一种乌鸡蛋清肽组合物及其应用

1.本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种乌鸡蛋清肽组合物及其应用。


背景技术：

2.铁是维持人体正常生理活动必不可少的金属元素之一，是人体血红蛋白和肌红蛋白的组成部分，参与人体氧的运输和贮存。铁和细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的合成密切相关，与琥珀酸脱氢酶、细胞色素c还原酶、z酰辅酶a等酶的活性也密切相关。当机体摄入铁不足时，往往会导致缺铁性贫血及代谢紊乱。
[0003][0004]
老年人中贫血的发生率很高，且随着年龄的增长，贫血的发生率也在不断提高。我国的研究调查发现，六十岁以上的老年人的贫血发生率为29％，而美国的相应研究发生发现，六十五岁以上的老年人的贫血发生率为11％，八十五岁以上的老年人的贫血发生率为23％，而居住在养老院中的老年人的贫血发生率接近50％，铁缺乏是导致老年人贫血的最常见病因。另外老年人因牙齿脱落，咀嚼困难偏食导致铁摄入不足，胃肠黏膜萎缩，胃酸分泌减少，导致生理性铁吸收低下，由于转铁蛋白减少导致不能充分利用铁。
[0005]
处于生长发育期的婴幼儿和儿童，体内的铁需求量较大，在此阶段如果饮食中铁摄入量不足，易造成体内铁缺乏，对其智力发育和生长发育都会造成影响。妊娠期女性由于胎儿生长所需要的营养素明显增加，铁作为身体造血的营养素之一，需要的量也会逐渐增加，特别是妊娠晚期，胎儿的快速增长对铁的需求量明显增加，此时若孕妇因恶心、呕吐等妊娠反应及各种原因造成饮食减少、挑食、偏食等，使铁及多种营养素摄入量不足。
[0006]
铁元素的大量丢失也会引起缺铁性贫血，月经问题是导致女性铁元素丢失的主要原因，女性在这一时期需要格外加强对铁元素的吸收。缺铁性贫血而导致的缺氧还会对皮肤慢性创面愈合造成不利的影响，动物实验表明，与正常饲料喂养的大鼠相比，贫血大鼠的伤口愈合速度较慢，在贫血和血容量对皮肤慢性创面愈合的影响的研究中发现，用右旋糖酐铁替代血容量可以恢复伤口的正常愈合；其次，铁可以维持胶原蛋白分子的稳定性，它是胶原蛋白合成和前胶原蛋白的翻译后修饰所必需的。胶原作为细胞生长的依附物，合成受阻会影响皮肤慢性创面的愈合。此外，乳铁蛋白作为一种由腺上皮细胞分泌的铁结合性糖蛋白，可以通过促进炎症发展及细胞的增殖和迁移来促进皮肤慢性创面愈合。
[0007]
铁蛋白是一种广泛存在的储铁蛋白，存在于几乎所有身体组织尤其是肝细胞和网状内皮细胞内，具有纳米尺寸的水合氧化铁内核和笼形结构的蛋白质外壳。
[0008]
植物性食物如豆类、谷物、水果、蔬菜中的膳食铁则多是非血红素铁，非血红素铁进入肠道后，需要先由三价铁还原为二价铁才能经肠道被人体吸收，因此吸收率常常不足10％。豆类、谷物、咖啡、茶等植物性食物中同时存在植酸、多酚等铁吸收的抑制因素，阻碍非血红素铁在人体内的吸收利用。维生素c是目前应用最广泛的铁吸收促进剂，常与铁强化剂一起添加到食物中尤其是植酸含量较高的食品，但同时过量使用维生素c极易引发肾结石、膀胱结石、胃肠道反应等症状。因此，有必要开发一种促进铁吸收利用的组合物，以改善
上述不足。


技术实现要素：

[0009]
本发明的目的在于提供一种乌鸡蛋清肽组合物及其应用，该组合物能够促进肠道细胞对铁元素的吸收，提高机体对铁的吸收利用率，使得细胞中铁离子及铁蛋白的含量增加。
[0010]
第一方面，本发明提供的一种乌鸡蛋清肽组合物，采用如下的技术方案：包括10-550份的乌鸡蛋清肽和5-100份的抗坏血酸。
[0011]
本发明提供的一种乌鸡蛋清肽组合物的有益效果在于：抗坏血酸参与体内细胞氨基酸代谢、神经递质的合成、胶原蛋白细胞间质的合成同时阻止亚硝胺的合成、刺激白细胞吞噬活性、促进抗体的形成，具有降低毛细血管通透性、刺激凝血功能、增加对感染的抵抗作用以及预防癌症、提高机体免疫功能的作用；将乌鸡蛋清肽和抗坏血酸组合，两种成分协同作用，该组合物具有良好的促进铁吸收的作用，与抗坏血酸或乌鸡蛋清肽单独使用相比，促进肠道铁吸收效果明显、使细胞中铁蛋白含量增加。
[0012]
可选地，所述乌鸡蛋清肽为乌鸡蛋清经蛋白酶水解后制得，且所述乌鸡蛋清肽的相对分子量小于或等于10000道尔顿。
[0013]
可选地，以重量份数计，还包括1-1000份的铁补充剂。
[0014]
可选地，所述铁补充剂为药品、食品和化妆品领域中可接受的铁补充剂。
[0015]
进一步可选地，所述铁补充剂可以是含铁元素的化合物，如乳酸亚铁、硫酸亚铁、碘化亚铁、次磷酸铁、清蛋白铁、氯化铁、柠檬酸铁、含糖氧化铁、柠檬酸铁铵、氯化亚铁、葡糖酸亚铁、富马酸亚铁、血红素、三甘氨酸铁、二甘氨酸亚铁、硝酸铁、含糖氢氧化亚铁、硫酸铁、葡糖酸铁、天冬氨酸铁、七水硫酸亚铁、磷酸亚铁、抗坏血酸铁、甲酸亚铁、乙酸亚铁、苹果酸亚铁、谷氨酸亚铁、硫酸亚铁甘氨酸、水合氧化铁、可溶焦磷酸铁、含糖氢氧化铁、含糖铁锰、碱式硫酸铁、硫酸铁铵、硫酸亚铁铵、三氯化二铁、柠檬酸铁胆碱、柠檬酸铁锰、柠檬酸奎宁铁、柠檬酸铁钠、乙二胺四乙酸铁钠、甲酸铁、草酸铁铵、草酸铁钾、草酸铁钠、蛋白胨铁、蛋白胨铁锰、乙酸铁、氟化铁、磷酸铁、焦磷酸铁、焦磷酸亚铁、含糖碳酸亚铁、碳酸亚铁、琥珀酸亚铁、柠檬酸亚铁、酒石酸亚铁、富马酸铁、琥珀酸铁、氢氧化亚铁、硝酸亚铁、碳酸亚铁、焦磷酸铁钠、酒石酸铁、酒石酸铁钾、碱式碳酸铁、甘油磷酸铁、含糖铁、含糖氢氧化铁、硫酸亚铁铵、焦磷酸铁钠、碳酸亚铁、氢氧化铁、氧化亚铁、羟基氧化铁、草酸亚铁、多糖-铁复合物、次甲基-铁复合物、乙二胺四乙酸-铁复合物、菲咯琳铁复合物、对甲苯胺铁复合物、含糖亚铁复合物、葡糖酸亚铁复合物、、含糖氢氧化亚铁复合物、铁-芳烃三明治型复合物、乙酸丙酮铁复合物盐、铁-右旋糖酐复合物、铁-糊精复合物、铁-山梨糖醇-柠檬酸复合物、含糖氧化铁、富马酸亚铁复合物、铁卟啉复合物、二硫代羧基铁复合物、去铁胺-铁复合物、博莱霉素-铁复合物、羟基吡啶酮-铁(iii)复合物、氨基糖苷-铁复合物、转铁蛋白-铁复合物、硫氰酸铁复合物、铁复合物氰化物、卷积聚碳酸酯，聚氯基聚碳酸酯-铁复合物、二硫代氨基甲酸铁复合物、阿霉素铁复合物、蒽环类-铁复合物、n-甲基-d-葡糖胺二硫代氨基甲酸-铁复合物、铁草氨菌素b、柠檬酸亚铁复合物、硫酸亚铁复合物、葡糖酸铁复合物、琥珀酸亚铁复合物、聚吡喃葡糖基-铁复合物、聚氯基二琥珀酸铁复合物、胆绿素-铁复合物、去铁酮铁复合物、铁氧氢化物-葡聚糖复合物、铁乳铁蛋白复合物、1，3-乙二胺四乙酸铁复合物
盐、二亚乙基三胺五乙酸铁复合物盐、环己二胺四乙酸铁复合物盐、甲基亚氨基二乙酸铁复合物盐、乙二醇醚二胺四乙酸铁复合物盐羟基吡喃酮铁复合物、琥珀酸铁复合物、氯化铁复合物、硫酸甘氨酸铁复合物、天冬氨酸铁复合物、葡糖酸钠亚铁复合物、聚麦芽糖氢氧化亚铁复合物。
[0016]
进一步可选地，所述铁补充剂可以是富含铁的食物，如动物肝脏、动物血、瘦肉、胡麻子、黑芝麻籽、菠菜和油菜等。
[0017]
可选地，还包括药品、食品和化妆品领域中可接受的辅料和/或添加剂。
[0018]
进一步可选地，辅料和添加剂包括白砂糖、柠檬酸、苹果香精、糊精、蔗糖、微晶纤维素、预胶化淀粉、硬脂酸镁、玉米淀粉、食用香精、复合稳定剂、红糖、米粉、果葡糖浆、二氧化碳、日落黄、壳聚糖、水杨酸、海藻酸钠、金盏花提取物、香料、1，2-己二醇、腺苷、透明质酸钠、角鲨烷、氢化聚癸烯、辛酸甘油三酯、辛酰水杨酸、乙基己基甘油、α-葡聚糖寡糖、乳酸杆菌发酵产物、香精、乳化剂、ph调节剂、生育酚e和麦芽糊精。
[0019]
可选地，所述组合物可制成食品、药品领域中包括粉剂、颗粒剂、口服液、片剂、胶囊剂在内的剂型。
[0020]
进一步可选地，组合物与药品、食品领域中可接受的辅料和/或添加剂并采用常规制剂工艺制成任意剂型，该剂型优选为颗粒剂、粉剂、片剂、胶囊剂、膏剂、糖浆剂、口服液等剂型。
[0021]
可选地，所述组合物可制成化妆品领域中包括乳剂、凝胶剂、霜剂、面膜或护肤品在内的剂型。
[0022]
进一步可选地，组合物与化妆品领域中可接受的辅料和/或添加剂并采用常规制剂工艺制成化妆品领域中包括乳剂、凝胶剂、霜剂、面膜及护肤水等公知的剂型。
[0023]
第二方面，本发明还提供一种乌鸡蛋清肽组合物的应用，将上述任一可选的乌鸡蛋清肽组合物作为制备促进铁吸收药物中的有效成分。其有益效果在于，能够提高机体对铁的吸收利用，改善和防治铁缺乏症。
[0024]
第三方面，本发明还提供一种乌鸡蛋清肽组合物的应用，将上述任一可选的乌鸡蛋清肽组合物作为制备食品中的应用。其有益效果在于，能够提高机体对铁的吸收利用，改善和防治铁缺乏症。
[0025]
第四方面，本发明还提供一种乌鸡蛋清肽组合物的应用，将上述任一可选的乌鸡蛋清肽组合物作为制备化妆品中的应用。其有益效果在于，能够提高机体对铁的吸收利用，改善和防治铁缺乏症。
[0026]
本发明的有益效果在于：1、将乌鸡蛋清肽和抗坏血酸组合使用，两种成分协同作用，具有良好的促进铁吸收的作用，与抗坏血酸或乌鸡蛋清肽单独使用相比，促进肠道对铁吸收的效果更明显，使细胞中铁含量增加更显著；2、提供的组合物可用于制备改善和防治铁缺乏症的药品、食品和化妆品；3、组合物以食品范畴内的乌鸡蛋清肽和抗坏血酸为主要成分，安全且无毒副作用，使用方便。
具体实施方式
[0027]
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是
全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另外定义，此处使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。
[0028]
本发明提供一种乌鸡蛋清肽组合物，以重量份数计，包括10-550份乌鸡蛋清肽和5-100份抗坏血酸。
[0029]
其中，乌鸡蛋清肽由乌骨鸡所产乌鸡蛋的蛋清经蛋白酶水解制得，其具体的制备步骤如下：取乌鸡蛋清搅匀，置于酶解罐中；升温至45-65℃时，加入蛋白酶对乌鸡蛋清进行搅拌水解，其水解时间为2-9h；酶解后升温至85-100℃进行灭酶处理，其灭酶时间为10-30min；灭酶后酶解液冷却至室温后，取酶解液经过滤、浓缩干燥，即得乌鸡蛋清肽。
[0030]
具体的，乌骨鸡蛋可以选用泰和乌鸡所产乌鸡蛋。
[0031]
具体的，制备乌鸡蛋清肽时，加入酶解罐中的蛋白酶的用量为乌鸡蛋清的0.1％-5％。
[0032]
具体的，制备乌鸡蛋清肽时，加入酶解罐中的蛋白酶选自木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶和复合蛋白酶中的任意一种单酶、或两到三种复配而成的复合酶。
[0033]
在一些实施例中，制备乌鸡蛋清肽时，加入酶解罐中的蛋白酶选自木瓜蛋白酶与胰蛋白酶，且木瓜蛋白酶占酶总质量的85％，胰蛋白酶占酶总质量的15％。
[0034]
在一些实施例中，制备乌鸡蛋清肽时，对乌鸡蛋清进行酶解时，每隔1小时需将酶解物料细化均质一次。
[0035]
在一些实施例中，制备乌鸡蛋清肽后，所得的乌鸡蛋清肽的相对分子质量小于或等于10000道尔顿。
[0036]
在一些实施例中，以重量份数计，还包括1-1000份的铁补充剂。
[0037]
在一些进一步的实施例中，铁补充剂为药品、食品和化妆品领域中可接受的铁补充剂。
[0038]
在一些更进一步的实施例中，铁补充剂可以是含铁元素的化合物，如乳酸亚铁、硫酸亚铁、碘化亚铁、次磷酸铁、清蛋白铁、氯化铁、柠檬酸铁、含糖氧化铁、柠檬酸铁铵、氯化亚铁、葡糖酸亚铁、富马酸亚铁、血红素、三甘氨酸铁、二甘氨酸亚铁、硝酸铁、含糖氢氧化亚铁、硫酸铁、葡糖酸铁、天冬氨酸铁、七水硫酸亚铁、磷酸亚铁、抗坏血酸铁、甲酸亚铁、乙酸亚铁、苹果酸亚铁、谷氨酸亚铁、硫酸亚铁甘氨酸、水合氧化铁、可溶焦磷酸铁、含糖氢氧化铁、含糖铁锰、碱式硫酸铁、硫酸铁铵、硫酸亚铁铵、三氯化二铁、柠檬酸铁胆碱、柠檬酸铁锰、柠檬酸奎宁铁、柠檬酸铁钠、乙二胺四乙酸铁钠、甲酸铁、草酸铁铵、草酸铁钾、草酸铁钠、蛋白胨铁、蛋白胨铁锰、乙酸铁、氟化铁、磷酸铁、焦磷酸铁、焦磷酸亚铁、含糖碳酸亚铁、碳酸亚铁、琥珀酸亚铁、柠檬酸亚铁、酒石酸亚铁、富马酸铁、琥珀酸铁、氢氧化亚铁、硝酸亚铁、碳酸亚铁、焦磷酸铁钠、酒石酸铁、酒石酸铁钾、碱式碳酸铁、甘油磷酸铁、含糖铁、含糖氢氧化铁、硫酸亚铁铵、焦磷酸铁钠、碳酸亚铁、氢氧化铁、氧化亚铁、羟基氧化铁、草酸亚铁、多糖-铁复合物、次甲基-铁复合物、乙二胺四乙酸-铁复合物、菲咯琳铁复合物、对甲苯胺铁复合物、含糖亚铁复合物、葡糖酸亚铁复合物、、含糖氢氧化亚铁复合物、铁-芳烃三明治型复合物、乙酸丙酮铁复合物盐、铁-右旋糖酐复合物、铁-糊精复合物、铁-山梨糖醇-柠檬酸复合物、含糖氧化铁、富马酸亚铁复合物、铁卟啉复合物、二硫代羧基铁复合物、去铁胺-铁复合物、博莱霉素-铁复合物、羟基吡啶酮-铁(iii)复合物、氨基糖苷-铁复合物、转铁
蛋白-铁复合物、硫氰酸铁复合物、铁复合物氰化物、卷积聚碳酸酯，聚氯基聚碳酸酯-铁复合物、二硫代氨基甲酸铁复合物、阿霉素铁复合物、蒽环类-铁复合物、n-甲基-d-葡糖胺二硫代氨基甲酸-铁复合物、铁草氨菌素b、柠檬酸亚铁复合物、硫酸亚铁复合物、葡糖酸铁复合物、琥珀酸亚铁复合物、聚吡喃葡糖基-铁复合物、聚氯基二琥珀酸铁复合物、胆绿素-铁复合物、去铁酮铁复合物、铁氧氢化物-葡聚糖复合物、铁乳铁蛋白复合物、1，3-乙二胺四乙酸铁复合物盐、二亚乙基三胺五乙酸铁复合物盐、环己二胺四乙酸铁复合物盐、甲基亚氨基二乙酸铁复合物盐、乙二醇醚二胺四乙酸铁复合物盐羟基吡喃酮铁复合物、琥珀酸铁复合物、氯化铁复合物、硫酸甘氨酸铁复合物、天冬氨酸铁复合物、葡糖酸钠亚铁复合物、聚麦芽糖氢氧化亚铁复合物。
[0039]
在一些更进一步的实施例中，铁补充剂可以是富含铁的食物，如动物肝脏、动物血、瘦肉、胡麻子、黑芝麻籽、菠菜和油菜等。具体的，可以是猪肝、猪血。
[0040]
在一些实施例中，还包括药品、食品和化妆品领域中可接受的辅料和/或添加剂。
[0041]
在一些进一步的实施例中，辅料和添加剂包括白砂糖、柠檬酸、苹果香精、糊精、蔗糖、微晶纤维素、预胶化淀粉、硬脂酸镁、玉米淀粉、食用香精、复合稳定剂、红糖、米粉、果葡糖浆、二氧化碳、日落黄、壳聚糖、水杨酸、海藻酸钠、金盏花提取物、香料、1，2-己二醇、腺苷、透明质酸钠、角鲨烷、氢化聚癸烯、辛酸甘油三酯、辛酰水杨酸、乙基己基甘油、α-葡聚糖寡糖、乳酸杆菌发酵产物、香精、乳化剂、ph调节剂、生育酚e和麦芽糊精。
[0042]
在一些实施例中，组合物可制成食品、药品领域中包括粉剂、颗粒剂、口服液、片剂、胶囊剂在内的剂型。
[0043]
在一些进一步的实施例中，组合物与化妆品领域中可接受的辅料和/或添加剂并采用常规制剂工艺制成化妆品领域中包括乳剂、凝胶剂、霜剂、面膜及护肤水等公知的剂型。
[0044]
本发明所提供的乌鸡蛋清肽组合物，还可以作为制备促进铁吸收药物中的有效成分。
[0045]
本发明所提供的乌鸡蛋清肽组合物，还可以作为制备食品中的应用。
[0046]
本发明所提供的乌鸡蛋清肽组合物，还可以作为制备化妆品中的应用。
[0047]
一些实施例中，当乌鸡蛋清肽组合物制备成粉剂时，组合物中抗坏血酸与乌鸡蛋清肽的重量比为1：(1-2)。
[0048]
一些实施例中，当乌鸡蛋清肽组合物制备成口服液时，组合物中抗坏血酸与乌鸡蛋清肽的重量比为1：(90-110)。
[0049]
一些实施例中，当乌鸡蛋清肽组合物制备成颗粒剂时，组合物中抗坏血酸与乌鸡蛋清肽的重量比为1：3。
[0050]
一些实施例中，当乌鸡蛋清肽组合物制备成片剂时，组合物中抗坏血酸与乌鸡蛋清肽的重量比为1：5。
[0051]
一些实施例中，当乌鸡蛋清肽组合物制备成胶囊剂时，组合物中抗坏血酸与乌鸡蛋清肽的重量比为2：3。
[0052]
一些实施例中，当乌鸡蛋清肽组合物制备成糖浆剂时，组合物中抗坏血酸与乌鸡蛋清肽的重量比为5：4。
[0053]
一些实施例中，当乌鸡蛋清肽组合物制备成清膏剂时，组合物中抗坏血酸与乌鸡
蛋清肽的重量比为1：4。
[0054]
一些实施例中，当乌鸡蛋清肽组合物制备成米糊剂时，组合物中抗坏血酸与乌鸡蛋清肽的重量比为1：10。
[0055]
一些实施例中，当乌鸡蛋清肽组合物制备成饮料时，组合物中抗坏血酸与乌鸡蛋清肽的重量比为10：1。
[0056]
一些实施例中，当乌鸡蛋清肽组合物制备成面膜时，组合物中抗坏血酸与乌鸡蛋清肽的重量比为1：6。
[0057]
一些实施例中，当乌鸡蛋清肽组合物制备成护肤水时，组合物中抗坏血酸与乌鸡蛋清肽的重量比为1：70。
[0058]
一些实施例中，当乌鸡蛋清肽组合物制备成面霜时，组合物中抗坏血酸与乌鸡蛋清肽的重量比为5：12。
[0059]
一些实施例中，当乌鸡蛋清肽组合物制备成乳液护肤品时，组合物中抗坏血酸与乌鸡蛋清肽的重量比为1：3。
[0060]
实施例1
[0061]
本实施例1提供的一种乌鸡蛋清肽组合物，其制备方法包括以下步骤：
[0062]
步骤(1)：取乌鸡蛋清，搅匀，置于酶解罐中；加入木瓜蛋白酶和胰蛋白酶(其中，木瓜蛋白酶占酶总质量的85％，胰蛋白酶占酶总质量的15％)，总用酶量为乌鸡蛋清质量的0.6％，混匀，酶解温度45
±
1℃，酶解5h后，90
±
1℃，灭酶30min，板框过滤得澄清滤液，滤液经超滤法截留收集分子量小于10000道尔顿的肽液，经浓缩后喷雾干燥得粉末状乌鸡蛋清肽；
[0063]
步骤(2)：以重量份数计，取50份抗坏血酸、50份粉末状乌鸡蛋清肽和6分乳酸亚铁，将三种原料混合均匀后，粉碎过100目筛，即得粉剂。
[0064]
实施例2
[0065]
本实施例2与实施例1的不同之处在于，实施例2的步骤(2)中以重量份数计，取5份抗坏血酸、10份粉末状乌鸡蛋清肽和6份乳酸亚铁。
[0066]
实施例3
[0067]
本实施例3与实施例1的不同之处在于，实施例3的步骤(2)为，以重量份数计，取5份抗坏血酸、500份粉末状乌鸡蛋清肽、6份氯化亚铁、1000份白砂糖、2份柠檬酸、3份苹果香精和7000份纯水，将上述原料缓慢搅拌均匀后，灌封于10ml口服液瓶中，放入高压灭菌锅中，于121℃中高压灭菌15min后，即得口服液。
[0068]
实施例4
[0069]
本实施例4与实施例3的不同之处在于，实施例4的步骤(2)中以重量份数计，取5份抗坏血酸、550份粉末状乌鸡蛋清肽、6份硫酸亚铁、1000份白砂糖、2份柠檬酸、3份苹果香精和7000份纯水。
[0070]
实施例5
[0071]
本实施例5与实施例3的不同之处在于，实施例5的步骤(2)中以重量份数计，取5份抗坏血酸、450份粉末状乌鸡蛋清肽、6份乳酸亚铁、1000份白砂糖、2份柠檬酸、3份苹果香精和7000份纯水。
[0072]
实施例6
[0073]
本实施例6与实施例1的不同之处在于，实施例6的步骤(2)为，以重量份数计，取50份抗坏血酸、150份粉末状乌鸡蛋清肽、6份硫酸亚铁、200份糊精、100份蔗糖、10份微晶纤维素和20份预胶化淀粉；将抗坏血酸、粉末状乌鸡蛋清肽、糊精、蔗糖和微晶纤维素置于粉碎机中分别粉碎至过60目筛后混合均匀备用；将预胶化淀粉加入热纯化水中配置成10％粘合剂胶浆备用；将混合粉末与粘合胶浆剂均匀混合，捏合成软材过12-20目筛网制成颗粒，并将颗粒置于干燥箱内干燥，干燥温度为60℃，得颗粒剂。
[0074]
实施例7
[0075]
本实施例7与实施例1的不同之处在于，实施例6的步骤(2)为，以重量份数计，取100份抗坏血酸、500份粉末状乌鸡蛋清肽、6份氯化亚铁、20份硬脂酸镁、500份玉米淀粉、5份食用香精、5份复合稳定剂和10份蔗糖粉，将上述各原料混合均匀后，制粒干燥过筛并压片，即得片剂。
[0076]
实施例8
[0077]
本实施例8与实施例1的不同之处在于，实施例8的步骤(2)为，以重量份数计，取80份抗坏血酸、120份粉末状乌鸡蛋清肽、6份氯化亚铁、20份硬脂酸镁、500份玉米淀粉、5份食用香精、5份复合稳定剂和10份蔗糖粉，将上述各原料混合均匀过100目筛后，填充至空白胶囊内，即得胶囊剂。
[0078]
实施例9
[0079]
本实施例9提供的一种乌鸡蛋清肽组合物，其制备方法包括以下步骤：
[0080]
步骤(1)：取泰和乌鸡蛋清，在65
±
1℃条件下预热变性后，加入2倍体积的水搅匀，经过胶体磨细化均质后，置于酶解罐中；加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解(其中，木瓜蛋白酶占酶总质量的85％，胰蛋白酶占酶总质量的15％)，总用酶量为乌鸡蛋清质量的0.6％，酶解温度48
±
1℃，酶解8h后，90
±
1℃灭酶25min，板框过滤得澄清滤液，滤液经浓缩干燥得相对密度在1.25～1.35的乌鸡蛋清肽浓缩液；
[0081]
步骤(2)：以重量份数计，取100份过100目筛的抗坏血酸、80份乌鸡蛋清肽浓缩液(以干物质计)、6份乳酸亚铁和5000份红糖，将上述原料加入至纯化水中并在60℃的环境中混合均匀后，再次加热调整相对密度至1.2-1.3后，趁热灌装并巴氏杀菌后，得糖浆状的乌鸡蛋白肽组合物。
[0082]
实施例10
[0083]
本实施例10与实施例1的不同之处在于，实施例10的步骤(2)为，以重量份数计，取50份抗坏血酸、200份粉末状乌鸡蛋清肽、500份猪肝粉和2000份红糖，加入适量的水在60℃加热使得上述原料混合均匀后，再次加热调整相对密度至1.2-1.3后，趁热灌装并巴氏杀菌后，得清膏状的乌鸡蛋白肽组合物；其中，猪肝粉为新鲜猪肝冷冻干燥后研磨制成。
[0084]
实施例11
[0085]
本实施例11与实施例1的不同之处，实施例11的步骤(2)为，以重量份数计，取50份抗坏血酸、500份粉末状乌鸡蛋清肽、1000份黑芝麻粉、1500份米粉和800份白砂糖，加入适量的水在60℃加热使得上述原料混合均匀后，即得米糊状的乌鸡蛋白肽组合物。
[0086]
实施例12
[0087]
本实施例12与实施例1的不同之处在于，实施例12的步骤(2)为，以重量份数计，取100份抗坏血酸、10份粉末状乌鸡蛋清肽、6份乳酸亚铁、1000份果葡糖浆、1000份白砂糖、
800份二氧化碳、5份柠檬酸、2份日落黄和3份食用香精，加入适量水后，混合加压灌装，即得含乌鸡蛋清肽组合物的饮料。
[0088]
实施例13
[0089]
本实施例13与实施例1的不同之处在于，实施例13的步骤(2)包括：
[0090]
步骤(2.1)：以重量份数计，取5份抗坏血酸、30份粉末状乌鸡蛋清肽、5份壳聚糖、2份乳酸亚铁、1份水杨酸、10份海藻酸钠、2份金盏花提取物和0.05份香料；
[0091]
步骤(2.2)：将抗坏血酸与乌鸡蛋清肽置于水中，在超声辅助的作用下分散均匀，得组合物水溶液；
[0092]
步骤(2.3)：将海藻酸钠在搅拌条件下加入到组合物水溶液中，制得凝胶；
[0093]
步骤(2.4)：在室温下将剩余原料加入到凝胶中，混合后经过磨浆匀质并注入面膜模具定性后，脱模即得含乌鸡蛋清肽组合物的面膜。
[0094]
实施例14
[0095]
本实施例14与实施例1的不同之处在于，实施例14的步骤(2)包括：
[0096]
步骤(2.1)：以重量份数计，取5份抗坏血酸、35粉末状乌鸡蛋清肽、1份氯化亚铁、2-3份1，2-己二醇、2份腺苷、2份透明质酸钠、3份角鲨烷、5份氢化聚癸烯、3份辛酸甘油三酯、1份辛酰水杨酸、2份乙基己基甘油、0.2份α-葡聚糖寡糖、0.2份乳酸杆菌发酵产物、2份香精、2份乳化剂、1份ph调节剂、1份生育酚e、2份麦芽糊精和600份去离子水；
[0097]
步骤(2.2)：将去离子水、1，2-己二醇、腺苷、透明质酸钠、ph调节剂、抗坏血酸和乌鸡蛋清肽投入乳化锅a中，在83℃，搅拌转速800r/min条件下，搅拌混合20min，得到水相；
[0098]
步骤(2.3)：将氢化聚癸烯、辛酸甘油三酯、角鲨烷、乳化剂和辛酰水杨酸投入乳化锅b中，在83℃，搅拌转速为800r/min条件下，搅拌混合20min，得到油相；
[0099]
步骤(2.4)：在温度为83℃，搅拌条件800r/min条件下，将油相抽入乳化锅c中，搅拌混合5min；保持真空压力为0.3mpa，将水相抽入乳化锅c中，在均质转速为3000r/min，均质4min，保温20min，得到混合物a；
[0100]
步骤(2.5)：向混合物a中加入乙基己基甘油、香精，在55℃，搅拌转速为800r/min条件下，搅拌混合10min，得到混合物b；向混合物b中加入α-葡聚糖寡糖、生育酚、乳酸杆菌发酵产物、麦芽糊精，在50℃，搅拌转速为800r/min条件下，搅拌混合10min后出料，即得含乌鸡蛋清肽组合物的护肤水。
[0101]
实施例15
[0102]
本实施例15与实施例1的不同之处在于，实施例15的步骤(2)包括：
[0103]
步骤(2.1)：以重量份数计，取5份抗坏血酸、12份粉末状乌鸡蛋清肽、1份硫酸亚铁、15分月桂酸单甘油酯、5份聚氧乙烯蓖麻油、4份植物精油、0.5份乙基己基甘油、3份维生素e、2份α-葡聚糖寡糖、1份麦芽糊精、1.5份乳酸杆菌、2.5份可可油、5份凡士林、3份月桂酸己酯、2.5分月桂醇、4份peg-7橄榄油酸枝、4份黄原胶和30份水；
[0104]
步骤(2.2)：将抗坏血酸、乌鸡蛋清肽、月桂酸单甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油、植物精油、乙基己基甘油、维生素e、α-葡聚糖寡糖、麦芽糊精、可可油、凡士林、月桂酸己酯、月桂醇、peg-7橄榄油酸酯、黄原胶和水搅拌混匀后进行超声波、微波循环处理，完成后得混合物a备用；其中，超声波处理20min，微波处理2min为一个循环，共进行4个循环；
[0105]
步骤(2.3)：将混合物a置于搅拌罐内进行变速搅拌处理，变速搅拌处理时，先
450rpm的转速搅拌30min，然后2000rpm的转速搅拌10min，再200rpm的转速搅拌1h，在变速搅拌的同时磁场处理；其中，磁场频率为10khz，磁感应强度为2.3
×
10-3
t；
[0106]
步骤(2.4)：步骤(2.3)结束后，对产物质检装瓶，即得含乌鸡蛋清肽组合物的面霜。
[0107]
实施例16
[0108]
本实施例15与实施例1的不同之处在于，实施例16的步骤(2)包括：
[0109]
步骤(2.1)：以重量份数计，取5份抗坏血酸、15份粉末状乌鸡蛋清肽、1.5份乳酸亚铁、35份库拉索芦荟叶汁、10份葡萄籽油、2份向日葵籽油、0.1份皱波角叉菜提取物、0.1份紫松果菊提取物、0.1份迷迭香提取物和5份大米发酵产物；
[0110]
步骤(2.2)：在40℃、100rpm的搅拌条件下，将向日葵籽油加入库拉索芦荟叶汁，保温搅拌20min，得到混合料a；
[0111]
步骤(2.3)：向混合料a中加入皱波角叉菜提取物，经4000rpm均质3min后，得到乳状物a；
[0112]
步骤(2.4)：向乳状物a中加入葡萄籽油，加热至80℃、经4000rpm均质10min、冷却至50℃，得到乳状物b；
[0113]
步骤(2.5)：向乳状物b中依次加入紫松果菊提取物、迷迭香提取物、抗坏血酸、乌鸡蛋清肽、大米发酵产物，搅拌均匀，即得含乌鸡蛋清肽组合物的乳液护肤品。
[0114]
性能检测与分析
[0115]
实验例1：由实施例1中粉剂制成，并调整至乌鸡蛋清肽浓度为50μg/ml，抗坏血酸浓度为50μg/ml，乳酸亚铁浓度为6μg/ml；
[0116]
实验例2：与实验例1的不同之处在于，将乳酸亚铁更换为氯化亚铁；
[0117]
实验例3：与实验例1的不同之处在于，将乳酸亚铁更换为硫酸亚铁；
[0118]
实验例4：由实施例2中粉剂制成，并调整至乌鸡蛋清肽浓度为100μg/ml，抗坏血酸浓度为50μg/ml，乳酸亚铁浓度为6μg/ml；
[0119]
实验例5：与实验例4的不同之处在于，将乳酸亚铁更换为氯化亚铁；
[0120]
实验例6：与实验例4的不同之处在于，将乳酸亚铁更换为氯化亚铁；
[0121]
空白例1：与实验例1的不同之处在于，仅含有6μg/ml的乳酸亚铁；
[0122]
空白例2：与实验例2的不同之处在于，仅含有6μg/ml的氯化亚铁；
[0123]
空白例3：与实验例3的不同之处在于，仅含有6μg/ml的硫酸亚铁；
[0124]
对比例1：与实验例1的不同之处在于，仅不含有乌鸡蛋清肽；
[0125]
对比例2：与实验例2的不同之处在于，仅不含有乌鸡蛋清肽；
[0126]
对比例3：与实验例3的不同之处在于，仅不含有乌鸡蛋清肽；
[0127]
对比例4：与实验例1的不同之处在于，仅不含有抗坏血酸；
[0128]
对比例5：与实验例2的不同之处在于，仅不含有抗坏血酸；
[0129]
对比例6：与实验例3的不同之处在于，仅不含有抗坏血酸；
[0130]
对比例7：与实验例4的不同之处在于，仅不含有抗坏血酸；
[0131]
对比例8：与实验例5的不同之处在于，仅不含有抗坏血酸；
[0132]
对比例9：与实验例6的不同之处在于，仅不含有抗坏血酸。
[0133]
一、细胞试验
[0134]
caco-2细胞是一种人类上皮结肠腺癌细胞系，caco-2细胞可模拟人的小肠黏膜上皮结构，是肠道离子转运研究中广泛使用的肠上皮细胞模型，其通常作为极化上皮层培养，通过形成融合的单层，为离子和小分子的通过提供屏障，可以用来进行模拟离子和小分子转运的实验。
[0135]
1、乌鸡蛋清肽和抗坏血酸组合物对caco-2细胞铁摄入的影响
[0136]
细胞培养：取传代次数为前40代且生长状态良好的caco-2细胞，用0.25％的胰蛋白酶消化后，以dmem制成均匀单细胞悬液，在大头管中调整并稀释细胞密度为1
×
105个/ml，接种于6孔板中，在恒温培养箱(培养条件：37℃、5％co2)培养。待细胞不断生长融合，细胞间连接紧密但未有叠层生长的细胞时，吸去6孔板中的上清液，用无菌pbs洗涤细胞两遍，加入上述配置的实施例1-6、空白例1-3和对比例1-9中的样品溶液作用3h后，分别进行细胞总蛋白浓度和细胞内铁含量测定。
[0137]
细胞总蛋白测定：将吸去上清后6孔板中剩余细胞用4℃的pbs洗涤3遍，每孔细胞中加入刚融化混匀的ripa裂解液(200μl/孔)，冰上裂解30min后，移液枪不断吹打细胞裂解液均匀使得细胞裂解充分，将细胞混悬液转移到2ml ep管中(冰上)，每孔再加入100μl冷pbs吹洗6孔板，将吹洗后的pbs也加入同管ep管中，混匀后于离心机离心5分钟(3000r/min)，小心的吸取上清25μl于96孔板中，加入现配的bca工作液200μl，37℃恒温箱放置30min，冷却至室温后酶标仪562nm测定吸光度；用裂解液配制0、25、62.5、125、250、500μg/ml的bsa蛋白标准品溶液，吸取各浓度蛋白溶液25μl于96孔板中，同法测定吸光度，制作蛋白浓度标准曲线，依照标准曲线，计算细胞总蛋白浓度；
[0138]
铁含量测定：将各样品测定蛋白含量剩余的沉淀和上清涡旋混合，吹打分散均匀，超声20-40min后，吸取200μl的细胞混悬液于超纯水超声洗净的无铁污染25ml烧杯中，按照湿法消化联合菲啰嗪测定铁含量方法测定混悬液中铁离子的浓度，按下式计算细胞中铁含量(以单位蛋白计)：
[0139][0140]
并按下式计算细胞铁含量增值和细胞铁含量增长率：
[0141]
细胞铁含量增值＝测试组样品细胞铁含量-空白组细胞铁含量；
[0142][0143]
结果如表1，2所示。
[0144]
表1：caco-2细胞中铁含量(μg/mg蛋白)
[0145][0146]
表2：caco-2细胞中铁含量(μg/mg蛋白)增值与铁含量增长率(％)
[0147][0148]
实验结果表明，对比例1、对比例2和对比例3中均仅加入抗坏血酸，分别采用乳酸亚铁、氯化亚铁和硫酸亚铁作为铁源时，其铁含量值分别为16.35ug/mg、12.29ug/mg和12.92ug/mg，铁含量增长率分别为46.51％、60.10％和33.48％，可知，加入抗坏血酸能够显著促进细胞中铁含量的增加，该实验结果与本领域所公知的抗坏血酸能够促进铁吸收的理论相符合，同时也验证了本实验模型的可靠性。
[0149]
对比例4、对比例5和对比例6中均仅加入50μg/ml乌鸡蛋清肽，分别采用乳酸亚铁、氯化亚铁和硫酸亚铁作为铁源时，其铁含量值分别为12.53ug/mg、9.60ug/mg和10.88ug/mg，铁含量增长率分别为12.31％、19.00％和18.15％，可知，乌鸡蛋清肽也能促进细胞中铁含量的增加，但其对铁含量增长的促进效果远不如抗坏血酸。
[0150]
对比例7、对比例8和对比例9中均仅加入100μg/ml乌鸡蛋清肽，分别采用乳酸亚铁、氯化亚铁和硫酸亚铁作为铁源时，其铁含量值分别为11.89ug/mg、9.35ug/mg和9.81ug/mg，铁含量增长率分别为6.55％、21.62％和1.52％，可知，虽然乌鸡蛋清肽能够促进细胞中铁含量的增加，但100μg/ml的乌鸡蛋清肽的促进效果弱于50μg/ml的乌鸡蛋清肽。主要原因
在于乌鸡蛋清肽有一定的促进肿瘤细胞凋亡的作用，较大浓度的的乌鸡蛋清肽对caco-2的正常功能有一定的影响。
[0151]
实施例1、实施例2和实施例3中均复配加入抗坏血酸和50μg/ml乌鸡蛋清肽，分别采用乳酸亚铁、氯化亚铁和硫酸亚铁作为铁源时，其铁含量值分别为21.24ug/mg、15.88ug/mg和17.29ug/mg，铁含量增长率为90.34％、96.78％和87.83％，可知，乌鸡蛋清肽与抗坏血酸共同作用时，对细胞铁吸收能够起到协同增效作用，增强的效果强于抗坏血酸与乌鸡蛋清肽各自单独作用之和。
[0152]
实施例4、实施例5和实施例6中均复配加入抗坏血酸和100μg/ml乌鸡蛋清肽，分别采用乳酸亚铁、氯化亚铁和硫酸亚铁作为铁源时，其铁含量值分别为18.73ug/mg、15.45ug/mg和13.32ug/mg，铁含量增长率为67.82％、91.48％和44.67％，可知，尽管使用100μg/ml乌鸡蛋清肽对抗坏血酸的促进效果弱于50μg/ml的乌鸡蛋清肽，但对细胞铁吸收依然呈现协同增效作用。
[0153]
2、乌鸡蛋清肽和抗坏血酸组合物对caco-2细胞铁蛋白含量的影响
[0154]
采用上述实验相同方法作用的细胞3h后，弃去上清液加入正常培养基培养21h后，用冷pbs轻轻清洗细胞表面，然后用胰蛋白酶将细胞消化下来，于1000rpm转速下离心5min后收集细胞，用冷pbs重复洗涤3遍后，将离心得到的细胞用细胞裂解液在冰上裂解后冰水超声处理至溶液澄清，于1500rpm的转速下离心10min，取上清液并用铁蛋白测定试剂盒检测细胞中铁蛋白的含量，如表3所示，并计算铁蛋白增长率，如表4所示。
[0155]
表3caco-2细胞中铁蛋白含量
[0156][0157]
表4 caco-2细胞中铁蛋白增长率
[0158][0159]
实验结果表明，对比例1、对比例2和对比例3中仅加入抗坏血酸，在乳酸亚铁、氯化亚铁和硫酸亚铁作为铁源时，铁蛋白含量分别为81.51ng/ml、61.14ng/ml和68.45ng/ml，铁蛋白增长率分别为34.13％、40.20％和30.06％，可知，抗坏血酸能够促进caco-2细胞对铁蛋白的合成。
[0160]
对比例4、对比例5和对比例6中仅加入50μg/ml乌鸡蛋清肽，在乳酸亚铁、氯化亚铁和硫酸亚铁作为铁源时，铁蛋白含量也略有增加，但单一添加乌鸡蛋清肽对铁蛋白的合成促进作用不明显。
[0161]
实施例1、实施例2和实施例3中复配加入抗坏血酸与乌鸡蛋清肽，能够对细胞铁蛋白的合成起到协同增效作用，增强的效果强于抗坏血酸与乌鸡蛋清肽各自单独作用之和。
[0162]
虽然在上文中详细说明了本发明的实施方式，但是对于本领域的技术人员来说显而易见的是，能够对这些实施方式进行各种修改和变化。但是，应理解，这种修改和变化都属于权利要求书中所述的本发明的范围和精神之内。而且，在此说明的本发明可有其它的实施方式，并且可通过多种方式实施或实现。

技术特征：
1.一种乌鸡蛋清肽组合物，其特征在于，以重量份数计，包括10-550份的乌鸡蛋清肽和5-100份的抗坏血酸。2.根据权利要求1所述的乌鸡蛋清肽组合物，其特征在于，所述乌鸡蛋清肽为乌鸡蛋清经蛋白酶水解后制得，且所述乌鸡蛋清肽的相对分子量小于或等于10000道尔顿。3.根据权利要求1所述的乌鸡蛋清肽组合物，其特征在于，以重量份数计，还包括1-1000份的铁补充剂。4.根据权利要求3所述的乌鸡蛋清肽组合物，其特征在于，所述铁补充剂为药品、食品和化妆品领域中可接受的铁补充剂。5.根据权利要求1所述的乌鸡蛋清肽组合物，其特征在于，还包括药品、食品和化妆品领域中可接受的辅料和/或添加剂。6.根据权利要求1至5任一项所述乌鸡蛋清肽组合物，其特征在于，所述组合物可制成食品、药品领域中包括粉剂、颗粒剂、口服液、片剂、胶囊剂在内的剂型。7.根据权利要求1至5任一项所述乌鸡蛋清肽组合物，其特征在于，所述组合物可制成化妆品领域中包括乳剂、凝胶剂、霜剂、面膜或护肤品在内的剂型。8.一种乌鸡蛋清肽组合物的应用，其特征在于，将权利要求1至5任一项所述乌鸡蛋清肽组合物作为制备促进铁吸收药物中的有效成分。9.一种乌鸡蛋清肽组合物的应用，其特征在于，将权利要求1至5任一项所述乌鸡蛋清肽组合物作为制备食品中的应用。10.一种乌鸡蛋清组合物的应用，其特征在于，将权利要求1至5任一项所述乌鸡蛋清肽组合物作为制备化妆品中的应用。

技术总结
本发明提供了一种乌鸡蛋清肽组合物及其应用，涉及生物技术领域。以重量份数计，所述乌鸡蛋清肽组合物包括10-550份的乌鸡蛋清肽和5-100份的抗坏血酸。本发明还提供了一种上述乌鸡蛋清肽组合物在制备药品、食品、化妆品中的应用，所述乌鸡蛋清肽组合物作为药品、食品、化妆品的有效成分。本发明所提供的组合物具有促进铁吸收的协同作用，能够促进肠道细胞对铁元素的吸收，提高机体对铁的吸收利用率，使得细胞中铁离子及铁蛋白的含量增加。细胞中铁离子及铁蛋白的含量增加。


技术研发人员：田颖刚
受保护的技术使用者：南昌大学
技术研发日：2023.05.25
技术公布日：2023/8/28