氟化异黄酮类化合物、其药物及其选择性抑制PI3K的用途

氟化异黄酮类化合物、其药物及其选择性抑制pi3k的用途
技术领域
1.本发明属于生物医药技术领域，具体涉及氟化异黄酮类化合物、其药物及其选择性抑制pi3k的用途。


背景技术：

2.黄酮类化合物因其结构和生物活性多样性被广泛应用于临床药物开发。其中，异黄酮类化合物广泛分布于许多天然植物中，如黄芪、葛根、甘草等，具有抗病毒、抗氧化、抗癌等活性。磷脂酰肌醇3-激酶（pi3ks）由一个催化亚基和一个调节亚基组成，根据催化亚基和生理功能的不同，分为α、β、δ和γ四种亚型。i类pi3ks可以将磷脂酰肌醇4,5-二磷酸转化为第二信使磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸，与癌症的发生和发展密切相关。pi3ks参与的pi3k/akt/mtor信号通路，可以调控细胞的增殖、存活、凋亡和自噬，在多种癌症中被异常激活。因此，通过开发新型的pi3k/akt/mtor信号通路小分子抑制剂，来治疗包括乳腺癌在内的恶性肿瘤的研究工作被不断报道。例如，nvp-bez235通过抑制pi3k和mtor，促进突变p53的降解，从而抑制三阴性乳腺癌细胞的生长。
3.天然异黄酮类化合物可以通过抑制pi3k/akt/mtor信号通路发挥抗肿瘤作用，例如，大豆和大豆制品中的异黄酮植物雌激素衍生物染料木素对乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用；葛根中的葛根素可以下调该信号通路的关键蛋白，从而抑制宫颈癌细胞的迁移。因此，结构多样的异黄酮类化合物可能具有潜在的pi3k抑制活性和抗癌治疗潜力。
4.自2011年以来，fda批准的近340种小分子药物中有108种含有氟原子，约占30%，多具有抗肿瘤、抗感染、神经保护和心脏保护作用。天然产物的氟化可以改善其生物活性、亲脂性、通透性、疏水性，从而提高成药性。例如，双氢青蒿素（dha）的氟化衍生物在ph = 2.0时稳定性得到了极大提高，且抗疟活性较青蒿素和其他药物强。天然产物的氟化修饰可以通过光氧化还原催化、电催化、过渡金属催化或有机催化来实现。有机催化具有高效、低成本、环境友好等优点，是最常用的氟化手段。作为典型的有机催化剂，n-杂环卡宾（nhcs）已成为制备生物活性化合物的有力工具。nhc催化的烯烃与各种氟烷源试剂的自由基反应，可以有效地将氟化基团引入到各种生物活性化合物中，以开发新的候选药物。利用氟化技术对异黄酮类化合物进行氟化处理，得到可以亚型选择性地靶向抑制pi3k的化合物，对于抗肿瘤药物的研发具有重要意义。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供氟化异黄酮类化合物、其药物及其选择性抑制pi3k的用途。
6.本发明提供了式i所示化合物、其盐、其立体异构体、其溶剂合物或其水合物：
式i其中，r1选自取代或未取代的c1~c8烷基、取代或未取代的c1~c8烷氧基、取代或未取代的6~12元芳基、取代或未取代的6~12元杂芳基、取代或未取代的3~8元环烷基、取代或未取代的4~8元杂环烷基；所述烷基、烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基的取代基选自c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基、三氟甲基、6~12元芳基、6~12元杂芳基、3~8元环烷基、4~8元杂环烷基；所述杂芳基、杂环烷基的杂原子为o、n或s，所述杂原子的个数为1、2或3个；r2连接在苯环任意位置上，m为r2的个数；m为1、2、3或4；每个r2分别独立选自氢、取代或未取代的c1~c8烷基、取代或未取代的c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基，或者两个相邻的r2与苯环形成萘基；所述烷基、烷氧基的取代基选自c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基；rf选自取代或未取代的c1~c8烷基；所述烷基的取代基选自卤素、-c(o)or3，且所述烷基至少被1个氟取代；r3选自c1~c8烷基。
7.进一步地，所述化合物为式ii所示：式ii其中，r4连接在苯环任意位置上，n为r4的个数；n为1、2、3或4；每个r4分别独立选自氢、c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基、三氟甲基、6~12元芳基、6~12元杂芳基、3~8元环烷基、4~8元杂环烷基；所述杂芳基、杂环烷基的杂原子为o、n或s，所述杂原子的个数为1、2或3个；r2连接在苯环任意位置上，m为r2的个数；m为1、2、3或4；每个r2分别独立选自氢、取代或未取代的c1~c8烷基、取代或未取代的c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基，或者两个相邻的r2与苯环形成萘基；所述烷基、烷氧基的取代基选自c1~c8烷基、c1~c8烷氧
基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基；rf选自取代或未取代的c1~c8烷基；所述烷基的取代基选自卤素、-c(o)or3，且所述烷基至少被1个氟取代；r3选自c1~c8烷基。
8.进一步地，所述化合物为式iii所示：式iii其中，r2连接在苯环任意位置上，m为r2的个数；m为1、2、3或4；每个r2分别独立选自氢、取代或未取代的c1~c8烷基、取代或未取代的c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基，或者两个相邻的r2与苯环形成萘基；所述烷基、烷氧基的取代基选自c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基。
9.进一步地，所述化合物为式iva所示：式iva其中，r4连接在苯环任意位置上，n为r4的个数；n为1、2、3或4；每个r4分别独立选自氢、c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基、三氟甲基、6~12元芳基、6~12元杂芳基、3~8元环烷基、4~8元杂环烷基；所述杂芳基、杂环烷基的杂原子为o、n或s，所述杂原子的个数为1、2或3个；或者，所述化合物为式ivb所示：
式ivb其中，r4连接在苯环任意位置上，n为r4的个数；n为1、2、3或4；每个r4分别独立选自氢、c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基、三氟甲基、6~12元芳基、6~12元杂芳基、3~8元环烷基、4~8元杂环烷基；所述杂芳基、杂环烷基的杂原子为o、n或s，所述杂原子的个数为1、2或3个；或者，所述化合物为式ivc所示：式ivc其中，r4连接在苯环任意位置上，n为r4的个数；n为1、2、3或4；每个r4分别独立选自氢、c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基、三氟甲基、6~12元芳基、6~12元杂芳基、3~8元环烷基、4~8元杂环烷基；所述杂芳基、杂环烷基的杂原子为o、n或s，所述杂原子的个数为1、2或3个。
10.进一步地，所述化合物为式v所示：
式v其中，rf选自取代或未取代的c1~c8烷基；所述烷基的取代基选自卤素、-c(o)or3，且所述烷基至少被1个氟取代；r3选自c1~c8烷基。
11.进一步地，r1选自c1~c3烷基、取代或未取代的苯基、苯并二恶唑；所述苯基的取代基选自c1~c3烷基、c1~c3烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基、三氟甲基、苯基；r2连接在苯环任意位置上，m为r2的个数；m为1、2、3或4；每个r2分别独立选自氢、c1~c3烷基、c1~c3烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基，或者两个相邻的r2与苯环形成萘基；rf选自取代或未取代的c1~c8烷基；所述烷基的取代基选自卤素、-c(o)or3，且所述烷基至少被1个氟取代；r3选自c1~c3烷基。
12.进一步地，所述化合物为如下化合物之一：进一步地，所述化合物为如下化合物之一：
。
mb-231细胞24 h后e-cadherin和mmp-2表达的免疫印迹分析结果图；f-g为用免疫荧光法分析化合物8（5 μm）处理或不处理mda-mb-231细胞中e-cadherin和mmp-2的表达结果图，图f和g中，zoom是虚线方框内的放大图，比例尺，10
µ
m，展示了代表性图片和统计数据；数据代表平均值
±
标准差；与对照组比较，*p《0.05，**p《0.01， ***p《0.001。
具体实施方式
23.本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
24.主要细胞以及试剂：mda-mb-231细胞购自american type culture collection (atcc, manassas, va, usa)，保存于含有10%胎牛血清(fbs)的dmem中，37
°
c。mtt (m2128)，3-ma(m9281)，cq (c6628)和dapi (d9542)购自sigma-aldrich (st. louis, mo, usa)。bafilomycin a1 (ab120497)购自abcam (cambridge, uk)。使用的抗体如下：beclin1 (3495,cst)，sqstm1/p62 (8025, cst)，lc3b (51520, abcam)，mmp-2 (87809, cst)，e-cadherin (14472, cst)，β-actin (66009-1-ig, proteintech, il, usa)，lamp1(25630, abcam)，pi3kα (27921-1-ap, proteintech, il, usa)，pi3kβ (20584-1-ap,proteintech, il, usa)，pi3kγ (20662-1-ap, proteintech, il, usa)，pi3kδ (34050, cst)，akt (9272, cst)，p-akts473 (4060s, cst)，p-aktt308 (13038s, cst)，mtor (2972, cst)，p-mtor(5536, cst)，p70 s6 (9202, cst)，p-p70 s6 (9205, cst)。
25.本发明化合物的合成路线：将催化剂nhc（0.02 mmol）加入反应封管后，换气处理，然后加入干燥cf3ph溶剂，在氩气氛围中依次加入邻羟基苯甲醛类化合物（化合物2，0.1 mmol）、共轭烯炔底物（化合物1，0.15mmol）、氟源试剂（0.15 mmol）和cs2co3（0.04 mmol），密封后于60℃反应12 h。tlc监测，化合物2完全消失后停止反应，接着用硅胶层析柱分离纯化，洗脱液为pe:ea = 60:1（v:v），收集浓缩得的最终目标化合物（化合物3）。当以溴二氟乙酸甲酯、全氟碘代丁烷或全氟碘代辛烷为氟源试剂时，cs2co3的用量为0.15 mmol。
26.nhc的结构为：
cf3ph的结构为：实施例1、化合物4a的合成（2-(1-([1,1'-联苯基]-4-基)-3,3,3-三氟丙基)-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为联苯基，r2为氢，rf为三氟甲基（氟源试剂为togni i），制备得到32.9 mg的化合物4a，乳白色固体，产率70%，熔点为119.3-123.7℃。
[0027]
togni i的结构为。
[0028]
化合物4a的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.24 (d,j= 7.8 hz, 1h), 7.72 (t,j= 8.4 hz, 1h), 7.60
ꢀ–ꢀ
7.54 (m, 6h),7.48
ꢀ–ꢀ
7.41 (m, 6h), 7.35 (t,j= 7.8 hz, 1h), 7.27 (d,j= 8.4 hz, 2h), 7.14
ꢀ–ꢀ
7.08 (m, 1h), 4.39 (dd,j= 10.8, 4.2 hz, 1h), 3.37
ꢀ–ꢀ
3.27 (m, 1h), 2.71
ꢀ–ꢀ
2.62 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 177.1, 162.7, 155.7, 141.0, 140.2, 137.3, 133.7, 132.1, 130.4, 128.8, 128.6, 128.3, 127.9, 127.7, 127.5, 127.0, 126.4, 125.8(c-f,1j
c-f
= 277.7 hz), 125.3, 124.2, 123.5, 117.6, 41.2, 37.0 (c-f,2j
c-f
= 29.0 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.18 (t,j= 10.7 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + h]
+
calcd for c
30h22
f3o
2+
471.1566; found 471.1562.实施例2、化合物4b的合成（2-(1-([1,1'-联苯基]-4-基)-3,3,3-三氟丙基)-6-甲基-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）
37.1 (c-f,2j
c-f
= 29.0 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.20 (t,j= 9.6 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + h]
+
calcd for c
31h24
f3o
3+
501.1672; found 501.1669.实施例4、化合物4d的合成（2-(1-([1,1'-联苯基]-4-基)-3,3,3-三氟丙基)-7-甲基-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为联苯基，r2为色酮母核7位的甲基，rf为三氟甲基（氟源试剂为togni i），制备得到43.1 mg的化合物4d，淡黄色固体，产率89%，熔点为79.1-83.5℃。
[0031]
化合物4d的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.11 (d,j= 8.4 hz, 1h), 7.56
ꢀ–ꢀ
7.42 (m, 10h), 7.39 (s, 1h), 7.35 (t,j= 7.2 hz, 1h), 7.26 (d,j= 7.8 hz, 2h), 7.23 (d,j= 8.4 hz, 1h), 7.18
ꢀ–ꢀ
7.08 (m, 1h), 4.37 (dd,j= 10.2, 4.8 hz, 1h), 3.34
ꢀ–ꢀ
3.25 (m, 1h), 2.69
ꢀ–ꢀ
2.60 (m, 1h), 2.53 (s, 3h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 177.0, 162.3, 155.8, 145.0, 140.9, 140.2, 137.5, 132.3, 130.7, 128.8, 128.6, 128.2, 127.9, 127.7, 127.5, 127.0, 126.8, 126.2,125.8 (c-f,1j
c-f
= 277.5 hz), 124.1, 121.2, 117.4, 41.2, 37.0 (c-f,2j
c-f
= 27.5 hz), 21.8.
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.20 (t,j= 9.6 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + h]
+
calcd for c
31h24
f3o
2+
485.1723; found 485.1720.实施例5、化合物4e的合成（2-(1-([1,1'-联苯基]-4-基)-3,3,3-三氟丙基)-7-甲氧基-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为联苯基，r2为色酮母核7位的甲氧基，rf为三氟甲基（氟源试剂为togni i），制备得到31.0 mg的化合物4e，黄色固体，产率62%，熔点为201.3-203.5℃。
[0032]
化合物4e的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.13 (d,j= 9.0 hz, 1h), 7.56
ꢀ–ꢀ
7.54 (m, 4h), 7.51
ꢀ–ꢀ
7.42 (m, 5h), 7.35 (t,j= 7.2 hz, 2h), 7.25 (d,j= 8.4 hz, 2h), 7.19
ꢀ–ꢀ
7.05 (m, 1h), 6.98 (d,j= 9.0 hz, 1h), 6.96 (s, 1h), 4.36 (dd,j= 10.8, 4.8 hz, 1h), 3.96 (s, 3h), 3.33
ꢀ–ꢀ
3.24 (m, 1h), 2.69
ꢀ–ꢀ
2.61 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 176.5, 164.2, 162.1, 157.4, 140.9, 140.2, 137.5, 132.2, 130.3, 128.8, 128.7, 128.2, 127.9, 127.7, 127.5, 127.0, 125.8 (c-f,1j
c-f
= 277.5 hz), 124.0, 117.3, 114.5, 99.9, 55.9, 41.1, 37.0 (c-f,2j
c-f
= 27.5 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.15 (t,j= 11.3 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + h]
+
calcd for c
31h24
f3o
3+
501.1672; found 501.1665.实施例6、化合物4f的合成（2-(1-([1,1'-联苯基]-4-基)-3,3,3-三氟丙基)-7-溴-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为联苯基，r2为色酮母核7位的卤素溴，rf为三氟甲基（氟源试剂为togni i），制备得到40.1 mg的化合物4f，淡黄色固体，产率73%，熔点为101.1-104.3℃。
[0033]
化合物4f的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.09 (d,j= 9.0 hz, 1h), 7.81 (s, 1h), 7.56
ꢀ–ꢀ
7.46 (m, 8h), 7.44 (t,j= 7.8 hz, 2h), 7.36 (t,j= 7.2 hz, 2h), 7.24 (d,j= 9.0 hz, 2h), 7.18
ꢀ–ꢀ
7.08 (m, 1h), 4.38 (dd,j= 10.2, 4.2 hz, 1h), 3.33
ꢀ–ꢀ
3.24 (m, 1h),2.68
ꢀ–ꢀ
2.60 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 176.4, 162.8, 155.7, 141.1, 140.1, 137.0, 131.7, 130.3, 128.9, 128.8, 128.6, 128.5, 128.0, 127.9, 127.8, 127.6, 127.0, 125.7(c-f,1j
c-f
= 277.7 hz), 124.5, 122.4, 120.8, 41.2, 36.9 (c-f,2j
c-f
= 29.0 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.20 (t,j= 10.7 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + h]
+
calcd for c
30h2179
brf3o
2+
549.0672, c
30h2181
brf3o
2+
551.0652; found 549.0673, 551.0657.实施例7、化合物4g的合成（2-(1-([1,1'-联苯基]-4-基)-3,3,3-三氟丙基)-7-氯-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）
(c-f,3j
c-f
= 10.1 hz), 128.8, 128.7, 128.5, 127.8, 127.8, 127.6, 127.0, 125.8 (c-f,1j
c-f
= 277.5 hz), 124.3, 120.3, 114.1 (c-f,2j
c-f
= 23.1 hz), 104.4 (c-f,2j
c-f
= 24.5 hz), 41.1, 36.9 (c-f3,2j
c-f
= 29.0 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.21 (t,j= 9.9 hz, 3f),
ꢀ‑
103.20
ꢀ–ꢀ‑
103.24 (m, 1f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
30h20
f4o2na
+
511.1292; found 511.1295.实施例9、化合物4i的合成（2-(1-([1,1'-联苯基]-4-基)-3,3,3-三氟丙基)-8-甲氧基-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为联苯基，r2为色酮母核8位的甲氧基，rf为三氟甲基（氟源试剂为togni i），制备得到39.0 mg的化合物4i，淡黄色固体，产率78%，熔点为170.7-171.8℃。
[0036]
化合物4i的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 7.77 (d,j= 7.8 hz, 1h), 7.57
ꢀ–ꢀ
7.42 (m, 10h), 7.36
ꢀ–ꢀ
7.30 (m, 4h), 7.24 (d,j= 7.8 hz, 1h), 7.18
ꢀ–ꢀ
7.07 (m, 1h), 4.35 (dd,j= 10.2, 4.8 hz, 1h), 4.08 (s, 3h), 3.43
ꢀ–ꢀ
3.33 (m, 1h), 2.70
ꢀ–ꢀ
2.61 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 177.1, 162.4, 149.0, 146.2, 140.8, 140.3, 137.4, 132.2, 130.4, 128.8, 128.6, 128.3, 128.2, 127.7, 127.5, 127.0, 125.9 (c-f,1j
c-f
= 277.5 hz), 124.7, 124.5, 123.9, 117.0, 114.2, 56.5, 41.5, 37.3 (c-f,2j
c-f
= 28.8 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.22 (t,j= 11.0 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + h]
+
calcd for c
31h24
f3o
3+
501.1672; found 501.1668.实施例10、化合物4j的合成（2-(1-([1,1'-联苯基]-4-基)-3,3,3-三氟丙基)-8-叔丁基-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为联苯基，r2为色酮母核8位的叔丁基，rf为三氟甲基
（氟源试剂为togni i），制备得到23.7 mg的化合物4j，淡黄色固体，产率45%，熔点为66.3-69.7℃。
[0037]
化合物4j的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.17 (d,j= 7.2 hz, 1h), 7.68 (d,j= 7.8 hz, 1h), 7.54 (d,j= 7.8 hz, 2h), 7.53 (d,j= 8.4 hz, 2h), 7.51
ꢀ–ꢀ
7.41 (m, 5h), 7.34 (t,j= 7.8 hz, 3h), 7.24
ꢀ–ꢀ
7.16 (m, 3h), 4.61 (dd,j= 10.2, 4.8 hz, 1h), 3.39
ꢀ–ꢀ
3.30 (m, 1h),2.86
ꢀ–ꢀ
2.78 (m, 1h), 1.52 (s, 9h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 177.5, 163.0, 154.9, 140.8, 140.1, 138.7, 137.1, 132.3, 131.2, 130.4, 128.8, 128.7, 128.3, 127.8, 127.6, 127.0, 125.9 (c-f,1j
c-f
= 279.0 hz), 124.9, 124.9, 124.5, 124.4, 40.8, 36.5 (c-f,2j
c-f
= 28.8 hz), 35.0, 30.4.
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
64.82 (t,j= 11.0 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
34h29
f3o2na
+
549.2012; found 549.2018.实施例11、化合物4k的合成（2-(1-([1,1'-联苯基]-4-基)-3,3,3-三氟丙基)-8-氟-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为联苯基，r2为色酮母核8位的卤素氟，rf为三氟甲基（氟源试剂为togni i），制备得到30.3 mg的化合物4k，淡黄色固体，产率62%，熔点为69.8-72.3℃。
[0038]
化合物4k的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 7.98 (d,j= 7.8 hz, 1h), 7.57
ꢀ–ꢀ
7.47 (m, 8h), 7.44 (t,j= 7.2 hz, 2h), 7.40
ꢀ–ꢀ
7.32 (m, 3h), 7.30 (d,j= 9.0 hz, 2h), 7.22
ꢀ–ꢀ
7.07 (m, 1h), 4.38 (dd,j= 10.2, 4.2 hz, 1h), 3.41
ꢀ–ꢀ
3.32 (m, 1h), 2.70
ꢀ–ꢀ
2.62 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 176.2, 162.5, 151.1 (c-f,1j
c-f
= 253.1 hz), 144.5 (c-f,2j
c-f
= 11.6 hz), 141.1, 140.2, 136.9, 131.6, 130.4, 128.8, 128.7, 128.6, 128.0, 127.8, 127.6, 127.0,125.8 (c-f,1j
c-f
= 277.7 hz), 125.3, 124.7 (c-f,3j
c-f
= 5.7 hz), 124.3, 121.4 (c-f,3j
c-f
= 2.9 hz), 119.3 (c-f,2j
c-f
= 15.9 hz), 41.4, 37.0 (c-f,2j
c-f
= 29.0 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.23 (t,j= 11.3 hz, 3f),
ꢀ‑
135.07
ꢀ–ꢀ‑
135.10 (m, 1f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
30h20
f4o2na
+
511.1292; found 511.1297.
277.5 hz), 125.2, 124.2, 123.0, 117.6, 41.5, 37.0 (c-f,2j
c-f
= 27.5 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.24 (t,j= 10.7 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
24h17
f3o2na
+
417.1073; found 417.1080.实施例14、化合物4n的合成（3-苯基2-(3,3,3-三氟-1-(4-甲氧基苯基)丙基)-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为，r2为氢，rf为三氟甲基（氟源试剂为togni i），制备得到31.4 mg的化合物4n，淡黄色固体，产率74%，熔点为99.8-103.3℃。
[0041]
化合物4n的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.22 (d,j= 8.4 hz, 1h), 7.70 (t,j= 7.2 hz, 1h), 7.56 (d,j= 7.8 hz, 1h), 7.43
ꢀ–ꢀ
7.54 (m, 3h), 7.41 (t,j= 8.4 hz, 1h), 7.27
ꢀ–ꢀ
7.39 (m, 1h), 7.11
ꢀ–ꢀ
7.04 (m, 3h), 6.84 (d,j= 9.0 hz, 2h), 4.29 (dd,j= 10.2, 4.8 hz, 1h), 3.78 (s, 3h), 3.29
ꢀ–ꢀ
3.19 (m, 1h),2.63
ꢀ–ꢀ
2.54 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 177.1, 163.1, 159.2, 155.7, 133.6, 132.2, 130.5, 130.4, 128.5, 128.4, 128.3, 126.4, 125.8 (c-f,1j
c-f
= 277.5 hz), 125.2, 123.8, 123.5, 117.6, 114.4, 55.2, 40.7, 37.1 (c-f,2j
c-f
= 27.5 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.21 (t,j= 10.7 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
25h19
f3o3na
+
447.1179; found 447.1185.实施例15、化合物4o的合成（3-苯基-2-(3,3,3-三氟-1-(4-氟苯基)丙基)-4h-苯并吡喃-4-酮）
i），制备得到29.7 mg的化合物4r，淡黄色固体，产率70%，熔点为124.4-125.7℃。
[0045]
化合物4r的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.21 (d,j= 7.8 hz, 1h), 7.69 (t,j= 7.8 hz, 1h), 7.55 (d,j= 9.0 hz, 1h), 7.48
ꢀ–ꢀ
7.43 (m, 3h), 7.40 (t,j= 7.8 hz, 1h), 7.34
ꢀ–ꢀ
7.25 (m, 1h), 7.21 (t,j= 7.8 hz, 1h), 7.17
ꢀ–ꢀ
7.08 (m, 1h), 6.80 (d,j= 8.4 hz, 1h), 6.76 (d,j= 7.2 hz, 1h), 6.68 (s, 1h), 4.29 (dd,j= 10.2, 2.4 hz, 1h), 3.74 (s, 3h), 3.31
ꢀ–ꢀ
3.21 (m, 1h), 2.63
ꢀ–ꢀ
2.55 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 177.1, 162.6, 159.9, 155.6, 139.9, 133.7, 132.1, 130.6, 130.1, 128.7, 128.3, 126.4, 125.8 (c-f,1j
c-f
= 277.5 hz), 125.2, 124.2, 123.5, 119.6, 117.6, 113.6, 113.1, 55.2, 41.5, 36.9(c-f,2j
c-f
= 28.8 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.26 (t,j= 10.7 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
25h19
f3o3na
+
447.1179; found 447.1182.实施例19、化合物4s的合成（3-苯基-2-(3,3,3-三氟-1-(3-(三氟甲基)苯基)丙基)-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为，r2为氢，rf为三氟甲基（氟源试剂为togni i），制备得到29.1 mg的化合物4s，淡黄色固体，产率63%，熔点为114.6-118.8℃。
[0046]
化合物4s的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.22 (d,j= 7.8 hz, 1h), 7.73 (t,j= 8.4 hz, 1h), 7.57
ꢀ–ꢀ
7.52 (m, 3h),7.48
ꢀ–ꢀ
7.42 (m, 5h), 7.38 (d,j= 8.4 hz, 2h), 7.17
ꢀ–ꢀ
7.00 (m, 1h), 4.40 (dd,j= 9.6, 4.8 hz, 1h), 3.33
ꢀ–ꢀ
3.24 (m, 1h),2.69
ꢀ–ꢀ
2.61 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 176.9, 161.7, 155.6, 139.2, 133.9, 131.8, 131.4 (c-f,2j
c-f
= 33.2 hz), 130.8, 130.3, 129.6, 128.8, 128.6, 126.5, 125.6 (c-f,1j
c-f
= 277.5 hz), 125.4, 125.0 (c-f,3j
c-f
= 4.4 hz), 124.5, 124.5, 123.7 (c-f,1j
c-f
= 273.3 hz), 123.4, 117.5, 41.4, 36.7 (c-f,2j
c-f
= 29.0 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
63.23 (s, 3f),
ꢀ‑
65.15 (t,j= 9.9 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
25h16
f6o2na
+
485.0947; found 485.0947.
8.4 hz, 1h), 7.65 (d,j= 8.4 hz, 1h), 7.45 (t,j= 7.2 hz, 3h), 7.41
ꢀ–ꢀ
7.28 (m, 3h), 7.17
ꢀ–ꢀ
7.13 (m, 2h), 7.08
ꢀ–ꢀ
7.06(m, 1h), 6.94
ꢀ–ꢀ
6.70 (m, 1h), 4.61 (dd,j= 10.8, 4.2 hz, 1h), 3.29
ꢀ–ꢀ
3.20 (m, 1h),2.47
ꢀ–ꢀ
2.39 (m, 1h), 1.65 (s, 3h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 177.1, 163.3, 155.6, 137.8, 135.2, 133.7, 132.2, 131.1, 130.1, 128.8, 128.2, 127.7, 126.8, 126.5, 126.4, 125.8 (c-f,1j
c-f
= 277.7 hz), 125.4, 124.4, 123.6, 117.6, 37.3, 37.0 (c-f,2j
c-f
= 27.7 hz), 18.3.
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.91 (t,j= 10.7 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
25h19
f3o2na
+
431.1230; found 431.1234.实施例22、化合物4v的合成（2-(1-(2-氯苯基)-3,3,3-三氟丙基)-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为，r2为氢，rf为三氟甲基（氟源试剂为togni i），制备得到14.2 mg的化合物4v，淡黄色固体，产率33%，熔点为96.9-100.1℃。
[0049]
化合物4v的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.27 (d,j= 8.4 hz, 1h), 7.75 (t,j= 8.4 hz, 1h), 7.62 (d,j= 8.4 hz, 1h), 7.55
ꢀ–ꢀ
7.43 (m, 3h), 7.39
ꢀ–ꢀ
7.36 (m, 2h), 7.35
ꢀ–ꢀ
7.26 (m, 2h), 7.25
ꢀ–ꢀ
7.21 (m, 2h), 7.10
ꢀ–ꢀ
6.66(m, 1h), 4.92 (dd,j= 10.8, 3.6 hz, 1h), 3.21
ꢀ–ꢀ
3.11 (m, 1h), 2.60
ꢀ–ꢀ
2.52 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 177.0, 162.0, 155.6, 136.8, 133.8, 133.1, 131.6, 130.2, 129.9, 129.1, 128.7, 128.3, 128.2, 127.5, 126.5, 125.6 (c-f,1j
c-f
= 277.5 hz), 125.5, 125.2, 123.6, 117.6, 38.3, 36.4 (c-f,2j
c-f
= 29.0 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.77 (t,j= 10.7 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
24h1635
clf3o2na
+
451.0683, c
24h1637
clf3o2na
+
453.0654; found 451.0683, 453.0665.实施例23、化合物4w的合成（2-(1-(3,4-二甲氧基苯基)-3,3,3-三氟丙基)-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）
8.4, 1h), 7.56 (d,j= 8.4 hz, 1h), 7.49
ꢀ–ꢀ
7.40 (m, 4h), 7.36
ꢀ–ꢀ
7.27 (m, 1h), 7.22
ꢀ–ꢀ
7.02 (m, 1h), 6.73
ꢀ–ꢀ
6.71 (m, 2h), 6.56 (dd,j= 8.4, 1.8 hz, 1h), 5.94 (dd,j= 12.0, 1.8 hz, 2h), 4.25 (dd,j= 10.2, 4.8 hz, 1h), 3.25
ꢀ–ꢀ
3.16 (m, 1h), 2.61
ꢀ–ꢀ
2.53 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 177.1, 162.8, 155.6, 148.1, 147.3, 133.7, 132.0, 132.0, 130.3, 128.8, 128.3, 126.4, 125.7 (c-f,1j
c-f
= 277.7 hz), 125.3, 123.9, 123.4, 121.0, 117.6, 108.6, 107.6, 101.2, 41.1, 37.1(c-f,2j
c-f
= 29.0 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.22 (t,j= 9.9 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
25h17
f3o4na
+
461.0971; found 461.0977.实施例25、化合物4y的合成（3-苯基-2-(4,4,4-三氟丁基-2-基)-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为甲基，r2为氢，rf为三氟甲基（氟源试剂为togni i），制备得到15.3 mg的化合物4y，淡黄色固体，产率46%，熔点为104.9-107.6℃。
[0052]
化合物4y的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.24 (d,j= 7.8 hz, 1h), 7.69 (t,j= 7.2 hz, 1h), 7.49
ꢀ–ꢀ
7.44 (m, 3h),7.43
ꢀ–ꢀ
7.39 (m, 2h), 7.25 (d,j= 7.2 hz, 2h), 3.25
ꢀ–ꢀ
3.20 (m, 1h), 2.80
ꢀ–ꢀ
2.71 (m, 1h), 2.31
ꢀ–ꢀ
2.22(m, 1h), 1.36 (d,j= 7.2 hz, 3h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 177.1, 165.6, 155.8, 133.6, 132.3, 130.1, 128.6, 128.1, 126.4, 126.0 (c-f,1j
c-f
= 276.2 hz), 125.1, 123.4, 123.3, 117.5, 37.3 (c-f,2j
c-f
= 28.8 hz), 30.9, 19.4.
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.17 (t,j= 10.7 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
19h15
f3o2na
+
355.0917; found 355.0925.实施例26、化合物4z的合成（4-(3,3,3-三氟-1-(6-甲氧基-4-酮-3-苯基-4h-苯并吡喃-2-基)丙基)苯基氰）
36.7 (c-f,2j
c-f
= 29.0 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
63.23 (s, 3f),
ꢀ‑
65.17 (t,j= 11.0 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
26h18
f6o3na
+
515.1053; found 515.1062.实施例28、化合物4ab的合成（6-甲氧基-3-苯基-2-(3,3,3-三氟-1-(3-甲氧基苯基)丙基)-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为，r2为色酮母核6位的甲氧基，rf为三氟甲基（氟源试剂为togni i），制备得到29.5 mg的化合物4ab，淡黄色固体，产率65%，熔点为61.5-65.4℃。
[0055]
化合物4ab的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 7.58 (s, 1h), 7.50
ꢀ–ꢀ
7.29 (m, 6h), 7.22 (t,j= 7.8 hz, 1h), 7.16
ꢀ–ꢀ
6.98 (m, 1h), 6.81 (d,j= 8.4 hz, 1h), 6.75 (d,j= 7.8 hz, 1h), 6.67 (s, 1h), 4.28 (d,j= 10.2 hz, 1h), 3.88 (s, 3h), 3.75 (s, 3h), 3.29
ꢀ–ꢀ
3.20 (m, 1h), 2.60
ꢀ–ꢀ
2.54 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 176.9, 162.4, 159.8, 157.0, 150.5, 140.0, 132.3, 130.8, 130.0, 128.8, 128.2, 125.8 (c-f,1j
c-f
= 277.7 hz), 124.0, 123.7, 123.4, 119.6, 119.0, 113.6, 113.0, 105.5, 55.9, 55.2,41.4, 36.9 (c-f,2j
c-f
= 28.4 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.28 (t,j= 9.9 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
26h21
f3o4na
+
477.1284; found 477.1279.实施例29、化合物4ac的合成（2-(1-(3,4-二甲氧基苯基-3,3,3-三氟丙基)-6-甲氧基-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）
132.9, 131.8, 130.2, 129.0, 128.5, 128.3, 127.9, 125.5 (c-f,1j
c-f
= 277.5 hz), 124.6, 118.2, 117.2, 114.7, 112.2, 99.9, 55.9, 41.5, 36.6 (c-f,2j
c-f
= 30.4 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.05 (t,j= 11.0 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
26h18
f3no3na
+
472.1131; found 472.1129.实施例31、化合物4ae的合成（7-甲氧基-3-苯基-2-(3,3,3-三氟-1-(3-(三氟甲基)苯基)丙基)-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为，r2为色酮母核7位的甲氧基，rf为三氟甲基（氟源试剂为togni i），制备得到18.2 mg的化合物4ae，淡黄色固体，产率37%，熔点为149.4-152.2℃。
[0058]
化合物4ae的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.12 (d,j= 9.0 hz, 1h), 7.55 (d,j= 7.2 hz, 1h), 7.52
ꢀ–ꢀ
7.43 (m, 4h),7.41 (s, 1h), 7.37
ꢀ–ꢀ
7.29 (m, 2h), 7.05
ꢀ–ꢀ
6.96 (m, 2h), 6.93 (d,j= 2.4 hz, 1h), 4.37 (dd,j= 10.2, 4.8 hz, 1h), 3.96 (s, 3h), 3.31
ꢀ–ꢀ
3.21 (m, 1h), 2.68
ꢀ–ꢀ
2.60 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 176.3, 164.3, 161.2, 157.3, 139.4, 131.9, 131.4 (c-f,2j
c-f
= 33.3 hz), 130.8, 130.6, 129.6, 128.9, 128.5, 127.9, 125.6 (c-f,1j
c-f
= 277.5 hz), 124.9 (c-f,3j
c-f
= 2.9 hz), 124.4 (c-f,3j
c-f
= 2.9 hz), 124.3, 123.7 (c-f,1j
c-f
= 273.2 hz), 117.3, 114.6, 99.9, 55.9, 41.3, 36.7 (c-f,2j
c-f
= 29.0 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
63.21 (s, 3f),
ꢀ‑
65.13 (t,j= 9.9 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
26h18
f6o3na
+
515.1052; found 515.1060.实施例32、化合物4af的合成（7-甲氧基-3-苯基-2-(3,3,3-三氟-1-(3-甲氧基苯基)丙基)-4h-苯并吡喃-4-酮）
按照合成路线所述方法，r1为，r2为色酮母核7位的甲氧基，rf为三氟甲基（氟源试剂为togni i），制备得到24.5 mg的化合物4af，淡黄色固体，产率54%，熔点为117.9-120.3℃。
[0059]
化合物4af的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.11 (d,j= 9.0 hz, 1h), 7.56
ꢀ–ꢀ
7.28 (m, 4h), 7.23 (t,j= 7.8 hz, 1h), 7.18
ꢀ–ꢀ
7.01 (m, 1h), 6.97 (dd,j= 9.0, 3.0 hz, 1h), 6.94 (s, 1h), 6.81 (dd,j= 8.4, 3.0 hz, 1h), 6.77 (d,j= 7.8 hz, 1h), 6.68 (s, 1h), 4.27 (dd,j= 10.2, 4.2 hz, 1h), 3.95 (s, 3h), 3.76 (s, 3h), 3.29
ꢀ–ꢀ
3.20 (m, 1h),2.63
ꢀ–ꢀ
2.55 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 176.5, 164.2, 162.1, 159.8, 157.3, 140.0, 132.2, 130.7, 130.0, 128.7, 128.2, 127.8, 125.8 (c-f,1j
c-f
= 277.7 hz), 124.0, 119.6, 117.3, 114.5, 113.7, 112.9, 99.9, 55.8, 55.2, 41.4,36.8 (c-f,2j
c-f
= 28.4 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
65.22 (t,j= 9.9 hz, 3f).hrms (esi-tof)m/z: [m + na]
+
calcd for c
26h21
f3o4na
+
477.1284; found 477.1289.实施例33、化合物8的合成（甲基 4-([1,1'-联苯基]-4-基)-2,2-二氟-4-(4-酮-3-苯基-4h-苯并吡喃-2-基)丁酸甲酯）按照合成路线所述方法，r1为联苯基，r2为氢，rf为-cf2coome（氟源试剂为brcf2coome），制备得到24.1 mg的化合物8，淡黄色固体，产率47%，熔点为71.8-74.6℃。
[0060]
化合物8的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.23 (d,j= 8.4 hz, 1h), 7.72 (t,j= 8.4 hz, 1h), 7.59 (d,j= 7.8 hz, 1h), 7.55
ꢀ–ꢀ
7.40 (m, 11h), 7.35 (t,j= 7.2 hz, 1h), 7.26 (d,j= 8.4 hz, 2h), 6.93
ꢀ–ꢀ
7.22 (m, 1h), 4.39 (dd,j= 9.0, 5.4 hz, 1h), 3.63 (s, 3h), 3.28
ꢀ–ꢀ
3.19 (m, 1h), 2.79
ꢀ–ꢀ
2.70 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 177.1, 163.9 (c-f,2j
c-f
= 33.2 hz), 163.3, 155.7, 140.8, 140.3, 137.6, 133.6, 132.2, 130.5, 128.8,128.6, 128.3, 128.1, 127.6, 127.5, 127.0, 126.4, 125.2, 123.9, 123.5, 117.6, 115.0 (c-f,1j
c-f
= 252.9 hz), 53.3, 41.0, 37.7 (c-f,2j
c-f
= 23.1 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
104.06 (dq,j= 264.5, 10.2 hz, 1f),
ꢀ‑
105.67 (dt,j= 264.0, 16.1 hz, 1f).hrms (esi-tof)m/z: [m + h]
+
calcd for c
32h25
f2o
4+
511.1715; found 511.1721.实施例34、化合物9的合成（2-(1-([1,1'-联苯基]-4-基)-3,3,4,4,5,5,6,6,6-九氟己基)-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）按照合成路线所述方法，r1为联苯基，r2为氢，rf为（氟源试剂为brcf2cf2cf2cf3），制备得到45.3 mg的化合物9，淡黄色固体，产率73%，熔点为66.9-70.6℃。
[0061]
化合物9的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.25 (d,j= 7.2 hz, 1h), 7.73 (t,j= 8.4 hz, 1h), 7.61 (d,j= 7.2 hz, 1h), 7.57
ꢀ–ꢀ
7.35 (m, 12h), 7.27 (d,j= 8.4 hz, 2h), 7.23
ꢀ–ꢀ
7.01 (m, 1h), 4.51 (dd,j= 10.2, 4.2 hz, 1h), 3.39
ꢀ–ꢀ
3.28 (m, 1h), 2.67
ꢀ–ꢀ
2.57 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 177.1, 162.8, 155.7, 141.0, 140.2, 137.7, 133.7, 132.1, 130.4, 128.8, 128.6, 128.3, 127.9, 127.8, 127.6, 127.0, 126.5, 125.3,123.9, 123.6, 117.5, 121.8
ꢀ–ꢀ
106.9 (m, 4c), 40.0, 33.8 (c-f,2j
c-f
= 21.0 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
81.43 (t,j= 9.9 hz, 3f),
ꢀ‑
113.86
ꢀ–ꢀ‑
114.90 (m, 2f),
ꢀ‑
124.77
ꢀ–ꢀ‑
125.25 (m, 2f),
ꢀ‑
126.12
ꢀ–ꢀ‑
126.78 (m,2f).hrms (esi-tof)m/z: [m + h]
+
calcd for c
33h22
f9o
2+
621.1471; found 621.1478.实施例35、化合物10的合成（2-(1-([1,1'-联苯基]-4-基-3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,10-十七氟癸基)-3-苯基-4h-苯并吡喃-4-酮）
按照合成路线所述方法，r1为联苯基，r2为氢，rf为（氟源试剂为brcf2(cf2)6cf3），制备得到62.4 mg的化合物10，淡黄色固体，产率76%，熔点为74.5-76.4℃。
[0062]
化合物10的表征数据如下：1h nmr (600 mhz, cdcl3) δ (ppm): 8.26 (d,j= 8.4 hz, 1h), 7.73 (t,j= 9.0 hz, 1h), 7.61 (d,j= 8.4 hz, 1h), 7.57
ꢀ–ꢀ
7.55 (m, 4h), 7.52
ꢀ–ꢀ
7.42 (m, 6h), 7.36 (t,j= 7.2 hz, 2h), 7.27 (d,j= 8.4 hz, 2h), 7.15
ꢀ–ꢀ
7.08 (m, 1h), 4.51 (dd,j= 10.2, 4.2 hz, 1h), 3.40
ꢀ–ꢀ
3.29 (m, 1h),2.67
ꢀ–ꢀ
2.57 (m, 1h).
13
c nmr (151 mhz, cdcl3) δ (ppm): 177.1, 162.9, 155.7, 141.0, 140.2, 137.7, 133.7, 132.1, 130.4, 128.8, 128.5, 128.4, 127.9, 127.8, 127.6, 127.0, 126.5, 125.3, 123.9,123.5, 118.0
ꢀ–ꢀ
108.4 (m, 8c), 117.5, 40.0, 33.6 (c-f,2j
c-f
= 21.6 hz).
19
f nmr (564 mhz, cdcl3) δ (ppm):
ꢀ‑
81.18 (t,j= 10.7 hz, 3f),
ꢀ‑
114.08 (s, 2f),
ꢀ‑
121.90 (s, 2f),
ꢀ‑
122.32 (s, 4f),
ꢀ‑
123.12 (s, 2f),
ꢀ‑
123.89 (s, 2f),-126.53 (s, 2f).hrms (esi-tof)m/z: [m + h]
+
calcd for c
37h22f17o2+
821.1343; found 821.1345.以下通过具体试验例证明本发明的有益效果。
[0063]
试验例1、细胞实验评价本发明化合物的抗癌活性采用mtt法检测本发明化合物（实施例1-35制备的化合物）对多种肿瘤细胞（mcf-7、mda-mb-231、bt549、rko和hct116细胞）活性的影响。具体方法如下：将肿瘤细胞（6
×
103个/孔）接种于96孔中，37℃孵育24 h，然后加入浓度为30μm的本发明化合物（溶剂为dmso）孵育24h，孵育后使用mtt法测定细胞活力。
[0064]
本发明化合物对多种肿瘤细胞活性抑制结果如图1和表1所示。图1a中最右边-50、0、50、100表示对细胞的抑制率。根据图1和表1所示结果可知：本发明化合物对多种肿瘤细胞均有抑制作用，对mcf-7的抑制作用最佳。在这些化合物中，化合物8对肿瘤细胞的抑制效果最优，在30 μm浓度下对三阴性乳腺癌（tnbc）细胞具有较高的抑制率，其中，对乳腺癌细胞mda-mb-231和mcf-7细胞的ic
50
值分别为5.4 μm和8.3 μm（图1b）。
[0065]
表1.本发明化合物对不同肿瘤细胞的抑制活性
试验例2、本发明化合物8作为pi3k抑制剂的研究为了研究本发明化合物8是否可以作为pi3k抑制剂，采用分子对接的方法分析化合物8与pi3kα、pi3kβ、pi3kγ和pi3kδ的结合模式。
[0066]
分子对接分析：用accelrys discovery studio（3.5版;accelrys, san diego, ca）来构造化学分子，并通过charmm力场最小化能量。采用cdocker协议作为对接方法对化合物进行半柔性对接。图片是用pymol生成的。
[0067]
分子动力学模拟：利用gromacs (version 2022.2) 软件包对产物8-pi3kα、8-pi3kβ、8-pi3kγ和8-pi3kδ进行分子动力学模拟。
[0068]
体外pi3k激酶活性测定：体外pi3k激酶活性测定由华为制药公司药物发现服务进行。采用graphpad prism 8.0软件进行曲线拟合，计算ic
50
值。
[0069]
细胞热位移试验：用完整细胞进行cetsa检测pi3kα、pi3kβ、pi3kγ、pi3kδ与化合物8之间的相互作用。mda-mb-231细胞（6
ꢀ×ꢀ
103细胞/孔）与化合物8（浓度为5 μm）一起或不一起孵育6小时。然后，收集所有细胞并在pbs中重悬。在指定温度下（37、41、45、49、53、57和61℃）加热3分钟后，所有细胞都用液氮进行三次冻融循环，在室温下解冻。以12000 r/min离心15 min澄清裂解物，westernblotting检测pi3kα、pi3kβ、pi3kγ和pi3kδ蛋白表达。
[0070]
分子对接分析结果表明（图2a）：化合物8的二氟乙酸甲酯基可以与pi3kα形成一个氢键，与pi3kβ形成一个氢键和两个卤素相互作用，与pi3kγ形成一个氢键，与pi3kδ形成两个氢键。其中，二氟乙酸甲酯基的氟原子和氧原子与pi3kβ和pi3kδ的都有相互作用，表明化合物8可能对pi3kβ和pi3kδ具有选择性，并且含氟基团可能在pi3k的亚型选择性中发挥重要作用。
[0071]
随后，通过计算100 ns md模拟后蛋白配体的rmsd对pi3k-8配合物的稳定性进行了评估。如图2b所示，pi3ks-8配合物的蛋白构象在10 ns md模拟过程中保持稳定，在30 ns模拟后稳定在0.2-0.4nm左右。通过将每个md轨迹的rmsf图与结晶蛋白结构的b因子进行比较来确定md模拟的稳定性（图2b）。
[0072]
采用mm/pbsa法测定了化合物8与pi3kα、β、δ、γ的结合自由能，md轨迹分别为30 ~ 100 ns。由图2b可知，化合物8与pi3k的结合自由能与实验值吻合良好。各个残基的结合分解贡献表明，pi3kα残基770arg （pi3kβ残基777lys, pi3kδ残基750thr和pi3kγ残基802lys）以及pi3kα残基780trp （pi3kβ残基787trp, pi3kδ残基760trp和pi3kγ残基812trp）主要影响了化合物8对pi3k亚型的选择性（图2b）。
[0073]
对pi3k亚型的体外激酶活性抑制实验发现化合物8可选择性抑制pi3kα/β/δ（ic
50
值分别为1978 nm、1873 nm和146 nm）（图2c）。
[0074]
接下来，本发明通过cetsa实验，研究了化合物8是否能与细胞中的pi3kα、pi3kβ、pi3kγ和pi3kδ结合。结果表明，化合物8提高了pi3kα、pi3kβ和pi3kδ的热稳定性，表明化合物8可以直接与pi3kα/β/δ结合（图2d-2e）。因此，化合物8可能是一种有效的pi3kα/β/δ抑制剂。
[0075]
试验例3、本发明化合物8对tnbc细胞的增殖和迁移抑制活性（1）集落形成实验：为了研究化合物8对tnbc细胞的抗肿瘤作用，本发明首先进行了集落形成实验，检测化合物8处理后tnbc细胞的长期增殖能力。具体实验方法：mda-mb-231细胞(1
ꢀ×ꢀ
102细胞/孔)培养于12孔板中，让其粘附过夜，然后细胞分别用化合物8和不使用化合物8处理7天（化合物8的浓度为5 μm）。然后用4%多聚甲醛固定细胞，用结晶紫染色(beyotime;中国c0121)。计数mda-mb-231细胞的菌落数。不使用化合物8处理为控制组。
[0076]
实验结果显示，化合物8剂量依赖性地抑制了mda-mb-231细胞的生长并减少了菌
落数量（图3a）。
[0077]
（2）3d细胞培养实验：mda-mb-231细胞(1
ꢀ×ꢀ
103细胞/孔)培养于96孔3d细胞培养板(primesurface; ms9096uz，日本)，并允许过夜，然后细胞分别用化合物8和不使用化合物8处理7天（化合物8的浓度为5 μm）。然后用hoechst 33342(beyotime; 中国c1022)，并使用荧光显微镜捕获。不使用化合物8处理为控制组。
[0078]
实验结果显示，化合物8可以抑制mda-mb-231细胞的增殖（图4a）。
[0079]
（3）edu细胞增殖试验：mda-mb-231细胞(3
ꢀ×ꢀ
104细胞/孔)接种于24孔板中，用化合物8（5 μm）孵育24小时。然后，再用10 μmedu试剂培养4小时，并按照说明书(beyotime；中国c0071s)进行。不使用化合物8处理为控制组。
[0080]
实验结果显示，与对照组相比，化合物8明显降低了edu与hoechst的共标记数（图4b）。这些结果表明化合物8可以抑制tnbc细胞的增殖。
[0081]
（4）划痕试验：通过划痕试验进一步分析了化合物8对mda-mb-231细胞迁移的影响。具体实验方法：mda-mb-231细胞(20
ꢀ×ꢀ
104细胞/孔)接种于6孔板中，在无血清培养基中培养24小时。然后，用塑料移液管尖划伤细胞，加入正常培养基或含化合物8的培养基培养（化合物8的浓度为5 μm）。在指定时间用相位对比显微镜观察细胞的创面愈合速度。加入正常培养基的为控制组。
[0082]
实验结果显示，化合物8处理的细胞伤口闭合率降低（图4c）。
[0083]
（5）transwell实验：mda-mb-231细胞(2
ꢀ×ꢀ
104细胞/孔)接种于transwell过滤器(8 μm孔，corning)，顶室加入无血清dmem培养基和化合物8（5 μm），底室添加5%胎牛血清的dmem。细胞在37
°
c下迁移/侵袭12 h。滤器底部细胞用4%多聚甲醛固定，用0.1%结晶紫染色。图像在倒置显微镜下拍摄，用image j量化。加入无血清dmem培养基的为控制组。
[0084]
transwell实验的结果也证实了化合物8可以抑制mda-mb-231细胞的迁移（图4d）。
[0085]
（5）免疫荧光和免疫印迹分析（western blot）：免疫荧光分析：将mda-mb-231细胞(3
ꢀ×ꢀ
104细胞/孔)接种到24孔培养板中，让其粘附过夜。细胞分别用化合物8和不使用化合物8处理7天（化合物8的浓度为0、2.5、5、10 μm）。mda-mb-231细胞依次用4%多聚甲醛固定，用0.2% triton x-100 (sigma-aldrich, 9002-93-1)打孔，用5%山羊血清(sigma-aldrich, g9023)孵育。用一抗在4℃孵育过夜，然后用二抗(tritc, ab6718;fitc, ab6717)在室温下放置60分钟。使用共聚焦激光扫描显微镜捕获图像。不使用化合物8处理为控制组。
[0086]
免疫印迹分析：收集mda-mb-231细胞，用裂解缓冲液在4℃下裂解30分钟。然后依次离心(12000 rpm, 10分钟)并定量(bio-rad laboratories, hercules, ca, usa)。等量的总蛋白通过10-15%sds-page分离，转移到pvdf膜上。用5%脱脂奶粉阻断后，用一抗检测膜蛋白，然后用酶标二抗检测膜蛋白，用ecl作为hrp底物进行显像。
[0087]
根据免疫荧光和免疫印迹分析：还观察到mda-mb-231细胞被化合物8处理后e-cadherin上调，mmp-2下调（图4e-g和图3b）。
[0088]
综上所述，这些结果表明化合物8可以抑制tnbc细胞的迁移。
[0089]
综上，本发明提供了一系列具有抗乳腺癌活性的氟化异黄酮类化合物，这些氟化异黄酮类化合物可选择性抑制pi3kα/β/δ，尤其是对δ亚型pi3k具有良好的抑制活性，还可以有效抑制肿瘤的生长和转移，其中化合物8效果最佳。本发明找到一种有效的pi3k抑制
剂，对乳腺癌治疗具有重要意义。

技术特征：
1.式i所示化合物、其盐、其立体异构体、其溶剂合物或其水合物：式i其中，r1选自取代或未取代的c1~c8烷基、取代或未取代的c1~c8烷氧基、取代或未取代的6~12元芳基、取代或未取代的6~12元杂芳基、取代或未取代的3~8元环烷基、取代或未取代的4~8元杂环烷基；所述烷基、烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基的取代基选自c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基、三氟甲基、6~12元芳基、6~12元杂芳基、3~8元环烷基、4~8元杂环烷基；所述杂芳基、杂环烷基的杂原子为o、n或s，所述杂原子的个数为1、2或3个；r2连接在苯环任意位置上，m为r2的个数；m为1、2、3或4；每个r2分别独立选自氢、取代或未取代的c1~c8烷基、取代或未取代的c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基，或者两个相邻的r2与苯环形成萘基；所述烷基、烷氧基的取代基选自c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基；r
f
选自取代或未取代的c1~c8烷基；所述烷基的取代基选自卤素、-c(o)or3，且所述烷基至少被1个氟取代；r3选自c1~c8烷基。2.根据权利要求1所述的化合物、其盐、其立体异构体、其溶剂合物或其水合物，其特征在于：所述化合物为式ii所示：式ii其中，r4连接在苯环任意位置上，n为r4的个数；n为1、2、3或4；每个r4分别独立选自氢、c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基、三氟甲基、6~12元芳基、6~12元杂芳基、3~8元环烷基、4~8元杂环烷基；所述杂芳基、杂环烷基的杂原子为o、n或s，所述杂原子的个数为1、2或3个；r2连接在苯环任意位置上，m为r2的个数；m为1、2、3或4；每个r2分别独立选自氢、取代或
未取代的c1~c8烷基、取代或未取代的c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基，或者两个相邻的r2与苯环形成萘基；所述烷基、烷氧基的取代基选自c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基；r
f
选自取代或未取代的c1~c8烷基；所述烷基的取代基选自卤素、-c(o)or3，且所述烷基至少被1个氟取代；r3选自c1~c8烷基。3.根据权利要求2所述的化合物、其盐、其立体异构体、其溶剂合物或其水合物，其特征在于：所述化合物为式iii所示：式iii其中，r2连接在苯环任意位置上，m为r2的个数；m为1、2、3或4；每个r2分别独立选自氢、取代或未取代的c1~c8烷基、取代或未取代的c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基，或者两个相邻的r2与苯环形成萘基；所述烷基、烷氧基的取代基选自c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基。4.根据权利要求2所述的化合物、其盐、其立体异构体、其溶剂合物或其水合物，其特征在于：所述化合物为式iva所示：式iva其中，r4连接在苯环任意位置上，n为r4的个数；n为1、2、3或4；每个r4分别独立选自氢、c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基、三氟甲基、6~12元芳基、6~12元杂芳基、3~8元环烷基、4~8元杂环烷基；所述杂芳基、杂环烷基的杂原子为o、n或s，所述杂原子的个
数为1、2或3个；或者，所述化合物为式ivb所示：式ivb其中，r4连接在苯环任意位置上，n为r4的个数；n为1、2、3或4；每个r4分别独立选自氢、c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基、三氟甲基、6~12元芳基、6~12元杂芳基、3~8元环烷基、4~8元杂环烷基；所述杂芳基、杂环烷基的杂原子为o、n或s，所述杂原子的个数为1、2或3个；或者，所述化合物为式ivc所示：式ivc其中，r4连接在苯环任意位置上，n为r4的个数；n为1、2、3或4；每个r4分别独立选自氢、c1~c8烷基、c1~c8烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基、三氟甲基、6~12元芳基、6~12元杂芳基、3~8元环烷基、4~8元杂环烷基；所述杂芳基、杂环烷基的杂原子为o、n或s，所述杂原子的个数为1、2或3个。5.根据权利要求2所述的化合物、其盐、其立体异构体、其溶剂合物或其水合物，其特征在于：所述化合物为式v所示：
式v其中，r
f
选自取代或未取代的c1~c8烷基；所述烷基的取代基选自卤素、-c(o)or3，且所述烷基至少被1个氟取代；r3选自c1~c8烷基。6.根据权利要求1所述的化合物、其盐、其立体异构体、其溶剂合物或其水合物，其特征在于：r1选自c1~c3烷基、取代或未取代的苯基、苯并二恶唑；所述苯基的取代基选自c1~c3烷基、c1~c3烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基、三氟甲基、苯基；r2连接在苯环任意位置上，m为r2的个数；m为1、2、3或4；每个r2分别独立选自氢、c1~c3烷基、c1~c3烷氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、羧基、羟基，或者两个相邻的r2与苯环形成萘基；r
f
选自取代或未取代的c1~c8烷基；所述烷基的取代基选自卤素、-c(o)or3，且所述烷基至少被1个氟取代；r3选自c1~c3烷基。7.根据权利要求1~6任一项所述的化合物、其盐、其立体异构体、其溶剂合物或其水合物，其特征在于：所述化合物为如下化合物之一：物，其特征在于：所述化合物为如下化合物之一：
。
8.权利要求1~7任一项所述的化合物、其盐、其立体异构体、其溶剂合物或其水合物在制备pi3k抑制剂或抗癌药物中的用途。9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述抗癌药物为预防和/或治疗乳腺癌的药物。10.一种药物，其特征在于：它是以权利要求1~7任一项所述的化合物、其盐、其立体异构体、其溶剂合物或其水合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而得的制剂。

技术总结
本发明提供了氟化异黄酮类化合物、其药物及其选择性抑制PI3K的用途，属于生物医药技术领域。本发明氟化异黄酮类化合物是式I所示化合物、其盐、其立体异构体、其溶剂合物或其水合物。本发明提供的氟化异黄酮类化合物具有抗乳腺癌活性，可选择性抑制PI3Kα/β/δ，尤其是对δ亚型PI3K具有良好的抑制活性，还可以有效抑制肿瘤的生长和转移，其中化合物8效果最佳。本发明找到一种有效的PI3K抑制剂，对乳腺癌治疗具有重要意义。疗具有重要意义。疗具有重要意义。疗具有重要意义。


技术研发人员：韩波 刘燕青 黄维 李俊龙 朱红萍
受保护的技术使用者：四川省医学科学院
技术研发日：2023.08.24
技术公布日：2023/9/22