包含棉花、苦瓜、木槿花及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物及其制备方法与流程

1.本发明涉及一种化妆品组合物及其制备方法，更详细地，涉及一种通过包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分来实现保湿效果的包含棉花、苦瓜、木槿花及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物及其制备方法。


背景技术：

2.皮肤是抵御外部环境的主要屏障，起到保护我们身体免受来自伤口、感染、水分流失及紫外线等的伤害的重要作用。紫外线等是通过损伤皮肤来导致皮肤老化的主要原因之一，在皮肤领域的研究中，正在开展大量对于紫外线与皮肤之间的相关关系的研究。
3.皮肤保湿起到在保护身体免受各种来自外部的刺激的同时阻隔内侧的水分流失的屏障功能，为了实现水分屏障功能，将在皮肤的表皮层通过分化过程来含有水分并发育成薄角质层(stratum corneum)。在结构上，角质层的细胞起到砖块般的作用，角质细胞的细胞间脂质起到砂浆般的作用，从而构成皮肤屏障。
4.然而，随着人的年龄增长，出现干燥皮肤增多的倾向，由于室内供暖以及空气污染等，对皮肤保湿剂的需求增加。为此，作为皮肤保湿剂，多元醇、糖类作为一般保湿剂与化妆品配合来使用。但是，存在皮肤出现黏稠感的缺点，还存在不能对皮肤起到充分的保湿效果的问题。
5.并且，在湿度非常高的夏季，从外部吸收水分而导致皮肤黏稠，而在冬季会因外部空气湿度低而导致从皮肤中吸走水分并出现皮肤干燥的问题。人的皮肤对相对湿度非常敏感，通常会在相对湿度在40～70％时感觉舒适。相对湿度是指用百分比(％)表示在1m3的空气中的水蒸气量与相同温度下的饱和水蒸气量的比值。在韩国，夏季因湿度高而非常潮湿，冬季因相对湿度低而非常干燥。季节的变化及湿度的变化还对人的皮肤产生很大的影响，因高温高湿而导致相对湿度高的夏季会增加不适感，干燥的冬季会因相对湿度低而使嘴唇或皮肤因干燥而破裂，有时还会感到呼吸困难。这是因为，当相对湿度高时，从空气中吸收水分而变得黏稠，相反，当相对湿度低时，皮肤的水分会蒸发而变得干燥。尤其，当相对湿度低时，皮肤的干燥往往伴随紧绷、瘙痒症。
6.各种化妆品组合物使用油、糖、多元醇等各种保湿剂，以克服皮肤的干燥。例如，通过使用作为皮肤组成成分的神经酰胺、胆固醇以及脂肪酸等来强化皮肤屏障功能，从而抑制水分从皮肤中蒸发，或者通过使用皮肤表面上的水分结合能力很强的糖、多元醇等来强化保持皮肤水分的能力，以提高皮肤的保湿效果。但是，在相对湿度低的冬季，无法长时间保持这种效果，在相对湿度高的夏季反而会带来不适感，很难根据相对湿度的变化来制备合适的化妆品组合物。
7.为了解决这种问题，现有的技术主要试图通过化学成分来解决如上所述的问题。然而，使用化学成分的化妆品存在可能会引发副作用并且在生态学上不可持续的问题。因此，正在对组合各种天然植物的化妆品原料进行研究。
8.现有技术文献
9.专利文献
10.专利文献0001：韩国授权专利公报第10-2348707号(公告日期：2022年01月06日)，“包含多西他赛或其药剂学上可允许的盐的用于皮肤弹力、皱纹改善、保湿或抗炎症的化妆品或药物组合物”

技术实现要素：

11.要解决的技术问题
12.为了解决如上所述的问题，本发明的目的在于提供一种通过包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分来实现保湿效果的包含棉花、苦瓜、木槿花及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物及其制备方法。
13.解决问题的技术方案
14.为了实现如上所述的目的，本发明提供一种包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物，其特征在于，包含对棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合物进行提取的混合提取物。
15.并且，本发明的特征在于，上述混合物分别以0.1～2.5：0.1～2.5：0.1～2.5：0.1～2.5的重量比混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵。
16.并且，本发明的特征在于，上述混合提取物用选自由纯净水、碳数为1至4的无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯以及1，3-丁二醇组成的组中的任一种提取溶剂提取。
17.并且，本发明的特征在于，在将上述混合提取物冷却至室温后，用过滤布过滤并减压浓缩。
18.并且，本发明提供一种包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物的制备方法，其包括：混合物制备步骤s10，混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵来制备混合物；提取步骤s20，将在上述混合物制备步骤s10中制备的混合物与选自由纯净水、碳数为1至4的无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯以及1，3-丁二醇组成的组中的任一种提取溶剂混合来提取混合提取物；以及过滤浓缩步骤s30，对上述提取步骤s20中的混合提取物进行冷却、过滤并减压浓缩。
19.并且，在上述提取步骤s20中，以0.1～2.0：10.0～30.0的重量比混合在上述混合物制备步骤s10中制备的混合物与提取溶剂，并在80～100℃的温度下提取2～6小时。
20.并且，在上述过滤浓缩步骤s30中，在室温下冷却上述提取步骤s20中的混合提取物，之后用200～600目的过滤布过滤并减压浓缩。
21.发明的有益效果
22.根据本发明的制备方法来制备的包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物，因包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分而具有保湿效果。
附图说明
23.图1为示出本发明的包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分
的化妆品组合物的制备工艺的流程图。
24.图2为关于制备例1至制备例5的细胞存活率的柱状图。
25.图3为关于制备例1至制备例5的胶原蛋白合成促进功效的柱状图。
26.图4为关于制备例1至制备例5的保湿基因表达评价的柱状图。
27.图5为关于制备例1至制备例5的角质形成细胞中的角质膜形成诱导效果的柱状图。
28.图6为关于实施例1以及比较例1至比较例4的皮肤保湿改善效果的柱状图。
29.图7为关于实施例1以及比较例1至比较例4的经皮水分损失的柱状图。
30.附图标记的说明
31.s10：混合物制备步骤
32.s20：提取步骤
33.s30：过滤浓缩步骤
具体实施方式
34.以下的关于本发明的详细说明是可以实施本发明的实施例，将参照作为相应实施例的示例而示出的附图。以下将详细说明这些实施例，以使本领域技术人员能够充分实施本发明。应理解，虽然本发明的各种实施例互不相同，但不需要相互排斥。例如，本文中记载的关于一实施例的特定形状、结构以及特性可在不脱离本发明的思想以及范围的情况下体现为其他实施例。并且，应理解，所记载的各个实施例内的个别结构要素的位置或布置可以在不脱离本发明的思想以及范围的情况下进行修饰。
35.因此，后述的详细说明并不具有限制性的意义，如果得到详细说明，则本发明的范围仅限制于与其权利要求所主张的内容同等的所有范围以及所附的权利要求。附图中相似的附图标记在多个层面表示相同或相似的功能。
36.考虑到在本发明中的功能，本发明中所使用的术语尽可能地选择当前广泛使用的通用术语，但这可能会随着本领域技术人员的意图或先例、新技术的出现等而改变。并且，在特定情况下，也有申请人任意选择的术语，这种情况会在相应的发明的说明部分详细记载其含义。因此，本发明中所使用的术语应基于其术语的含义及本发明的整体内容来定义，而不是术语本身的名称。
37.在本发明中，当某一个部分“包括”某一个结构要素时，除非另有特别相反的记载，否则是指还可以包括其他结构要素，而不是排除其他结构要素。
38.以下，详细说明本发明的将棉花、苦瓜、木槿花及蜀葵的混合提取物作为有效成分包含的化妆品组合物及其制备方法。
39.本发明的化妆品组合物的特征在于，包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分。
40.上述棉花(陆地棉，gossypium hirsutum)为双子叶植物纲锦葵目锦葵科的一年生植物，也称为棉纤维(綿花)、草棉。虽然原产地为热带地区，但也在温带地区作为纤维作物广泛栽培。通常为一年生植物，但也有矮灌木状。在温带可以长到90cm左右高度，在热带可以长到2m高度。根笔直延伸，茎长得笔直且枝条岔开。
41.上述苦瓜(momordica charantia linnaeus)为双子叶植物纲葫芦目葫芦科的攀
援性一年生植物，叶片交错且叶柄长。叶片裂成5～7瓣且具有锯齿状。果实为椭圆形且覆盖有像瘤的突起。雌雄同株，花朵单生于叶腋间且开黄色花朵。上述苦瓜为攀援性且在高温高湿的气候下易于生长。
42.上述木槿花(hibiscus syriacus(althaea frutex))为锦葵科的落叶灌木，也被称为槿花。耐寒性，高为2～4m，有时几乎能长成乔木。整体无毛，分枝多，呈灰色。叶晚发芽且交错，叶柄短，叶片为菱形或蛋形，叶片长为4～6cm，宽为2.5～5cm，叶片浅裂成3瓣，边缘为不规则的锯齿状。叶片表面无毛，但叶片背面有毛。花朵单生于新长的叶腋间，整体为钟形，花柄短。
43.上述蜀葵(althaea rosea)为一种具有悠久历史的锦葵科花卉，生长在韩国各地。如果在春季或夏季播种，那年只长出茂密的叶片，次年才会长出茎并开花。花朵有各种颜色并分为单瓣和重瓣。茎、花朵、叶片、根可用作中药材。
44.优选地，本发明的组合物包含用提取溶剂对以0.1～2.5：0.1～2.5：0.1～2.5：0.1～2.5的重量比混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合物进行提取的混合提取物，更具体的重量比为，优选地以1：1：1：1的重量比混合提取棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵。
45.在此情况下，将棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合物用选自由纯净水、碳数为1至4的无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯以及1，3-丁二醇组成的组中的任一种提取溶剂来提取是合适的，最具体地，优选地可用纯净水提取。
46.另一方面，在本发明的组合物中，能够以0.1～2.0：10.0～30.0的重量比混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合物与提取溶剂来提取。更具体地，最优选地以1.0：20.0的重量比混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合物与提取溶剂来提取。
47.并且，对于本发明的组合物而言，用提取溶剂提取棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合物时，优选地在80～100℃的温度下提取2～6小时。更具体地，最优选地可以混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合物与提取溶剂，并在90℃的温度下提取4小时。
48.另一方面，优选地，本发明的组合物用提取溶剂提取棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合物，并冷却至室温后，用200～600目的过滤布过滤并减压浓缩。
49.综上所述，可如下获得本发明的组合物，即，以0.1～2.0：10.0～30.0的重量比混合以0.1～2.5：0.1～2.5：0.1～2.5：0.1～2.5的重量比混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵而得的混合物与选自由纯净水、碳数为1至4的无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯以及1，3-丁二醇组成的组中的任一种提取溶剂，并在80～100℃的温度下提取2～6小时，冷却至室温后，用200～600目的过滤布过滤并减压浓缩。
50.最合适地，以1：20的重量比混合以1：1：1：1的重量比混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵而得的混合物与纯净水，并在90℃的温度下提取4小时，冷却至室温后，用400目的过滤布过滤并减压浓缩。
51.除本发明的组合物以外，本发明包含通常用于化妆品组合物的成分，例如，包含抗氧化剂、稳定剂、助溶剂、维生素、颜料、色素以及香料等一般辅剂以及载体。
52.本发明的化妆品组合物可以制成本领域通常制备的所有剂型，例如，可以制成溶液、悬浮液、乳液、膏、凝胶、霜、液、粉、皂、含表面活性剂的清洁剂、油、粉状粉底、乳液状粉底、蜡状粉底以及喷雾等，但不限于此。更详细地，可以制成柔软化妆水、滋养化妆水、滋养霜、按摩霜、精华、面膜、眼霜、卸妆膏、洁面泡沫、卸妆水、面膜、喷雾或粉剂型。
53.在本发明的剂型为膏、霜或凝胶的情况下，可以使用选自动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、二氧化硅、滑石或氧化锌中的一种以上作为载体成分。
54.在本发明的剂型为粉或喷雾的情况下，可以使用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙、聚酰胺粉末作为载体成分，尤其在喷雾的情况下，可以额外包含氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚等促进剂。
55.在本发明的剂型为溶液或乳液的情况下，使用溶剂、增溶剂或乳化剂作为载体成分，例如，可以使用选自水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、丁二醇、1,3-丁二醇油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、甘油(glycerol)、丙三醇(glycerin)、脂肪族酯、苯氧乙醇、三乙醇胺、聚乙二醇、蜜蜡、聚山梨醇酯60、失水山梨醇倍半油酸酯、石蜡、脱水山梨糖醇硬脂酸酯、亲脂性单硬酯酸甘油、硬脂酸、硬脂酸甘油酯/聚乙二醇400硬脂酸酯、羧基聚合物、谷甾醇、聚甘油2-油酸酯、神经酰胺、胆固醇、steareth-4、双十六烷基磷酸、澳洲坚果油、羧基乙烯基聚合物、黄原胶或山梨聚糖脂肪酸酯中的一种以上。
56.在本发明的剂型为悬浮液的情况下，可以使用选自以下中的一种以上作为载体成分：如水、乙醇、甘油、丁二醇或丙二醇等液体稀释剂；如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯以及聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯等悬浮液；微晶纤维素、羟乙基纤维素、透明质酸钠、苯氧乙醇、偏氢氧化铝、膨润土、硬脂酸、鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、失水山梨醇倍半油酸酯、单硬脂酸甘油酯/硬脂酸甘油酯/聚氧乙烯硬脂酸酯、蜡、石蜡、角鲨烷、辛酸/癸酸甘油三酯、羧乙烯基聚合物、三乙醇胺、琼脂或黄蓍。
57.在本发明的剂型为含表面活性剂的清洁剂的情况下，可以使用选自脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、牛磺酸甲酯、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐，椰油酰胺丙基甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯中的一种以上作为载体成分。
58.并且，本发明一实施例的化妆品组合物的使用功效可以随着个人的皮肤状态及状况、外部环境条件适当地调整。
59.以下，将详细说明本发明的包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物的制备方法。
60.本发明的包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物的制备方法包括：混合物制备步骤s10，混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵来制备混合物；提取步骤s20，将在上述混合物制备步骤s10中制备的混合物与选自由纯净水、碳数为1至4的无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯以及1，3-丁二醇组成的组中的任一种提取溶剂混合来提取混合提取物；以及过滤浓缩步骤s30，对上述提取步骤s20中的混合提取物进行冷却、过滤并减压浓缩。
61.首先，执行混合物制备步骤s10。
62.在上述混合物制备步骤s10中，混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵来制备混合物。
63.优选地，上述混合物制备步骤s10中的混合物分别以0.1～2.5：0.1～2.5：0.1～2.5：0.1～2.5的重量比混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵。
64.更具体地，优选地，上述混合物制备步骤s10中的混合物分别以1：1：1：1的重量比混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵。
65.然后，执行提取步骤s20。
66.在上述提取步骤s20中，将在上述混合物制备步骤s10中制备的混合物与选自由纯净水、碳数为1至4的无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯以及1，3-丁二醇组成的组中的任一种提取溶剂混合并提取来制备混合提取物。
67.在上述提取步骤s20中，以0.1～2.0：10.0～30.0的重量比混合在上述混合物制备步骤s10中制备的混合物与选自由纯净水、碳数为1至4的无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯以及1，3-丁二醇组成的组中的任一种提取溶剂，并在80～100℃的温度下提取2～6小时。
68.更具体地，优选地，在上述提取步骤s20中，以1：20的重量比混合在上述混合物制备步骤s10中制备的混合物与纯净水，并在90℃的温度下提取4小时。
69.然后，执行过滤浓缩步骤s30。
70.在上述过滤浓缩步骤s30中，对上述提取步骤s20中的混合提取物进行冷却、过滤并减压浓缩。
71.在上述过滤浓缩步骤s30中，在室温下冷却上述提取步骤s20中的混合提取物，之后用200～600目的过滤布过滤并减压浓缩。
72.更具体地，优选地，在上述过滤浓缩步骤s30中，在室温下冷却上述提取步骤s20中的混合提取物，之后用400目的过滤布过滤并减压浓缩。
73.以下，通过下述制备例、实施例、比较例以及实验例详细说明本发明的化妆品组合物的效果。
74.制备例1.制备本发明的混合提取物
75.以1：20的重量比混合以1：1：1：1的重量比混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵而得的混合物与纯净水，并在90℃的温度下提取4小时，冷却至室温后，用400目的过滤布过滤并减压浓缩。
76.制备例2.制备单独提取棉花的提取物
77.以1：20的重量比混合棉花与纯净水，并在90℃的温度下提取4小时，冷却至室温后，用400目的过滤布过滤并减压浓缩。
78.制备例3.制备单独提取苦瓜的提取物
79.以1：20的重量比混合苦瓜与纯净水，并在90℃的温度下提取4小时，冷却至室温后，用400目的过滤布过滤并减压浓缩。
80.制备例4.制备单独提取木槿花的提取物
81.以1：20的重量比混合木槿花与纯净水，并在90℃的温度下提取4小时，冷却至室温后，用400目的过滤布过滤并减压浓缩。
82.制备例5.制备单独提取蜀葵的提取物
83.以1：20的重量比混合蜀葵与纯净水，并在90℃的温度下提取4小时，冷却至室温后，用400目的过滤布过滤并减压浓缩。
84.实施例1以及比较例1至比较例4.制备使用制备例1至制备例5的剂型
85.如下表1所示，通过将上述制备例1至制备例5剂型化来制备实施例1以及比较例1至比较例4。
86.表1
[0087][0088]
实验例1.确认细胞存活率-四唑盐比色法(mtt assay)
[0089]
测定从上述制备例1至制备例5中获取的试样对细胞存活率的影响程度。在将从上述制备例1至制备例5中获取的试样悬浮于纯净水中来形成不同浓度(0.1％、0.5％、1％、3％、5％)后，通过如下方法测定细胞存活率。
[0090]
1)实验方法
[0091]
通过如下方法进行细胞毒性以及增殖实验。将正在培养的角质形成细胞株hacat细胞以5000细胞/孔接种到96孔的微孔板中并在恒温槽中培养30分钟后，以不同浓度(0.1％，0.5％，1％、3％，5％)给药试样并培养72小时。然后，给药噻唑蓝(thiazoline blue)并进一步培养4小时。除去培养液，在微孔板的每孔中添加反应终止液并搅拌5分钟后，在570nm处测定吸光度。对照组按试样的注入量给药10％胎牛血清(fetal bovine serum，fbs)培养基，在细胞生长的最佳条件下同时培养，将对照组的细胞增殖为100％来计算试样投入实验组的细胞增值率。
[0092]
2)实验结果
[0093]
通过数学式1来算出细胞增殖效果，其结果如下表2所示。
[0094]
数学式1
[0095][0096]
表2
[0097][0098]
实验结果，如表2以及图2所示，可以知道与制备例2至制备例5相比，包含本发明的混合提取物的制备例1的不同浓度下的细胞存活率最优异。
[0099]
实验例2.确认胶原蛋白生物合成促进功效-胶原蛋白合成(collagen synthesis)
[0100]
测定了上述制备例1至制备例5的胶原蛋白生成促进效果。
[0101]
1)实验方法
[0102]
将人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblast，龙沙(lonza)，瑞士(swiss))用包含10％胎牛血清(fbs)及1％青链霉素(penicillin-streptomycin)的dmem继代培养后，接种到96孔细胞培养板(96-well cell culture plate)中，在37℃的温度、5％的二氧化碳(co2)条件下培养24小时。之后，更换成无血清培养基(serum free media)后，将稀释的试样向细胞处理并培养24小时后回收上清液，通过procollagen type i c-peptide pip eia kit(takara，日本)测定胶原蛋白(collagen)合成量。取出20μl的每孔的上清液，与100μl的在常温下溶解的抗体-pod偶联物溶液(antibody-pod conjugate solution)混合来反应3小时。之后，用500μl的磷酸盐缓冲溶液(phosphate-buffered saline)清洗3次后，分别处理100μl的显色试剂。在反应15分钟后，放入同量的1n硫酸(1n sulfuric acid)(daejung，韩国)并进行反应后，通过酶标仪(microplate reader)(versamax
tm
，美国)在450nm处测定吸光度。
[0103]
2)实验结果
[0104]
通过下述数学式2来算出胶原蛋白生成促进率，并如下表3所示。
[0105]
数学式2
[0106][0107]
表3
[0108][0109]
实验结果，如表3以及图3所示，可以知道与制备例2至制备例5相比，包含本发明的混合提取物的制备例1的不同处理浓度的胶原蛋白合成促进效果最优异。
[0110]
实验例3.保湿基因表达评价-基因表达测定(gene expression assay)
[0111]
为了确认制备例1至制备例5的透明质酸tgm1基因的信使核糖核酸(mrna)合成促进效果，进行了实时聚合酶链式反应(real-time pcr)实验。
[0112]
在6-孔板中以2.5x105细胞/孔处理人角质形成细胞株hacat细胞后，在37℃的温度、5％的二氧化碳(co2)条件下在dmem、10％胎牛血清(fbs)、1％青链霉素(penicillin-streptomycin)培养基中培养24小时。24小时后，除去前次用于培养的培养基，并处理分别以0.1％、0.5％、1％、3％、5％的浓度稀释于培养基中的制备例1至制备例5，在37℃的温度、5％的二氧化碳(co2)条件下反应18小时。
[0113]
18小时后回收细胞，通过核糖核酸(rna)提取试剂盒(kit)(内含子，intron)提取核糖核酸(rna)。测定核糖核酸(rna)浓度及纯度后，通过互补脱氧核糖核酸(cdna)合成试剂盒(kit)用1ug的核糖核酸(rna)合成互补脱氧核糖核酸(cdna)。之后，使用甘油醛-3-磷酸脱氢酶引物(gapdh primer)进行实时聚合酶链式反应(real-time pcr)。
[0114]
下述表4示出制备例1至制备例5的不同浓度的tgm1基因的信使核糖核酸(mrna)的表达量，可以确认与制备例2至制备例5相比，处理制备例1的实验组的tgm1的信使核糖核酸(mrna)的表达量增加。
[0115]
表4
[0116][0117]
实验例4.确认角质形成细胞中的角质膜形成诱导效果-角化包膜试验(cornified envelope assay)
[0118]
确认了上述制备例1至制备例5的角质形成细胞中的角质膜形成诱导效果。
[0119]
1)实验方法
[0120]
将人正常角质形成细胞(human normal keratinocyte)在包含生长因子的培养基中继代培养。之后，将其接种到平板培养基中，在5％的二氧化碳(co2)、37℃的温度条件下培养至70～80％后，以不同浓度处理制备例1至制备例5的试样来试验表皮细胞的分化能力。在此情况下，使用1.20mm ca2+处理组作为阳性对照组。将其在37℃的温度下培养48小时后，用磷酸缓冲盐溶液(pbs)清洗并回收细胞，在85℃的温度下煮沸15分钟，以洗脱细胞。取出一部分用作为蛋白质定量评价时的基准，将剩余部分离心分离(1200rpm，30分钟)，将分离的沉淀物再次悬浮于磷酸缓冲盐溶液(pbs)中，在340nm处测定吸光度。将处理成0.03mm的ca
2+
的组作为100％阴性对照组，换算与其相对的表皮分化程度来相比较。
[0121]
2)实验结果
[0122]
角质形成细胞中的角质膜形成诱导效果如下表5所示。
[0123]
表5
[0124][0125]
实验结果，如表5以及图5所示，可以知道与制备例2至制备例5相比，包含本发明的混合提取物的制备例1的角质形成细胞中的角质膜形成诱导效果最优异。
[0126]
实验例5.确认皮肤保湿效果
[0127]
1)实验方法
[0128]
用在上述实施例1以及比较例1至比较例4中制备的化妆品组合物来以1天2次连续4周的时间分别向30名测试对象(20岁-45岁的男性以及女性)的面部两侧以及前侧涂抹在实施例1以及比较例1至比较例4中制备的化妆品组合物，并通过皮肤水分测量仪(皮肤水分含量测试探头，corneometer cm820，courage+khazaka，德国)测定涂抹前、涂抹2周后、涂抹4周后的皮肤保湿改善状态，单位为仪器给出的任意单位(arbitrary unit，au)，测定值越高，意味着皮肤表面的水分含量越高。
[0129]
2)实验结果
[0130]
皮肤保湿改善的实验结果如表6所示。
[0131]
表6
[0132][0133]
实验结果，如6以及图6所示，可以知道与比较例1至比较例4相比，包含本发明的混合提取物的实施例1的皮肤保湿改善效果最优异。
[0134]
实验例6.确认经皮失水量抑制率
[0135]
1)实验方法
[0136]
用上述实施例1以及比较例1至比较例4中制备的化妆品组合物来分别将30名受试对象(20岁-45岁的男性以及女性)的上臂部位设定为测定部位并标记横、竖为2
×
2cm2大小的试验部位后测定了经皮失水量。在试验部位涂抹化妆品组合物后充分揉搓，并通过皮肤水分流失测试仪(tewameter tm210，c+k eletronic gmhh.德国)测定了经皮失水量。以涂抹前0小时的水分含量为基准，测定了涂抹后30分钟、涂抹1天后、涂抹4天后、涂抹8天后的水分增长率(％)，以评价短期保湿效果。当测定时，使探头(probe)垂直接触并维持60秒钟的水平，连续测定了3次经皮失水量的抑制率。测定是以相同条件在恒温恒湿室内进行，数值越高，意味着水分损失越少。
[0137]
表7
[0138][0139]
实验结果，如表7以及图7所示，可以知道与比较例1至比较例4相比，包含本发明的混合提取物的实施例1的经皮失水量抑制率最优异。
[0140]
剂型例1.制备爽肤水剂型
[0141]
使用本发明的混合提取物的爽肤水的处方例如下表8所示。
[0142]
表8
[0143][0144]
剂型例2.制备乳液剂型
[0145]
使用本发明的混合提取物的乳液的处方例如下表9所示。
[0146]
表9
[0147]
[0148][0149]
剂型例3.制备乳霜剂型
[0150]
使用本发明的混合提取物的乳霜的处方例如下表10所示。
[0151]
表10
[0152]
[0153][0154]
尽管结合附图说明了本发明，但这不过是包括本发明的主旨的各种实施方式中的一个实施例，其目的在于使本领域普通技术人员容易实施，很显然，本发明并不限定于以上说明的实施例。因此，本发明的保护范围应根据所附发明要求保护范围进行解释，在不脱离本发明的主旨的范围内，通过变更、替换、代替等形成的同等范围内的所有技术思想均属于本发明的权利。并且，要明确的是，为了更明确地说明结构，附图中的一部分结构要比实际夸大或缩小。

技术特征：
1.一种包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物，其特征在于，包含对棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合物进行提取的混合提取物。2.根据权利要求1所述的包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物，其特征在于，上述混合物分别以0.1～2.5：0.1～2.5：0.1～2.5：0.1～2.5的重量比混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵。3.根据权利要求1所述的包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物，其特征在于，上述混合提取物用选自由纯净水、碳数为1至4的无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯以及1，3-丁二醇组成的组中的任一种提取溶剂提取。4.根据权利要求1所述的包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物，其特征在于，在将上述混合提取物冷却至室温后，用过滤布过滤并减压浓缩。5.一种包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物的制备方法，其特征在于，包括：混合物制备步骤(s10)，混合棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵来制备混合物；提取步骤(s20)，将在上述混合物制备步骤(s10)中制备的混合物与选自由纯净水、碳数为1至4的无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯以及1，3-丁二醇组成的组中的任一种提取溶剂混合来提取混合提取物；以及过滤浓缩步骤(s30)，对上述提取步骤(s20)中的混合提取物进行冷却、过滤并减压浓缩。6.根据权利要求5所述的包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物的制备方法，其特征在于，在上述提取步骤(s20)中，以0.1～2.0：10.0～30.0的重量比混合在上述混合物制备步骤(s10)中制备的混合物与提取溶剂，并在80～100℃的温度下提取2～6小时。7.根据权利要求5所述的包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分的化妆品组合物的制备方法，其特征在于，在上述过滤浓缩步骤(s30)中，在室温下冷却上述提取步骤(s20)中的混合提取物，之后用200～600目的过滤布过滤并减压浓缩。

技术总结
本发明涉及一种通过包含棉花、苦瓜、木槿花以及蜀葵的混合提取物作为有效成分来实现保湿效果的化妆品组合物及其制备方法。保湿效果的化妆品组合物及其制备方法。保湿效果的化妆品组合物及其制备方法。


技术研发人员：郑义洙 李宗燮 朴珉喜 李银模 车永权 金台勋 苏垧锡 宋艺瑟 金镇贤
受保护的技术使用者：蔻诗曼嘉韩国股份公司
技术研发日：2022.09.07
技术公布日：2023/8/31