一种稳定的益生菌营养膏及其制备方法和用途

1.本发明属于益生菌技术领域，更具体地，本发明涉及一种稳定的益生菌营养膏及其制备方法和用途。


背景技术：

2.益生菌(probiotics)是一类能够改善宿主肠内微生物平衡，并对宿主产生正面效益的微生物。由于菌体对外界环境高度敏感，在生产、储存和使用过程中容易出现存活率低或生物活性差等问题，极大地降低了益生菌的益生效果。如在实际应用过程中，益生菌常常受到胃酸和胆汁的作用，在进入人体肠道后活性降低甚至消失而无法发挥其作用。因此，必须通过一些方法提高益生菌在肠道中的存活率。
3.微胶囊化技术是采用天然或合成的高分子材料为囊材，通过化学、物理或物理化学法将活性物质即囊芯材包裹起来形成半透性或密封性囊膜的微型胶囊。然而一些研究表明，微囊化对益生菌在胃液中的存活并没有显现出较好的保护效果。目前主要通过3种手段提高微囊对活菌的保护效果：第一种是通过在微囊表面进行包衣；第二种是使用多种壁材复配；第三种是在壁材中加入益生元，提高益生菌对不利生长环境的适应性，从而提高其存活率。微胶囊主要有储集型、基质型和涂层基质型三种类型。其中芯材被壁材膜完全包被的为储集型微胶囊，芯材被分散在壁材内部和表面的为基质型微胶囊，涂层基质型微胶囊则是前两者的结合。其中，双层包埋制得的涂层基质型微囊较多。
4.现有技术cn115769896a、cn115844018a、cn115769895a、cn116076733a、cn116076730a公开了益生菌微胶囊，然而目前已报道的微胶囊很难在液体环境(水分活度较高，例如，含水的营养膏)中，长期存活，主要原因是传统的微胶囊容易在水分活度高的环境中易破裂，导致益生菌释放出来而失活。
5.因此，需要一种在水分活度高的环境中保持高活性的益生菌产品。


技术实现要素：

6.本发明提供了一种稳定性好的益生菌营养膏。为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
7.一种稳定的益生菌营养膏，其包括(1)芯材，其包含益生菌和第一油相(o1)，(2)中间油相(o2)层，其包含第一油相(o1)、益生元、乳清蛋白和中链甘油三酯，和(3)外水相层，其包含维生素、氨基酸、矿物质元素和功能性添加剂，所述第一油相包含鱼油和表面活性剂。
8.在另一优选例中，芯材、中间油相层和外水相层的重量比为3～4:0.1～0.5:5～6。在另一优选例中，所述芯材中益生菌的重量含量为30％～50％，更佳地25％～35％。在另一优选例中，所述第一油相中鱼油与表面活性剂的重量比为1:0.01～0.03。在另一优选例中，所述中间油相层中第一油相(o1)、益生元、乳清蛋白和中链甘油三酯的重量比为4～5:1～3:1～2:3～4。
9.在另一优选例中，所述益生菌选自青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、两歧双歧杆菌、
短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、弯曲乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、德氏乳杆菌乳亚种、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜热链球菌、乳酸乳球菌乳酸亚种，乳酸乳球菌乳脂亚种，乳酸乳球菌双乙酰亚种，费氏丙酸杆菌谢氏亚种，肠膜明串菌肠膜亚种，马克斯克鲁维酵母，乳酸片球菌，戊糖片球菌，或其组合。
10.在另一优选例中，所述中链甘油三酯选自亚油酸(ω-6)、α-亚麻酸(ω-3)、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸，或组合。
11.在另一优选例中，表面活性剂的亲水亲油平衡值hlb＝4～5.5。在另一优选例中，所述表面活性剂选自span 80、tween 80、十二烷基磺酸钠，较佳地，tween 80。
12.在另一优选例中，所述维生素选自维生素a、维生素e、硫胺素(维生素b1)、核黄素(维生素b2)、泛酸(维生素b5)、维生素b12、吡哆醇、维生素k、牛磺酸、烟酸、叶酸、胆碱，或其组合。
13.在另一优选例中，所述氨基酸包括赖氨酸、精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、苯丙氨酸+酪氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、蛋氨酸+胱氨酸和色氨酸，或其组合。
14.在另一优选例中，所述矿物质元素选自蛋白铜、蛋白锌、酵母硒、蛋白铁，或其组合。
15.在另一优选例中，所述功能性添加剂选自牛磺酸、酶制剂(蛋白酶、纤维素酶和脂肪酶)、没食子酸、硫辛酸，或其组合。
16.本发明另一方面提供了上述益生菌营养膏的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
17.(1)芯材的制备：将鱼油和表面活性剂混合均匀后获得第一油相(o1)，将益生菌粉与第一油相(o1)混合均匀，
18.(2)中间油相(o2)的制备：将第一油相(o1)与益生元、乳清蛋白、中链甘油三酯混合均匀，得到双乳剂(o1/o2)，
19.(3)包覆外水相层：将步骤(1)制得的芯材和步骤(2)制得的双乳剂(o1/o2)加入到含有维生素、矿物质元素、氨基酸和功能性添加剂的水液中，得到益生菌营养膏。
20.在另一优选例中，所述益生菌粉由以下步骤制得：
21.(a)将益生菌加入到液体培养基中35～40℃进行传代培养，至菌株活菌数为10
9-10
cfu/g或以上，将培养液离心，收集菌体沉淀物，然后使用无菌生理盐水洗涤得到的菌泥，收集备用。
22.(b)将菌泥悬浮在5～15倍体积的冻干保护液中，冷冻干燥，获得益生菌粉。
23.在另一优选例中，步骤(a)中，所述冻干保护液含有10～20wt％的脱脂牛奶、3～5wt％的海藻糖、0.1～0.3wt％的醋酸钠，和余量的水。
24.本发明还提供了上述益生菌营养膏在制备人保健品和宠物营养品中的用途。
25.本发明还提供了一种宠物营养品，其包含上述益生菌营养膏。
26.与现有技术相比，本发明将益生菌通过微囊阻隔的方式将其牢牢锁在两层油相中，克服了在水分活度高的环境中，例如，营养膏，不稳定的问题。
具体实施方式
27.针对现有技术的益生菌产品中的益生菌易失活不能长期保存的缺陷，本技术发明人通过深入的研究，发现将其中的益生菌制备为包括油相芯材、油相中间层和外层水相的结构，可使得益生菌通过两层油相层和微囊阻隔技术被牢牢地锁在油相中，最外层加入常规营养膏中的营养成分。在两年的贮藏期内，益生菌在营养膏中仍具有较高的活性，在人保健品和宠物营养品等领域具有较大的应用价值。
28.本发明的稳定的益生菌营养膏其包括(1)芯材，其包含益生菌和第一油相，(2)中间油相层，其包含第一油相、益生元、乳清蛋白和中链甘油三酯(mct)，和(3)外水相层，其包含维生素、氨基酸、矿物质元素和功能性添加剂，所述第一油相包含鱼油和表面活性剂。
29.本方面的益生菌营养膏中的益生菌为o1/o2/w型益生菌。
30.本发明的益生菌营养膏中，鱼油作为油相，不仅可以保存益生菌的活性也能解决目前ω-3缺乏的问题。用于本发明的表面活性剂的亲水亲油平衡值hlb优选为4～5.5。中间油相层在第一油相的基础上，继续添加益生元、mct和乳清蛋白，乳清蛋白不但可提高芯材在mct相中的分散效果，而且也能作为益生菌的碳氮(c/n)来源，提高益生菌在胃中的耐酸特性。外水相层中的维生素、氨基酸、矿物质元素和功能性添加剂的用于动物的营养补充剂。
31.益生菌营养膏的制备
32.本发明的益生菌营养膏的制备包括以下步骤：
33.(1)芯材的制备：将鱼油和表面活性剂混合均匀后获得第一油相(o1)，将益生菌粉与第一油相(o1)混合均匀，
34.(2)中间油相(o2)的制备：将第一油相(o1)与益生元、乳清蛋白、中链甘油三酯混合均匀，得到双乳剂(o1/o2)，
35.(3)包覆外水相层：将步骤(1)制得的芯材和步骤(2)制得的双乳剂(o1/o2)加入到含有维生素、矿物质元素、氨基酸和功能性添加剂的水液中，得到益生菌营养膏。
36.步骤(1)中，鱼油和表面活性剂混合在0～40℃通过300～500rpm的磁力摇动混合均匀，益生菌粉与第一油相(o1)混合通过匀浆器在3000～5000rpm下匀浆2～5分钟。芯材中益生菌的重量含量没有特别限定，只要鱼油形成的油相能充分包覆益生菌即可，较佳地，鱼油在芯材中的含量为20％～50％，例如，25％～35％，25％、30％、32％、35％。鱼油与表面活性剂的重量比为1:0.01～0.03，例如1:0.3、1:0.4、1:0.5。
37.步骤(2)中，中间油相层中第一油相(o1)、益生元、乳清蛋白和中链甘油三酯的重量比为4～5:1～3:1～2:3～4。这些成分混合过程为在4000rpm下均质1～3分钟。
38.步骤(3)中，芯材与双乳剂(o1/o2)的重量比例为3～4:0.1～0.5。
39.制备芯材的过程中所用益生菌粉可以市售所得，也可以按照本发明记载的下面的方法制备，只要益生菌粉中活菌属达到约10
10
cfu/g，或更高。
40.(a)将益生菌加入到液体培养基(高压灭菌后)中进行35～40℃传代培养至菌株活菌数为10
9-10
cfu/g或以上，将益生菌的培养液离心，收集菌体沉淀物，然后使用无菌生理盐水洗涤离心后的菌泥，收集备用。
41.(b)菌泥悬浮在5～15倍体积的冻干保护液中，冷冻干燥，获得益生菌粉。
42.步骤(a)中，所述冻干保护液含有10～20wt％的脱脂牛奶、3～5wt％的海藻糖、0.1
～0.3wt％的醋酸钠，和余量的水。更佳地，益生菌的培养条件为37℃，24h。离心收集菌体沉淀物(菌泥)过程中，离心温度为0～8℃，离心速度为约3000～5000rpm，离心时间为约5～15分钟。生理盐水洗涤三次，每次通过离心收集菌泥。
43.可用于本发明的益生菌包括但不局限于青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、弯曲乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、德氏乳杆菌乳亚种、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜热链球菌、乳酸乳球菌乳酸亚种，乳酸乳球菌乳脂亚种，乳酸乳球菌双乙酰亚种，费氏丙酸杆菌谢氏亚种，肠膜明串菌肠膜亚种，马克斯克鲁维酵母，乳酸片球菌，戊糖片球菌。
44.步骤(b)中，保护液含有10-20wt％的脱脂牛奶、3-5wt％的海藻糖0.1-0.3wt％的醋酸钠和余量的水。包含液的用量没有特别限定，例如，为菌泥体积的5～15倍。悬浮液冻干过程为：在-80℃预冻24小时后，使用冷冻干燥机(lp plus4-2 alpha，克里斯特公司，德国)在-55℃下冷冻干燥48小时。冷冻干燥粉末的菌存活率可达到10
9-10
cfu/g。在进一步的实验之前，冻干粉被储存在-20℃。
45.益生菌存活率的测定方法
46.首先准确样品1-2g，加入9ml柠檬酸钠溶液(0.05m)中，以230rpm剧烈摇晃30分钟，使体系崩解，释放益生菌，计数。用无菌磷酸盐缓冲盐水(pbs)(9ml)连续稀释lc2w，充分振摇，然后做10倍系列稀释，选取2-3个适宜稀释梯度，并将每种稀释物的100μl涂于琼脂培养基平板上，每个稀释度做3个平皿，然后在37℃培养育48h。结果以对数菌落形成单位(cfu/g)表示。
47.营养膏封装的lc2w的ee计算方法如下：
[0048][0049]
式中，n为释放的活益生菌数(cfu/g)，n0为加入的活细胞数(cfu/g)。
[0050]
本发明的有益效果：
[0051]
(1)本发明的益生菌营养膏将益生菌包覆在两层油相和一层水相中使得其在水相环境中能长期存活。
[0052]
(2)本发明的益生菌营养膏的芯材利用鱼油作为油相，不仅可以保存益生菌的活性也能解决目前ω-3缺乏的问题，中间油相除包含鱼油外，还包含益生元、mct和乳清蛋白，乳清蛋白不但可提高芯材在mct相中的分散效果，而且也能作为益生菌的碳氮(c/n)来源，提高益生菌在胃中的耐酸特性。
[0053]
(3)本发明的益生菌营养膏巧妙地将人或宠物需要补充的营养物质做为最外层(w)，从而起到微囊阻隔的效果，使得两层油相中的益生菌可以长期存活。
[0054]
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。具体实施例是在以本发明技术方案为前提下进行实施的，给出了详细的实施方式和操作过程。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件进行。除非另有说明，比例和百分数按重量计。
[0055]
下列实施例中维生素为组合物，包含以下重量份的组分：
[0056]
维生素a1份、维生素e1份、硫胺素(维生素b1)1份、核黄素(维生素b2)1份、泛酸(维
生素b5)1份、维生素b12 1份、吡哆醇1份、维生素k1份、牛磺酸1份、烟酸1份、叶酸1份、胆碱1份。
[0057]
下列实施例中矿物质为组合物，包含以下重量份的组分：蛋白铜1份、甘氨酸锌1份、酵母硒1份、蛋白镁1份。
[0058]
下列实施例中氨基酸为组合物，包含赖氨酸2份、精氨酸1份、组氨酸1份、异亮氨酸1份、苏氨酸1份、缬氨酸1份、苯丙氨酸1份、苯丙氨酸0.5份、酪氨酸0.5份、亮氨酸1份、蛋氨酸1份、蛋氨酸0.5份、胱氨酸0.5份和色氨酸1份。
[0059]
下列实施例中功能性添加剂为组合物，包含牛磺酸1份、蛋白酶0.6份、纤维素酶0.6份、脂肪酶0.6份、没食子酸1份、硫辛酸1份。
[0060]
下列实施例中构成水相层的介质包含重量含量为2％的维生素、2％的矿物质元素、1％的氨基酸和1％的功能性添加剂，余量为水。
[0061]
下列实施例所用原料，如未特别说明，均市售可得。
[0062]
下列实施例所用益生元的厂家为天津奥特奇生物制品有限公司。
[0063]
实施例1
[0064]
(1)芯材的制备
[0065]
(1.1)益生菌的培养
[0066]
将嗜酸乳杆菌加入到液体培养基(高压灭菌后)中进行传代培养(菌的培养条件37℃，24h)，至菌株活菌数为10
10
cfu/g或以上，将1l益生菌的培养液，在4℃经4000rpm离心10分钟后，收集菌体沉淀物，然后使用无菌生理盐水洗涤离心后的菌泥，离心三次，收集备用。
[0067]
(1.2)益生菌菌粉的制备
[0068]
菌泥悬浮在10倍体积的冻干保护剂中，其中含有15wt％的脱脂牛奶、4wt％的海藻糖和0.2wt％的醋酸钠，余量的水。悬浮液在-80℃预冻24小时后，使用冷冻干燥机(lp plus4-2 alpha，克里斯特公司，德国)在-55℃下冷冻干燥48小时。冷冻干燥粉末的菌存活率可达到109cfu/g。在进一步的实验之前，冻干粉被储存在-20℃。
[0069]
(1.3)益生菌芯材的制备
[0070]
将鱼油与升span 80或tween 80以1:0.02的比例(表面活性剂的亲水亲油平衡值hlb＝4.5)通过磁力摇动(400rpm，25℃)混合获得油相o1。将菌粉与油相o1按照2:3的比例进行混合，用转子-定子匀浆器(ultraturrax，型号t25，ika，werke，德国)在5000rpm下匀浆2分钟，得益生菌芯材。
[0071]
(2)中间油相相制备
[0072]
将上述油相o1与益生元、乳清蛋白(wp)和亚油酸按照5:3:2:3，在4000rpm下均质1分钟，得到双相乳剂o1/o2，贮藏备用。
[0073]
(3)水相层制备
[0074]
将步骤1的芯材和步骤2的油相按照3:0.3的比例加入到构成水相层的介质中，得到益生菌营养膏，其中芯材、外油相层和水相层的重量比例是3:0.3:5。
[0075]
实施例2
[0076]
(1)芯材的制备
[0077]
益生菌的培养
[0078]
将两歧双歧杆菌加入到液体培养基(高压灭菌后)中进行传代培养(菌的培养条件
37℃，24小时)，至菌株活菌数为10
10
cfu/g或以上，将1l益生菌的培养液，在4℃经4000rpm离心10分钟后，收集菌体沉淀物，然后使用无菌生理盐水洗涤离心后的菌泥，离心三次，收集备用。
[0079]
益生菌菌粉的制备
[0080]
菌泥悬浮在15倍体积的冻干保护剂中，其中含有10wt％的脱脂牛奶、5wt％的海藻糖和0.3wt％的醋酸钠，其余为水。悬浮液在-80℃预冻24小时后，使用冷冻干燥机(lp plus4-2 alpha，克里斯特公司，德国)在-55℃下冷冻干燥48小时。冷冻干燥粉末的菌存活率可达到10
10
cfu/g。在进一步的实验之前，冻干粉被储存在-20℃。
[0081]
益生菌芯材的制备
[0082]
将鱼油与span80或tween80以1:0.03的比例(表面活性剂的亲水亲油平衡值hlb＝4.5)通过磁力摇动(400rpm，25℃)混合获得油相o1。将菌粉与油相o1按照1:1的比例进行混合，用转子-定子匀浆器(ultraturrax，型号t25，ika，werke，德国)在5000rpm下匀浆3分钟。
[0083]
(2)中间油相制备
[0084]
将上述油相o1与益生元乳清蛋白(wp)和α-亚麻酸(ω-3)按照5:1:2:3，在4000rpm下均质1-3分钟，得到双乳剂o1/o2，贮藏备用。
[0085]
(3)外层水相制备
[0086]
将步骤1的芯材和步骤2的油相按照4:0.3的比例加入到构成水相层的介质中，得到益生菌营养膏，其中芯材、外油相层和水相层的重量比例是4:0.3:6。
[0087]
实施例3
[0088]
(1)芯材的制备
[0089]
(1.1)益生菌的培养
[0090]
将干酪乳杆菌加入到液体培养基(高压灭菌后)中进行传代培养(菌的培养条件37℃，24小时)，至菌株活菌数为10
10
cfu/g或以上，将1l益生菌的培养液，在4℃经4000rpm离心10分钟后，收集菌体沉淀物，然后使用无菌生理盐水洗涤离心后的菌泥，离心三次，收集备用。
[0091]
(1.2)益生菌菌粉的制备
[0092]
菌泥悬浮在8倍体积的冻干保护剂中，其中含有20wt％的脱脂牛奶、5wt％的海藻糖和0.1wt％的醋酸钠，其余为水。悬浮液在-80℃预冻24小时后，使用冷冻干燥机(lp plus4-2 alpha，克里斯特公司，德国)在-55℃下冷冻干燥48小时。冷冻干燥粉末的菌存活率可达到10
10
cfu/g。在进一步的实验之前，冻干粉被储存在-20℃。
[0093]
(1.3)益生菌芯材的制备
[0094]
将鱼油与span 80或tween 80以1:0.01的比例(表面活性剂的亲水亲油平衡值hlb＝4.5)通过磁力摇动(400rpm，25℃)混合获得油相o1。将菌粉与油相o1按照1:2的比例进行混合，用转子-定子匀浆器(ultraturrax，型号t25，ika，werke，德国)在5000rpm下匀浆2分钟。
[0095]
(2)中间油相的制备
[0096]
将上述油相o1与益生元、乳清蛋白(wp)和花生四烯酸按照4:2:2:4，在4000rpm下均质3分钟，得到双乳剂(o1/o2)，贮藏备用。
[0097]
(3)最外层w相制备
[0098]
将步骤1的芯材和步骤2的油相按照5:0.2的比例加入到构成水相层的介质中，得到益生菌营养膏，其中芯材、外油相层和水相层的重量比例是5:0.2:6。
[0099]
对比例1
[0100]
直接将嗜酸乳杆菌加入到构成水相层的介质中，制得含有嗜酸乳杆菌的介质。
[0101]
对比例2
[0102]
(1)芯材的制备
[0103]
按照实施例1制得益生菌芯材。
[0104]
(2)水相层制备
[0105]
将步骤1的芯材加入到构成水相层的介质中，得到益生菌营养膏。
[0106]
益生菌营养膏贮藏实验
[0107]
将上述实施例和对比例制备的益生菌营养膏样品放在室温条件下贮藏1年测定益生菌的存活率。具体结果参见下表1。
[0108]
表1对照组和实施例1-3中在贮藏期间的益生菌的存活率
[0109] 0d7d30d180d365d实施例110
10
cfu/g10
10
cfu/g109cfu/g108cfu/g107cfu/g实施例210
10
cfu/g10
10
cfu/g109cfu/g108cfu/g107cfu/g实施例310
10
cfu/g10
10
cfu/g109cfu/g108cfu/g107cfu/g对比例110
10
cfu/g102cfu/g000对比例210
10
cfu/g109cfu/g105cfu/g104cfu/g101cfu/g
[0110]
以上所述的，仅为本发明的较佳实施例，并非用以限定本发明的范围，本发明的上述实施例还可以做出各种变化。即凡是依据本发明申请的权利要求书及说明书内容所作的简单、等效变化与修饰，皆落入本发明专利的权利要求保护范围。本发明未详尽描述的均为常规技术内容。

技术特征：
1.一种稳定的益生菌营养膏，其特征在于，所述益生菌营养膏包括(1)芯材，其包含益生菌和第一油相，(2)中间油相层，其包含第一油相、益生元、乳清蛋白和中链甘油三酯，和(3)外水相层，其包含维生素、氨基酸、矿物质元素和功能性添加剂，所述第一油相包含鱼油和表面活性剂。2.根据权利要求1所述的稳定益生菌的营养膏，其特征在于，所述芯材、中间油相层和外水相层的重量比为3-4:0.1-0.5:5-6，和/或所述芯材中益生菌的重量含量为30％～50％，和/或所述第一油相中鱼油与表面活性剂的重量比为1:0.01～0.03，和/或所述中间油相层中第一油相、益生元、乳清蛋白和中链甘油三酯的重量比为4～5:1～3:1～2:3～4。3.根据权利要求1所述的稳定益生菌的营养膏，其特征在于，所述益生菌选自青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、弯曲乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、德氏乳杆菌乳亚种、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜热链球菌、乳酸乳球菌乳酸亚种，乳酸乳球菌乳脂亚种，乳酸乳球菌双乙酰亚种，费氏丙酸杆菌谢氏亚种，肠膜明串菌肠膜亚种，马克斯克鲁维酵母，乳酸片球菌，戊糖片球菌的一种或多种。4.根据权利要求1所述的稳定的益生菌的营养膏，其特征在于，所述中链甘油三酯选自亚油酸、α-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸，或组合，和/或所述表面活性剂选自span 80、tween 80、十二烷基磺酸钠，较佳地，tween 80。5.根据权利要求1所述的稳定的益生菌的营养膏，其特征在于，所述维生素选自维生素a、维生素e、硫胺素、核黄素、泛酸(维生素b5)、维生素b12、吡哆醇、维生素k、牛磺酸、烟酸、叶酸、胆碱，或其组合，和/或所述氨基酸包括赖氨酸、精氨酸、组氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、苯丙氨酸+酪氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、蛋氨酸+胱氨酸和色氨酸，或其组合，和/或所述矿物质元素选自蛋白铜、蛋白锌、酵母硒、蛋白铁，或其组合，和/或所述功能性添加剂选自牛磺酸、酶制剂(蛋白酶、纤维素酶和脂肪酶)、没食子酸、硫辛酸，或其组合。6.权利要求1至5任一项所述的稳定益生菌的营养膏的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)芯材的制备：将鱼油和表面活性剂混合均匀后获得第一油相，将益生菌粉与第一油相混合均匀，(2)中间油相的制备：将第一油相与益生元、乳清蛋白、中链甘油三酯混合均匀，得到双乳剂，(3)包覆外水相层：将步骤(1)制得的芯材和步骤(2)制得的双乳剂加入到含有维生素、矿物质元素、氨基酸和功能性添加剂的水介质中。7.权利要求6所述的益生菌营养膏的制备方法，其特征在于，所述益生菌粉由以下步骤制得：(a)将益生菌加入到液体培养基中35～40℃进行传代培养，至菌株活菌数为10
9-10
cfu/g
或以上，将培养液离心，收集菌体沉淀物，然后使用无菌生理盐水洗涤得到的菌泥，收集备用。(b)将菌泥悬浮在5～15倍体积的冻干保护液中，冷冻干燥，获得益生菌粉。8.权利要求7所述的稳定益生菌的营养膏的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述冻干保护液含有10～20wt％的脱脂牛奶、3～5wt％的海藻糖、0.1～0.3wt％的醋酸钠，和余量的水。9.权利要求1至5任一项所述的益生菌营养膏在制备人保健品和宠物营养品中的用途。10.一种宠物营养品，其包含权利要求1至5任一项所述的益生菌营养膏。

技术总结
本发明公开了一种益生菌营养膏及其制备方法和用途，其包括(1)芯材，其包含益生菌和第一油相，(2)中间油相层，其包含第一油相、益生元、乳清蛋白和中链甘油三酯，和(3)外水相层，其包含维生素、氨基酸、矿物质元素和功能性添加剂，所述第一油相包含鱼油和表面活性剂。该益生菌营养膏中的益生菌在水分活度高的环境中稳定性好，且利用维生素、氨基酸、矿物质元素和功能性添加剂作为外水相，即增加了其稳定性，也可以为动物提供营养物质。也可以为动物提供营养物质。


技术研发人员：张洪才
受保护的技术使用者：上海交通大学
技术研发日：2023.06.21
技术公布日：2023/8/28