SRA基因在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用

sra基因在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及sra基因在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用，属于医药技术领域。


背景技术：

2.心肌肥厚是心脏在各种机械应力或者神经激素刺激下的适应性反应。病理性心肌肥厚导致心肌细胞的凋亡及间质纤维化从而引发心力衰竭，早期诊断和治疗心肌肥厚是改善心衰预后的有效策略。虽然β受体阻滞剂、醛固酮拮抗剂和血管紧张素转换酶抑制剂已被广泛用于治疗心肌肥厚，但这些药物容易引发不良反应，如停药反弹、心力衰竭加重、低血压、心律失常、肾衰竭和哮喘等。因此，寻找安全有效的治疗心肌肥厚的新型药物势在必行。近年来，越来越多的研究聚焦影响心肌发育的lncrnas，探索其在心肌肥厚中的病理生理作用，以及成为心肌肥厚治疗靶点的可行性。
3.本发明通过大量实验筛选发现，类固醇受体rna激活因子(steroid receptor rna activator,sra)是一种心肌肥厚发生时在心脏中异常上调的lncrna，敲除或敲降sra可显著缓解小鼠心肌肥厚的发展。


技术实现要素：

4.发明目的：本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中治疗心肌肥厚的不足，提供sra基因在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用。
5.技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：
6.sra基因在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用。
7.sra基因表达抑制剂在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用。
8.aav-shsra腺相关病毒可通过下调心脏sra表达在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用。
9.有益效果：本发明通过大量实验研究结果表明sra基因和心肌肥厚的直接相关性，实验发现sra在肥厚的心肌中表达水平显著上调，sra的缺失或下调可抵抗iso诱导的小鼠心肌肥厚，并提升了心脏的泵血功能。sra基因可作为治疗心肌肥厚的新靶点；和现有技术相比，本发明从基因水平治疗心肌肥厚，具有针对性强，疗效好，不良反应低的优点。
附图说明
10.图1是类固醇受体rna激活因子(sra)缺乏可减轻异丙肾上腺素(iso)诱导的小鼠心肌肥厚实验结果图。
11.图2是心脏特异性敲降类固醇受体rna激活因子(sra)可减轻异丙肾上腺素(iso)诱导的小鼠心肌肥厚实验结果图。
具体实施方式
12.下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明
而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本技术所附权利要求所限定的范围。
13.实施例1
14.1、实验材料
15.sra敲除小鼠由美国密歇根大学徐斌教授惠赠，c57bl/6小鼠购自南京医科大学动物中心。实验动物均饲养在spf即动物房内。
16.异丙肾上腺素(medchemexpress，上海，中国)
17.微型渗透泵(model 2004d，alzet，库比蒂诺，加利福尼亚，美国)
18.多普勒超声仪(vevo 2100，visualsonics，加拿大)
19.小型动物麻醉机(r510-25，深圳瑞沃德生命科技有限公司，深圳，中国)
20.异氟烷(深圳瑞沃德生命科技有限公司，深圳，中国)
21.aav9型腺相关病毒以cardiac troponin t启动子启动表达敲降sra的shrna(aav-shsra)，由applied biological materials inc(里士满,加拿大)构建并纯化。aav-shsra及其对照病毒(aav-shcon)滴度分别为1.78
×
10
12
gc/ml和2.03
×
10
12
gc/ml。
22.2、实验方法
23.2.1小鼠心肌肥厚模型的制备
24.以异氟烷为麻醉剂，通过小型动物麻醉机吸入麻醉小鼠，在小鼠颈背部两肩胛骨正中纵切约1厘米切口，对皮下组织进行钝性分离，制作一个1.5厘米
×
4厘米囊袋。在囊袋中植入内含异丙肾上腺素的微型渗透泵，持续给与异丙肾上腺素(iso,20mg/kg/day)两周，诱导小鼠心肌肥厚。
25.选用8周龄雄性sra敲除小鼠(ko)及其野生对照小鼠(wt)，各6只，体重22～25g，通过植入微型渗透泵，持续给与iso(20mg/kg/day)两周，诱导心肌肥厚。
26.选用5周龄c57bl/6雄性小鼠16只(16～18g)，按体重随机分为两组，分别尾静脉注射aav-shsra和aav-shcon，注射剂量1.5
×
10
11
gc/鼠。一周之后重复注射一次。首次注射病毒3周后皮下植入微型渗透泵，持续给与异丙肾上腺素(iso,20mg/kg/day)两周，诱导小鼠心肌肥厚。
27.2.2小鼠心脏结构与功能的检测
28.心脏多普勒超声仪(vevo2100系统)，45mhz的超声探头检测并生成心脏超声心动图，获得左室后壁厚度(left ventricular posterior wall diameter,lvpwd)、左室间隔厚度(interventricular septum diameter,ivsd),左室舒展末期内径(left ventricular end-diastolic diameter,lvidd)以及左室收缩末期内径期内径(left ventricular end-systolic diameter,lvids)。射血分数(ejection fraction,ef)、左室收缩末期容积(left ventricular end-systolic volume,lvesv)、左室舒展末期容积(left ventricular end-diastolic volume,lvedv)和左室重量指数(left ventricular mass,lv mass)通过以下公式计算。
29.lvesv＝7.0/(2.4+lvids)*lvids3；
30.lvedv＝7.0/(2.4+lvidd)*lvidd3；
31.ef＝100*((lvedv-lvesv)/lvedv)；
32.lv mass＝1.053*((lvidd+lvpwd+ivsd)
3-lvidd3)
33.处死动物后测量心脏质量及体重。用苏木素-伊红(h&e)染色方法观察心脏组织学形态，使用imagej测量心脏直径、计算心肌纤维横截面积。
34.3、实验结果
35.3.1sra敲除缓解iso诱导的小鼠心肌肥厚并改善心脏功能
36.本发明通过皮下植入微型渗透泵持续给与iso，诱发小鼠心肌肥厚，发现sra在肥厚的心肌中表达水平显著上调(图1a)。为检验sra在心肌肥厚发生发展中的功能，本发明在野生对照小鼠(wt)和sra敲除小鼠(ko)上复制心肌肥厚模型。实验发现sra的缺失在不影响小鼠体重的前提下，可显著抑制心脏的肥厚并下调心脏重量(图1c-d)。h&e染色显示sra敲除可显著缩小心脏横截面直径以及心肌纤维横截面积(图1e-g)。另外心脏超声证明，ko较之wt小鼠心脏室间隔厚度(ivsd)、左室游离壁厚度(lvpwd)、左室重量指数(lv mass)都显著下降，而射血分数(ef)(一项心脏功能指标)则表现出显著回升(图1h-i)。这些结果证明，sra的缺失可抵抗iso诱导的小鼠心肌肥厚，并可提升心脏的泵血功能。
37.3.2心脏特异性敲降sra缓解iso诱导的小鼠心肌肥厚并改善心脏功能
38.本发明利用aav-shsra腺相关病毒载体下调心脏sra表达，但不影响其它组织中sra水平(图2a)。实验结果显示，心脏特异性下调sra显著抑制iso诱导的心肌肥厚并下调心脏/体重比，同时减少心脏横截面直径以及心肌纤维横截面积(图2b-f)。并且心脏超声证明，心脏sra的下调显著降低心脏室间隔厚度(ivsd)、左室游离壁厚度(lvpwd)，提升心脏射血(ef)分数(图2g-h)。这些结果说明靶向sra是治疗心肌肥厚的有效方法。
39.以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理和构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：
1.sra基因在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用。2.sra基因表达抑制剂在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用。3.aav-shsra腺相关病毒通过下调心脏sra表达在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用。

技术总结
本发明提供了SRA基因在制备治疗心肌肥厚的药物中的应用，本发明通过大量实验研究结果表明SRA基因和心肌肥厚的直接相关性，实验发现SRA在肥厚的心肌中表达水平显著上调，SRA的缺失或下调可抵抗ISO诱导的小鼠心肌肥厚，并提升了心脏的泵血功能。SRA基因可作为治疗心肌肥厚的新靶点；和现有技术相比，本发明从基因水平治疗心肌肥厚，具有针对性强，疗效好，不良反应低的优点。良反应低的优点。良反应低的优点。


技术研发人员：盛亮 刘卓群
受保护的技术使用者：南京医科大学
技术研发日：2023.07.04
技术公布日：2023/8/31