一种硼酸亲和侧流免疫层析试纸及其检测方法

1.本发明涉及一种侧流免疫层析试纸，尤其涉及一种硼酸亲和侧流免疫层析试纸，还涉及上述侧流免疫层析试纸的检测方法。


背景技术：

2.糖蛋白是一类参与多种生理和病理过程的重要生物分子，包括细胞内转运、信号转导、代谢稳态、细胞间相互作用和免疫反应。糖蛋白在体内的异常表达与癌症、心血管疾病以及糖尿病等重大疾病的发生和发展密切相关，因此被广泛认为是临床诊断的生物标志物之一。探索建立简便、快速、低成本、高灵敏度的糖蛋白检测方法对相关疾病的筛查与早期诊断等方面均具有重要意义。酶联免疫吸附剂测定elisa具有高选择性、高通量等优点，被认为是糖蛋白常规检测的金标准。然而，由于需要完美配对的抗体、复杂费时的操作流程以及特定的实验室环境，使得elisa在临床诊断中的应用受到了限制。近年来，探索一种具有高灵敏度和短响应时间的即时检测(poct)技术作为elisa的替代方法用于检测糖蛋白已经成为热点。
3.侧流免疫分析(lfia)是目前最成功的poct平台，这得益于其快速性、便携性、高稳定性和用户友好性的优势。lfia在疾病诊断、药品安全以及环境监测中发挥着巨大作用。在传统的用于糖蛋白检测的lfia中，对目标糖蛋白的特异性识别和捕获是关键步骤。为此，纳米材料(nms)需要与捕获抗体(ca)相结合来标记目标糖蛋白。然而，抗体往往存在价格高、来源有限、储存稳定性差和外部处理后生物活性丧失等问题，而且获取nms-ca探针的过程相对复杂，限制lfia的广泛应用。现有技术的侧流免疫层析检测法需使用配对抗体对以及检测限高，因此，开发ca非依赖性lfia策略用于检测糖蛋白有重大意义。


技术实现要素：

4.发明目的：本发明的目的在于提供一种灵敏度高、成本低、稳定性好且操作简单，可以同时完成定性和定量测试的硼酸亲和侧流免疫层析试纸，还提供了上述侧流免疫层析试纸的检测方法。
5.技术方案：本发明的硼酸亲和侧流免疫层析试纸，包括平板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，样品垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次粘贴在平板的单侧表面，所述硝酸纤维素膜的表面包被检测线及质控线，所述检测线上包被糖蛋白抗体，金-苯硼酸-糖蛋白结合物通过与检测线上包被糖蛋白单克隆抗体结合，使得金纳米颗粒聚集于检测线，显红色；所述质控线上包被生物素，金-链霉亲和素结合物通过与质控线上包被的生物素结合，使得金纳米颗粒聚集于质控线，显红色。
6.优选的，所述金-苯硼酸-糖蛋白结合物，通过将苯硼酸加入金纳米颗粒，制得苯硼酸功能化的金纳米颗粒；将苯硼酸功能化的金纳米颗粒加入待测糖蛋白，混合后加入牛血清白蛋白得到金-苯硼酸-糖蛋白结合物。
7.优选的，所述金-链霉亲和素结合物，通过将链霉亲和素加入金纳米颗粒，混合后
再加入牛血清白蛋白得金-链霉亲和素结合物。
8.优选的，所述样品垫为聚酯膜通过曲拉通x-100、氯化钠和tris-hcl处理并烘干，所述样品垫和硝酸纤维素膜的交界重叠1-3mm，硝酸纤维素膜和吸收垫的交界重叠1-3mm。
9.上述硼酸亲和侧流免疫层析试纸的检测方法，包括以下步骤：
10.(1)制备胶体金纳米颗粒溶液，与苯硼酸溶液混合搅拌，离心去除游离的苯硼酸，真空干燥得到金-苯硼酸纳米颗粒；
11.(2)取金-苯硼酸纳米颗粒加入待测糖蛋白，混合后加入牛血清白蛋白，得到金-苯硼酸-待测糖蛋白结合物；
12.(3)通过将链霉亲和素加入金纳米颗粒，混合后再加入牛血清白蛋白得金-链霉亲和素结合物；
13.(4)取步骤(2)制得的金-苯硼酸-糖蛋白结合物溶液和步骤(3)制得的金-链霉亲和素结合物溶液混合后，金-苯硼酸-糖蛋白结合物溶液和金-链霉亲和素结合物溶液的体积比为1：0.5-2，得金-苯硼酸-糖蛋白结合物和金-链霉亲和素结合物混合溶液；
14.(5)侧流免疫层析试纸条制备：将样品垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次粘贴到平板上彼此重叠1-3mm，组装成侧流免疫层析试纸，所述硝酸纤维素膜的表面包被检测线以及质控线，所述检测线上包被糖蛋白抗体；所述质控线上包被生物素；
15.(6)取步骤(3)制得的金-苯硼酸-糖蛋白结合物和金-链霉亲和素结合物混合溶液，滴加于试纸条的样品垫，样品溶液往吸收垫方向迁移，金-链霉亲和素结合物能与硝酸纤维素膜上的检测线包被的生物素进行链霉亲和素-生物素系统识别，金纳米颗粒聚集于质控线，待检测糖蛋白能与硝酸纤维素膜上的检测线包被的糖蛋白抗体进行特异性抗原抗体识别，金纳米颗粒聚集于检测线，检测线出现红色条带，可通过裸眼进行定性判断；用colorpicker软件分析检测线的rgb值，与标准曲线对比，实现样品中的糖蛋白浓度的比色信号的定量判断。
16.优选的，步骤(1)中，所述氯金酸溶液浓度为0.1％-10％，还原剂的浓度为0.1％-10％，苯硼酸浓度为0.1-1g/l；所述胶体金纳米颗粒溶液与苯硼酸溶液的体积比为100:1-10。
17.优选的，步骤(2)中，所述糖蛋白的浓度为0-10μg/ml，所述混合时间为0.1-2h，所述牛血清白蛋白浓度为1％-20％。
18.优选的，步骤(3)中，所述链霉亲和素浓度为0.1-10g/l，所述混合时间为0.1-1h，所述牛血清白蛋白浓度为1％-10％。
19.优选的，步骤(5)中，所述样品垫的制备具体为，将聚酯膜浸入样品垫处理液处理10-24h，然后于烘箱25-40℃烘干2-10h，得到样品垫，所述样品垫处理液由0.1％-10％曲拉通-100，1％-10％氯化钠以及tris-hcl(ph 7.0-10.0)组成；所述硝酸纤维素膜的制备具体为，将待检测糖蛋白抗体以0.4-3μl/cm速率分配到硝酸纤维素膜上形成检测线，将生物素以0.4-3μl/cm速率分配到硝酸纤维素膜上形成质控线。
20.优选的，步骤(6)中，所述colorpicker软件分析各个糖蛋白浓度下的检测线rgb值，拟合制定比色信号标准曲线。根据待检测样品检测线rgb值，实现定量判断样品中的糖蛋白浓度。
21.发明原理：本发明提供了一种快速，高灵敏度，高特异性的可现场即时检测的基于
金-苯硼酸纳米探针的侧流免疫层析比色检测方法，可同时完成定性和定量测试。与传统的双抗体夹心胶体金法相比，该方法不需要配对抗体的使用，在灵敏度、成本、稳定性和操作方面比传统的双抗体夹心胶体金法有明显的优势。
22.硼酸配体可以与含有顺式二醇的化合物如糖类、糖蛋白、核苷和核苷酸可逆性结合，形成可逆的环状顺式二醇酯，本发明的侧流免疫层析检测方法使用的金-苯硼酸纳米探针不仅用于产生比色信号，而且探针表面的苯硼酸分子可与糖蛋白进行共价结合使得该探针具有优异的糖蛋白亲和能力，从而避免传统的捕获抗体的使用，实现了新型的捕获抗体非依赖性lfia比色检测。将得到的金-苯硼酸-糖蛋白结合物滴加于试纸条的样品垫后，通过裸眼观察检测线的颜色强度后进行比色定性判断糖蛋白浓度；用colorpicker软件分析检测线rgb值定量判断糖蛋白浓度。实现了糖蛋白的现场即时检测，大大节约了检测成本。与传统的双抗体夹心胶体金法相比，提高了检测灵敏度，本发明的侧流免疫层析检测方法在糖蛋白检测领域具有普遍适用性；金-苯硼酸纳米探针的合成以及侧流免疫层析试纸条的制备工艺具有成本效益。
23.有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：(1)本发明的检测方法不需要配对抗体的使用，灵敏度高、成本低、稳定性好且操作简单，可以同时完成定性和定量测试，以癌胚抗原作为模型糖蛋白，该硼酸亲和侧流免疫层吸检测方法的裸眼检测限为1.25ng/ml，比传统的双抗夹心lfia法的检测限低8倍；(2)检测方法具有良好的可重复性和高特异性，样本检测准确率高达到100％。
附图说明
24.图1为本发明的侧流免疫层析试纸条的示意图；
25.图2为本发明的金-苯硼酸纳米颗粒的透射电镜图；
26.图3为金-苯硼酸纳米颗粒的紫外-可见光吸收光谱图；
27.图4为金-苯硼酸纳米颗粒的水合动力学直径图；
28.图5为金-苯硼酸纳米颗粒的稳定性图；
29.图6为基于金-苯硼酸纳米颗粒的侧向流动免疫层析法的三个检测参数优化图；
30.图7为该检测方法以及传统的双抗体夹心lfia法下，以癌胚抗原为模型分析物，空白对照组、0.625、1.25、2.5、5、10、20、30、40、50、60ng/ml癌胚抗原对应的条带裸眼观测结果图。
31.图8为该检测方法下，以癌胚抗原为例，空白对照组、0.625、1.25、2.5、5、10、20、30、40、50、60ng/ml癌胚抗原对应的条带的colorpicker软件分析结果图(定量比色信号)；
32.图9为该侧流免疫层析法的特异性评价；
33.图10为该侧流免疫层析法检测人血清中癌胚抗原含量的定量结果图；
34.图11为该侧流免疫层析法以及临床方法检测64位临床病人血清中癌胚抗原含量的结果图；
35.图12为该检测方法下，甲胎蛋白为模型分析物，癌胚抗原阳性样品与空白对照组对应的条带裸眼观测结果图。
具体实施方式
36.下面结合附图和实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
37.实施例1
38.如图1所示，侧流层析试纸包括平板1、样品垫2、硝酸纤维素膜3和吸收垫4，样品垫2、硝酸纤维素膜3和吸收垫4依次粘贴在平板1的单侧表面，所述硝酸纤维素膜3的表面包被检测线5及质控线7，所述检测线上包被糖蛋白抗体6，金-苯硼酸-糖蛋白结合物通过与检测线上包被糖蛋白单克隆抗体结合，使得金纳米颗粒聚集于检测线，显红色；所述质控线上包被生物素8，金-链霉亲和素结合物通过与质控线上包被的生物素结合，使得金纳米颗粒聚集于质控线，显红色。
39.实施例2
40.金-苯硼酸纳米颗粒的制备：
41.在快速搅拌的条件下，加热100ml 0.3mm的氯金酸溶液；当氯金酸溶液的温度达到100℃时，向其加入4ml柠檬酸钠(1％，w/v)还原溶液；反应体系颜色变为黑灰色，后在2min内变成酒红色，随后保持反应10min；然后用铝箔覆盖于反应瓶口并冷却至室温；将得到的金纳米颗粒溶液保存于4℃待用；将得到的胶体金与20ml 0.1mg/ml苯硼酸(pmba)溶液混合，800rpm搅拌12h，然后将反应溶液9000g离心5min；去除上清液后，用乙醇重新分散/离心循环洗涤以确保完全除去游离的pmba；最后进行真空干燥得到金-苯硼酸纳米颗粒。
42.如图2所示，为金-苯硼酸纳米颗粒的透射电镜图，显示合成出来的金-苯硼酸纳米颗粒形貌均一，呈球状，粒径为20nm左右，表明金-苯硼酸纳米颗粒的成功合成。
43.如图3所示，为金-苯硼酸纳米颗粒的紫外可见光吸收光谱图，显示，金-苯硼酸纳米颗粒在524nm处有吸收峰，相对于金纳米颗粒红移了4nm，表明金-苯硼酸纳米颗粒的成功合成。
44.如图4所示，为金-苯硼酸纳米颗粒的水合动力学图，通过动态光散射结果分析，金-苯硼酸纳米颗粒的流体动力学直径为43.2nm，而单纯的金纳米颗粒为22.3nm，表明金-苯硼酸纳米颗粒的成功合成。
45.如图5所示，为金-苯硼酸纳米颗粒的水合动力学直径(a图)和在524nm处的吸光度(b图)的变化。显示当金-苯硼酸纳米颗粒在去离子水和人血清溶液中分散100天后，表现出可忽略的流体动力学直径和吸光度的变化，表明金-苯硼酸纳米颗粒具有良好的胶体和光学稳定性，保证lfia的检测结果的可重复性。
46.实施例3
47.侧流免疫层析试纸条的制备：
48.(1)如实施例2制备得到金-苯硼酸纳米颗粒；
49.(2)金-苯硼酸-糖蛋白的制备：取80μl金-苯硼酸纳米颗粒加入40μl待测糖蛋白，混合后加入20μl10％牛血清白蛋白，得到金-苯硼酸-待测糖蛋白结合物；
50.(3)金-链霉亲和素结合物的制备：通过将3μg链霉亲和素加入200μl金纳米颗粒，混合后再加入60μl 10％牛血清白蛋白得金-链霉亲和素结合物；
51.(4)金-苯硼酸-糖蛋白结合物和金-链霉亲和素结合物混合溶液的制备：取步骤(3)制得的金-苯硼酸-糖蛋白结合物溶液和步骤(4)制得的金-链霉亲和素结合物溶液按体积比1:1混合后，得金-苯硼酸-糖蛋白结合物和金-链霉亲和素结合物混合溶液；
52.(5)侧流免疫层析试纸条制备：将样品垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次粘贴到平板上彼此重叠1-3mm，组装成侧流免疫层析试纸，所述硝酸纤维素膜的表面包被检测线以及质控线，所述检测线上包被1mg/ml糖蛋白抗体；所述质控线上包被1mg/ml生物素。
53.实施例4
54.取实施例3制得的侧流免疫层析试纸条进行检测，以50ng/ml的癌胚抗原作为标准溶液进行参数优化；如图6所示，以检测线显色强度作为判断标准，检测线显色最深时所对应的参数值作为最佳实验参数。如图6a所示，苯硼酸修饰浓度为0.4mg/ml；如图6b所示，金-苯硼酸纳米颗粒的ph值为8；如图6c所示，糖蛋白与金-苯硼酸纳米颗粒的孵育时间为40min作为最佳实验参数用于接下来的整个检测过程。
55.取60μl金-苯硼酸-糖蛋白结合物和金-链霉亲和素结合物混合溶液，滴加于试纸条的样品垫，样品溶液往吸收垫方向迁移，金-链霉亲和素结合物能与硝酸纤维素膜上的检测线包被的生物素进行链霉亲和素-生物素系统识别，金纳米颗粒聚集于质控线，质控线显红色，表明试纸条工作正常；待检测糖蛋白能与硝酸纤维素膜上的检测线包被的糖蛋白抗体进行特异性抗原抗体识别，金纳米颗粒聚集于检测线，检测线出现红色条带，可通过裸眼进行定性判断；定量检测是基于智能手机“color picker”应用程序确定的t线处rgb值(r值)。t线的光学信号与目标糖蛋白的浓度成正比，并用于定量分析。
56.如图7所示，为该lfia法以及传统的双抗体夹心lfia法用于癌胚抗原检测的裸眼观测图。所有试纸条的质控线均显红色，表明试纸条工作正常。该lfia法的裸眼检测限为1.25ng/ml；传统的双抗体夹心lfia法的裸眼检测限为10ng/ml。
57.实施例5
58.将40μl不同浓度的癌胚抗原溶液分别与80μl 50μg/ml金-苯硼酸纳溶液共孵育40min，得到金-苯硼酸-癌胚抗原复合物。然后将30μl 金-苯硼酸-癌胚抗原复合物和30μl金-链霉亲和素的混合溶液滴加到样品垫上，开始免疫层析反应。通过直接观察t线的红色色带获得定性检测结果。对于定量检测，用colorpicker软件分析检测线的rgb值，与标准曲线对比，实现样品中的糖蛋白浓度的比色信号的定量判断。
59.如图8所示，为该lfia法检测癌胚抗原的定量结果图，表明该lfia检测癌胚抗原的比色定量信号的检测限为1.25ng/ml，线性范围为1.25-50ng/ml，
60.r2＝0.9828。
61.如图9所示，为该lfia方法检测癌胚抗原的特异性评价，通过检测几种常见的干扰蛋白，包括50ng/ml甲胎蛋白(afp)、神经元特异性烯醇化酶(nse)抗原、人血清白蛋白(has)、胃蛋白酶原ⅰ(pgⅰ)、胃蛋白酶原ⅱ(pgⅱ)和bsa，评估该lfia方法的特异性，其中癌胚抗原(cea)溶液(50ng/ml)和去离子水分别作为阳性和空白对照。结果表明，该检测平台特异性良好，可以准确区分癌胚抗原和其他六种蛋白。
62.如图10所示，为该lfia平台检测人血清中癌胚抗原含量的定量结果。检测限为2.5ng/ml，低于临床诊断中广泛接受的浓度阈值(5ng/ml)，线性范围为2.5-80ng/ml，表明该硼酸亲和lfia适用于人血清中癌胚抗原的超灵敏和快速定量分析。
63.实施例6如图11所示，为本侧流免疫层析法以及临床方法检测64位临床病人血清中癌胚抗原含量的定量结果图。a图为该lfia方法检测64个临床血清样本中cea浓度的热图，热图中的数值是每个样品的cea浓度，测试结果表明，基于金-苯硼酸纳米颗粒的lfia方
法可以成功地从64个可疑的人血清样本中识别出23个cea阳性的样本。
64.为了评估该lfia方法的准确性，采用临床金标准方法-化学发光免疫分析法(clia)来确认这64份实际的人血清样品(b图)，“+”代表通过clia检测到的cea阳性样本，
“‑”
代表通过clia检测到的cea阴性样本。结果表明，基于该lfia方法的检测结果与临床方法的检测结果100％一致，说明本发明的侧流免疫层析检测方法具有良好的可重复性和高特异性，样本检测准确率高达到100％。
65.实施例7
66.以甲胎蛋白作为糖蛋白的模型分析物，将40μl甲胎蛋白阳性溶液和空白对照溶液分别与80μl50μg/ml金-苯硼酸纳溶液共孵育40min，得到金-苯硼酸-癌胚抗原复合物。然后将30μl金-苯硼酸-癌胚抗原复合物和30μl金-链霉亲和素的混合溶液滴加到样品垫上，开始免疫层析反应。通过直接观察t线是否出现红色色带以获得定性检测结果。如图12显示，左侧为甲胎蛋白阳性溶液t线显红色，右侧为空白对照t线不显色，表明该侧流免疫层析法广泛适用于糖蛋白检测。

技术特征：
1.一种硼酸亲和侧流免疫层析试纸，其特征在于，所述侧流层析试纸包括平板(1)、样品垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸收垫(4)，样品垫(2)、硝酸纤维素膜(3)和吸收垫(4)依次粘贴在平板(1)的单侧表面，所述硝酸纤维素膜(3)的表面包被检测线(5)及质控线(7)，所述检测线上包被糖蛋白抗体(6)，金-苯硼酸-糖蛋白结合物通过与检测线上包被糖蛋白单克隆抗体结合，使得金纳米颗粒聚集于检测线，显红色；所述质控线上包被生物素(8)，金-链霉亲和素结合物通过与质控线上包被的生物素结合，使得金纳米颗粒聚集于质控线，显红色。2.根据权利要求1所述的侧流免疫层析试纸，其特征在于，所述金-苯硼酸-糖蛋白结合物，通过将苯硼酸加入金纳米颗粒，制得苯硼酸功能化的金纳米颗粒；将苯硼酸功能化的金纳米颗粒加入待测糖蛋白，混合后加入牛血清白蛋白得到金-苯硼酸-糖蛋白结合物。3.根据权利要求1所述的侧流免疫层析试纸，其特征在于，所述金-链霉亲和素结合物，通过将链霉亲和素加入金纳米颗粒，混合后再加入牛血清白蛋白得金-链霉亲和素结合物。4.根据权利要求1所述的侧流免疫层析试纸，其特征在于，所述样品垫为聚酯膜通过曲拉通x-100、氯化钠和tris-hcl处理并烘干，所述样品垫和硝酸纤维素膜的交界重叠1-3mm，硝酸纤维素膜和吸收垫的交界重叠1-3mm。5.一种权利要求1所述的硼酸亲和侧流免疫层析试纸的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取氯金酸溶液，搅拌加热并加入还原剂，制得胶体金纳米颗粒溶液，与苯硼酸溶液混合搅拌，离心去除游离的苯硼酸，真空干燥得到金-苯硼酸纳米颗粒；(2)取金-苯硼酸纳米颗粒加入待测糖蛋白，混合后加入牛血清白蛋白，得到金-苯硼酸-待测糖蛋白结合物；(3)通过将链霉亲和素加入金纳米颗粒，混合后再加入牛血清白蛋白得金-链霉亲和素结合物；(4)取步骤(2)制得的金-苯硼酸-糖蛋白结合物溶液和步骤(3)制得的金-链霉亲和素结合物溶液混合后，金-苯硼酸-糖蛋白结合物溶液和金-链霉亲和素结合物溶液的体积比为1：0.5-2，得金-苯硼酸-糖蛋白结合物和金-链霉亲和素结合物混合溶液；(5)侧流免疫层析试纸条制备：将样品垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次粘贴到平板上彼此重叠1-3mm，组装成侧流免疫层析试纸，所述硝酸纤维素膜的表面包被检测线以及质控线，所述检测线上包被糖蛋白抗体；所述质控线上包被生物素；(6)取步骤(3)制得的金-苯硼酸-糖蛋白结合物和金-链霉亲和素结合物混合溶液，滴加于试纸条的样品垫，样品溶液往吸收垫方向迁移，金-链霉亲和素结合物能与硝酸纤维素膜上的检测线包被的生物素进行链霉亲和素-生物素系统识别，金纳米颗粒聚集于质控线，待检测糖蛋白能与硝酸纤维素膜上的检测线包被的糖蛋白抗体进行特异性抗原抗体识别，金纳米颗粒聚集于检测线，检测线出现红色条带，可通过裸眼进行定性判断；用colorpicker软件分析检测线的rgb值，与标准曲线对比，实现样品中的糖蛋白浓度的比色信号的定量判断。6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述氯金酸溶液浓度为0.1％-10％，还原剂的浓度为0.1％-10％，苯硼酸浓度为0.1-1g/l；所述胶体金纳米颗粒溶液与苯硼酸溶液的体积比为100:1-10。
7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述糖蛋白的浓度为0-10μg/ml，所述混合时间为0.1-2h，所述牛血清白蛋白浓度为1％-20％。8.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述链霉亲和素浓度为0.1-10g/l，所述混合时间为0.1-1h，所述牛血清白蛋白浓度为1％-10％。9.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，步骤(5)中，所述样品垫的制备具体为，将聚酯膜浸入样品垫处理液处理10-24h，然后于烘箱25-40℃烘干2-10h，得到样品垫；所述样品垫处理液由曲拉通-100、氯化钠和tris-hcl组成；所述硝酸纤维素膜的制备具体为，将待检测糖蛋白抗体以0.4-3μl/cm速率分配到硝酸纤维素膜上形成检测线，将生物素以0.4-3μl/cm速率分配到硝酸纤维素膜上形成质控线。10.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，步骤(6)中，所述colorpicker软件分析各个糖蛋白浓度下的检测线rgb值，拟合制定比色信号标准曲线。根据待检测样品检测线rgb值，实现定量判断样品中的糖蛋白浓度。

技术总结
本发明公开了一种硼酸亲和侧流免疫层析试纸及其检测方法，所述侧流层析试纸包括平板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，通过制备金-苯硼酸纳米颗粒、制备金-苯硼酸-糖蛋白结合物、制备侧流层析试纸条和侧流层析检测的步骤，即可完成所述侧流层析检测方法；所述检测方法快速、高灵敏度、高特异性，可现场即时检测并同时完成定性和定量测试，与传统的双抗体夹心胶体金法相比，该方法不需要配对抗体的使用，在灵敏度、成本、稳定性和操作方面比传统的双抗体夹心胶体金法有明显的优势。双抗体夹心胶体金法有明显的优势。双抗体夹心胶体金法有明显的优势。


技术研发人员：鞠艳敏 戴建君 吴鹏程
受保护的技术使用者：中国药科大学
技术研发日：2023.06.20
技术公布日：2023/9/20