一种恶性胶质瘤生物标志物的应用

1.本发明属于生物技术，病理检验和肿瘤学领域，具体涉及一种恶性胶质瘤生物标志物的应用。


背景技术：

2.多形性胶质母细胞瘤(gbm)是中枢神经系统(cns)中常见的恶性肿瘤，是严重威胁人类健康的疾病之一。胶质瘤细胞具有快速增殖、迁移和侵袭的特征以及刺激血管生成的能力，因此胶质瘤以一种扩张性和侵入性的方式生长，并趋向于更高的等级发展。脑胶质瘤根据世界卫生组织的标准可分为：ⅰ～ⅳ级。低级别胶质瘤(lgg)是whoi和ii级胶质瘤，高级别胶质瘤是whoiii和iv级胶质瘤。目前胶质瘤患者的标准治疗方法是手术切除，然后放疗和化疗。作为胶质瘤的最高级别，gbm占所有胶质瘤的一半以上，基本上是不可治愈的，接受当前标准治疗的gbm患者的中位生存期为诊断后14.6个月，5年生存率仅为9.8％。由于治疗耐药和肿瘤复发，人们一直在努力寻找调节gbm发生发展的分子，这些分子在调节gbm迁移和侵袭过程中具有重要作用，可能作为重要的治疗靶点。因此瞄准调节gbm发展和侵袭的关键分子对于开发有效的分子标志物和治疗靶点具有重要临床意义，为胶质瘤患者提供额外的治疗手段，发展有效的靶向分子治疗是必要的。
3.sectm1长度约为14kb，编码8kbmrna，翻译后是一种大小为27kda的i型跨膜蛋白，以跨膜和可溶性形式存在，其可溶性形式是cd7的配体。sectm1在多种正常细胞中表达，包括中性粒细胞、树突状细胞和上皮细胞，但在外周淋巴细胞中不表达。sectm1在许多肿瘤中高度表达，
4.包括黑色素瘤细胞，它也在乳腺癌和前列腺癌细胞系以及一些髓系白血病中高度表达。sectm1在白血病中高度表达的潜在作用是与cd7结合激活t细胞和nk细胞并刺激其增殖。sectm1在黑色素瘤细胞中的表达表明，sectm1可能通过诱导单核细胞功能从而调节肿瘤微环境发挥作用。然而，sectm1在恶性胶质瘤中的表达，诊断、治疗和预后判断中的应用目前并无相关报道。


技术实现要素：

5.技术问题：本发明提供一种恶性胶质瘤生物标志物的应用，明确了sectm1在胶质瘤细胞与正常星形胶质细胞中的表达以及在胶质瘤中的作用；阐明sectm1调控胶质瘤增殖、迁移、侵袭等恶性表型的作用；如何靶向sectm1或其结合的关键靶分子。制备了用于检测sectm1表达的抗体和试剂盒的特异性，基于sectm1蛋白与晶体结构结合计算机算法预测的小分子化合物设计合成，以及通过噬菌体展示技术等抗体筛选方法筛选靶向sectm1的治疗性抗体。
6.用于检测sectm1的物质在制备如下任意一种或多种产品中的应用：
7.(a1)、胶质瘤诊断或辅助诊断产品；
8.(a2)、胶质瘤预后评估或辅助预后评估产品。
9.进一步地，所述应用(a1)中，胶质瘤诊断或辅助诊断包括对sectm1在胶质瘤中的表达差异性进行诊断分析；或，所述应用(a2)中，胶质瘤预后评估包括对患者胶质瘤术后总体生存期的预测；
10.优选地，所述产品包括检测试剂盒或者药物。
11.进一步地，用于检测sectm1表达差异性的物质包括针对sectm1rna或者sectm1蛋白质的物质。
12.用于抑制sectm1的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为：抑制胶质瘤细胞增殖。
13.用于敲减sectm1的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为：抑制恶性胶质瘤细胞侵袭迁移。
14.用于敲减sectm1的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为：抑制gbm细胞的致瘤性和皮下肿瘤生长。
15.所述应用的产品为药物。
16.有益效果：本发明通过转录组测序，基因芯片，实时荧光定量pcr(rt-qpcr)，免疫印迹，免疫荧光和免疫组化对胶质瘤细胞和临床胶质瘤组织中sectm1表达分析，发现sectm1在恶性胶质瘤中高表达并与胶质瘤患者预后差相关，明确其对恶性胶质瘤诊断与预后判断的重要作用。敲低sectm1表达抑制gbm(胶质母细胞瘤)细胞增殖，并诱导细胞周期阻滞于s期，稳定敲低sectm1显著抑制gbm(胶质母细胞瘤)细胞侵袭，迁移与致瘤性，表明sectm1在gbm发生发展中起重要作用。明确sectm1调控差异靶基因介导胶质瘤恶性表型的信息或证据，为胶质瘤的诊断和靶向治疗提供新型分子标志物和干预靶点。
附图说明
17.图1为sectm1在高级别胶质瘤(gbm)中过表达；其中a为cgga数据库中kruskal-wallis分析显示sectm1在原发性gbm、复发性gbm和继发性gbm患者中相对表达差异,b为cgga数据库中kruskal-wallis分析显示sectm1在胶质瘤ii级、胶质瘤iii级、胶质瘤iv级患者中相对表达差异，c-f为cgga数据库中wilcoxon分析显示sectm1在idh突变和野生型患者(c)、不同性别患者(d)、1p19q染色体缺失和未缺失患者(e)、小于等于41岁和大于41岁患者(f)中相对表达差异，g为cgga数据库中kruskal-wallis分析显示sectm1在gbm不同组织学分级中相对表达差异，h-j为rt-qpcr(h)或蛋白质印迹(i-j)检测正常脑组织、lgg和gbm组织中sectm1的相对表达差异，k-m为ihc染色(k)和免疫荧光染色(l-m)检测胶质瘤ii级、胶质瘤iii级、胶质瘤iv级患者组织中sectm1的相对表达差异，比例尺分别是，2μm和10μm。所有数据通过t检验对p值进行了分析，每次实验重复三次并取平均值。**p《0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。
18.图2为sectm1在胶质瘤中过表达并与患者生存和预后差显著相关；其中a-c为cgga数据库中kaplan-meier分析显示gbm中高表达sectm1与所有glioma(a)，lgg(b)和gbm(c)患者生存显著相关,d为tcga数据库中kaplan-meier分析显示gbm中高表达sectm1与所有胶质瘤患者生存显著相关，e为cgga数据库中分析显示gbm中高表达sectm1与所有glioma患者预后显著相关，f为tgga数据库中分析显示gbm中高表达sectm1与所有胶质瘤患者预后显著相关，g为cgga数据库中分析显示gbm中高表达sectm1与患者胶质瘤级别、性别、年龄、idh突
变、1p19q染色体缺失等因素有关。
19.图3为sectm1在gbm细胞系中过表达；a-c为rt-qpcr(a)或蛋白质印迹(b-c)检测人星形胶质细胞(ha)和人gbm细胞系(u87mg、u251、ln229、kns81)中sectm1的相对表达差异，d-e为免疫荧光染色检测人星形胶质细胞(ha)和人gbm细胞系(u87mg、u251、ln229、kns81)中sectm1的相对表达差异，比例尺，10μm。所有数据通过t检验对p值进行了分析，作为三个独立实验的平均值
±
sem。*p＜0.05；**
20.p《0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。
21.图4为敲低sectm1的表达抑制gbm细胞的增殖并诱导细胞周期阻滞在s期；其中a-c和e-g为rt-qpcr或蛋白质印迹检测显示shrna抑制gbm细胞系u87mg(a-c)和u251(e-g)中sectm1mrna和蛋白的表达，d和h为shrna抑制sectm1表达后通过细胞增殖实验(cck-8实验)分析gbm细胞系u87mg(d)和u251(h)的生长曲线,i-k为u87mg细胞中shrna敲低sectm1表达后诱导细胞周期阻滞在s期，l-n为u251细胞中shrna敲低sectm1表达后诱导细胞周期阻滞在s期，所有数据通过t检验对p值进行了分析，每次实验重复三次并取平均值。*p＜0.05；**p《0.01；***p＜0.001。
22.图5为敲低sectm1的表达可抑制gbm细胞的增殖、迁移和侵袭能力；其中a-d为edu荧光染色检测shrna抑制gbm细胞系u87mg(a-b)和u251(c-d)中sectm1表达后细胞增殖的数量，比例尺，10μm，e-g显示在gbm细胞系u87mg和u251中稳定敲低sectm1后细胞迁移能力的代表图像(e)和统计图(f-g)分析，比例尺，10μm，h-i为在gbm细胞系u251中稳定敲低sectm1后细胞伤口愈合实验的代表性图像(h)和统计的相对迁移面积(i)，j-l为在gbm细胞系u87mg和u251中稳定敲低sectm1后细胞侵袭测定的代表性图像(j)和和统计的侵袭细胞数(k-l)分析，数据表示为三个实验的平均值
±
sem，**p《0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。
23.图6为稳定敲低sectm1的表达抑制gbm细胞在小鼠体内的致瘤性；其中a-e为将500万成功转染shsectm1或对照shrna(shnc)的u87mg细胞接种到balb/c裸鼠皮下后的成瘤情况统计，每2天测量一次肿瘤大小(b)和小鼠体重(c)(n＝4)，注射后23天后，对小鼠(a)和肿瘤称重拍照(d-e)并制成冰冻切片以进行ihc(免疫组织化学)分析，f为对照或shsectm1细胞的异种移植肿瘤组织的h&e染色和ihc染色分析sectm1和增殖标记物ki-67的表达，比例尺，2μm，数据代表通过三个独立实验的t检验分析的均值
±
sem，*p＜0.05；**p《0.01；***p＜0.001；****p＜0.0001。
具体实施方式
24.下面的实施例可使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
25.实施例1
26.通过生物信息学r语言分析sectm1在胶质瘤中的表达差异以及与胶质瘤生存预后的关系。脑胶质瘤患者的转录组和临床资料可在中国脑胶质瘤基因组图谱(cgga)网站(http://www.cgga.org.cn/)和癌症基因图谱(tcga)网站(https://www.cancergenome.nih.gov)查阅。筛查后，我们获得了817例(cgga数据集)和658例(tcga数据集)胶质瘤患者转录组测序信息。首先，我们利用cgga微阵列数据来探索sectm1在胶质瘤中的表达情况和生存预后的关系。然后对tcgarnaseq数据进行并行分析，进一步验证了
我们在cgga数据集中发现的结果，发现两个队列之间的结果是一致的。对于tcga队列，rsemrnaseq数据进行log2转换。对于cgga队列，微阵列数据(已经标准化并由数据提供者集中)被直接分析。使用多个r包，包括ggplot2，proc，pheatmap，corrgram，circlize，基因组变异分析(gsva)以及生存来生成数字。所有的统计学检验都是双侧的，p值《0.05被认为是有统计学意义的。结果显示sectm1在gbm中表达明显高于lgg，在复发gbm中表达明显高于非复发gbm，而且高表达sectm1与生存差和预后不良显著相关(图1a-g和图2)。
27.实施例2
28.通过实时荧光定量pcr和蛋白质印迹(westernblot，wb)对胶质瘤细胞系和临床胶质瘤患者组织样本检测，分别提取人星形胶质细胞ha、恶性胶质瘤细胞(u87mg，u251，ln229和kns81)及胶质瘤患者临床组织样本总rna，用sybrgreen染料法或taqman探针法对sectm1进行实时定量荧光pcr测定其表达水平。通过胶质瘤病理分型及结合临床分析其对病人存活和预后的影响，探究sectm1作为胶质瘤分子诊断或预后判断的标志物和干预治疗靶点的应用前景。发现sectm1的rna在gbm细胞系中表达明显高于正常细胞，在gbm中表达明显高于lgg(图1h和图3a)。
29.sectm1qpcr引物如下：
30.上游引物:5'cttgggaccctcctgttttt3'
31.下游引物:5'gcagcttgatgttgacatgg3'
32.gapdhqpcr引物如下：
33.上游引物:5'caactacatggtttacatgttc3'
34.下游引物:5'gccagtggactccacgac3'
35.分别提取人星形胶质细胞ha、恶性胶质瘤细胞系(u87mg，u251，ln229和kns81)及胶质瘤患者临床组织样本总蛋白，进行westernblot(sectm1，1:2000，proteintech，60281-1-ig)检测sectm1蛋白表达情况，发现sectm1在多种胶质瘤细胞系中表达上调，而在对照组细胞株ha细胞中表达水平相对较低。而且在gbm临床组织样本中表达明显高于lgg(图1i-j和图3b-c)。
36.实施例3
37.我们对收集的不同级别胶质瘤(who ii、who iii、who iv)患者临床组织石蜡切片进行免疫组织化学(ihc)染色：将收集到的病理石蜡切片置于二甲苯中脱蜡5min，更换二甲苯再次脱蜡5min，无水乙醇5min，90％乙醇5min，80％乙醇5min，70％乙醇5min洗掉二甲苯，最后放入蒸馏水5min。随后进行抗原修复，将切片完全浸泡于抗原修复液(0.01m柠檬酸缓冲液，ph＝6.0)中95-98℃持续煮沸15min，自然冷却至室温以增强抗原修复，pbs缓冲液冲洗3次，每次5min。将稀释后的3％h2o2滴至切片中的组织上，室温避光放置10min，pbs洗2次(5min/次)以灭活内源性酶；滴加5％牛血清蛋白(bsa)封闭液至切片中的组织上，室温放置30min。甩干封闭液，加一抗sectm1抗体(1:500，proteintech，60281-1-ig)，4℃孵育过夜。pbs缓冲液洗3次，每次持续3min，使用免疫组织化学试剂盒(keygen biotech，kgos60)滴加二抗染色及显色，自来水冲洗10min，苏木素(索莱宝生物)衬染30秒，自来水冲洗3min，按照75％乙醇、85％乙醇、95％乙醇各1min，然后无水乙醇4min的顺序进行脱水；二甲苯透明3min；中性树脂封片、晾片。正置显微镜拍照保存。染色结果显示sectm1在高级别胶质瘤患者中高表达(图1k)。
38.细胞系(ha，u87mg，u251，ln229和kns81)和不同级别胶质瘤(who ii、who iii、who iv)患者临床组织石蜡切片免疫荧光实验，分别将细胞接种到6孔板中，每孔细胞3.0
×
105个。24h后去除细胞培养上清，并用pbs溶液清洗细胞2次，然后每孔加入1ml4％多聚甲醛(pfa)室温固定30min，去除多聚甲醛，用pbs溶液清洗细胞2次，每孔加入1ml含0.5％tritonx-100的5％bsa封闭液室温封闭1h，pbs溶液清洗细胞两次。加入一抗sectm1(1:500，proteintech，60281-1-ig)4℃孵育16h，pbs清洗细胞3次，每次5min。加入荧光二抗山羊抗鼠igg h&l(cy5)(ab6563，abcam)，室温避光孵育1h后，pbs清洗3次，每孔加入1mldapi染液，10min后回收dapi染液，pbs清洗细胞3次后在荧光显微镜下观察。免疫荧光染色发现sectm1在各种恶性胶质瘤细胞株中荧光更强，表达更高，而在对照组细胞株ha细胞中荧光较弱，表达相对较低。而且在gbm临床组织样本中表达明显高于lgg(图1l-m和图3d-e)。
39.实施例4
40.稳定敲减sectm1的shrna质粒的构建。shrna碱基序列由sigma公司官网获得，并插入plvxko.1质粒载体，构建shsectm1表达质粒。ncbi网站获得sectm1基因序列，设计引物，引物由通用生物(安徽)股份有限公司合成提供。将shsectm1质粒转化进入大肠杆菌并进行凃板培养，随后挑选5个单克隆菌落后摇菌扩大培养，使用天根生化dp118无内毒素质粒小提试剂盒提取质粒后测其浓度并送上海生工生物公司测序，选取插入序列正确的质粒使用。
41.shrna、shnc表达质粒转染包装慢病毒及筛选稳定转染细胞株。shrna及shnc质粒转染293t细胞包装慢病毒，293t细胞接种于6孔板，目的质粒与病毒包装质粒pspax2和pmd2.g(购自addgene)以1.5:1:2比例与pei混合并静置15min后加入293t细胞，转染48h后收取病毒上清过滤后用于感染u87mg和u251细胞株，感染24h后，换新鲜培养基并加入终浓度为2μg/ml的嘌呤霉素筛选稳转细胞株，大约一周后获得稳定转染细胞株，随后通过qrt-pcr和wb验证敲减效率。
42.shsectm1序列如下：
43.#sh-sectm1-1:5'-caccagagaaataacagacaa-3'；
44.#sh-sectm1-2:5'-gtgttcaaaccctcaccactt-3'；
45.细胞增殖和周期检测(u87mg和u251细胞株)。用细胞计数试剂盒-8(cck-8)检测sectm1基因敲低对u87mg、u251细胞增殖的影响。将u87mg或u251稳定转染细胞株以3000个细胞/孔的密度接种于96孔培养板中。在培养细胞2小时(细胞贴壁)后，将10μl cck-8溶液(kga317，keygen biotech)加入到每个孔中并温育1小时，然后使用微孔板读数器(biotek)测量450nm处的吸光度。随后每24小时测定细胞cck-8，连续5天，绘制细胞增殖曲线。
46.用edu法检测sectm1基因沉默对细胞(u87mg，u251)增殖的影响。将u87mg或u251稳定细胞株以5
×
105个细胞/孔的密度接种于6孔培养板中。培养24小时后，用kfluor488-edu细胞增殖检测试剂盒(kga331，keygen biotech)染色，edu工作浓度为50μm，并在加入edu后孵育细胞2小时。在荧光显微镜下观察和拍摄(德国卡尔蔡司axio显微镜)。用image-j软件测量细胞增殖百分比。
47.细胞周期实验，将u87mg或u251稳定细胞株以5
×
105个细胞/孔的密度接种于6孔培养板中。培养24小时后，收集细胞，重悬于1.5ml的70％乙醇中并放置于-20℃固定过夜。随后1000rpm离心3min，用pbs洗2次，加入提前配制好的500μl pi/rnase a(9：1)染色工作
液避光室温处理30min，然后用流式细胞仪(beckman，德国)检测激发波长488nm处红色荧光，并使用modfit软件进行数据图像分析。通过细胞生长曲线实验和edu实验发现沉默sectm1表达后抑制u87mg和u251细胞增殖(图4d，h和图5a-d)，流式细胞检测还发现敲减sectm1表达后会影响细胞周期进程，细胞周期阻滞在s期(图4i-n)。
48.实施例5
49.transwell实验检测细胞迁移，u87mg或u251稳定细胞株细胞在无血清培养基中培养过夜后用胰酶消化并离心，随后用无血清dmem培养基重悬细胞，通过细胞计数仪计数后将浓度调整为2
×
104/ml；将600μl含有10％血清的dmem完全培养基加入24孔transwell培养板的底部，200μl的细胞悬液加入上室，之后放入37℃，5％co2的培养箱中培养；24h后去掉上室液体并将小室用镊子取出，用pbs洗2次，加入500μl4％多聚甲醛固定，室温放置30min；去掉上室的4％多聚甲醛，用pbs洗2次，加入500μl提前配好的结晶紫染液，室温染色30min；去掉染液，取出小室用pbs轻轻冲洗数次后，用湿棉签小心擦去上室中的细胞；在100倍镜下观察并随机选取5个视野进行计数取平均值并拍照保存图像，统计结果分析发现敲减sectm1抑制细胞迁移(图5e-g)。
50.划痕实验验证细胞伤口愈合能力，将u87mg或u251稳定细胞株胰酶消化后用无血清的dmem培养液重悬，并以2ml/孔、5
×
105个细胞/孔的密度铺到6孔板中培养直至细胞基本融合；随后用移液器插上10μl枪头在6孔板细胞中垂直划痕，每孔划3道痕，用pbs洗掉划下来的细胞后，加入无血清dmem培养基；放入37℃、5％co2条件下的培养箱内培养。分别于0h、24h在倒置显微镜5
×
物镜下取6个视野内观察拍照，并用imagej软件分析伤口的距离。发现敲减sectm1抑制细胞迁移，体外功能实验发现敲减sectm1表达抑制恶性胶质瘤细胞迁移(图5h-i)。
51.transwell侵袭实验验证sectm1敲减后对细胞侵袭的影响，提前将matrigel基质胶放于4℃解冻，并用无血清培养基稀释matrigel胶(3:1稀释)，将30μl稀释好的matrigel胶加入transwell小室中，置于细胞培养箱中1-2h使matrigel胶凝固；u87mg或u251稳定细胞株细胞在无血清培养基中培养过夜后用胰酶消化并离心，随后用无血清dmem培养基重悬细胞，通过细胞计数仪计数后将浓度调整为2
×
104/ml；将600μl含有10％血清的dmem完全培养基加入24孔transwell培养板的底部，200μl的细胞悬液加入含有matrigel胶的上室中，之后放入37℃，5％co2的培养箱中培养；24h后去掉上室液体和matrigel胶并将小室用镊子取出，用pbs洗2次，加入500μl4％多聚甲醛固定，室温放置30min；去掉上室的4％多聚甲醛，用pbs洗2次，加入500μl提前配好的结晶紫染液，室温染色30min；去掉染液，取出小室用pbs轻轻冲洗数次后，用湿棉签小心擦去上室中的细胞；在100倍镜下观察并随机选取5个视野拍照保存图像并进行计数取平均值，统计结果分析发现sectm1敲减后抑制细胞侵袭(图5j-l)。
52.实施例6
53.裸鼠皮下成瘤实验验证sectm1敲减后对细胞致瘤性的影响。5-6周龄雄性balb/c裸鼠(购自中国南京集萃药康生物科技股份有限公司)，体重约18-22g。小鼠被饲养在spf级别的室内，可以自由获得食物和水以及12小时的照明和12小时的黑暗周期。所有动物研究均按照《中国实验动物护理和使用条例》的指导方针进行。为了进行体内动物研究，将已稳转成功的表达shnc或shsectm1的u87细胞消化，计数，将500万细胞重悬于100μlpbs后，注射
入裸鼠皮下，每组4只。注射5天后，每2天称量小鼠体重和测量一次肿瘤大小，并根据下式计算：(长
×
宽
×
宽)/2。在注射23天后处死小鼠取出皮下瘤并称重和拍照保存。裸鼠皮下成瘤实验发现敲减sectm1后，明显抑制gbm细胞的致瘤性和皮下肿瘤生长(图6)。
54.综上申请人获得sectm1在胶质瘤细胞系及临床胶质瘤患者组织的表达水平与胶质瘤患者存活和预后关系的临床证据；阐明sectm1调控胶质瘤增殖、侵袭、迁移和致瘤性等恶性表型的作用。明确sectm1调控gbm恶性表型的信息或证据，为胶质瘤临床诊断与靶向治疗提供新型分子标志物和干预靶点。首次证明sectm1在恶性胶质瘤诊断、治疗和预后判断中的重要作用，接下来开发检测sectm1表达的特异性抗体和试剂盒以及免疫组化或酶联免疫吸附检测(elisa)技术及其应用，研发治疗恶性胶质瘤的药物组合物，包括抑制或沉默人sectm1表达的核酸分子，sectm1小分子抑制剂或治疗性抗体等及其应用，都应该涵盖在本发明范围之内。
55.序列表信息:
56.dtd版本:v1_3
57.文件名:一种恶性胶质瘤生物标志物的应用.xml
58.软件名称:wipo sequence
59.软件版本:2.2.0
60.生成日期:2023-03-03
61.基本信息:
62.当前申请/申请人档案名:southeast university
63.申请人姓名或名称:东南大学
64.申请人姓名或名称/语言:zh
65.申请人姓名或名称/拉丁名称:southeast university
66.发明名称:一种恶性胶质瘤生物标志物的应用(zh)
67.序列总量:2
68.序列:
69.序列号(id):1
70.长度:2003
71.分子类型:rna
72.特征 位置/限定符:
[0073]-source,1..2003
[0074]
》mol_type,mrna
[0075]
》organism,artificial sequences
[0076]
残基:
[0077]
cattttcctg gggctccggg gcgcggagaa gctgcatccc agaggagcgc gtccaggagc 60
[0078]
ggacccggga gtgtttcaag agccagtgac aaggaccagg ggcccaagtc ccaccagcca 120
[0079]
tgcagacctg ccccctggca ttccctggcc acgtttccca ggcccttggg accctcctgt 180
[0080]
ttttggctgc ctccttgagt gctcagaatg aaggctggga cagccccatc tgcacagagg240
[0081]
gggtagtctc tgtgtcttgg ggcgagaaca ccgtcatgtc ctgcaacatc tccaacgcct 300
[0082]
tctcccatgt caacatcaag ctgcgtgccc acgggcagga gagcgccatc ttcaatgagg 360
[0083]
tggctccagg ctacttctcc cgggacggct ggcagctcca ggttcaggga ggcgtggcac 420
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agctggtgat caaaggcgcc cgggactccc atgctgggct gtacatgtgg cacctcgtgg 480
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gacaccagag aaataacaga caagtcacgc tggaggtttc aggtgcagaa ccccagtccg 540
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cccccgacac tgggttctgg cctgtgccag cggtggtcac tgctgtcttc atcctcttgg 600
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tcgctctggt catgttcgcc tggtacaggt gccgctgttc ccagcaacgc cgggagaaga 660
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agttcttcct cctagaaccc cagatgaagg tcgcagccct cagagcggga gcccagcagg 720
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gcctgagcag agcctccgct gaactgtgga ccccagactc cgagcccacc ccaaggccgc 780
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tggcactggt gttcaaaccc tcaccacttg gagccctgga gctgctgtcc ccccaaccct 840
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tgtttccata tgccgcagac ccatagccgc ctgcaaggca gagaggacac aggagagcca 900
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gccctgagtg ccgaccttgg gtggcggggc ctgggtctct cgtcccaccc ggagggcaca 960
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gacaccggct tgcttggcag gctgggcctc tgtgtcaccc actcctgggt gcgtgcagac 1020
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acctcacctc cgcagcaccc gacttaccag gacgcatgcc cctccctctg ccctcatcaa 1140
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ccgctctctc cactcccagg gctccgcgcc caagtgaggg ggcccctgcc ggagcctcag 1260
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acacactcca gttcagggct gtggggggcc ttggccacat acctgtccct tggctatgag 1320
[0099]
caggctttgg gggcccttcc gcggcagccc cgggggccga ggtagggtcg ggggcttaga 1380
[0100]
ggctgggatg gctcctggcc ccaccgccag ggggcagcgc aggccgggct gggaggcggc 1440
[0101]
ggcggcggct cgggctgggg ggtcaggtgg acgccgccct ccggggctgg acgcgcatcc 1500
[0102]
ctcagtccct cggccacccg ggggtcgctc cctcgtgccc accgcacctg ccgagcctct 1560
[0103]
ttggacccag atctgttcat gcttttgtct tcgtcactgc ggcggggccc tttgatgtct 1620
[0104]
tcatctgtat ggggtggaaa aatcaccggg aatcccccttcagttctttg aaaaagttcc 1680
[0105]
atgactcgaa tatctgaaat gaagaaaaca aaccgactca caaacctcca agtagctcca 1740
[0106]
aatgcaattt ttaaaatgga aaacaaaaat ctgaaagaaa cgtctttagt ggctttaagc 1800
[0107]
cccaaaacgt ccctaaggcgtcctcgagat gaagacgggg gggagccccc agccaggtgg 1860
[0108]
agaccccgcagggacgcggc ggcgcccggt gaccgaggcc tcgcacagcc ggccgccctg 1920
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ttccgtccgc gtgctgggtc aga 2003
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序列号(id):2
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分子类型:aa
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特征位置/限定符:
[0115]-source,1..248
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》mol_type,protein
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》organism,artificial sequences
[0118]
残基:
[0119]
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kffllepqmk vaalragaqq glsrasaelw tpdseptprp lalvfkpspl galellspqp 240
[0123]
lfpyaadp248
[0125]
end。

技术特征：
1.用于检测sectm1的物质在制备如下任意一种或多种产品中的应用：(a1)、胶质瘤诊断或辅助诊断产品；(a2)、胶质瘤预后评估或辅助预后评估产品。2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述应用(a1)中，胶质瘤诊断或辅助诊断包括对sectm1在胶质瘤中的表达差异性进行诊断分析；或，所述应用(a2)中，胶质瘤预后评估包括对患者胶质瘤术后总体生存期的预测；优选地，所述产品包括检测试剂盒或者药物。3.如权利要求2所述应用，其特征在于，用于检测sectm1表达差异性的物质包括针对sectm1rna或者sectm1蛋白质的物质。4.用于抑制sectm1的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为：抑制胶质瘤细胞增殖。5.用于敲减sectm1的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为：抑制恶性胶质瘤细胞侵袭迁移。6.用于敲减sectm1的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为：抑制gbm细胞的致瘤性和皮下肿瘤生长。7.如权利要求4所述应用或者权利要求5所述应用或者权利要求6所述应用，其特征在于，所述应用的产品为药物。

技术总结
本发明属于生物技术，病理检验和肿瘤学领域，具体涉及一种恶性胶质瘤生物标志物的应用；恶性胶质瘤生物标志物的应用包括以下几个方面：用于胶质瘤诊断；用于胶质瘤预后评估；用于抑制胶质瘤细胞增殖；用于抑制恶性胶质瘤细胞侵袭迁移；用于抑制GBM细胞的致瘤性和皮下肿瘤生长；本发明通过转录组测序，基因芯片，实时荧光定量PCR，免疫印迹，免疫荧光和免疫组化对恶性胶质瘤组织中SECTM1表达分析，发现SECTM1在恶性胶质瘤中表达与病人预后差相关，锁定其对恶性胶质瘤诊断与预后判断的重要价值。沉默SECTM1表达抑制GBM(胶质母细胞瘤)细胞增殖，并诱导细胞周期S期阻滞，稳定敲低SECTM1显著抑制GBM(胶质母细胞瘤)细胞侵袭，迁移与致瘤性，提示SECTM1在GBM中起重要作用。提示SECTM1在GBM中起重要作用。提示SECTM1在GBM中起重要作用。


技术研发人员：夏洪平 姚志鹏 江晓春 张帆 戚晨学
受保护的技术使用者：东南大学
技术研发日：2023.05.09
技术公布日：2023/9/22