淫羊藿素衍生物及其在抗肝癌中的应用

1.本发明涉及生物医药领域，具体涉及淫羊藿素衍生物及其在抗肝癌中的应用。


背景技术：

2.肝细胞癌(肝癌，hcc)是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高，复发转移率高。肝切除仍然是肝癌的首选治疗方式之一。然而，肝切除通常不能防止肿瘤的转移，且手术风险高，术后易发生并发症，预后不理想。其术后5年复发率为40％～70％，制约着患者的长期生存。
3.肝癌术后复发包括肝内转移和多中心发生两种方式，前者是由于残肝内存在微小转移灶，通常在2 年内发生(早期复发)。后者是由于潜在的肝脏病变或在肝硬化基础上新发肿瘤，通常在2年后发生(晚期复发)。已有研究表明，与早期复发相比，晚期复发患者行外科治疗效果较好。目前，肝癌复发外科治疗方式包括再次肝切除、补救性肝移植及射频消融，这些方法各有优缺点。再次肝切除是复发性肝癌首选的治疗方法之一，但其应用受到不同程度的肝硬化、残肝体积不足及腹腔粘连等限制。补救性肝移植也是复发性肝癌较为有效的治疗选择，但供肝较为缺乏；射频消融治疗具有可重复及微创等优点，但其局部复发率高。因此，选择何种外科治疗方案对复发性肝癌患者比较合理仍然是一个富有争议的话题。选择较为合理的外科治疗方案，需要基于初次肝切除时肿瘤情况、复发肿瘤特征、患者基本情况及复发时间来指导，目前尚缺乏根治肝癌的有效治疗手段。
4.化疗是目前临床常用治疗方式，但是化疗使用的是细胞毒性药物，不仅会对健康器官产生不利影响，且会导致出血和贫血等严重不良副作用。此外，这些副作用增加了癌症患者的死亡率，因此，开发高效低毒的药物迫在眉睫。
5.淫羊藿是一种传统中药，为小檗科淫羊藿属，味辛、甘，性温，以其干燥叶入药，主治阳痿遗精、肾阳虚衰、风湿痹痛、筋骨痿软、麻木拘挛等病症。现代药理研究证明，淫羊藿提取物的主要活性成分包括淫羊藿苷、淫羊藿次苷、淫羊藿总黄酮类衍生物、以及生物碱、蒽醌类、木脂素类、植物甾醇、花青素、萜类化合物、绿原酸及必需脂肪酸、微量元素等其他生物活性成分及营养成分。它不仅具有扩张冠脉、抑制微生物、抗衰老、促进骨细胞生长得功能，而且还能抑制肿瘤等多种生物活性。
6.淫羊藿素(icaritin,ict)是淫羊藿的活性黄酮类成分，其结构如下，是由淫羊藿的主要活性单体成分淫羊藿苷经水解而成。研究表明，淫羊藿素具有抗肿瘤、抗肝纤维化、抗骨质疏松、改善前列腺功能、神经保护、免疫抑制、抗炎、抗氧化、雌激素受体样作用等多重效应，且其抗肿瘤作用谱广，对多种肿瘤均具有抑制作用。
[0007][0008]
但是淫羊藿素与许多天然产物一样，具有在水中溶解性较差、生物利用度低的缺点，大大限制了临床应用。
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众多临床研究成果表明，糖类在细胞表面有许多结合受体，具有细胞靶向性，且有良好的水溶性，是先导药物的良好载体。糖基化合物修饰制剂可以有效改善某些药物中的生物利用度低、溶解性差、药理活性差以及降低毒副作用等问题，因此，设计一种糖基化的淫羊藿素衍生物有助于提高淫羊藿素的生物利用度，提高其临床应用率。


技术实现要素：

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本发明针对现有技术的不足，设计一种淫羊藿素糖基化衍生物。
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本发明的目的之一是提供一种淫羊藿素衍生物，其结构式如式(1)所示，
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本发明的目的之二是提供式(1)的淫羊藿素衍生物在制备抗肝癌药物中的应用。
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进一步的，式(1)化合物对肝癌细胞的作用浓度为2～50μm。
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进一步的，式(1)化合物对肝癌细胞的作用浓度为10～20μm。
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进一步的，式(1)化合物对肝癌细胞的作用浓度为20μm。
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进一步的，式(1)化合物的作用时间为48h。
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本发明的工作原理及有益效果：1、通过mtt法筛选发现式(1)化合物相对于淫羊藿素对人肝癌细胞hepg2的生长具有更好的抑制作用。
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2、通过mtt法筛选发现式(1)化合物相对于淫羊藿素对人正常肝细胞l02的毒性更低。
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3、通过cck-8法筛选发现式(1)化合物相对于淫羊藿素对小鼠来源肝癌细胞h22的生长具有更好的抑制作用。
[0021]
通过体外抗肿瘤活性筛选，发现式(1)淫羊藿素衍生物不仅对肝癌细胞有较好的抑制作用，且对正常肝细胞毒性较低，避免在治疗的时候对健康器官产生不利影响，具备高效低毒的特点，适合临床应用。
附图说明
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图1为mtt法测试淫羊藿素衍生物对hepg2人肝癌细胞的活力影响示意图；
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图2为mtt法测试淫羊藿素衍生物对l02正常肝细胞的活力影响示意图；
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图3为cck-8法测试淫羊藿素衍生物对h22肝癌细胞的活力影响示意图。
具体实施方式
[0025]
下面通过具体实施方式进一步详细说明：
[0026]
下述实施例中，除非另有说明，所述的试验方法通常按照常规条件或制造厂商建议的条件实施；所示的原料、试剂均可通过市售购买的方式获得。
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实施例1.mtt法检测淫羊藿素衍生物对hepg2人肝癌细胞的活力影响
[0028]
取对数生长的人肝癌细胞hepg2加入96孔板中，每孔100μl约含有3000个细胞。再加入上述淫羊藿素衍生物，并加入淫羊藿素(icaritin)作为对照，每组设5个平行孔，置二氧化碳培养箱中37℃培养48小时。实验终止前4小时加入20μl/孔mtt(20mg/ml)溶液，再培养4小时，弃去培养液，加入150μl/孔dmso，待结晶溶解后，在酶标仪上检测 490nm波长下每孔的od值。其结果如图1所示。从图1中可以看出，药物作用浓度为20μm 时，淫羊藿素衍生物相较于对照药物淫羊藿素对人肝癌细胞hepg2生长的抑制作用更强，且随着药物浓度的增加，抑制作用增强。注：*代表p＜0.05(data＝mean+/-sd)
[0029]
实施例2.mtt法检测淫羊藿素衍生物对l02人正常肝细胞的活力影响
[0030]
取对数生长的人正常肝细胞l02加入96孔板中，每孔100μl约含有3000个细胞。再加入上述淫羊藿素衍生物，并加入淫羊藿素(icaritin)作为对照，每组设5个平行孔，置二氧化碳培养箱中37℃培养48小时。实验终止前4小时加入20μl/孔mtt(20mg/ml)溶液，再培养4小时，弃去培养液，加入150μl/孔dmso，待结晶溶解后，在酶标仪上检测 490nm波长下每孔的od值。其结果如图2所示。从图2中可以看出，在药物作用浓度范围内，淫羊藿素衍生物相较于对照药物淫羊藿素对人正常肝细胞l02无毒性。注：*代表p＜ 0.05(data＝mean+/-sd)
[0031]
实施例3.cck-8法检测淫羊藿素衍生物对h22小鼠肝癌细胞的活力影响
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取对数生长的小鼠肝癌细胞h22加入96孔板中，每孔100μl约含有3000个细胞。再加入上述淫羊藿素衍生物，并加入淫羊藿素(icaritin)作为对照，每组设5个平行孔，置二氧化碳培养箱中37℃培养48小时。实验终止前4小时加入20μl/孔cck-8溶液，再培养4 小时。在酶标仪上检测450nm波长下每孔的od值。其结果如图3所示。从图3中可以看出，淫羊藿素衍生物相较于对照药物淫羊藿素对h22细胞的生长的抑制作用更强，且随着药物浓度的增加，抑制作用增强。注：*代表p＜0.05(data＝mean+/-sd)。
[0033]
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本技术要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

技术特征：
1.一种淫羊藿素衍生物，其特征在于，结构式如式(1)所示，2.根据权利要求1所述的淫羊藿素衍生物在制备抗肝癌药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：式(1)化合物对肝癌细胞的作用浓度为2～50μm。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：式(1)化合物对肝癌细胞的作用浓度为10～20μm。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：式(1)化合物对肝癌细胞的作用浓度为20μm。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：式(1)化合物的作用时间为48h。

技术总结
本申请公开了医药技术领域中的淫羊藿素衍生物，其特征在于，结构式如式(1)所示，式(1)的淫羊藿素衍生物具有较好的抗肝癌活性，高效低毒，可开发成为用于治疗肝癌的新药。于治疗肝癌的新药。于治疗肝癌的新药。


技术研发人员：孙成新 兰青 赵长阔 王先恒
受保护的技术使用者：遵义医科大学
技术研发日：2022.03.16
技术公布日：2023/9/22