一种提取大球盖菇中黄酮的方法

1.本发明涉及食用菌中天然活性成分提取领域，具体涉及到一种提取大球盖菇中黄酮的方法。


背景技术：

2.大球盖菇又称皱环球盖菇，粗腿菇、彩云菇，因其外形像松茸，商品名为“赤松茸”。是国际菇类交易市场上十大菇类之一，也是世界粮农组织(fao)近年来向发展中国家推荐栽培的特色品种之一。大球盖菇色泽艳丽、柄粗盖肥、口感滑爽、脆嫩，营养丰富，含有多糖、黄酮和多肽等活性成分。近年来研究发现，大球盖菇具有改善冠心病、降血糖、抗肿瘤、抑菌和抗氧化等方面的功效。
3.黄酮类化合物是指中央三碳原子与两个具有酚羟基的苯环相互连接的一系列化合物，易溶解于甲醇、乙醇、水等极性溶剂中，黄酮类化合物在植物界和食用菌中分布广泛，是一种对人体非常有用的天然活性物质，是许多药品和保健品的主要成分，具有杀菌、抗病毒、保护心脑血管系统和祛痰等生理活性。目前大球盖菇黄酮成分提取的一般步骤是先对大球盖菇通过干燥、粉碎得到大球盖菇粉，然后以水、碱溶液、有机溶剂作为提取介质，辅助超声波或者微波在常压条件下提取。大球盖菇粉的粒径大小、提取介质和提取途径是影响黄酮提取率的主要影响因素。共研磨技术是一项将精细粉碎技术与包合技术或固体分散技术等结合起来的技术，该技术通过物理途径使得研磨物具有更小的粒径、更大的表面积，这样有利于在提取介质中释放出更多的生物活性成分。
4.大球盖菇子实体黄酮主要以水溶液、碱溶液和有机溶剂等作提取介质辅助超声波、微波在常压条件下提取。这些方法提取时间较长，细胞内黄酮类成分很难被充分提取出来，因此黄酮提取率相对较低，无法满足人们对现代化工业化提取的需要。


技术实现要素：

5.为了解决上述现有技术中的不足之处，本发明提出一种提取大球盖菇中黄酮的方法，大球盖菇纳米微粉与共聚维酮混合，经过共研磨技术处理后，采用微波辅助提取法，以氢氧化钾溶液作为提取介质，可以大大缩短提取时间，提高提取效率，有利于大球盖菇黄酮的后续分离纯化工作。
6.为了实现上述技术效果，本发明采用如下方案：
7.一种提取大球盖菇中黄酮的方法，包括以下步骤：
8.s1、采摘新鲜大球盖菇菇子实体，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥；
9.s2、将干燥后的大球盖菇切片通过纳米粉碎机进行纳米级粉碎并过目；
10.s3、向上述大球盖菇粉中加入的共聚维酮并混合均匀，投入低温球磨机中研磨一段时间，得到大球盖菇粉-共聚维酮研磨混合物，然后于自封袋内低温避光保存；
11.s4、称取上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，并加入提取药
液，将微波萃取管密闭后放入微波萃取设备内进行高温萃取；
12.s5、萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，将沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，得到提取液ⅱ和沉淀ⅱ；
13.s6、合并上述提取液ⅰ和提取液ⅱ得到黄酮提取液。
14.优选的技术方案，所述步骤s1中，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准。
15.优选的技术方案，所述步骤s1中，冷冻干燥温度设定在-2℃。
16.优选的技术方案，所述步骤s2中，对冷冻干燥的大球盖菇切片进行纳米级粉碎过20000目，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产。
17.优选的技术方案，所述步骤s3中，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％。
18.优选的技术方案，所述步骤s3中，低温球磨时间为40分钟，球磨温度设定在1℃。
19.优选的技术方案，所述步骤s4中，提取药液是质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液，料液比为1:30～1:70g/ml。
20.优选的技术方案，所述步骤s4中，微波萃取温度设定为100～125℃，萃取时间为2～10分钟，萃取功率设定为300～800w。
21.优选的技术方案，所述步骤s5中，重复萃取次数至少两次。
22.优选的技术方案，所述步骤s4中，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪。
23.与现有技术相比，有益效果为：
24.(1)本发明首次采用多聚维酮共研磨技术对大球盖菇粉进行处理。大球盖菇粉-共聚维酮混合物经共研磨之后，大球盖菇粉的粒径将减小，微粒间存在轻微的吸附聚集现象，微粒比较均匀，微粒呈不规则多面体，表面积增大。大球盖菇粉-共聚维酮混合物在提取介质氢氧化钾溶液中，一方面微粒与提取介质接触面积大大增加，另一方面共聚维酮水溶液对脂溶性黄酮和水溶性黄酮具有更好的溶解性，可以将大球盖菇中的脂溶性和水溶性黄酮充分提取出来。黄酮类化合物分子中大多数都含有酚羟基而显示弱酸性，易溶于碱性水溶液中，因此使用氢氧化钾溶液可以提高黄酮类化合物的溶解性和提取率。同时，微波辅助提取具有加热速度快、提取时间短的优点，同时兼有成本低、高效、环保的优点，有利于大球盖菇总黄酮后续的分离纯化工作；目前大球盖菇粉结合共聚维酮共研磨处理技术，以氢氧化钾溶液作为提取溶剂结合微波辅助法在高温高压条件下提取黄酮的方法还没有文献报道过。
25.(2)共聚维酮和大球盖菇粉共研磨接触提取介质之后，亲水性的共聚维酮迅速吸收水分，分散于水中，使得大球盖菇中的黄酮能够更多地接触提取介质，从而提高大球盖菇黄酮的溶出速率；另外共聚维酮结构中的羰基与黄酮成分形成氢键被认为是实现难溶性黄酮增溶甚至抑制重结晶的一个重要因素。
26.(3)本发明提供上述大球盖菇总黄酮的提取方法，可以在制备食品、中药中应用，达到充分利用大球盖菇资源的目的。
附图说明
27.图1是本发明不同实施例和对比例大球盖菇黄酮提取率结果；
28.图2是本发明原料不同处理和不同提取方法大球盖菇黄酮提取率％；
29.图3是本发明原料不同处理和不同提取方法大球盖菇黄酮提取率柱状图。
具体实施方式
30.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
31.实施例1
32.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行纳米级粉碎并过20000目，所用粉碎机为全自动智能纳米粉碎机，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产；s3：向上述大球盖菇粉中加入1％的共聚维酮，投入低温球磨机中研磨40分钟，球磨温度设定在1℃，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％，所得研磨大球盖菇粉-共聚维酮混合物于自封袋内低温避光保存；s4：称取一定量的上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，加入质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液；密闭微波萃取管后放入微波提取设备内进行高温高压萃取，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪，萃取温度100℃，萃取功率300w，料液比1:30g/ml，萃取时间2分钟；s5：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少两次提取的提取；s6：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算大球盖菇总黄酮提取率为7.05％。
33.实施例2
34.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行纳米级粉碎并过20000目，所用粉碎机为全自动智能纳米粉碎机，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产；s3：向上述大球盖菇粉中加入1.2％的共聚维酮，投入低温球磨机中研磨40分钟，球磨温度设定在1℃，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％，所得研磨大球盖菇粉-共聚维酮混合物于自封袋内低温避光保存；s4：称取一定量的上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，加入质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液；密闭微波萃取管后放入微波提取设备内进行高温高压萃取，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪，萃取温度120℃，萃取功率400w，料液比1:40g/ml，萃取时间4分钟；s5：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少两次提取的提取；s6：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算
大球盖菇总黄酮提取率为8.79％。
35.实施例3
36.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行纳米级粉碎并过20000目，所用粉碎机为全自动智能纳米粉碎机，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产；s3：向上述大球盖菇粉中加入1.4％的共聚维酮，投入低温球磨机中研磨40分钟，球磨温度设定在1℃，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％，所得研磨大球盖菇粉-共聚维酮混合物于自封袋内低温避光保存；s4：称取一定量的上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，加入质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液；密闭微波萃取管后放入微波提取设备内进行高温高压萃取，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪，萃取温度125℃，萃取功率500w，料液比1:50g/ml，萃取时间6分钟；s5：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少两次提取的提取；s6：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算大球盖菇总黄酮提取率为9.06％。
37.实施例4
38.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行纳米级粉碎并过20000目，所用粉碎机为全自动智能纳米粉碎机，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产；s3：向上述大球盖菇粉中加入1.2％的共聚维酮，投入低温球磨机中研磨40分钟，球磨温度设定在1℃，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％，所得研磨大球盖菇粉-共聚维酮混合物于自封袋内低温避光保存；s4：称取一定量的上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，加入质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液；密闭微波萃取管后放入微波提取设备内进行高温高压萃取，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪，萃取温度120℃，萃取功率600w，料液比1:60g/ml，萃取时间8分钟；s5：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少两次提取的提取；s6：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算大球盖菇总黄酮提取率为9.14％。
39.实施例5
40.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行纳米级粉碎并过20000目，所用粉碎机为全自动智能纳米粉碎机，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产；s3：向上述大球盖菇粉中加入1.4％的共聚维酮，投入低温球磨机中研磨40分钟，球磨温
度设定在1℃，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％，所得研磨大球盖菇粉-共聚维酮混合物于自封袋内低温避光保存；s4：称取一定量的上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，加入质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液；密闭微波萃取管后放入微波提取设备内进行高温高压萃取，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪，萃取温度110℃，萃取功率600w，料液比1:60g/ml，萃取时间8分钟；s5：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少两次提取的提取；s6：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算大球盖菇总黄酮提取率为8.92％。
41.实施例6
42.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行纳米级粉碎并过20000目，所用粉碎机为全自动智能纳米粉碎机，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产；s3：向上述大球盖菇粉中加入1.2％的共聚维酮，投入低温球磨机中研磨40分钟，球磨温度设定在1℃，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％，所得研磨大球盖菇粉-共聚维酮混合物于自封袋内低温避光保存；s4：称取一定量的上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，加入质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液；密闭微波萃取管后放入微波提取设备内进行高温高压萃取，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪，萃取温度120℃，萃取功率500w，料液比1:70g/ml，萃取时间8分钟；s5：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少两次提取的提取；s6：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算大球盖菇总黄酮提取率为9.28％。
43.实施例7
44.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行纳米级粉碎并过20000目，所用粉碎机为全自动智能纳米粉碎机，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产；s3：向上述大球盖菇粉中加入1.6％的共聚维酮，投入低温球磨机中研磨40分钟，球磨温度设定在1℃，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％，所得研磨大球盖菇粉-共聚维酮混合物于自封袋内低温避光保存；s4：称取一定量的上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，加入质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液；密闭微波萃取管后放入微波提取设备内进行高温高压萃取，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪，萃取温度100℃，萃取功率600w，料液比1:60g/ml，萃取时间6分钟；s5：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少
两次提取的提取；s6：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算大球盖菇总黄酮提取率为9.07％。
45.实施例8
46.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行纳米级粉碎并过20000目，所用粉碎机为全自动智能纳米粉碎机，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产；s3：向上述大球盖菇粉中加入1.2％的共聚维酮，投入低温球磨机中研磨40分钟，球磨温度设定在1℃，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％，所得研磨大球盖菇粉-共聚维酮混合物于自封袋内低温避光保存；s4：称取一定量的上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，加入质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液；密闭微波萃取管后放入微波提取设备内进行高温高压萃取，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪，萃取温度110℃，萃取功率500w，料液比为1:40g/ml，萃取时间4分钟；s5：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少两次提取的提取；s6：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算大球盖菇总黄酮提取率为。
47.实施例9
48.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行纳米级粉碎并过20000目，所用粉碎机为全自动智能纳米粉碎机，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产；s3：向上述大球盖菇粉中加入1.2％的共聚维酮，投入低温球磨机中研磨40分钟，球磨温度设定在1℃，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％，所得研磨大球盖菇粉-共聚维酮混合物于自封袋内低温避光保存；s4：称取一定量的上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，加入质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液；密闭微波萃取管后放入微波提取设备内进行高温高压萃取，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪，萃取温度120℃，萃取功率500w，料液比为1:60g/ml，萃取时间8分钟；s5：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少两次提取的提取；s6：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算大球盖菇总黄酮提取率为9.85％。
49.实施例10
50.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行纳米级粉碎并过20000目，所用粉碎机
为全自动智能纳米粉碎机，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产；s3：向上述大球盖菇粉中加入1.6％的共聚维酮，投入低温球磨机中研磨40分钟，球磨温度设定在1℃，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％，所得研磨大球盖菇粉-共聚维酮混合物于自封袋内低温避光保存；s4：称取一定量的上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，加入质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液；密闭微波萃取管后放入微波提取设备内进行高温高压萃取，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪，萃取温度100℃，萃取功率400w，料液比为1:40g/ml，萃取时间4分钟；s5：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少两次提取的提取；s6：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算大球盖菇总黄酮提取率为8.76％。
51.对比例1
52.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行常规粉碎并过160目，所用粉碎机为普通中药粉碎机；s3：将上述大球盖菇粉进行自然提取，提取介质为1％氢氧化钾溶液，萃取温度为室温，料液比为1:50g/ml，萃取时间600分钟；s4：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s3的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少两次提取的提取；s5：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算大球盖菇总黄酮提取率为2.60％。
53.对比例2
54.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行纳米级粉碎并过20000目，所用粉碎机为全自动智能纳米粉碎机，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产；s3：将上述大球盖菇粉进行超声辅助提取，提取介质为1％氢氧化钾溶液，超声提取温度为100℃，超声提取功率500w，料液比为1:50g/ml，提取时间60分钟；s4：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s3的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少两次提取的提取；s5：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算大球盖菇总黄酮提取率为4.85％。
55.对比例3
56.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行常规粉碎并过160目，所用粉碎机为普通中药粉碎机；s3：向上述大球盖菇粉中加入1.6％的共聚维酮，投入低温球磨机中研磨40分钟，球磨温度设定在1℃，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚
维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％，所得研磨大球盖菇粉-共聚维酮混合物于自封袋内低温避光保存；s4：称取一定量的上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，加入质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液；密闭微波萃取管后放入微波提取设备内进行高温高压萃取，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪，萃取温度100℃，萃取功率500w，料液比为1:50g/ml，萃取时间4分钟；s5：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少两次提取的提取；s6：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算大球盖菇总黄酮提取率为6.46％。
57.对比例4
58.s1：采摘新鲜大球盖菇菇子实体，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥，冷冻干燥温度为-2℃；s2：将干燥后的大球盖菇切片进行纳米粉碎并过20000目，所用粉碎机为全自动智能纳米粉碎机，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产；s3：向上述大球盖菇粉中加入1.6％的共聚维酮，投入低温球磨机中研磨40分钟，球磨温度设定在1℃，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％，所得研磨大球盖菇粉-共聚维酮混合物于自封袋内低温避光保存；s4：称取一定量的上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，加入质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液；密闭微波萃取管后放入微波提取设备内进行高温高压萃取，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪，萃取温度100℃，萃取功率500w，料液比为1:50g/ml，萃取时间4分钟；s5：萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，通过此方式提取至少两次，得到得到至少两次提取的提取；s6：合并上述至少两次提取的提取液得到黄酮提取液。采用硝酸铝显色法来测定提取液中大球盖菇总黄酮的浓度，再进一步换算成大球盖菇总黄酮的提取量，计算大球盖菇总黄酮提取率为8.61％。
59.将本发明实施例1至实施例10、对比例1至对比例4得到的大球盖菇黄酮提取液在容量瓶中定容，然后采用“亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法”测定大球盖菇总黄酮的含量，进而计算总黄酮提取率，具体测定方法为：取1ml提取液到10ml玻璃比色管中，加入5％亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，静置6min；加入10％硝酸铝溶液0.3ml，混匀，静置6min；加入1mol/l氢氧化钠4ml，反应10min，在510nm测定提取液吸光值，根据回归方程计算大球盖菇总黄酮的提取率。计算得到的大球盖菇总黄酮的提取率结果如图1所示，对比例1、对比例2、对比例3、和对比例4的结果对比如图2以及图3所示。
60.共聚维酮n-乙烯基吡咯烷酮与乙酸乙烯酯的线性共聚物，因此它具备了聚乙烯吡咯烷酮和聚乙酸乙烯酯的特性，具有更为宽广的溶解性能、更好的塑形和更强的表面活性。
61.微波辅助提取(microwave-assisted extraction,mae)是利用微波加热来加速溶剂对固体样品中目标萃取物的萃取过程。其作用机理是微波射线能够使细胞内温度急剧升高，使其内部压力超过细胞壁膨胀能力而导致细胞破裂，使细胞内活性物质充分传递到周围介质中而提高提取效率。提取介质的极性对微波提取效果影响较大，提取介质极性越高，微波能传递效率越高。氢氧化钾-多聚维酮溶液作为一种极性较高的介质，可以更加充分吸
收微波能，微波能迅速转化为热能而使细胞内部温度急速上升。当细胞内部的压力超过细胞壁的承受能力时，细胞将会破裂，细胞内的活性成分将被释放出来，并溶解到提取介质中。
62.本发明提供的技术方案：(1)本发明首次采用多聚维酮共研磨技术对大球盖菇粉进行处理。大球盖菇粉-共聚维酮混合物经共研磨之后，大球盖菇粉的粒径将减小，微粒间存在轻微的吸附聚集现象，微粒比较均匀，微粒呈不规则多面体，表面积增大。大球盖菇粉-共聚维酮混合物在提取介质氢氧化钾溶液中，一方面微粒与提取介质接触面积大大增加，另一方面共聚维酮水溶液对脂溶性黄酮和水溶性黄酮具有更好的溶解性，可以将大球盖菇中的脂溶性和水溶性黄酮充分提取出来。黄酮类化合物分子中大多数都含有酚羟基而显示弱酸性，易溶于碱性水溶液中，因此使用氢氧化钾溶液可以提高黄酮类化合物的溶解性和提取率。同时，微波辅助提取具有加热速度快、提取时间短的优点，同时兼有成本低、高效、环保的优点，有利于大球盖菇总黄酮后续的分离纯化工作；目前大球盖菇粉结合共聚维酮共研磨处理技术，以氢氧化钾溶液作为提取溶剂结合微波辅助法在高温高压条件下提取黄酮的方法还没有文献报道过；(2)共聚维酮和大球盖菇粉共研磨接触提取介质之后，亲水性的共聚维酮迅速吸收水分，分散于水中，使得大球盖菇中的黄酮能够更多地接触提取介质，从而提高大球盖菇黄酮的溶出速率；另外共聚维酮结构中的羰基与黄酮成分形成氢键被认为是实现难溶性黄酮增溶甚至抑制重结晶的一个重要因素。(3)本发明提供上述大球盖菇总黄酮的提取方法，可以在制备食品、中药中应用，达到充分利用大球盖菇资源的目的。
63.在本发明的描述中，需要理解的是，术语“上”、“下”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，或者是该发明产品使用时惯常摆放的方位或位置关系，或者是本领域技术人员惯常理解的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的设备或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
64.此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
65.基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

技术特征：
1.一种提取大球盖菇中黄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、采摘新鲜大球盖菇菇子实体，清洗干净并切片，晾干后放入真空冷冻干燥器中冷冻干燥；s2、将干燥后的大球盖菇切片通过纳米粉碎机进行纳米级粉碎并过目；s3、向上述大球盖菇粉中加入的共聚维酮并混合均匀，投入低温球磨机中研磨一段时间，得到大球盖菇粉-共聚维酮研磨混合物，然后于自封袋内低温避光保存；s4、称取上述大球盖菇粉-共聚维酮混合物，倒入到微波萃取管内，并加入提取药液，将微波萃取管密闭后放入微波萃取设备内进行高温萃取；s5、萃取后经过离心分离得到提取液ⅰ和沉淀ⅰ，将沉淀ⅰ干燥后重新按照上述步骤s4的提取方法提取一次，得到提取液ⅱ和沉淀ⅱ；s6、合并上述提取液ⅰ和提取液ⅱ得到黄酮提取液。2.如权利要求1所述的提取大球盖菇中黄酮的方法，其特征在于，所述步骤s1中，大球盖菇子实体的长度在5～7cm，菌柄粗度≥3cm，符合1级商品菇标准。3.如权利要求1所述的提取大球盖菇中黄酮的方法，其特征在于，所述步骤s1中，冷冻干燥温度设定在-2℃。4.如权利要求1所述的提取大球盖菇中黄酮的方法，其特征在于，所述步骤s2中，对冷冻干燥的大球盖菇切片进行纳米级粉碎过20000目，所使用的纳米粉碎机为广东东莞海璐智能电气有限公司所生产。5.如权利要求1所述的提取大球盖菇中黄酮的方法，其特征在于，所述步骤s3中，共聚维酮为n-乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯线性共聚物，共聚维酮的加入量占大球盖菇粉质量的1～2％。6.如权利要求1所述的提取大球盖菇中黄酮的方法，其特征在于，所述步骤s3中，低温球磨时间为40分钟，球磨温度设定在1℃。7.如权利要求1所述的提取大球盖菇中黄酮的方法，其特征在于，所述步骤s4中，提取药液是质量百分比浓度1％的氢氧化钾溶液，料液比为1:30～1:70g/ml。8.如权利要求1所述的提取大球盖菇中黄酮的方法，其特征在于，所述步骤s4中，微波萃取温度设定为100～125℃，萃取时间为2～10分钟，萃取功率设定为300～800w。9.如权利要求1所述的提取大球盖菇中黄酮的方法，其特征在于，所述步骤s5中，重复萃取次数至少两次。10.如权利要求1所述的提取大球盖菇中黄酮的方法，其特征在于，所述步骤s4中，所述微波提取设备是产自奥地利的安东帕微波萃取仪。

技术总结
本发明公开了一种提取大球盖菇黄酮的方法，包括大球盖菇清洗干净并切片，经过冷冻干燥后进行纳米级粉碎，向大球盖菇粉中加入共聚维酮，然后投入低温球磨机中研磨；用氢氧化钾溶液在微波辅助条件下对大球盖菇粉-共聚维酮混合物在密闭环境内高温高压萃取。本发明，大球盖菇纳米微粉与共聚维酮混合，经过共研磨技术处理后，采用微波辅助提取法，以氢氧化钾溶液作为提取介质，可以大大缩短提取时间，提高提取效率，有利于大球盖菇黄酮的后续分离纯化工作，并且降低生产成本且环境友好，有利于大球盖菇黄酮类成分的产业化发展。球盖菇黄酮类成分的产业化发展。球盖菇黄酮类成分的产业化发展。


技术研发人员：贺伟强 骆卢佳 刘俊 张旭锋 施昕磊 孙禹
受保护的技术使用者：嘉兴职业技术学院
技术研发日：2023.06.08
技术公布日：2023/8/28