一种耐受胃肠液的雷公藤红素纳米颗粒及制备方法

1.本发明属于生物医药技术领域。更具体地，涉及一种耐受胃肠液的雷公藤红素纳米颗粒及制备方法。


背景技术：

2.雷公藤红素(celastrol，以下简称cel)是从中草药雷公藤的根部提取出的一种活性提取物，是一种三萜类化合物，具有多种生物活性。cel首先作为一种热休克蛋白(hsp90)抑制剂被人们发现，随后人们发现cel具有强大的抗炎、抗氧化应激、以及免疫抑制能力，可以应用于自身免疫病，骨关节炎，肾炎等炎性疾病，阿尔兹海默症等疾病的治疗。同时，cel可以抑制肿瘤血管生成，通过多种途径抑制肿瘤增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，而广泛应用于肿瘤治疗的研究当中。cel在一些代谢疾病如糖尿病，高脂血症中也具有一定的治疗作用。
3.尽管cel具有多种药理活性，但是由于cel具有亲脂性，低水溶性和低溶解性等性质，使其胃肠道稳定性差，口服生物利用度低。为了提高cel的生物利用度，优化其治疗效果和临床应用，近年来研究者们为解决这问题进行了深入研究，如采用化学改性，有机溶剂分散，添加助溶剂或是采用纳米药物递送等方法，与其他三种方法相比，纳米药物的合成目前研究较为深入，且具有靶向性、缓释控释等优点。现如今对于cel的纳米药物构建主要集中于脂质体，聚合物纳米药物，药物纳米晶体等。良好的胃肠道稳定性可以保证纳米颗粒不被胃肠道的复杂环境所破坏，从而顺利被肠道吸收进入血液，这是提高cel生物利用度的前提。上述纳米制备技术大多是保护纳米颗粒不被胃液破坏，而促进药物在肠道释放，甚至需采用肠溶性胶囊以此达到该目的；这些技术还普遍存在所选载体材料生物安全性差，操作繁琐条件苛刻或是易产生溶剂污染等缺点。因此，有必要提供一种绿色安全，制备技术简单的雷公藤红素纳米颗粒在无需额外其他技术的情况下使得纳米颗粒不被胃肠液破坏，提高其胃肠道稳定性。


技术实现要素：

4.本发明要解决的技术问题时克服上述纳米颗粒制备方法的缺陷和不足，提供一种耐受胃肠液的雷公藤红素纳米颗粒(以下简称csnps)及其制备方法。
5.本发明的第一个目的是提供一种耐受胃肠液的csnps。
6.本发明的第二个目的是提供所述csnps的制备方法。
7.本发明提供了一种耐受胃肠液的csnps，所述纳米颗粒由一定质量比的cel和硫酸软骨素(chondroitinsulfate，以下简称cs)制备而成。
8.本发明所述csnps的平均粒径范围为110～240nm，形貌为均一的球形颗粒，经人工胃液处理两小时后，cel释放量低于20％，而经过人工肠液处理四小时后，cel释放量仍低于20％，且经过人工胃肠液处理之后，纳米颗粒的粒径略微增大，而形貌未发生明显改变，表明纳米颗粒具有良好的胃肠道稳定性。
9.本发明还提供了所述csnps的制备方法，包括以下步骤：
10.s1.称取适量cel溶于有机溶剂中配制成一定浓度的cel溶液。
11.s2.称取适量cs溶于超纯水中配制成一定浓度的cs溶液。
12.s3.将cel溶液缓慢按一定质量比滴加至cs溶液中，于室温搅拌。
13.s4.将反应后的溶液吸取至透析袋中，避光透析。
14.s5.透析结束后得到所述的csnps。
15.优选的，所述步骤s1中有机溶剂是二甲基亚砜。
16.优选的，所述步骤s2中超纯水ph为7。
17.优选的，所述步骤s3中搅拌转速为100～500rpm，搅拌时间30min。
18.优选的，所述步骤s4中透析时间为24小时。
19.优选的，所述cel与cs质量比为1:100。
20.本发明还请求保护有上述方法制备得到的csnps。
21.本发明具有以下优点：
22.1.本发明提供了一种耐受胃肠液的csnps及制备方法。本发明所述csnps制备方法的操作简单，可重复性高，能耗低，具有工业化生产的可能性，且制备工程无需引入大量有机溶剂，绿色无污染，避免了溶剂污染等问题。
23.2.利用本发明制备所得的csnps大小均一，形态规则，可在分散性高。
24.3.利用本发明所得的csnps在模拟胃肠液中cel释放率较低，且形态与粒径并未发生明显改变，具有良好的胃肠道稳定性，能够耐受胃肠液的复杂环境。
附图说明
25.图1为csnps的粒径分布图。
26.图2为csnps的透射电镜图。
27.图3为cel、cs、cel和cs混合物、csnps的x射线衍射曲线。
28.图4为cel标准曲线。
29.图5为csnps在模拟胃肠液中粒径变化图。
30.图6分别为csnps在模拟胃液处理后的透射电镜图和释放曲线图(左)，模拟肠液处理后的透射电镜和释放曲线图(右)。
具体实施方式
31.下面将结合本发明实例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚，完整地描述，显然，所描述的实例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施实例，本领域普通技师人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
32.实施实例1
33.本发明提供了一种耐受胃肠液的csnps，具体制备步骤如下：
34.将20mg的cs溶解在2ml的超纯水中，得到10mg/ml的cs溶液；随后在称取10mg的cel溶解在1ml二甲亚砜中，配制成10mg/ml的cel溶液；将cs溶液置于棕色反应瓶中，放置在磁力搅拌台上，设置转速为300rpm，缓慢滴加20μl的cel溶液形成cel和cs质量比为1:100搅拌30min。搅拌结束后，使用移液枪将溶液吸取至透析袋中，室温条件下在3l超纯水中避光透
析24h，透析结束后将溶液吸取至ep管中4℃保存。
35.由图1可知，在此条件下形成的csnps粒径在180左右，且具有良好的分散性。。
36.由图2可知，在此条件下形成的csnps为形貌均一的球形结构。
37.实施实例2
38.本发明对cel组，cs组，csnps组，cs与cel物理混合组进行了x射线粉末衍射分析。
39.取适量样品进行x射线衍射分析。测定条件：cu靶，高压40kv，单流40ma，扫描2θ角度3
°
～80
°
，扫描速度6
°
/min；记录样品的x射线衍射曲线。不同样品的x射线衍射曲线如图3所示。
40.由图3可知，cel和物理混合组都存在明显尖锐的cel结晶衍射峰，表明cel主要存在于这两种体系的结晶中。然而，csnps的衍射图中并未观察到明显的衍射峰，这表明在本发明制备csnps过程中，原来结晶的cel在所得的csnps中转变为无定形状态。
41.实施实例3
42.本发明对cel进行了紫外标准曲线的制作：
43.s1.精密称取10mg的cel溶解于1ml二甲亚砜中，配制成10mg/ml的cel标准溶液。
44.s2.精密吸取适量10mg/ml的cel标准溶液梯度稀释至50μg/ml，25μg/ml，12.5μg/ml，6.25μg/ml，3.125μg/ml，1.563μg/ml，0.781μg/ml，0.391μg/ml，0.195μg/ml，0.098μg/ml，0.049μg/ml，0.024μg/ml的cel标准品溶液，利用紫外分光光度计在425nm处测定其吸光度。用空白二甲亚砜校准背景，以吸光度对药物浓度作图，得到回归曲线方程；用最小二乘法进行线性拟合，得到c与a的线性回归方程及相关系数r2
45.由图4可知，该紫外标准曲线具有良好的线性关系。
46.实施实例4
47.本发明通过体外模拟胃肠液消化情况测定了csnps经胃肠液处理后粒径以及形貌改变情况。图6中从左到右分别为对照组，胃液处理组，肠液处理组。
48.s1.称取胃蛋白酶(猪源)10g溶解在800ml的超纯水中，超声10min后，加入2ml左右盐酸调节ph至1.2，加超纯水定容至1000ml，即得到人工胃液。
49.s2.取一定量的cel溶液封装于透析袋中，将透析袋放入在20ml人工胃液中，然后在37℃，150rpm磁力搅拌下处理2h，处理结束后使用马尔文粒度仪检测人工胃液处理前后粒径改变情况或用透射电镜拍摄形貌是否发生改变。
50.s3.称取磷酸二氢钾6.8g，加入500ml超纯水使其溶解，用0.1mol/l氢氧化钠调节ph至6.8左右；另称取胰蛋白酶10g，加入适量超纯水水使其溶解，将两个溶液混合后，超纯水定容至1000ml即得人工肠液。
51.s4.取一定量的cel溶液封装于透析袋中，将透析袋放入在20ml人工肠液中，然后在37℃，150rpm磁力搅拌下处理4h，处理结束后使用马尔文粒度仪检测人工肠液处理前后粒径改变情况或用透射电镜拍摄形貌是否发生改变。
52.由图5，6可知，本发明所得的csnps经胃肠液处理后，粒径略微增大，形貌仍然是均一的球形结构。表面该纳米颗粒具有良好的胃肠液稳定性。
53.实施实例5
54.本发明通过体外模拟胃肠液消化情况测定了csnps在胃肠液的释放率。
55.人工胃肠液配制方法与实施实例4相同，分别测定csnps在胃肠液的释放率。
56.s1.取已知浓度的cel溶液封装于透析袋中，将透析袋放入在20ml人工胃液中，然后在37℃，150rpm磁力搅拌下处理2h，处理结束后使用紫外分光光度计测量浓度。
57.s2.吸取已知浓度的cel溶液封装于透析袋中，将透析袋放入在20ml人工肠液中，然后在37℃，150rpm磁力搅拌下处理4h，处理结束后使用紫外分光光度计测量浓度。
58.s3.根据所测量浓度绘制cel释放曲线。
59.cel释放率(％)＝(c
0-c
t
)v
×
100％
60.式中c0为初始cel浓度；c
t
为t时间测得的cel浓度；v为体积。
61.由图6可知，本发明所制备的csnps在胃肠液中cel的释放率低于百分之十，胃肠中的复杂环境没有破坏纳米结构，导致其释放出大量的cel，说明该纳米颗粒具有良好的胃肠液稳定性。
62.以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不同利发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种耐受胃肠液的雷公藤红素纳米颗粒，其特征在于，所述纳米颗粒由一定质量比的雷公藤红素和硫酸软骨素制备而成。2.根据权利要求1所述雷公藤红素纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s1.将雷公藤红素溶解在有机溶剂中，得到雷公藤红素溶液；s2.将硫酸软骨素溶解在超纯水中，得到硫酸软骨素溶液；s3.将雷公藤红素溶液按一定质量比滴加至硫酸软骨素溶液中，于室温搅拌；s4.将搅拌完成后的溶液吸取至透析袋中，避光透析；s5.透析结束后取出透析袋中的溶液，可得目标产物。3.如权利要求2所述的雷公藤红素纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述s1中有机溶剂为二甲亚砜。4.如权利要求2所述的雷公藤红素纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述s3中雷公藤红素溶液的质量浓度为5mg/ml～50mg/ml。5.如权利要求2所述的雷公藤红素纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述s3中质量份数比为1:2～1:200。6.如权利要求2所述的雷公藤红素纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述s3中搅拌转速为100～500rpm；搅拌时间30min。7.如权利要求2所述的雷公藤红素纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述s4中透析时间为24h。8.如权利要求2所述的雷公藤红素纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述的雷公藤红素纳米颗粒能够耐受胃肠液的复杂环境，具有良好的胃肠道稳定性。

技术总结
本发明公开了一种耐受胃肠液的雷公藤红素纳米颗粒及制备方法，属于生物医药技术领域。本发明将雷公藤红素与硫酸软骨素通过绿色简单的制备方法形成形貌均一的纳米颗粒；解决了雷公藤红素因低水溶性，低溶解性导致的胃肠道稳定性差的缺点，增加了雷公藤红素的生物利用度；本发明还提供了一种耐受胃肠液的雷公藤红素纳米颗粒的制备方法，该方法绿色安全，制备技术简单，可重复性高，具有工业化生产的可能性。能性。能性。


技术研发人员：罗建国 于超 陈俊
受保护的技术使用者：重庆医科大学
技术研发日：2023.08.08
技术公布日：2023/9/22