5
′‑
内切酶、水解3
′‑
磷酸二酯键，把磷酸基团留在5
′
位置上的3
′‑
内切酶以及对磷酸酯键一侧的碱基有高度专一性核酸内切酶；所述a液的缓冲液包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100。
40.进一步地，所述b液的缓冲液包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100，b液的金属离子包括但不限于氯化钾、氯化钠、氯化镁、氯化钙以及钾、钠、镁、钙所成的盐类化合物。
41.进一步地，所述c液的含氯试剂包括但不限于次氯酸钠、次氯酸以及含有次氯酸根的化合物，c液的缓冲剂包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100，c液的蛋白变性剂包括但不限于过氧化物、十二烷基硫酸钠、胍盐、尿素。
42.如上所述的核酸污染去除剂的使用方法：实验台面、超净工作台、设备及仪器表面的清洁，将a液倒入b液中，充分摇匀，按压b液瓶喷头，将核酸清除剂均匀的喷洒在以上物体表面，根据实验室污染程度，选择喷洒量及喷洒时间，喷洒后停留15分钟，用洁净的纸巾或洁净的无纺布擦干即可。
43.实验室核酸气溶胶的清洁，关闭pcr实验室的送回风系统后用本产品对实验室的墙面、台面、地面及空气喷雾处理后等待30分钟后，打开pcr实验室室送回风系统30分钟以后再进行实验操作；当实验室的核酸气溶胶污染较为严重时，重复处理3次。
44.使用本产品一定周期（一两个月）后，关闭pcr实验室的送回风系统后用c液对实验室的墙面、台面、地面及空气喷雾，处理后等待30分钟后，打开pcr实验室室送回风系统30分钟以后再进行实验操作，如有液体残留，用洁净的纸巾或洁净的无纺布擦干即可。
45.c液为含氯离子的消毒剂，消毒剂内含有清除核酸酶成分，用于清除核酸酶残留，
防止pcr实验室因长期使用核酸清洗剂造成核酸酶降解不彻底的造成二次污染。其特征在于广谱核酸酶本身是一种蛋白质,为了降解dna或rna,又必须去除之,蛋白质变性剂可使它们成为变性剂-蛋白复合物沉淀,再加kac使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的变性剂-蛋白质复合物,使沉淀更加完全。
46.以上对本发明的具体实施进行了详细描述，但是只是作为一个范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施案例，对本发明进行的等同修改也在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种核酸污染去除剂，其特征在于，包括以下重量份的原料：a液含广谱核酸酶0.005ku-1ku/ml,缓冲液0.001%-2%、glycerol10%-50%，金属离子盐0.001%-1%；b液含缓冲液0.01％-1％、金属离子盐0 .01％-0.1％和去离子水；c液含氯试剂0 .2％-2％、表面活性剂0.5%-3%、缓冲剂0.01%-1%、蛋白变性剂0.5%-3%、醋酸钾（kac）0.01%-1%及去离子水。2.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂，其特征在于，所述广谱核酸酶为为冻干粉剂，所述广谱核酸酶的纯度 ≥98% 、活性 ≥ 1.0 x 10
6 u/ml 、比活≥ 1.0 x 10
6 u/mg（蛋白），使用广谱核酸酶冻干粉剂制备a液1000ml，称量广谱核酸酶冻干粉0.01ug-15ug加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.01ml-0.2ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称配1克-5克金属离子盐加入到容器内，称量100ml-500mlglycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30-60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值7.5-8.5，加去离子水至1000ml，备用，如a液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，-20
°
冷冻保存。3.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂，其特征在于，所述广谱核酸酶为无菌液体酶，所述广谱核酸酶的纯度 ≥90% 、活性 ≥ 2.5 x 10
5 u/ml、比活≥≥ 1.5
×
106u/mg（蛋白）；使用无菌液体酶作为a液的原料制备a液1000ml，配制方法如下：移液枪取广谱核酸酶无菌液0.4ml-60ml加入到容器中，用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐1ml-20ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，再用移液枪吸取1克-5克金属离子盐加入到容器内，称量100ml-500mlglycerol加入到容器中，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30-60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值7.5-8.5，加去离子水至1000ml，备用；如a液的包装规格1ml/瓶，分装成1000瓶，-20
°
冷冻保存使用时复溶至室温。4.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂，其特征在于，所述b液为稀释液，常温保存，制备1000mlb液稀释剂配制方法如下：用移液枪吸取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.1ml-2ml，加入到称配后的广谱核酸酶里，称取0.1g-10g金属离子盐加入到容器内，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30-60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值7.5-8.5，加去离子水至1000ml。5.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂，其特征在于，所述c液为含氯离子的消毒剂，制备1000mlc液的方法如下：用移液枪吸取含氯试剂2ml-20ml，加入到容器内，再用移液枪吸取5ml-30ml表面活性剂加入到容器内，用移液枪吸取缓冲剂0.1ml-10ml加入到容器内，称量5ml-30m蛋白质变性剂加入到容器中，再称量醋酸钾0.1g-10g加入到容器内，去离子水加到950ml，常温下搅拌（30-60转/分钟）30分钟，使以上物质充分混合，用氢氧化钠调ph值7.5-8.5，加去离子水至1000ml，备用。6.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂，其特征在于，所述a液的广谱核酸酶包括但不限于野生型、各种基因改造的广谱核酸外切酶、野生型、各种基因改造的广谱核酸内切酶，包含从3
′
端
→5′
端外切酶端开始逐个水解核苷酸和从5
′
端
→3′
端逐个水解的外切酶以及广谱核酸内切酶包括水解5
′
磷酸二酯键，把磷酸基团留在3
′
位置上的5
′‑
内切酶、水解3
′‑
磷酸二酯键，把磷酸基团留在5
′
位置上的3
′‑
内切酶以及对磷酸酯键一侧的碱基有高度专一性核酸内切酶；所述a液的缓冲液包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100。7.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂，其特征在于，所述b液的缓冲液包括但不限
于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100，b液的金属离子包括但不限于氯化钾、氯化钠、氯化镁、氯化钙以及钾、钠、镁、钙所成的盐类化合物。8.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂，其特征在于，所述c液的含氯试剂包括但不限于次氯酸钠、次氯酸以及含有次氯酸根的化合物，c液的缓冲剂包括但不限于三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、sds以及triton x100，c液的蛋白变性剂包括但不限于过氧化物、十二烷基硫酸钠、胍盐、尿素。9.根据权利要求1所述的核酸污染去除剂的使用方法，其特征在于，实验台面、超净工作台、设备及仪器表面的清洁，将a液倒入b液中，充分摇匀，按压b液瓶喷头，将核酸清除剂均匀的喷洒在以上物体表面，根据实验室污染程度，选择喷洒量及喷洒时间，喷洒后停留15分钟，用洁净的纸巾或洁净的无纺布擦干即可；实验室核酸气溶胶的清洁，关闭pcr实验室的送回风系统后用本产品对实验室的墙面、台面、地面及空气喷雾处理后等待30分钟后，打开pcr实验室室送回风系统30分钟以后再进行实验操作；当实验室的核酸气溶胶污染较为严重时，重复处理2-3次；使用本产品一定周期（一两个月）后，关闭pcr实验室的送回风系统后用c液对实验室的墙面、台面、地面及空气喷雾，处理后等待30分钟后，打开pcr实验室室送回风系统30分钟以后再进行实验操作，如有液体残留，用洁净的纸巾或洁净的无纺布擦干即可。

技术总结
本发明提供一种核酸污染去除剂，包括以下重量份的原料：A液含广谱核酸酶0.005KU-1KU/ml,缓冲液0.001%-2%、Glycerol10%-50%，金属离子盐0.001%-1%；B液含缓冲液0.01％-1％、金属离子盐0.01％-0.1％和去离子水；C液含氯试剂0.2％-2％、表面活性剂0.5%-3%、缓冲剂0.01%-1%、蛋白变性剂0.5%-3%、醋酸钾（KAC）0.01%-1%及去离子水。一种核酸污染去除剂的使用方法：将A液倒入B液中，充分摇匀，将核酸清除剂均匀的喷洒在以上物体表面，并定期使用C液；本发明核酸去除剂采用A液、B液、C液三种液体联合使用既能保持较高的酶活性、达到有效、快速清除核酸残留，防止假阳性，又能解决长期使用核酸酶，通过降解核酸酶达到定期清除核酸酶残留，防止实验室二次污染的目的。实验室二次污染的目的。


技术研发人员：王风滩 王兰兰 王秀兰 李娜
受保护的技术使用者：菏泽德康医学检验所有限公司
技术研发日：2022.10.31
技术公布日：2023/9/23