用于定量检测人血液中GDF15含量的试纸条及其制备方法、检测卡及试剂盒与流程

用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条及其制备方法、检测卡及试剂盒
技术领域
1.本技术涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条及其制备方法、检测卡及试剂盒。


背景技术：

2.生长分化因子15(gdf-15)，又称为tgf-pl、mic-1、pdf、plab和ptgfb，是转化生长因子β超家族中的一员，在调节损伤组织和疾病过程中的炎症和凋亡途径中起作用。在生理状态下唯一能大量表达gdf15的正常组织是胎盘。gdf15很容易在血液中检测到，其浓度随年龄而改变。事实上，血液中gdf15浓度在很多病理条件下都会增加，例如肿瘤、炎症、急慢性疾病等。
3.gdf15可用于肝癌的早期诊断，以及心脑血管疾病的诊断，此外，当身体经历急性或长期的应激时会激发gdf15的活性，影响人体代谢，造成过度肥胖或体重不足，检测gdf15可有助干机体代谢监测、治疗及相关药物开发。目前，国内gdf15的检测主要采用进口试剂和免疫组化试剂，国内开发的试剂盒多采用化学发光方法和酶联免疫法，这些方法检测步骤多，检测时间长，同时，引进的影响因素较多，检测结果易造成偏差，检测精度不高。


技术实现要素：

4.本技术实施例所要解决的技术问题是相关技术中，gdf15检测时间长以及检测精度低的技术问题。
5.为了解决上述技术问题，本技术实施例提供一种用于定量检测定量检测人血液中gdf15含量gdf15含量的试纸条的制备方法，采用了如下所述的技术方案：
6.配制荧光微球标记抗体溶液，将所述荧光微球标记抗体溶液喷涂于结合垫上，其中，所述荧光微粒标记抗体溶液包括gdf15标记抗体和羊抗兔igg标记抗体；
7.制备gdf15包被抗体溶液和兔igg包被抗体溶液；
8.在硝酸纤维素膜上设置间隔平行的第一划膜线和第二划膜线，将所述gdf15包被抗体溶液喷涂至硝酸纤维素膜上的第一划膜线，形成检测线，将所述兔igg包被抗体溶液喷涂至硝酸纤维素膜上的第二划膜线，形成质控线，其中，所述检测线包被gdf15抗体，所述质控线包被兔igg抗体；
9.将预处理的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次接触式平铺在一底板上，制得检测试纸；
10.将检测试纸按照预设大小进行切割，得到试纸条。
11.进一步的，所述配制荧光微球标记抗体溶液的步骤包括：
12.取荧光微球加入装有2-吗啉乙磺酸缓冲溶液的离心管中，超声至混合均匀，得到荧光微球混合液；
13.量取活化液，加入荧光微球混合液中，超声至分散均匀，得到活化混合液；
14.对活化混合液进行离心，并去上清，留取沉淀；
15.往沉淀中加入2-吗啉乙磺酸缓冲溶液，依次进行旋涡超声后，加入gdf15标记抗体进行旋转反应，静止后，加入羊抗兔igg标记抗体，得到标记抗体反应物；
16.向标记抗体反应物加入牛血清蛋白溶液进行封闭，并进行离心；
17.去上清后加入三羟甲基氨基甲烷缓冲液，并进行超声和离心，并重复此步骤一次；
18.去上清后加入微球复溶液，依次进行超声和离心，去沉淀得到荧光微粒标记抗体溶液。
19.进一步的，所述制备gdf15包被抗体溶液和兔igg包被抗体溶液的步骤包括：
20.配制包被液；
21.使用包被液稀释gdf15包被抗体，得到gdf15包被抗体溶液；
22.使用包被液稀释兔igg包被抗体，得到兔igg包被抗体溶液。
23.进一步的，所述gdf15标记抗体和所述羊抗兔igg标记抗体在所述结合垫上的终浓度均为0.3mg/ml。
24.进一步的，所述gdf15包被抗体在所述硝酸纤维素膜上的终浓度为1mg/ml，所述兔igg包被体在所述硝酸纤维素膜上的终浓度均为0.5mg/ml。
25.为了解决上述技术问题，本技术实施例还提供一种用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条，该试纸条采用如上所述的试纸条制备方法制备。
26.为了解决上述技术问题，本技术实施例还提供一种用于定量检测人血液中gdf15含量的检测卡，采用了如下所述的技术方案：
27.该检测卡包括试纸壳和采用如上所述的试纸条制备方法制得的试纸条，所述试纸条安装于所述试纸壳内。
28.为了解决上述技术问题，本技术实施例还提供一种用于定量检测人血液中gdf15含量的试剂盒，采用了如下所述的技术方案：
29.包括样品稀释液、gdf15检测芯片以及采用如上所述的检测卡，其中：
30.所述样品稀释液用于稀释待测样本；
31.所述检测卡用于检测待测样本中的gdf15含量；
32.所述gdf15检测芯片用于存储试剂标准曲线信息，以读取待测样本的检测结果。
33.进一步的，所述待测样本的类型包括全血样本、血浆样本以及血清样本。
34.进一步的，所述全血样本的采集方法如下：
35.采用含有肝素锂、edta-k2或柠檬酸钠抗凝剂的抗凝管采集受检者静脉血，并将采集到的静脉血摇匀后得到；
36.所述血浆样本的采集方法如下：
37.采用含有肝素锂、edta-k2或柠檬酸钠抗凝剂的抗凝管采集受检者静脉血，并分离得到血浆；
38.所述血清样本的采集方法如下：
39.采用血清管或含有促凝剂的快速血清管采集受检者静脉血，并分离得到血清。
40.与现有技术相比，本技术实施例主要有以下有益效果：
41.本技术提供的试纸条，基于荧光定量免疫层析技术，通过待测样本依次与结合垫上的荧光微粒标记抗体溶液中的gdf15标记抗体和羊抗兔igg标记抗体，以及硝酸纤维素膜
上检测线的gdf15包被抗体和质控线的兔igg抗体反应，形成“抗体-抗原-荧光抗体”复合物，可以gdf15检测的检测速度，缩短检测时间，同时提高检测灵敏度、增强特异性，进一步提高检测的精度，此外，操作简便、成本低，应用前景广。
附图说明
42.为了更清楚地说明本技术中的方案，下面将对本技术实施例描述中所需要使用的附图作一个简单介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
43.图1是根据本技术的用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条的制备方法的一个实施例的流程图。
具体实施方式
44.除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本技术的技术领域的技术人员通常理解的含义相同；本文中在申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本技术；本技术的说明书和权利要求书及上述附图说明中的术语“包括”和“具有”以及它们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。本技术的说明书和权利要求书或上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别不同对象，而不是用于描述特定顺序。
45.在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本技术的至少一个实施例中。在说明书中的各个位置出现该短语并不一定均是指相同的实施例，也不是与其它实施例互斥的独立的或备选的实施例。本领域技术人员显式地和隐式地理解的是，本文所描述的实施例可以与其它实施例相结合。
46.为了使本技术领域的人员更好地理解本技术方案，下面将结合附图，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
47.本技术实施例提供了一种用于定量检测定量检测人血液中gdf15含量gdf15含量的试纸条制备方法，参见图1所示，该方法包括如下步骤：
48.步骤s10，配制荧光微球标记抗体溶液，将荧光微球标记抗体溶液喷涂于结合垫上，其中，荧光微粒标记抗体溶液包括gdf15标记抗体和羊抗兔igg标记抗体。
49.在本实施例中，gdf15标记抗体的生物源性为鼠源单克隆igg，其标记有荧光微球，羊抗兔igg标记抗体的生物源性为羊源抗体，其标记有荧光微球。
50.具体的，配制荧光微球标记抗体溶液的步骤如下：
51.取荧光微球加入装有2-吗啉乙磺酸缓冲溶液的离心管中，超声至混合均匀，得到荧光微球混合液，其中，荧光微球可取100μl，2-吗啉乙磺酸缓冲溶液(mes)为800μl；
52.量取活化液，加入荧光微球混合液中，超声至分散均匀，得到活化混合液，其中，活化液量取30μl，活化液中包含1-乙基-碳酰二亚胺盐酸盐(edc)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)，edc和nhs的混合比例为1:1；
53.对活化混合液进行离心，并去上清，留取沉淀，其中，活化混合液在室温下平衡一定时间后进行离心15min，离心条件为12000r/min，4℃；
54.往沉淀中加入2-吗啉乙磺酸缓冲溶液，依次进行旋涡超声后，加入gdf15标记抗体
进行旋转反应，静止后，加入羊抗兔igg标记抗体，得到标记抗体反应物，其中，2-吗啉乙磺酸缓冲溶液(mes缓冲液)加入量为1ml，gdf15标记抗体取0.3mg，羊抗兔igg标记抗体取0.3mg，旋转反应进行2h，使得标记抗体与荧光微球进行偶联；
55.向标记抗体反应物加入牛血清蛋白溶液进行封闭，并进行离心，其中，牛血清蛋白溶液(bsa)具体为100μl 10％bsa，封闭30min，以12000r/min，4℃的离心条件离心15min；
56.去上清后加入三羟甲基氨基甲烷缓冲液，并进行超声和离心，并重复此步骤一次，其中，三羟甲基氨基甲烷(tris)缓冲液可加入1ml，离心条件为12000r/min，4℃，离心时间为15min；
57.去上清后加入微球复溶液，依次进行超声和离心，去沉淀得到荧光微粒标记抗体溶液，其中，微球复溶液取1ml，离心条件为2000r/min，4℃，离心时间为3min，得到的荧光微粒标记抗体溶液在4℃避光保持。
58.具体的，上述超声均进行3min。
59.将制备的荧光微粒标记抗体溶液以6μl/cm的速度均匀喷在结合垫上，并在55℃进行3-4h的烘干操作。
60.在本实施例中，gdf15标记抗体和羊抗兔igg标记抗体在结合垫上的终浓度均为0.3mg/ml。
61.步骤s20，制备gdf15包被抗体溶液和兔igg包被抗体溶液。
62.在本实施例中，预先配制包被液，用来稀释gdf15包被抗体和兔igg包被抗体，以制得gdf15包被抗体溶液和兔igg包被抗体溶液。gdf15包被抗体的生物源性为鼠源单克隆igg，兔igg包被抗体的生物源性为兔源抗体。
63.具体的，包被液含有三羟甲基氨基甲烷和蔗糖，三羟甲基氨基甲烷(tris)的浓度为0.05m，蔗糖为1％蔗糖。
64.步骤s30，在硝酸纤维素膜上设置间隔平行的第一划膜线和第二划膜线，将gdf15包被抗体溶液喷涂至硝酸纤维素膜上的第一划膜线，形成检测线，将兔igg包被抗体溶液喷涂至硝酸纤维素膜上的第二划膜线，形成质控线。
65.在本实施例中，将硝酸纤维素膜贴在底板上，并在硝酸纤维素膜上相互平行间隔设置有第一划膜线和第二划膜线，将gdf15包被抗体溶液喷涂至硝酸纤维素膜上的第一划膜线，形成检测线，将兔igg包被抗体溶液喷涂至硝酸纤维素膜上的第二划膜线，形成质控线，对喷涂后的硝酸纤维素膜进行干燥，干燥时间可以选择48h。
66.其中，gdf15包被抗体溶液中gdf15包被抗体浓度为1mg/ml，使得gdf15包被抗体在硝酸纤维素膜上的终浓度为1mg/ml；兔igg包被抗体溶液中的兔igg包被抗体浓度为0.5mg/ml，使得兔igg包被体在硝酸纤维素膜上的终浓度均为0.5mg/ml。
67.步骤s40，将预处理的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次接触式平铺在一底板上，制得检测试纸。
68.在本实施例中，样品垫用处理液进行预处理，处理液的组分包括bb、蔗糖、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮(pvpk3o)以及人抗红细胞抗体(rbc)。
69.优选的，处理液中各组分的浓度分别为：bb为0.1m，蔗糖为1％(100ml稀释液中含有1g蔗糖)，海藻糖为1％(100ml稀释液中含有1g海藻糖)，聚乙烯吡咯烷酮为1％(100ml稀释液中含有1g聚乙烯吡咯烷酮)，人抗红细胞抗体为0.1mg/ml。
70.将处理液按3-4ml/条(每条样品垫宽：3.5-3.6cm，长：30cm)均匀涂抹在样品垫上，并在55℃进行6-8h的烘干操作，得到预处理后的样品垫。
71.在本实施例中，底板可选pvc底板，硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane，nc膜)贴在pvc底板上，然后，将样品垫、结合垫和吸水垫依次固定于底板上，其中，样品垫的一端与结合垫的一端搭接，结合垫的另一端与硝酸纤维素膜的一端搭接，吸水垫的一端与硝酸纤维素膜的另一端搭接，制得检测试纸。
72.步骤s50，将检测试纸按照预设大小进行切割，得到试纸条。
73.在本实施例中，样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次贴在pvc底板上进行组装，组装完成后，得到检测试纸，经切条机将检测试纸切割成3.85-4.00mm宽度的免疫层析试纸条。
74.本技术实施例还提供一种用于定量检测定量检测人血液中gdf15含量gdf15含量的检测卡，该检测卡包括试纸壳和采用如上所述的试纸条制备方法制得的试纸条，试纸条安装于所述试纸壳内。
75.具体的，在试纸壳上设置加样孔和观察窗口，其中，加样孔位于样品垫区域，观察窗口位于硝酸纤维素膜区域。试纸壳包括壳上盖和壳下盖，将试纸条嵌入壳下盖，将壳上盖盖于壳下盖上，置于压壳设备上压牢，组装得到检测卡。
76.本技术实施例还提供一种用于定量检测定量检测人血液中gdf15含量gdf15含量的试剂盒，该试剂盒包括样品稀释液、gdf15检测芯片以及采用如上所述的检测卡。
77.其中，样品稀释液用于稀释待测样本；检测卡用于检测待测样本中的gdf15含量；gdf15检测芯片用于存储试剂标准曲线信息，以读取待测样本的检测结果。
78.具体的，样品稀释液包括0.01m pb、1％聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、1％氯化钠以及1％吐温，即100ml稀释液中含有1gpvp、1g氯化钠及1g吐温。
79.将样品稀释液、gdf15检测芯片和检测卡进行组装，得到试剂盒，试剂盒的主要组成成分、包装及数量参见表1所示。
80.表1试剂盒的主要组成成分、包装及数量
[0081][0082]
在本实施例中，试剂盒的待测样本类型包括全血样本、血浆样本以及血清样本。
[0083]
在一些可选的实现中，全血样本的采集方法为：采用含有肝素锂、edta-k2或柠檬
酸钠抗凝剂的抗凝管采集受检者静脉血，并将采集到的静脉血摇匀后得到。
[0084]
血浆样本的采集方法为：采用含有肝素锂、edta-k2或柠檬酸钠抗凝剂的抗凝管采集受检者静脉血，并分离得到血浆。
[0085]
血清样本的采集方法为：采用血清管或含有促凝剂的快速血清管采集受检者静脉血，并分离得到血清。
[0086]
需要说明的是，采血后应尽快分离血浆或者血清，以免溶血。
[0087]
不同类型样本采集后应尽可能立即使用。若不能及时检测，血清/血浆/全血室温放置可保存3小时；血清/血浆2℃～8℃放置可保存7天，全血2℃～8℃放置可保存3天；血清/血浆-20
±
5℃放置可保存90天，全血样本不能冷冻保存。冷藏、冷冻样本检测前要充分溶解混匀，并恢复至室温后方可进行测试，请勿反复冻融。
[0088]
本技术的试剂盒用于判定检测有效性的标准为：每次检测，质控线出现荧光条带，且试纸卡未出现损坏，仪器未出现故障，表明实验结果有效。
[0089]
具体的，取待检测的血清、血浆或全血样品20-30ul加入到100ul的上述样品稀释液中，待混合均匀后滴加至免疫层析检测卡上进行免疫层析反应；随后在荧光检测器下采用与荧光微粒相对应的发射光波长进行荧光检测。荧光检测器下荧光检测时，仅在质检线上检测到信号，才能证明检测结果是有效的。
[0090]
基于上述试剂盒，对gdf15含量进行检测的检测原理为：
[0091]
检测时，将血液样本加入到检测卡的样品垫上，通过毛细管作用下进行层析，在结合垫上，血液样本中gdf15抗原和荧光微球标记gdf15抗体发生特异性结合，扩散至反应板，被检测线包被的gdf15抗体捕获，形成“抗体-抗原-荧光抗体”复合物。血液样本中的gdf15浓度与复合物荧光强度成正比，根据设定的试剂标准曲线，免疫荧光检测仪将荧光信号值转换成血液样本中gdf15浓度。
[0092]
基于上述试剂盒，本技术还提供一种人体血浆以及全血样本中生长分化因子15(gdf15)快速检测的方法，具体步骤包括：
[0093]
(1)打开仪器，插入与试剂批号相同的gdf15检测芯片；
[0094]
(2)用移液器吸取100μl样本，加入到样品稀释液中，上下颠倒混匀；
[0095]
(3)取出检测卡，水平放置于桌面上；
[0096]
(4)用移液器吸取稀释后混匀的样本100μl，加入到检测卡的加样孔中；
[0097]
(5)在配套仪器上选择样本类型“血浆、血清或全血”；
[0098]
(6)即时测试：待室温反应15min后，将检测卡放入仪器卡槽中，选择“即时测试”模式，点击“测试”；标准测试：将检测卡放入仪器卡槽中，选择“标准测试”模式，点击“测试”，仪器自动计时，计时结束后，自动测试并显示结果；
[0099]
(7)点击“打印”，可打印检测结果报告。
[0100]
本技术实施例中，对试剂盒的空白限性能进行评估，具体的，取阴性牛血清100μl加入100μl样品稀释液，混匀后取100μl加入到检测卡的加样孔中，15min后采用荧光检测器检测，重复20次。其相对t/c平均值(m)和标准差(sd)，得出m+2sd所对的数值，将其带入标准曲线方程中，得出相应浓度值，即为空白限。实验结果参见表2所示，结果表明，本技术试剂盒的空白限为不大于1.00pg/ml。
[0101]
表2空白限测试结果
[0102]
[0103]
[0104][0105]
在一些可选的实现方式中，对试剂盒的线性性能进行评估实验，具体的，采用阴性牛血清作为稀释液，将生长分化因子15(gdf15)标准品配制成浓度为1pg/ml、10pg/ml、50pg/ml、200pg/ml、800pg/ml的标准品溶液，取标准品100μl加入100μl样品稀释液，混匀后取100μl加入到检测卡的加样孔中，15min后采用荧光检测器检测。实验结果参见表3所示，结果表明，线性的相关系数r2大于0.9900，检测限1.00pg/ml，各浓度的检测变异系数均小于10％。
[0106]
表3不同浓度标准品线性性能检测实验结果
[0107][0108]
在本实施例中，对本技术试剂盒的准确度性能进行评估实验，具体的，试取一定量的生长分化因子15(gdf15)标准品添加到阴性小牛血清中，使血清中gdf15终浓度分别为10pg/ml、200pg/ml，各重复6个。将100μl待测样本与100μl试剂盒中的样本稀释液充分混合1min，然后取100μl混合液加入试剂卡的加样孔中，将试剂卡水平放置15min后插入荧光定量检测仪中，读取荧光信号t/c值，根据标准曲线计算出相应的样本浓度。通过表4的试验数据可看出，6个样本的相对偏差均不超过
±
15％。
[0109]
表4准确度测试实验结果
[0110]
[0111]
基于上述试剂盒，将其应用至临床实验中，具体的，从医院采集20例全血、血浆样本，取100μl的样品稀释液于小离心管中，然后用移液枪吸取100μl的临床样本于小离心管中，混合液用漩涡振荡器摇匀反应1min后，用移液枪吸取100μl混合液于试剂卡的加样孔中加样(加样过程中注意不要将气泡打入加样孔中，以防气泡进入层析系统影响测定结果)。每个样本平行检测两次。将试剂卡水平放置15min，层析反应后插入荧光定量检测仪中进行读取t/c值。用标曲反求出待测值，与临床样本值进行比对，实验结果参见表5所示。
[0112]
表5 20例全血、血浆样本检测结果
[0113]
[0114][0115]
由表5可知，20份临床样本有2个阴性，28个阳性，经本试剂盒检测时结果与之一致，此外，通过分析本试剂盒测试值与临床样本值的相关性可知，两者测试结果相关性良好。以上结果说明本试剂盒定量检测人体全血和血浆样本gdf15的含量较为可靠。
[0116]
本技术的试剂盒基于免疫学原理的定量检测方法对gdf15进行检测，可以提高gdf15检测的检测速度、缩短检测时间，同时gdf15检测的检测灵敏度高、特异性强。
[0117]
显然，以上所描述的实施例仅仅是本技术一部分实施例，而不是全部的实施例，附图中给出了本技术的较佳实施例，但并不限制本技术的专利范围。本技术可以以许多不同的形式来实现，相反地，提供这些实施例的目的是使对本技术的公开内容的理解更加透彻全面。尽管参照前述实施例对本技术进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来而言，其依然可以对前述各具体实施方式所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等效替换。凡是利用本技术说明书及附图内容所做的等效结构，直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理在本技术专利保护范围之内。

技术特征：
1.一种用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：配制荧光微球标记抗体溶液，将所述荧光微球标记抗体溶液喷涂于结合垫上，其中，所述荧光微粒标记抗体溶液包括gdf15标记抗体和羊抗兔igg标记抗体；制备gdf15包被抗体溶液和兔igg包被抗体溶液；在硝酸纤维素膜上设置间隔平行的第一划膜线和第二划膜线，将所述gdf15包被抗体溶液喷涂至所述第一划膜线，形成检测线，将所述兔igg包被抗体溶液喷涂至硝酸纤维素膜上的第二划膜线，形成质控线，其中，所述检测线包被gdf15抗体，所述质控线包被兔igg抗体；将预处理的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次接触式平铺在一底板上，制得检测试纸；将检测试纸按照预设大小进行切割，得到试纸条。2.根据权利要求1所述的用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条的制备方法，其特征在于，所述配制荧光微球标记抗体溶液的步骤包括：取荧光微球加入装有2-吗啉乙磺酸缓冲溶液的离心管中，超声至混合均匀，得到荧光微球混合液；量取活化液，加入荧光微球混合液中，超声至分散均匀，得到活化混合液；对活化混合液进行离心，并去上清，留取沉淀；往沉淀中加入2-吗啉乙磺酸缓冲溶液，依次进行旋涡超声后，加入gdf15标记抗体进行旋转反应，静止后，加入羊抗兔igg标记抗体，得到标记抗体反应物；向标记抗体反应物加入牛血清蛋白溶液进行封闭，并进行离心；去上清后加入三羟甲基氨基甲烷缓冲液，并进行超声和离心，并重复此步骤一次；去上清后加入微球复溶液，依次进行超声和离心，去沉淀得到荧光微粒标记抗体溶液。3.根据权利要求1所述的用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备gdf15包被抗体溶液和兔igg包被抗体溶液的步骤包括：配制包被液；使用包被液稀释gdf15包被抗体，得到gdf15包被抗体溶液；使用包被液稀释兔igg包被抗体，得到兔igg包被抗体溶液。4.根据权利要求1所述的用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条的制备方法，其特征在于，所述gdf15标记抗体和所述羊抗兔igg标记抗体在所述结合垫上的终浓度均为0.3mg/ml。5.根据权利要求3所述的用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条的制备方法，其特征在于，所述gdf15包被抗体在所述硝酸纤维素膜上的终浓度为1mg/ml，所述兔igg包被体在所述硝酸纤维素膜上的终浓度均为0.5mg/ml。6.一种用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条，其特征在于，采用如权利要求1至5中任一项所述的试纸条制备方法制备。7.一种用于定量检测人血液中gdf15含量的检测卡，其特征在于，包括试纸壳和如权利要求6中所述的试纸条，所述试纸条安装于所述试纸壳内。8.一种用于定量检测人血液中gdf15含量的试剂盒，其特征在于，包括样品稀释液、
gdf15检测芯片以及采用如权利要求7所述的检测卡，其中：所述样品稀释液用于稀释待测样本；所述检测卡用于检测待测样本中的gdf15含量；所述gdf15检测芯片用于存储试剂标准曲线信息，以读取待测样本的检测结果。9.根据权利要求8所述的用于定量检测人血液中gdf15含量的试剂盒，其特征在于，所述待测样本的类型包括全血样本、血浆样本以及血清样本。10.根据权利要求9所述的用于定量检测人血液中gdf15含量的试剂盒，其特征在于，所述全血样本的采集方法如下：采用含有肝素锂、edta-k2或柠檬酸钠抗凝剂的抗凝管采集受检者静脉血，并将采集到的静脉血摇匀后得到；所述血浆样本的采集方法如下：采用含有肝素锂、edta-k2或柠檬酸钠抗凝剂的抗凝管采集受检者静脉血，并分离得到血浆；所述血清样本的采集方法如下：采用血清管或含有促凝剂的快速血清管采集受检者静脉血，并分离得到血清。

技术总结
本申请实施例属于生物医药技术领域，涉及一种用于定量检测人血液中GDF15含量的试纸条及其制备方法、检测卡及试剂盒，包括配制荧光微球标记抗体溶液，将荧光微球标记抗体溶液喷涂于结合垫上，其中，荧光微粒标记抗体溶液包括GDF15标记抗体和羊抗兔IgG标记抗体；制备GDF15包被抗体溶液和兔IgG包被抗体溶液，将GDF15包被抗体溶液喷涂至硝酸纤维素膜上的第一划膜线，形成检测线，将兔IgG包被抗体溶液喷涂至硝酸纤维素膜上的第二划膜线，形成质控线；将预处理的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次接触式平铺在一底板上，制得检测试纸；将检测试纸按照预设大小进行切割，得到试纸条。本申请可以缩短检测时间，提高检测的精度。精度。精度。


技术研发人员：齐文闯 蒋析文 刘双 潘秀华 徐鸿 李俊玉
受保护的技术使用者：广州达安基因股份有限公司
技术研发日：2022.03.18
技术公布日：2023/9/22